對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用的組合物的制作方法
【專利摘要】本發明是新型組合物，該組合物含有花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物、對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用。
【專利說明】
對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用的組合物
[0001 ] 本申請是2006年6月29日提交的同名發明專利申請200610100093.0的分案申請。
技術領域
[0002]本發明涉及對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用的組合物。
【背景技術】
[0003]在尚齡者中，經常有被確認為白天活動量減少、抑郁癥狀的人，有報告指出這種白天活動量與睡眠關系密切，經常會因睡眠障礙而使活動量減少，白天活動量與夜間睡眠的質和量相關[Psychiatry Clin Neurosci Vol.54,309-310(2000)]。睡眠障礙的發生率隨著年齡的增加而顯著增加，在高齡者的種種睡眠障礙增加的背景下，以中途覺醒增加、中途覺醒后再入眠障礙、總睡眠時間縮短、睡眠效率降低、慢波睡眠減少為代表的睡眠結構的增齡變化作為共同的原因而存在。一般認為這樣的生理變化相互疊加，會產生極其多樣的睡眠障礙要因，因此引發高齡者的睡眠障礙癥狀[最新醫學Vol.59,468-475(2004)]。
[0004]另一方面認為，不僅是老化、各種精神疾病也會直接或通過睡眠障礙等癥狀引發白天活動量減少、抑郁癥狀。例如已知綜合失調癥患者，不僅有急性惡化期的入眠困難、中途覺醒等失眠癥狀，而且還有因生活方式的變化、不規律的日常生活等睡眠、覺醒規律的混亂引發的睡眠障礙。此外，感情障礙在精神疾病中也是高發病率合并發生睡眠障礙和抑郁癥狀。單極型抑郁病是指入眠困難、中途覺醒、早朝覺醒、缺少熟睡感、睡眠時間縮短等失眠癥狀。此外，雙極型抑郁病的病相期也表現出與單極型抑郁病同樣的失眠癥狀。但是，雙極型抑郁病的特征與單極型抑郁病相比，多認為其是因反復午睡等引起的過眠。此外也發現有因種神經疾患引起的睡眠障礙、抑郁癥狀。作為常伴隨睡眠障礙的神經疾患，可以為腦變性疾病、認知癥、Parkinson癥候群、致死性家族性失眠癥、睡眠相關性癲癇、睡眠時癲癇樣發作波重疊、睡眠相關的頭痛等[別冊日本臨床Vol.39，231-248(2003)]。
[0005]最近，作為評價睡眠的質量、活動量的方法，都把目光集中于使用活動記錄器Actigraph的方法，Actigraph是把測定活動量用的內部裝有傳感器的手表型測定機器戴在不常用的手腕上，以I周時間為單位，晝夜測定活動量并以此評價活動量變化的機器。通過使用計算機軟件分析該Ac t i graph測定的結果，可以在下述疾病的診斷、過程觀察、及治療結果的判定上發揮威力，所述疾病為精神疾病、神經疾患、及伴隨老化的睡眠障礙、活動量減少等。
[0006]此外，作為對這種因睡眠障礙、身心功能降低引起的白天活動量減少及抑郁癥狀的治療方法，有精神療法的探討、非藥物療法、藥物療法。非藥物療法有高照度光照射，現在積極用于治療季節性感情障礙、違反日常規律引起的睡眠障礙。在睡眠障礙、抑郁癥狀的藥物療法中，雖然使用了維生素B12、苯二氮桌類(benzodiazepine)睡眠藥等，但很難說都得到了確切的效果，仍有待于藥物療法的確立。此外，在治療感情障礙、神經疾患時，一般合并使用抗抑郁藥、抗精神藥和睡眠藥。但是，現狀是仍沒有安全有效的并對睡眠障礙、身心功能降低引起的白天活動量減少、抑郁癥狀具有治療效果的化合物。[0007 ]作為控制睡眠、行動的化合物，知道有大麻醇(cannab inoid)，有報告指出大麻醇(cannabinoid)通過腦內的大麻醇受體，能夠對記憶、學習[Nature Vol.388 ,773-778(1997)]、攝食、放松、睡眠等行動[J Neurosci Vol.21,5344-5350(2001)]產生影響。作為人的生體內的內因性的大麻醇，已知有安南得邁(anandamide)、2_花生四稀酰甘油(2-arachidonoyΙ-glycerol)等含有花生四稀酸的化合物，但即使經口攝取這些大麻醇(cannabinoid)，因為水解而不能被直接吸收，到目前為止的報告中，也只是停留在活體外(in vitro)或給與受體措抗劑的實驗上。
