一種復合乳酸菌微生物肥料及其制備與應用
【專利摘要】本發明公開了一種復合乳酸菌微生物肥料，屬于肥料技術領域。該生物肥料由四株植物乳桿菌P?8、PB?1、PY?1和SCI?02發酵制備而來。本發明采用乳酸菌混菌發酵，特殊的組方及配比能夠提供高整個發酵體系生產苯乳酸的能力，并進一步在農作物種植過程中起到降低植株感染病害的風險，延緩或減輕病害加重進程；使植株增產，增加甜度，改善口感的作用；提高土壤中有益微生物，抑制土傳病害真菌，改善土壤微生態環境；以及提高作物對惡劣環境的抗逆性的作用。CGMCC No.24
【專利說明】
一種復合乳酸菌微生物肥料及其制備與應用
技術領域：
[0001 ]本發明屬于肥料技術領域，具體涉及一種復合乳酸菌微生物肥料的制備及應用。
【背景技術】：
[0002] 乳酸菌作為農業有益微生物和植物促生長細菌中的成員，是自然環境中普遍存在 的一種安全且可食用微生物，在農產品種植及其質量安全中發揮著獨有的優勢。隨著對乳 酸菌抗致病性真菌特性研究的深入和乳酸菌降解重金屬、農藥殘留等安全性方面研究的探 索，減少農藥和化學肥料種植的植物性農產品受到人們越來越多的關注。微生態制劑與土 壤中固有的微生物協同作用可抑制植物地下部分致病性真菌、細菌病原體和線蟲，甚至地 上食草性昆蟲對植物造成的損害。農業有益微生態制劑是由乳酸菌、酵母菌、光合細菌和放 線菌等組成的復合益生菌制劑。該制劑具有促進植物健康生長、增加植物產量和光合速率、 加速土壤中有機質分解和營養物質的釋放、利于植物吸收、減少化學藥劑使用、改善土壤質 量等作用。
[0003] 乳酸菌作為益生菌，是植物促生長細菌中的一類，是公認的安全級(GRAS)菌株，研 究發現，植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和德氏乳桿菌是微生物肥料生產中常用的 乳酸菌種。蘋果中存在乳桿菌屬、片球菌屬和明串珠菌屬等乳酸菌。葡萄表面的乳酸菌約為 100CFU/g，隨著貯運過程的延長而逐漸降低。自不同植物和農產品中分離鑒定乳酸菌研究 發現，乳酸菌是最大的細菌種群(約占30%)，其中乳球菌屬是優勢菌屬。乳酸菌應用于植物 性農產品中具有抑制致病菌、腐敗菌的增殖，降解重金屬、農藥殘留，減少農藥和化學肥料 的使用等諸多優點，而越來越多的被人們所重視。
[0004] 本發明針對上述課題，對分離自自然植物表面和根際中的植物乳桿菌，進行產抑 菌物質、抑制腐敗病真菌和致病菌等一系列試驗，篩選出1株具有抑制植物致病真菌和常見 食物污染病原菌的植物乳桿菌L.plantarum SCI-02。然后與具有良好腐敗真菌抑制能力的 3株乳酸菌（L.plantarum P_8、L.plantarum PB_l、L.plantarum PY-1)混合發酵，制備成復 合乳酸菌微生態肥料。研究復合乳酸菌微生態肥料在改善土壤微生態環境、促進植物生長、 調控植物病害、增強植物抗逆性及改善植物性農產品品質等方面的應用，旨在促進乳酸菌 在農產品中的應用發展，并提高農產品質量及其食用安全，以期更好的提高人們的健康水 平。

【發明內容】
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[0005] 為了解決上述問題本發明提供一種復合乳酸菌微生物肥料，所述復合乳酸菌微生 物肥料的制備方法如下：
[0006] (1)將四株植物乳桿菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按總接種量為7%接入發酵培養基 進行發酵，發酵條件如下：發酵罐初始pH為7.0，發酵溫度為30°C，恒pH 5.7-5.9，流加堿液 4_5h后，自然發酵至pH 4.3-4.7后，流加堿液維持發酵液恒pH 5.7-5.9至發酵液自身pH不 變化時為發酵終點；
[0007] (2)發酵完成后，將復合乳酸菌發酵液與無菌處理后的蔗糖和大豆粉混合均勻即 得復合乳酸菌微生物肥料；
[0008] 所述 P-8、PB-1、PY-1 和 SCI-02 的接種比例為：1:1:1:2;
[0009] 所述發酵培養基組成如下：大豆蛋白粉20-40g，蔗糖40-80g，檸檬酸0.7-1.0g， K2HP〇4 l_4g，檸檬酸鈉8-12g，吐溫-80 l-3g，蒸餾水lL，pH 7.0;
[0010] 所述蔗糖的添加量與發酵液質量體積比為0.1% ;
