一種用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑及其制備方法
【專利摘要】本發明屬于疫苗的技術領域，具體的涉及一種用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑及其制備方法。該種用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，包括以下原料：殼聚糖、β?環狀糊精、海藻酸鈉、棉子糖、乳酸、磷脂酸肌醇和丁基羥基茴香醚。該用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑針對宿主設計，通過研究探索對細胞具有保護作用的物質，進行合理協同組合，通過該冷凍干燥保護劑對宿主細胞保存的條件進行優化，為更好的保存病毒打下基礎。
【專利說明】
-種用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明屬于疫苗的技術領域，具體的設及一種用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護 劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 保護劑是為了保證凍干過程中能夠順利調節滲透壓，降低對凍干對象的傷害而采 用的一種組合試劑。冷凍干燥技術由英國人Wollaston發明，隨后該技術開始應用到菌種、 疫苗及其它生物制品的凍干保存，取得了較好效果。常見冷凍干燥保護劑種類很多，主要有 糖類、多元醇，氨基酸、無水溶劑等物質，現有技術主要集中在生物制品的耐熱凍干保護劑 及制備工藝;雞痘凍干苗耐熱凍干保護劑及制備工藝等，運些均針對的是疫苗自身。
[0003] 然而病毒疫苗的特點為其繁殖過程中需要在宿主體內完成，同時病毒疫苗在宿主 體內的保存效果更加理想，因此不論是病毒疫苗的繁殖還是病毒疫苗的保存都離不開宿 主，尤其是需要在活體內保存的病毒疫苗，由此可見要提高疫苗的活性，就必須保證宿主擁 有良好的活性，即宿主的存活率將大大影響病毒的活性。目前現階段均是針對疫苗本身而 言的，還沒有針對宿主活性而設計的冷凍干燥保護劑。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于針對目前保護劑僅針對疫苗本身而無法保證宿主活性的缺陷 而提供一種用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑及其制備方法，該用于病毒疫苗宿主的冷 凍干燥保護劑針對宿主設計，通過研究探索對細胞具有保護作用的物質，進行合理協同組 合，通過該冷凍干燥保護劑對宿主細胞保存的條件進行優化，為更好的保存病毒打下基礎。
[0005] 本發明的技術方案為:一種用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，包括W下原料： 殼聚糖、β-環狀糊精、海藻酸鋼、棉子糖、乳酸、憐脂酸肌醇和下基徑基茵香酸。
[0006] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成:2-5.5份殼 聚糖、1-3.4份β-環狀糊精、0.8-2份海藻酸鋼、1-4.7份棉子糖、1-2份乳酸、1.6-4份憐脂酸 肌醇和1-3份下基徑基茵香酸。
[0007] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成:4.5-5.5份 殼聚糖、2.6-3.4份β-環狀糊精、0.8-1.2份海藻酸鋼、3.3-4.7份棉子糖、1-2份乳酸、1.7- 2.3份憐脂酸肌醇和1.7-2.3份下基徑基茵香酸。在37°C情況下對該配比范圍內的冷凍干燥 保護劑進行測試實驗，實驗結果驗證:保護劑效果為宿主存活率達到99.2%。
[000引所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成:4.6-5.4份 殼聚糖、2.7-3.4份β-環狀糊精、0.8-1.2份海藻酸鋼、3.4-4.6份棉子糖、1.2-1.8份乳酸、 1.6-2.4份憐脂酸肌醇和1.8-2.2份下基徑基茵香酸。在37°C情況下對該配比范圍內的冷凍 干燥保護劑進行測試實驗，實驗結果驗證:保護劑效果為宿主存活率達到99.6%。
[0009]所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成：5份殼聚 糖、3份β-環狀糊精、1份海藻酸鋼、4份棉子糖、1.5份乳酸、2份憐脂酸肌醇和2份下基徑基茵 香酸。
[0010] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由w下重量份的原料組成：2份殼聚 糖、1份β-環狀糊精、1份海藻酸鋼、1份棉子糖、1份乳酸、2份憐脂酸肌醇和1份下基徑基茵香 酸。
[0011] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成：3份殼聚 糖、1.5份β-環狀糊精、1.5份海藻酸鋼、2份棉子糖、1.5份乳酸、2份憐脂酸肌醇和2份下基徑 基茵香酸。
[0012] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成：5份殼聚 糖、3份β-環狀糊精、2份海藻酸鋼、4份棉子糖、2份乳酸、4份憐脂酸肌醇和3份下基徑基茵香 酸。
[0013] 本發明的有益效果為:本發明所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，包括W 下原料:殼聚糖、β-環狀糊精、海藻酸鋼、棉子糖、乳酸、憐脂酸肌醇和下基徑基茵香酸。其中 殼聚糖具有乳化穩定性，起到保濕作用，對細胞水分的保持有重要作用。β-環狀糊精容易形 成穩定的水合物，起到固水的作用。海藻酸鋼是一種高粘性的高分子化合物親水性強，可W 與殼聚糖形成均一穩定的穩定劑，安全性高，可W食用，對細胞可W起到保護作用。棉子糖 在非晶體狀態下，具有較強的吸濕和保濕能力。乳酸作為抑調節劑，可W與海藻酸鋼形成穩 定抑環境，維持環境處于穩定的滲透壓，有助于細胞的活性。憐脂酸肌醇為細胞膜的組成成 分，對細胞膜具有很強的保護作用。下基徑基茵香酸:具有很強的抗氧化性，食品等方面廣 泛應用，使用安全，來源充足。