[0008]也就是說，到目前為止，根本不明白使人體攝取以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物時，是否會對減少的白天活動量、抑郁癥狀產生影響
[0009][非專利文獻I]Psychiatry Clin Neurosci Vol.54，309-310(2000)
[0010][非專利文獻2]最新醫學Vol.59,468-475(2004)
[0011 ][非專利文獻3]別冊日本臨床Vol.39，231-248(2003)
[0012][非專利文獻4]NatureVol.388,773-778( 1997)
[0013][非專利文獻5]JNeurosci Vol.21，5344-5350(2001)

【發明內容】

[0014]本發明要提供含有花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物、對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用的飲食品及其制造方法。更加詳細地說，提供下述飲食品及其制造方法:將從花生四烯酸、花生四烯酸醇酯、及構成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂質、或糖脂質群中選擇的至少I種作為有效成分，對由精神疾病(綜合失調癥、抑郁病等)、神經疾患(腦變性疾病、認知癥、Parkinson癥候群、致死性家族性失眠癥、睡眠相關性癲癇、睡眠時癲癇樣發作波重疊、睡眠相關的頭痛等)引起、或由伴隨老化的身心功能降低的睡眠障礙引起的白天活動量減少及/或抑郁癥狀，具有預防或改善作用的飲食品及其制造方法。
[0015]本
【發明人】等，將花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物作為有效成分，把證明其對白天活動量減少及抑郁癥狀的改善效果作為目的，進行了精心研究，結果驚喜地發現，將Actigraph的測定值作為指標進行評價，在人體上證明了以花生四稀酸為構成脂肪酸的化合物對短期進入老人護理機構的高齡者的白天活動量減少及抑郁癥狀的改善效果。
[0016]因此，根據本發明可以提供將花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物作為有效成分、改善白天活動量減少及/或抑郁癥狀的改善劑以及對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用的組合物及其制造方法。更加詳細地說，提供下述改善劑、組合物及其制造方法:將從花生四烯酸、花生四烯酸醇酯、及構成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂質、或糖脂質組中選擇的至少I種作為有效成分，對由精神疾病(綜合失調癥、抑郁病等)引起的睡眠障礙、神經疾患(腦變性疾病、認知癥、Parkinson癥候群、致死性家族性失眠癥、睡眠相關性癲癇、睡眠時癲癇樣發作波重疊、睡眠相關的頭痛等)引起的睡眠障礙、或由伴隨老化的身心功能降低引起的睡眠障礙引起的白天活動量減少及/或抑郁癥狀的改善劑、以及具有預防或改善作用的組合物及其制造方法。
【附圖說明】
[0017][圖1]表示使用Actigraph評價的含有花生四稀酸的油脂對高齡者白天活動量的影響。
[0018][圖2]表示使用Zung抑郁自我評定尺度評價的含有花生四烯酸的油脂對高齡者抑郁癥狀的影響。
[0019][圖3]表示攝取含有花生四烯酸的油脂時，高齡者的白天活動量和Zung抑郁自我評定尺度評分的相關性。
【具體實施方式】
[0020]本發明涉及將花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物作為有效成分、改善白天活動量減少及/或抑郁癥狀的改善劑以及對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有預防或改善作用的組合物及其制造方法。
[0021]作為白天活動量減少及/或抑郁癥狀的原因，可以為精神疾病(綜合失調癥、抑郁病等)引起的睡眠障礙，神經疾患(腦變性疾病、認知癥、Parkinson癥候群、致死性家族性失眠癥、睡眠相關性癲癇、睡眠時癲癇樣發作波重疊、睡眠相關的頭痛等)引起的睡眠障礙或由伴隨老化的身心功能降低引起的睡眠障礙等，但并不限于這些癥狀或疾病，而是包括所有的與白天活動量減少及/或抑郁癥狀相關的癥狀或疾病。