[0011] 所述大豆粉的添加量與發酵液質量體積比為0.1 % ;
[0012] 所述植物乳桿菌P-8,保藏編號CGMCC No.6312;
[0013] 所述植物乳桿菌PB-1，保藏編號CGMCC No.5399;
[0014] 所述植物乳桿菌PY-1，保藏編號CGMCC No.5358
[0015] 所述植物乳桿菌SCI-02具體為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)SCI-02， 該菌株已于2015年12月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址 為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101，保藏編號 CGMCC No.11931；
[0016] 所述SCI-02菌株由抑制植物致病真菌(寄生曲霉、黃曲霉、婁地青霉、番茄早疫、甜 瓜枯萎、蘋果炭疽、甜瓜疫霉)和腸道致病細菌(大腸桿菌、鼠傷沙門氏菌、弗氏志賀氏菌、金 黃色葡萄球菌、單胞李斯特氏菌)篩選而來，且能夠代謝高產廣譜抑菌物質一苯乳酸；
[0017] 所述P-8、PB-1、PY-1菌株對常見腐敗霉菌具有良好的控制效果。
[0018] 表1 L.plantarum SCI-02真菌抑制試驗
[0019]
[0020] 表2 L.plantarum SCI-02致病細菌抑制試驗
[0021]
[0022]本發明提供的技術方案二是將上述復合乳酸菌微生物肥料應用于農作物生產中， 具體如下：每15-30天，葉面噴施按照100-200ml/畝/次(將肥料100倍稀釋后進行使用），根 部澆灌按照500-1000ml/畝/次(將肥料100倍稀釋后進行使用）。
[0023] 有益效果：
[0024] 1、本發明所提供的微生態復合肥料中添加有L.plantarum SCI-02,該菌株具有良 好的抑菌性能，并且高產苯乳酸。
[0025] 2、本發明采用乳酸菌混菌發酵，特殊的組方及配比能夠提供高L. plantarum SCI- 02及整個發酵體系生產苯乳酸的能力。
[0026] 3、本發明提供的微生態復合肥料a.具有降低植株感染病害的風險，對植株具有保 護作用，可延緩或減輕病害加重進程;b.具有使植株增產，增加甜度(含糖量增高），改善口 感的作用;c.有利于提高土壤中有益微生物，抑制土傳病害真菌，改善土壤微生態環境的效 果:減少土壤中真菌數量;增加土壤中放線菌、芽孢桿菌和細菌總數增加(分別增加6.88%、 10.70 %和46.06 % ); d.提高作物對惡劣環境的抗逆性。
【附圖說明】
[0027] 圖1:復合乳酸菌微生物肥料能夠降低黃瓜植株感染病害的風險
[0028] 圖2:復合乳酸菌微生物肥料能夠延緩黃瓜植株病害加重進程
[0029] 圖3:復合乳酸菌微生物肥料能夠預防、緩解黃瓜植株病害
[0030] 圖4:復合乳酸菌微生物肥料能夠提高西紅柿產量
[0031] 圖5:復合乳酸菌微生物肥料能夠提高西紅含糖量、改善西紅柿口感品質和土壤理 化性狀
[0032]圖6:復合乳酸菌微生物肥料能夠顯著改善西紅植株根系發育生長
[0033]圖7:復合乳酸菌微生物肥料能夠顯著促進西紅柿植株生長
[0034]圖8:復合乳酸菌微生物肥料能夠改善土壤微生態環境
[0035]圖9:復合乳酸菌微生物肥料能夠促進土壤中有機質分解和氮磷養分釋放
【具體實施方式】：
[0036]下面結合實施例對本發明作進一步說明；以下實施例僅為說明性的，本發明并不 受這些實施例的限制。
[0037] 下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規方法。
[0038] 復合乳酸菌（L.plantarum P-8、L.plantarum PB-l、L.plantarum PY-1 和 L.plantarum SCI-02)混合發酵制備微生物肥料及其應用。
[0039]實施例1、試驗方法 [0040] 1.1菌種活化
[0041 ]冷凍干燥保存的菌株L.plantarum P_8、L.plantarum PB_l、L.plantarum PY-1 和 L·plantarum SCI-02菌種接種于MRS液體培養基中，37°C恒溫培養18h，傳代2次。