[0014] 綜上所述，本發明所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑針對宿主設計，通過 研究探索對細胞具有保護作用的物質，進行合理協同組合，通過該冷凍干燥保護劑對宿主 細胞保存的條件進行優化，為更好的保存病毒打下基礎。同時所采用的原料價格相對低廉、 充足，易于準確配伍組合，受外界環境影響小等特點，提高凍干疫苗的穩定性的用途。
【具體實施方式】
[0015] 下面通過實施例對本發明進行詳細的說明。
[0016] 實施例1
[0017] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成：2份殼聚 糖、1份β-環狀糊精、1份海藻酸鋼、1份棉子糖、1份乳酸、2份憐脂酸肌醇和1份下基徑基茵香 酸。
[001引實施例2
[0019] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成：3份殼聚 糖、1.5份β-環狀糊精、1.5份海藻酸鋼、2份棉子糖、1.5份乳酸、2份憐脂酸肌醇和2份下基徑 基茵香酸。
[0020] 實施例3
[0021] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成：5份殼聚 糖、3份β-環狀糊精、2份海藻酸鋼、4份棉子糖、2份乳酸、4份憐脂酸肌醇和3份下基徑基茵香 酸。
[0022] 實施例4
[0023] 所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，由W下重量份的原料組成：5份殼聚 糖、3份β-環狀糊精、1份海藻酸鋼、4份棉子糖、1.5份乳酸、2份憐脂酸肌醇和2份下基徑基茵 香酸。
[0024] 下面對上述4個實施例基于正交試驗方法進行組合優化測試。
[002引一、試樣情況見表1:
[0026] 表1:屯種原料的濃度與比例
[0027]
[0028] 二、試驗具體方法：
[0029] W存活率為觀測值，測定方法：用ImL無菌吸管吸取0.5mL已充分混勻的菌懸液，精 確地放4.5mL至10-1的試管中，此即為10倍稀釋，依次類推完成稀釋過程，然后選擇合適的 稀釋度，取〇.2mL稀釋后的菌懸液涂布在Ξ個平行的直徑為9mL平皿(含有再生固體培養基） 中，經過24-48小時，計算cfu數目，根據稀釋度，通過Ξ平皿平均數，計算出每個平皿的存活 率。在37°C情況下，35天，測定病毒宿主的存活率。
[0030] Ξ、試驗結果見表2:
[0031] 表2:優化試驗結果直觀分析表
[0032]
[0034] 根據表2進行極差分析得知:最佳組合如表3
[0035] 表3:最佳組合
[0036]

[0037]同時對上述冷干產品在W下條件作進一步驗證:25°C，60d進行試驗，結果表明低 溫下，宿主的活率更高，保存活性更好，為病毒的活性保持，打下良好的基礎。
【主權項】
1. 一種用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，其特征在于，包括以下原料:殼聚糖、β-環狀糊精、海藻酸鈉、棉子糖、乳酸、磷脂酸肌醇和丁基羥基茴香醚。2. 根據權利要求1所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，其特征在于，由以下重量 份的有效原料組成:2-5.5份殼聚糖、1-3.4份β-環狀糊精、0.8-2份海藻酸鈉、1-4.7份棉子 糖、1-2份乳酸、1.6-4份磷脂酸肌醇和1-3份丁基羥基茴香醚。3. 根據權利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，其特征在于，由以下重量 份的有效原料組成:4.5-5.5份殼聚糖、2.6-3.4份β-環狀糊精、0.8-1.2份海藻酸鈉、3.3-4.7份棉子糖、1-2份乳酸、1.7-2.3份磷脂酸肌醇和1.7-2.3份丁基羥基茴香醚。4. 根據權利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，其特征在于，由以下重量 份的有效原料組成:4.6-5.4份殼聚糖、2.7-3.4份β-環狀糊精、0.8-1.2份海藻酸鈉、3.4-4.6份棉子糖、1.2-1.8份乳酸、1.6-2.4份磷脂酸肌醇和1.8-2.2份丁基羥基茴香醚。5. 根據權利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，其特征在于，由以下重量 份的有效原料組成:5份殼聚糖、3份β-環狀糊精、1份海藻酸鈉、4份棉子糖、1.5份乳酸、2份 磷脂酸肌醇和2份丁基羥基茴香醚。6. 根據權利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，其特征在于，由以下重量 份的有效原料組成:2份殼聚糖、1份β-環狀糊精、1份海藻酸鈉、1份棉子糖、1份乳酸、2份磷 脂酸肌醇和1份丁基羥基茴香醚。7. 根據權利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，其特征在于，由以下重量 份的有效原料組成：3份殼聚糖、1.5份β-環狀糊精、1.5份海藻酸鈉、2份棉子糖、1.5份乳 酸、2份磷脂酸肌醇和2份丁基羥基茴香醚。8. 根據權利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷凍干燥保護劑，其特征在于，由以下重量 份的有效原料組成:5份殼聚糖、3份β-環狀糊精、2份海藻酸鈉、4份棉子糖、2份乳酸、4份磷 脂酸肌醇和3份丁基羥基茴香醚。
【文檔編號】A61K47/10GK105999285SQ201610309200
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月11日
【發明人】吳憶春, 趙春海, 苗立忠
【申請人】吳憶春, 趙春海, 苗立忠