[0022]本發明的有效成分是花生四烯酸，可以利用所有的以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物。以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物，可以為花生四烯酸鹽，如鈣鹽、鈉鹽等，此外還可以為花生四烯酸的低級醇酯，如花生四烯酸甲酯、花生四烯酸乙酯等，此外還可以利用構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯、磷脂質、糖脂質等。并且，本發明并不限于上述例舉的物質，可以利用所有的以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物。
[0023]考慮在食品方面應用時，優選花生四烯酸是甘油三酯、磷脂質的形式，特別優選是甘油三酯的形式。含有花生四烯酸的甘油三酯(與含有構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯含義相同)的天然供給源幾乎不存在，本
【發明人】們可以把以花生四烯酸為構成脂肪酸的甘油三酯應用于工業，提供給針對高齡者的白天活動量減少及抑郁癥狀的攝取試驗使用，本發明的有效成分的效果首次在人體試驗中得到證明，證明其對白天活動量減少及抑郁癥狀具有預防或改善效果，并且證明該效果由花生四烯酸產生。
[0024]因此，在本發明中可以使用含有本發明的有效成分的構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯(含有花生四烯酸的甘油三酯)。作為含有花生四烯酸的甘油三酯，構成甘油三酯的全部脂肪酸中花生四烯酸的比例等于或大于20重量(W/W)%、優選等于或大于30重量％、更優選等于或大于40重量％的油脂(甘油三酯)是適用于食品時的優選方式。因此，在本發明中，只要是培養具有生產含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)的能力的微生物得到的油脂，都可以使用。
[0025]作為具有生產含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)的能力的微生物，可以是屬于被孢霉屬(Mortierella)、耳霉屬(Conid1bolus)、腐霉屬(Pythium)、疫霉屬(Phytophthora)、青霉屬(Pencillium)、芽枝霉屬(Cladosporium)、毛霉屬(Mucor)、謙刀菌屬(Fusarium)、曲霉屬(Aspergillus)、紅酵母屬(Rhodotorula)、蟲霉屬(Entomophthora)、Echinosporangium 屬、水霉屬(Saprolegnia)的微生物。
[0026]屬于被孢霉屬(MortierelIa)被孢霉屬(MortiereI Ia)亞屬的微生物，可以為Mortierella elongata、Mortierella exigua、Mortierella hygrophila、Mortierellaalpine等。具體來說，可以是Mortierel la elongate IF08570、Mortierel la exiguaIF08571、Mortierella hygrophila IF05941、Mortierella alpine IF08568、ATCC16266、ATCC32221、ATCC42430、CBS219.35、CBS224.37、CBS250.53、CBS343.66、CBS527.72、CBS529.72、CBS608.70、CBS754.68 等菌株。
[0027]這些菌株，都可不受任何限制從大阪市財團法人發酵研究所(IFO)、美國模式菌種收集中心(American Type Culture Collect1n，ATCC)及Centrralbureau voorSchimme I culture s (CBS)得到。此外本發明的研究組還可以使用從土壤中分離的菌株Mortierella elongate SAM0219(微工研菌寄第8703號)(微工研條寄第1239號)。
[0028]為了培養本發明使用的菌株，可將其菌株的胞子、菌絲、或提前培養得到的前培養液接種到液體培養基或固體培養基上培養。如果是液體培養基，作為碳源一般使用葡萄糖、果糖、木糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、糖蜜、甘油、甘露醇等，任何碳源都可以使用，并不限于這些。