[0042] 1.2活菌計數
[0043] -般采用傾注平板計數法，操作步驟為:依據國標方法，搖勻發酵液，吸取lmL發酵 液置于9mL的無菌生理鹽水中，進行10倍稀釋，隨后依次稀釋至所需梯度。將最后稀釋梯度 試管稀釋振勻后，吸取lmL稀釋液傾注至平板中，到入培養基，搖勻，置凝固，于37 °C培養箱 培養48h。平板分別做兩個梯度，每個梯度兩個平行。
[0044] 測定乳酸菌活菌數培養基:MRS固體培養基
[0045] 1.3pH測定:使用精確pH計直接測定發酵液pH值
[0046] 1.4苯乳酸含量測定（LC-MS法）：LC條件：色譜柱BEH C18;流0.4ml/min;柱溫:45 °C ;進樣量:4μ1;流動相A:水+0.1 %甲酸;流動相B:乙腈+0.1 %甲酸；梯度洗脫3min JS條 件:正離子模式、ESI離子源，錐孔電壓20V;碰撞能4V。
[0047] 實施例2接種比例對混菌發酵的影響
[0048] 研究不同接種比例，對菌種混合發酵的影響。
[0049]培養基配方如下：大豆蛋白粉30g，蔗糖60g，檸檬酸0.8g，K2HP〇4 2g，檸檬酸鈉10g， 吐溫-80 2g，蒸餾水lL，pH 7.0;
[0050] 發酵罐初始pH:為7.0,發酵溫度為30°C，恒pH 5.7-5.9,流加堿液維持發酵液恒pH 5.7-5.9至發酵液自身pH不再變化時為發酵終點；
[0051] a·當L·plantarum P-8、L·plantarum PB-1、L·plantarum PY-1和L·plantarum SCI-02的總接種量為6% (接種比例1:1:1:1)，30°C，80r/min發酵，測定乳酸菌活菌數為 0.72X1010CFU/mL；
[0052] b·當L·plantarum P-8、L·plantarum PB-1、L·plantarum PY-1和L·plantarum SCI-02的總接種量為6% (接種比例2:1:1:1)，30°C，80r/min發酵，測定乳酸菌活菌數為 0.84X1010CFU/mL；
[0053] c·當L·plantarum P-8、L·plantarum PB-1、L·plantarum PY-1和L·plantarum SCI-02的總接種量為7% (接種比例1:1:1:2)，30°C，80r/min發酵，測定乳酸菌活菌數為 1.03X1010CFU/mL；
[0054] 依據實驗結果，當L.plantarum P-8、L.plantarum PB-l、L.plantarum PY-1 和 L.plantarum SCI-02的總接種量為7% (接種比例1:1:1: 2)，利于復合乳酸菌微生物肥料的 發酵。
[0055] 實施例3發酵工藝對發酵液中苯乳酸的影響
[0056] 研究不同發酵工藝，對混合發酵液中抑菌物質(苯乳酸)的影響：
[0057]發酵培養基：大豆蛋白粉30g，蔗糖60g，檸檬酸0.8g，K2HP04 2g，檸檬酸鈉10g，吐 溫-80 2g，蒸饋水lL，pH T.OeL.plantarum P-8、L.plantarum PB-l、L.plantarum PY-1 和 L.plantarum SCI-02的總接種量為7% (接種比例1:1:1:2);
[0058] a.發酵罐初始pH為7.0，發酵溫度為30°C，恒pH 5.9，全程流加堿液至發酵液自身 pH不再變化時為發酵終點；取樣檢測發酵液中的廣譜抑菌物質一苯乳酸含量為25.7mg/L， 活菌數為1.10 X 101()CFU/mL;
[0059] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum SCI-02接種量為7%時，實驗結果為： 苯乳酸含量為8.6mg/L，活菌數為1.01 X 101()CFU/mL。
[0060] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum PY-1接種量為7%時，實驗結果為:苯 乳酸含量為3 · 2mg/L，活菌數為0 · 98 X 101QCFU/mL
[0061 ]其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum P-8接種量為7%時，實驗結果為:苯乳 酸含量為8 · 3mg/L，活菌數為1 · 21 X 101()CFU/mL