[0029]作為氮源，可以使用胨、酵母浸膏、麥芽浸膏、肉浸膏、酸水解酪素(Casaminoacids)、谷物浸提液(corn steep liquor)、大豆蛋白、脫脂大豆、棉籽渣等天然氮源，此外還可以使用尿素等有機氮源，以及硝酸鈉、硝酸銨、硫酸銨等無機氮源。此外可根據需要也可將磷酸鹽、硫酸鎂、硫酸鐵、硫酸銅等無機鹽及維生素等作為微量營養源使用。這些培養基的成分只要其濃度對微生物的生長發育不產生危害，沒有特別限定。實際上一般來說，碳源為0.1重量％?40重量％，優選I重量％?25重量％。開始的氮源添加量為0.1重量％?10重量％，優選0.1重量％?6重量％，培養途中也可以流加氮源。
[0030]通過控制培養基碳源的濃度，可以使含有花生四烯酸等于或大于45重量(W/W)%的油脂(甘油三酯)作為本發明的有效成分。對于培養，培養2?4日為菌體增殖期，培養2?4日后為油脂蓄積期。使起初的碳源濃度為I重量％?8重量％，優選I重量％?4重量％的濃度，僅在菌體增殖期和油脂蓄積期的初期之間，逐次添加碳源，逐次添加的碳源的總和為2重量％?20重量％，優選5重量％?15重量％。并且，在菌體增殖期和油脂蓄積初期之間的碳源的逐次添加量，根據起初的氮源濃度進行添加，使培養7日后、優選培養6日后、更優選培養4日后的培養基中的碳源濃度為0，這樣可以得到含有花生四烯酸等于或大于45重量％的油脂(甘油三酯)，可以作為本發明的有效成分。
[0031]花生四烯酸生產菌的培養溫度由使用的微生物決定，可以為5°C?400C，優選200C?30 °C，或者可在20 °C?30 °C培養使菌體增殖，然后在5 °C?20 °C繼續培養生產不飽和脂肪酸。這樣的溫度管理可以使生成脂肪酸中的多不飽和脂肪酸的比例提高。使培養基的PH為4?10，優選pH為5?9，進行通氣攪拌培養、振蕩培養、或靜置培養。通常培養2日?30日間，優選5日?20日間，更優選5日?15日間。
[0032]作為提高含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)中的花生四烯酸的比例的方法，除控制培養基碳源濃度外，還可以使含有花生四烯酸的油脂進行選擇性水解，這樣可以得到花生四烯酸高含量的油脂。該選擇性水解使用的脂肪酶沒有對甘油三酯的位置特異性，其水解活性與雙鍵數量成比例地降低，所以多不飽和脂肪酸以外的脂肪酸的酯鍵可被水解。而且，生成的PUFA部分在甘油酯間發生酯交換反應等，因此可生成多不飽和脂肪酸高的甘油三酉旨(“Enhancement of Archidonic: Selective Hydrolysis of a Single-Cell Oilfrom Mortierella with Candida cylindracea Lipase，，:J.Am.0iI Chem.Soc.,72,1323-1327(1998))。
[0033]這樣，含有花生四烯酸的油脂進行選擇性水解得到的花生四烯酸高含量的油脂(甘油三酯)可以作為本發明的有效成分。相對于本發明的含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)的全部脂肪酸，花生四烯酸的比例從排除其他脂肪酸的影響的目的來看，優選高的比例，但并不限于高比例。實際在應用于食品時，有時花生四烯酸的絕對量會成為問題，實際可以使用含有等于或大于10重量％的花生四烯酸的油脂(甘油三酯)。
[0034]在本發明中，作為構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯，可以使用1，3位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯。并且可以使用含有的I，3位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯等于或大于5mol%、優選等于或大于10mol%、更優選等于或大于20mol%、最優選等于或大于30mol%的油脂(甘油三酯)。上述甘油三酯的I，3位結合的中鏈脂肪酸，可以利用從具有6?12個碳原子的脂肪酸中選擇的脂肪酸。作為具有6?12個碳原子的脂肪酸，如可以為辛酸或癸酸等，特別優選I，3_辛酰基-2-花生四烯酰-甘油(以后稱“8A8”)。
[0035]這些I，3_位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯，以高齡者為對象時，是最合適的油脂(甘油三酯)。一般攝取油脂(甘油三酯)，進入小腸內后被胰脂肪酶水解，該胰脂肪酶對1，3位有特異性，甘油三酯的1，3位被切斷，形成2分子的游離脂肪酸，同時生成I分子的2-單酰基甘油(2-MG)。該2-MG的膽汁酸溶解性非常高，吸收性良好，因此一般說2位脂肪酸的吸收性好。此外，2-MG在膽汁酸中溶解后，產生表面活性劑的作用，提高游離脂肪酸的吸收性。
[0036]游離脂肪酸和2-MG能夠與膽固醇、磷脂質等一起生物合成膽汁酸復合膠束(micelle)，然后被小腸上皮細胞吸收，再合成三酰基甘油，最終作為乳糜微粒(Chylomicron)在淋巴內釋放。但是，該胰脂肪酶的脂肪酸特性具有對飽和脂肪酸高、難于切斷花生四烯酸的特征。并且問題是隨著年齡的增加胰脂肪酶的活性降低，因此對于高齡者，I，3位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯是最合適的油脂(甘油三酯)。
[0037]作為I，3位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯的具體制造方法之一，在含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)及中鏈脂肪酸存在的條件下，可以使僅僅對甘油三酯的I，3位酯鍵作用的脂肪酶發揮作用來制造。
[0038]作為原料的油脂(甘油三酯)是以花生四烯酸為構成脂肪酸的甘油三酯，在相對于構成甘油三酯的全部脂肪酸中花生四烯酸的比例高時，為了防止因未反應的油脂(原料甘油三酯和I，3位的脂肪酸中只有I個是中鏈脂肪酸的甘油三酯)的增加引起的反應收率降低，通常的酶反應溫度為20 °C?30 °C、高為30 0C?50 °C、優選40 V?50 °C。
[0039]作為對甘油三酯的I，3位的酯鍵產生特異作用的脂肪酶，如可以是根霉屬(Rhizopus)、(Rhizomucor)、曲霉屬(Aspergillus)等微生物產生的酶、豬胰臟脂肪酶等。對于所述脂肪酶，可以使用市售的，如戴爾根霉(Rhizopus delemar)的脂肪酶(田邊制藥(株)制、talipase)、根毛霉屬(Rhizomucor miehei)的脂肪酶(諾和諾德Novo Nordisk(株)社制、酶性核酸(Ribozyme) IM)、Apergillus niger的脂肪酶(天野制藥(株)脂肪酶A)等，但不限于這些酶，只要是對I，3位有特異性的脂肪酶，都可以使用。
[0040]上述脂肪酶的使用形式，從提高反應效率的目的來看，反應溫度應等于或大于30°C，優選等于或大于40°C，所以優選使用以附加酶的耐熱性為目的的在固定化擔體上固定的脂肪酶。固定化擔體是多孔性樹脂，可以為具有約等于或大于100埃(angstrom)的孔徑的離子交換樹脂擔體，如Dowex MARATHON WBA等。但是，并不限于這些固定化擔體，只要是能夠附加耐熱性的固定化擔體，都可以使用。
[0041 ]對于固定化擔體I，使其懸浮于0.5-20倍重量的對I，3位有特異性的脂肪酶的水溶液中，在懸浮液中邊攪拌邊慢慢加入2-5倍量的冷丙酮(如-80°C)形成沉淀。將該沉淀物在減壓下干燥，可以調制固定化酶。進而簡便的方法是，對于固定化擔體I，使0.05?0.4倍量的對I，3位有特異性的脂肪酶溶解于最小量的水中，邊攪拌邊混合固定化擔體，在減壓下進行干燥可調制固定化酶。通過該操作約90%的脂肪酶可固定在擔體上，但這種情況下其本身根本沒有酯交換活性，在加入1-10重量(W/V)%水的基質中、優選在加入1-3重量％的基質中進行前處理，能夠提供制造活性化效率最高的固定化酶。
[0042]根據酶的種類，在本反應系中加入的水分量極為重要，不含水時難于進行酯交換反應，另外水分量多時會發生水解反應，甘油酯的回收率降低(發生水解可生成甘油二酯、單酸甘油酯)。但是，在該情況下如果使用經過前處理的活性化的固定化酶，在本反應中加入的水分量并不重要，即使在完全不含水的體系中，也能夠有效地進行酯交換反應。并且可以通過選擇酶的種類而省去前處理。
[0043]這樣，使用具有耐熱性的固定化酶，可以提高酶反應的溫度，因此，在對于1，3位特異性脂肪酶反應性低的含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)中，不會降低反應效率，而能夠有效地制造I，3位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯(8A8)。