[0062] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum ro-1接種量為7%時，實驗結果為:苯 乳酸含量為3 · 7mg/L，活菌數為0 · 87 X 101()CFU/mL
[0063] b.發酵罐初始pH為7.0,發酵溫度為30°C，恒pH 5.9,流加堿液7h后，自然發酵至pH 不再變化時為止(約PH4.2-4.5)視為發酵終點；取樣檢測發酵液中的廣譜抑菌物質一苯乳 酸含量為 30 · 6mg/L，活菌數為 0 · 72 X 101QCFU/mL;
[0064] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum SCI-02接種量為7%時，實驗結果為： 苯乳酸含量為1 〇. 3mg/L，活菌數為0.71 X 101()CFU/mL;
[0065] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum ΡΥ-l種量為7%時，實驗結果為:苯乳 酸含量為 5 · 2mg/L，活菌數為 0 · 78 X 101()CFU/mL;
[0066] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum P-8種量為7%時，實驗結果為:苯乳酸 含量為8 · lmg/L，活菌數為0 · 65 X 101()CFU/mL;
[0067] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum ro-1種量為7%時，實驗結果為:苯乳 酸含量為 4 · 7mg/L，活菌數為 0 · 72 X 101()CFU/mL。
[0068] c.發酵罐初始pH為7.0，發酵溫度為30°C，恒pH 5.9，流加堿液4.5h后，自然發酵至 pH 4.5后，流加堿液維持發酵液恒pH 5.9至發酵液自身pH不再變化時為發酵終點。取樣檢 測發酵液中的廣譜抑菌物質一苯乳酸含量為49.2mg/L，活菌數為1.06X 101()CFU/mL;
[0069] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum SCI-02種量為7%時，實驗結果為：苯 乳酸含量為15 · 3mg/L，活菌數為0 · 96 X 101()CFU/mL;
[0070] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum PY-1種量為7%時，實驗結果為:苯乳 酸含量為1〇.111^/1，活菌數為0.78\101(^?1]/1^;
[0071]其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum P-8種量為7%時，實驗結果為:苯乳酸 含量為 12 · 4mg/L，活菌數為 1 · 01 X 101QCFU/mL;
[0072]其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum ro-1種量為7%時，實驗結果為:苯乳 酸含量為 9 · 8mg/L，活菌數為 0 · 79 X 101()CFU/mL。
[0073] d.發酵罐初始pH為7.0，發酵溫度為30°C，自然發酵24h為終點。取樣檢測發酵液中 的廣譜抑菌物質一苯乳酸含量為50. lmg/L，活菌數為0.50 X 101()CFU/mL;
[0074] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum SCI-02種量為7%時，實驗結果為：苯 乳酸含量為12.5mg/L，活菌數為0.45 X 101QCFU/mL;
[0075] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum PY-1種量為7%時，實驗結果為:苯乳 酸含量為 12 · lmg/L，活菌數為0 · 56 X 101QCFU/mL;
[0076] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum P-8種量為7%時，實驗結果為:苯乳酸 含量為 9 · 4mg/L，活菌數為 0· 42 X 101QCFU/mL;