[0044]作為制造對白天活動量降低及/或抑郁癥狀具有改善作用的飲食品的制造方法，可以將花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物單獨使用，或者可以將其與實質上不含花生四烯酸、或即使含有也只是微量的飲食原料一起配合。這里的微量，指的是即使飲食原料中含有花生四烯酸，人體攝取配合其的食品后，也達不到下述本發明的I天應攝取花生四烯酸的量。
[0045]特別是構成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯的情況下，油脂(甘油三酯)的用途有無限的可能性，可以作為食品、飲料、化妝品、醫藥品的原料及添加物使用。并且其使用目的、使用量不受任何限制。
[0046]例如，作為食品組合物，可以是一般食品、其他功能性食品、營養輔助食品、特定保健用食品、早產兒用調制乳、乳兒用調制乳、乳兒用食品、孕產婦食品或老人用食品等。作為含有油脂的食品例子，可以是含有肉、魚、或果仁等本來的油脂的天然食品，湯等調理時加入油脂的食品，炸面(餅)圈等使用油脂作熱介質的食品，黃油等油脂食品，小甜餅干等加工時加入油脂的加工食品，或hard biscuit等加工完成時將油脂噴霧或涂抹油脂的食品等。并且可以添加到不含油脂的農產食品、發酵食品、畜產食品、水產食品或飲料中。而且可以是功能性食品、醫藥品的形式，例如可以為經腸營養劑、粉末、顆粒、含片、內服液、懸浮液、乳濁液、糖漿等加工形式。本發明的制品可以附加對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用的標示。
[0047]本發明的組合物，除本發明的有效成分以外，還可以含有一般飲食品、醫藥品或醫藥外用品使用的各種擔體、添加物。特別優選含有以防止本發明有效成分氧化為目的的抗氧化劑。作為抗氧化劑，可以為生育酚類、黃酮衍生物、甜菜內酯類、麹酸、沒食子酸衍生物、兒茶酸類、蜂斗葉酸、棉子酚、吡嗪衍生物、芝麻酚、愈瘡木酚、愈瘡木酸、P-香豆素酸、去甲二氫愈瘡木酸、留醇、terpen類、核酸堿基類、類胡蘿卜素類、木聚糖類等天然抗氧化劑，以及以抗壞血酸棕櫚酸酯、抗壞血酸硬脂酸酯、丁基羥基茴香醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)J^丁基對苯二酸(TBHQ)、4-輕甲基-2，6_二叔丁基酸(腿1^)(4-取(11'(?501161:1171-2，6-(1;[-丨61'1:-buty Ipheno I)為代表的合成抗氧化劑。
[0048]在生育酚類中，可以為α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、ε-生育酚、ζ-生育酚、η-生育酚及生育酚酯(醋酸生育酚等)，甚至可以把生育三烯酚作為類緣化合物。此夕卜，類胡蘿卜素類，可以為胡蘿卜素、角黃素(canthaxanthin)、4下青素(astaxanthin)等。
[0049]本發明的組合物，除本發明的有效成分外，擔體可以為各種載體擔體、填充劑、稀釋劑、增量劑、分散劑、賦形劑、粘結劑溶劑(如水、乙醇、植物油)、溶解輔助劑、緩沖劑、溶解促進劑、膠化劑、懸浮劑、小麥粉、米粉、淀粉、玉米淀粉、多糖、乳蛋白質、骨膠原、米油、卵磷脂等。作為添加劑，如可以為維生素類、甜味料、有機酸、著色劑、香料、防潮劑、纖維、電解質、礦物質、營養素、抗氧化劑、保存劑、芳香劑、濕潤劑、天然食物提取物、蔬菜提取物等，但并不限于這些。
[0050]花生四烯酸及以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物的主藥效成分是花生四烯酸。有報告指出:每日從食物中攝取的花生四烯酸的量，關東地區為0.14g、關西地區為0.19-
0.20g[脂質營養學4，73，(1995)]。從高齡者攝取的油脂量少、胰脂肪酶活性低等方面來考慮，高齡者必須攝取相當量、或大于相當量的花生四烯酸。因此，本發明的花生四烯酸及以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物的成人(如體重為60kg)每日攝取量，以花生四烯酸量換算應為0.0Olg?20g、優選0.0lg?10g、更優選0.05g?5g、最優選0.1g?2g。
[0051]將本發明的有效成分實際應用于飲食品時，在食品中配合的花生四烯酸的絕對量也很重要。但是，在飲食品中配合的絕對量也因配合的飲食品的攝取量而變化，所以將含有構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯配合在食品中時，配合的花生四烯酸應等于或大于0.001重量％，優選等于或大于0.01重量％，更優選等于或大于
0.1重量％。并且，將I，3位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯配合在飲食品中時，配合的花生四烯酸應等于或大于0.0003重量％，優選等于或大于0.003重量％，更優選等于或大于0.03重量％。
[0052]本發明的組合物作為醫藥品使用時，可以按照制劑技術領域慣用的方法如日本藥局方所述方法或以此為標準的方法進行制造。
[0053]本發明的組合物作為醫藥品使用時，組合物中的有效成分的配合量，只要能夠達到本發明的目的，沒有特別限定，可以按照適當的配合比例使用。
[0054]本發明的組合物作為醫藥品使用時，優選以給藥單位的形式給藥，特別優選經口給藥。本發明的組合物的給藥量隨年齡、體重、癥狀、給藥次數等不同而不同，例如，成人(約60kg)每日攝取本發明的花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物的量，以花生四稀酸量換算，通常約為0.00Ig?20g，優選0.0Ig?1g，更優選0.05g?5g，最優選0.1g?2g，I日可分1-3次給藥。
[0055]腦磷脂質膜的主要脂肪酸是花生四烯酸及二十二碳六烯酸，考慮到平衡，優選與二十二碳六烯酸組合。此外，因為腦磷脂質膜內二十碳五烯酸的比例很低，所以優選幾乎不含二十碳五烯酸的花生四烯酸和二十二碳六烯酸組合。并且，在花生四烯酸和二十二碳六烯酸的組合中，花生四烯酸/ 二十二碳六烯酸比為0.1?15范圍，優選0.25?10的范圍。此夕卜，優選配合的二十碳五烯酸的量不超過花生四烯酸的五分之一(重量比)的飲食物。
[0056]【實施例】
[0057]根據實施例對本發明進行更加具體的說明。但是，本發明不限于實施例。
[0058]【實施例1:含有花生四烯酸的甘油三酯的制造方法】
[0059]作為花生四烯酸生產菌，使用高山被孢霉(Mortierella alpina)CBS754.68，將含有 1.8%葡萄糖、3.1%脫脂大豆粉、0.1%大豆油、0.3%101屮04、0.1%恥2304、0.05%0&(:12.2H20及0.05%MgCl2.6H20的培養基6kL加入到1kL的培養槽內調制，開始調整pH為6.0，取前培養液30L接種，在溫度26 0C、通氣量360m3/h、槽內壓200kPa的條件下通氣攪拌培養8天。且調整攪拌數使溶存氧氣濃度維持為10ppm-15ppm。采用流加法使到第4日為止培養基中的葡萄糖濃度為1%_2.5%的范圍內，此后維持0.5%-1%(上述％表示重量(W/V)%)。
[0060]培養結束后，通過過濾、干燥，回收含有以花生四烯酸為構成脂肪酸的甘油三酯的菌體，利用己烷從得到的菌體中提取油脂，經過食用油脂的精制工序(脫膠、脫酸、脫臭、脫色)，得到150kg含有花生四烯酸的甘油三酯(含有構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯)。將得到的油脂(甘油三酯)進行甲酯化，將得到的脂肪酸甲酯用氣相色譜法分析，花生四烯酸占全部脂肪酸的比例為40.84重量％。
[0061]并且，棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、γ-亞麻酸、二均-γ-亞麻酸等分別為11.63重量％、7.45重量％、7.73重量％、9.14重量％、2.23重量％、3.27重量％。并且將上述含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)(SUNTGA40S)進行乙酯化，采用規定的高效液相色譜法，從含有40重量％的花生四烯酸乙酯的脂肪酸乙酯混合物中，分離、精制99重量％的花生四烯酸乙酯。
[0062]【實施例2:含有等于或大于5mol%8A8的甘油三酯的制造】
[0063]將10g離子交換樹脂擔體(DowexMARATHON WBA:Dow Chemical)懸浮于80ml的戴爾根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶水溶液中(talipase 12.5%:田邊制藥(株))，攪拌240ml的冷丙酮(_80°C)，進行減壓干燥得到固定化的脂肪酶。