[0077] 其他條件不變，接入菌種改為L.plantarum ro-1種量為7%時，實驗結果為:苯乳 酸含量為1〇.111^/1，活菌數為0.51\101(^?1]/111匕
[0078] 結論：綜上所述，經不同接種比例，不同發酵工藝研究，考慮4株乳酸菌混合發酵 時，對乳酸菌活菌數和抑菌物質產量的影響，綜合優選:L.plantarum P-8、L.plantarum PB-1、L.plantarum ΡΥ-1和L.plantarum SCI-02的總接種量為7% (接種比例1:1:1:2) [0079] 發酵罐初始pH為7.0,發酵溫度為30°C，恒pH 5.7-5.9,流加堿液4-5h后，自然發酵 至pH 4.3-4.7后，流加堿液維持發酵液恒pH 5.7-5.9至pH不再變化時為發酵終點，為最佳 發酵工藝。
[0080]實施例4復合乳酸菌微生物肥料的制備：
[0081 ] (1)將四株植物乳桿菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按總接種量為7%，接種比例為：1: 1:1:2，接入發酵培養基進行發酵；
[0082]發酵條件如下：發酵罐初始pH:為7.0，發酵溫度為30 °C，恒pH 5.7-5.9，流加堿液 4h后，自然發酵至pH 4.3-4.7后，流加堿液維持發酵液恒pH 5.7-5.9至發酵液自身pH不再 變化時為發酵終點；
[0083] 發酵培養基組成如下:大豆蛋白粉20g，蔗糖40g，檸檬酸0.7g，K2HP〇4 lg，檸檬酸鈉 8g，吐溫-80 lg，蒸餾水lL，pH 7.0;
[0084] (2)發酵完成后，將復合乳酸菌發酵液與無菌處理后的蔗糖和大豆粉混合均勻后 包裝冷藏即得復合乳酸菌微生物肥料;蔗糖的添加量與發酵液質量體積比為〇. 1 % ;大豆粉 的添加量為0.1%。
[0085] 實施例5復合乳酸菌微生物肥料的制備：
[0086] (1)將四株植物乳桿菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按總接種量為7%，接種比例為：1: 1:1:2，接入發酵培養基進行發酵；
[0087]發酵條件如下：發酵罐初始pH:為7.0，發酵溫度為30 °C，恒pH 5.7-5.9，流加堿液 5h后，自然發酵至pH 4.3-4.7后，流加堿液維持發酵液恒pH 5.7-5.9至pH不在變化時為酵 餘占. ，-、，
[0088] 發酵培養基組成如下:大豆蛋白粉40g，蔗糖80g，檸檬酸1.0g，K2HP〇4 4g，檸檬酸鈉 12g，吐溫-80 3g，蒸餾水lL，pH 7.0;
[0089] (2)發酵完成后，將復合乳酸菌發酵液與無菌處理后的蔗糖和大豆粉混合均勻后 包裝冷藏即得復合乳酸菌微生物肥料;蔗糖的添加量與發酵液質量體積比為〇. 1 % ;大豆粉 的添加量為0.1%。
[0090] 實施例6復合乳酸菌微生物肥料的制備：
[0091] (1)將四株植物乳桿菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按總接種量為7%，接種比例為：1: 1:1:2，接入發酵培養基進行發酵；
[0092]發酵條件如下：發酵罐初始pH:為7.0，發酵溫度為30 °C，恒pH 5.7-5.9，流加堿液 4.5h后，自然發酵至pH 4.3-4.7后，流加堿液維持發酵液恒pH 5.7-5.9至pH不在變化時為 發酵終點；
[0093]發酵培養基組成如下:大豆蛋白粉30g，蔗糖60g，檸檬酸0.8g，K2HP〇4 2g，檸檬酸鈉 l〇g，吐溫-80 2g，蒸餾水lL，pH 7.0;
[0094] (2)發酵完成后，將復合乳酸菌發酵液與無菌處理后的蔗糖和大豆粉混合均勻后 包裝冷藏即得復合乳酸菌微生物肥料;蔗糖的添加量與發酵液質量體積比為〇. 1 % ;大豆粉 的添加量為0.1%。
[0095] 實施例7復合乳酸菌微生物肥料的應用
[0096] a.將實施例6所得復合乳酸菌微生態肥料應用于黃瓜病害抑制
[0097] 試驗分組:黃瓜植株隨機分為試驗組和對照組，每組各9株。
[0098] 試驗方法:試驗組黃瓜每隔15天葉面噴施和根部灌溉復合乳酸菌微生物肥料一 次。葉面噴施按照150ml/畝/次(將肥料100倍稀釋后進行使用），根部澆灌1000ml/畝/次(將 肥料100倍稀釋后進行使用）。
[0099] 試驗觀察:每隔15d觀察記錄黃瓜植株的病害發生情況和植株的生長情況。
[0100] 試驗管理:試驗全程不使用任何農藥和抗菌類物質，不施用任何肥料，試驗組和對 照組黃瓜管理情況相同。
[0101] 試驗結果：
[0102] 復合乳酸菌微生物肥料能夠降低黃瓜植株病害感染的幾率和延緩病害加重進程， 使用15d后降低植株染病幾率33.4%，使用30d后降低病害程度25%。復合乳酸菌微生物肥 料具有降低黃瓜植株感染病害的風險，對黃瓜植株具有保護作用；可延緩或減輕黃瓜植株 病害加重進程，對黃瓜植株具有保護作用。見圖1 -3。
[0103] b.將實施例5所得復合乳酸菌微生態肥料應用于西紅柿增產
[0104] 試驗分組:西紅柿隨機分為試驗組和對照組，每組各0.5畝。
[0105] 試驗方法:試驗組西紅柿每隔15天葉面噴施和根部灌溉復合乳酸菌微生物肥料一 次。葉面噴施按照150ml/畝/次(將肥料100倍稀釋后進行使用），根部澆灌1000ml/畝/次(將 肥料100倍稀釋后進行使用）。
[0106] 試驗觀察:每天觀察記錄西紅柿植株的的生長情況和產量。
[0107] 試驗管理:試驗全程不使用任何農藥和抗菌類物質，試驗組和對照組西紅柿管理 情況相同。
[0108]試驗結果：
[0109] 乳酸菌肥料能夠顯著促進西紅柿根系發育，加快植株生長，提高西紅柿單株平均 產量，試驗組較對照組株產提高14.34%。試驗后對西紅柿種植土壤和西紅柿的含糖量進行 了比較發現:試驗組pH6.57，顯著低于對照組(pH6.97)，蔬菜生長最佳pH為6.5-6.8，使用乳 酸菌肥料對土壤具有一定的改善效果。此外，使用乳酸菌肥料后，西紅柿的甜度(含糖量)增 高，口感改善。使用乳酸菌肥料對西紅柿的品質具有改善作用。見圖4-7.
[0110] c.將實施例4所得復合乳酸菌微生態肥料應用于土壤微生態環境和肥效的改善
[0111] 試驗分組:西紅柿、黃瓜隨機分為試驗組和對照組，每組各1畝。
[0112] 試驗方法:試驗組每隔15天葉面噴施和根部灌溉復合乳酸菌微生物肥料一次。葉 面噴施按照150ml/畝/次（將肥料100倍稀釋后進行使用），根部澆灌700ml/畝/次(將肥料 100倍稀釋后進行使用）。
[0113] 土壤檢測：試驗前期和后期采集試驗組和對照組土壤樣本，檢測土壤中的微生物 含量及肥力指標。
[0114] 試驗管理:試驗全程不使用任何農藥和抗菌類物質，試驗組和對照組西紅柿管理 情況相同。
[0115] 試驗結果：
[0116]西紅柿種植使用復合乳酸菌微生物肥料后，土壤微生物分析發現:土壤中真菌數 量顯著減少（減少28.57%);土壤中放線菌、芽孢桿菌和細菌總數增加（分別增加6.88%、 10.70%和46.06% )。復合乳酸菌微生物肥料有利于提高土壤中有益微生物，抑制土傳病害 真菌，改善土壤微生態環境。
[0117]復合乳酸菌微生物肥料能夠顯著減少土壤中有機質（指:土壤中含碳的有機化合 物)含量(減少27.31%)，速效磷含量(減少33.67%)和堿解氮含量(減少27.68%)。有利于 促進土壤中有機質分解和氮磷養分釋放，促進植物對營養元素的吸收。見圖8-9。
[0118] d.將實施例6所得復合乳酸菌微生態肥料應用于植物抗逆性試驗
[0119] 試驗分組:西紅柿和油菜植株隨機分為試驗組和對照組，每組各1畝。
[0120] 試驗方法:試驗組每隔15天葉面噴施和根部灌溉復合乳酸菌微生物肥料一次。葉 面噴施按照150ml/畝/次(將肥料100倍稀釋后進行使用），根部澆灌1000ml/畝/次(將肥料 100倍稀釋后進行使用）。
[0121 ]試驗觀察:每天觀察記錄西紅柿和油菜植株的的生長情況。
[0122] 試驗管理:試驗全程不使用任何農藥和抗菌類物質，不施用任何肥料，試驗組和對 照組管理情況相同。
[0123] 試驗結果：
[0124] 1)油菜試驗發現:冬季2月份低溫時，由于溫室南邊1米范圍內溫度較低，與溫室內 北面種植的油菜，植株生長差異顯著。對照組溫室南邊1米范圍內的油菜平均株高為 12. lcm，北面油菜平均株高為14.8cm(兩者相差2.7cm，差異顯著）；試驗組溫室南邊1米范圍 內的油菜平均株高為14.2cm，北面油菜平均株高為14.7cm(兩者相差0.5cm，差異不顯著）。 噴施復合乳酸菌微生物肥料能夠增強油菜對低溫的抗性。
[0125] 2)西紅柿實驗發現:夏季8月份高溫時，溫室溫度高于38度時，實驗區的番茄葉片 正常，對照區的葉片出現避熱現象，葉片上卷。說明噴施復合乳酸菌微生物肥料能夠增強西 紅柿對高溫的抗性。
[0126] 結果分析:復合乳酸菌微生物肥料能夠顯著促進促進西紅柿植株地上部分(株高、 地徑)的生長和根系發育，提高西紅柿平均單株產量，試驗組較對照組株株產提高14.34%。 復合乳酸菌微生物肥料有利于提高土壤中有益微生物，抑制土傳病害真菌，改善土壤微生 態環境。復合乳酸菌微生物肥料有利于促進土壤中有機質分解和氮磷養分釋放，促進植物 對營養元素的吸收。。此外，使用乳酸菌肥料后，植物對高溫、低溫和病害的抗性得到增強， 有利于植株的健康生長。此外，西紅柿的甜度(含糖量)增高，口感改善，對西紅柿的品質具 有改善作用。見附圖4-9。
[0127] 結論：
[0128] 4株乳酸菌經復合發酵制得發酵液，乳酸菌活菌數達到1.06X 101QCFU/mL以上。混 合發酵液與載體混合均勻后制成復合乳酸菌微生物肥料。
[0129] 復合乳酸菌微生物肥料能夠顯著促進植物地上部分(株高、地徑)的生長和根系發 育，提高作物產量。復合乳酸菌微生物肥料有利于提高土壤中有益微生物，抑制土傳病害真 菌，改善土壤微生態環境。復合乳酸菌微生物肥料有利于促進土壤中有機質分解和氮磷養 分釋放，促進植物對營養元素的吸收。。此外，使用乳酸菌肥料后，植物對高溫、低溫和病害 的抗性得到增強，有利于植株的健康生長。此外，果實甜度(含糖量)增高，口感改善，對品質 具有改善作用。
【主權項】
1. 一種復合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述復合乳酸菌微生物肥料的制備方法 如下： (1) 將四株植物乳桿菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按總接種量為7%接入發酵培養基進行 發酵，發酵條件如下：發酵罐初始pH為7.0，發酵溫度為30°C，恒pH 5.7-5.9，流加堿液4-5h 后，自然發酵至pH 4.3-4.7后，流加堿液維持發酵液恒pH 5.7-5.9至發酵液自身pH不變化 時為發酵終點； (2) 發酵完成后，將復合乳酸菌發酵液與無菌處理后的蔗糖和大豆粉混合均勻即得復 合乳酸菌微生物肥料。2. 如權利要求1所述的一種復合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述植物乳桿菌SCI-02具體為植物乳桿菌(LactobaciIlus plantarum)SCI_02，保藏編號CGMCC No · 11931。3. 如權利要求1所述的一種復合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述植物乳桿菌P-8、 PB-I、PY-1 和SCI-02的接種比例為：1: 1:1: 2。4. 如權利要求1所述的一種復合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述發酵培養基組成 如下：大豆蛋白粉20-40g，蔗糖40-80g，檸檬酸0 · 7-1 · Og，K2HPO4 l_4g，檸檬酸鈉8-12g，吐 溫-80 l-3g，蒸餾水IUpH 7.0。5. 如權利要求1所述的一種復合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述蔗糖的添加量與 發酵液質量體積比為〇. 1 % ;所述大豆粉的添加量與發酵液質量體積比為〇. 1 %。6. 權利要求1所述復合乳酸菌微生物肥料在農作物種植過程中的應用。7. 如權利要求6所述的復合乳酸菌微生物肥料在農作物種植過程中的應用，其特征在 于，每15-30天，將肥料100倍稀釋后，葉面噴施按照100-200ml/畝/次使用，根部澆灌按照 500-1000ml/畝 / 次使用。
【文檔編號】C05F11/08GK105948838SQ201610265043
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年4月26日
【發明人】劉曉軍, 張建軍
【申請人】北京科拓恒通生物技術開發有限公司