[0064]接著，取80g實施例1得到的含有40重量％的花生四烯酸的甘油三酯(SUNTGA40S)、160g辛酸、12g上述固定化脂肪酶、4.8ml水，在30°C的條件下攪拌(130rpm)48小時進行反應。反應結束后，除去反應液，得到活性化固定化酶。
[0065]接著，取1g固定化脂肪酶[戴爾根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶、擔體DowexMARATHON WBA]填充到帶有夾層的玻璃柱(1.8 X 12.5cm、容量31.8ml)內，實施例1得到的SUNTGA40S和辛酸以1:2的比例混合的反應油脂以一定流速(4ml/h)流入柱內，實施連續反應得到400g反應油脂。此外，柱溫為40°C_4rC。通過分子蒸餾從得到的反應油脂中除去未反應的辛酸和游離脂肪酸，經過食用油脂的精制工序(脫膠、脫酸、脫臭、脫色)，得到含有8A8的油脂(甘油三酯)。
[0066]通過氣相色譜法和高效液相色譜法，對得到的含有8A8的油脂中8A8的比例進行分析，發現8A8的比例是31.6mol% (且8P8、808、8L8、8G8、8D8的比例分別為0.6mol%、7.911101%、15.111101%、5.211101%、4.811101%，甘油三酯2位結合的脂肪酸？、0、1^、6、0分別表示棕櫚酸、油酸、亞油酸、γ -亞麻酸、二均-γ -亞麻酸，8Ρ8是I，3-辛酰基-2-棕櫚油酸-甘油、808是I，3-辛酰基-2-油酰基-甘油、8L8是I，3-辛酰基-2-亞油酰基-甘油、8G8是I，3-辛酰基-2- γ -亞麻酰基-甘油、8D8是I，3_辛酰基-2-二均-γ -亞麻酰基-甘油)。米用規定方法的高速液相色譜法從得到的含有8Α8的油脂(甘油三酯)中分離、精制96mol %的8A8。
[0067]【實施例3:試驗膠囊的制造】
[0068]在100重量份明膠和35重量份食品添加甘油中，加水在50 °C?60 °C溶解，調制黏度為2000cp的明膠被膜。接著在實施例1得到的含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)中混合
0.05重量％的維生素E油，調制內容物I。使用該內容物1，根據常法進行膠囊成型和干燥，制造每粒含有200mg內容物的軟膠囊。作為人體試驗用的模擬膠囊，同時制造內容物為橄欖油的軟膠囊。
[0069]【實施例4:對于短期進入老人護理機構的高齡者的白天活動量減少及抑郁癥狀產生影響的含有花生四烯酸的食用油脂膠囊的攝取試驗】
[0070]白天及夜間的活動量的測定，在不好使的手腕上帶上內部裝有傳感器用于測定活動量的手表型測定器Actigraph，連續I周時間晝夜測定活動量。用計算機軟件分析該Actigraph的測定結果，評價白天活動量、夜間睡眠質量等。此外，本發明的人體試驗是在遵守helsinki宣言精神、十分關照的情況下實施的。
[0071]進行是否同意參加試驗的說明會，對70名同意的短期進入老人護理機構的高齡者，分為A和B兩個組(A:N=4、B:N = 3)，為了使A組每日能夠攝取240mg花生四烯酸，使其每日攝取3粒實施例3調制的含有花生四烯酸的食用油脂膠囊(花生四烯酸為SOmg/粒)，服用I個月，使B組服用3粒模擬膠囊。在攝取膠囊前后，在不好使的手腕上帶上Actigraph，連續I周晝夜測定活動量。其后，A組、B組的被驗者停止攝取膠囊2周時間，作為洗胃期間。洗胃之后使A組服用模擬膠囊、B組服用含有花生四烯酸的食用油脂膠囊，服用I個月，同樣在攝取膠囊前后在不好使的手腕上帶上Actigraph，連續I周晝夜測定活動量(雙盲試驗、交叉試驗)。
[0072]同時在攝取各膠囊前后，為了判定抑郁癥狀的程度，實施Zung抑郁自我評定尺度的檢查。使用該Zung抑郁自我評定尺度的評分(等于或大于40分:輕度抑郁癥狀，等于或大于50:中度抑郁癥狀)，評價抑郁程度的變化。
[0073]攝取膠囊前后的白天平均活動量的變化如圖1所示，由Zung抑郁自我評定尺度測定的評分的變化如圖2所示。攝取模擬膠囊時，白天平均活動量和由Zung抑郁自我評定尺度測定的評分都沒有顯著的變化，攝取含有花生四烯酸的食用油脂膠囊后，白天平均活動量明顯增加19.lcounts/day，由Zung抑郁自我評定尺度測定的評分明顯改善3.2點。
[0074]接著，用根據最小二乘法的一次近似曲線求出白天平均活動量和由Zung抑郁自我評定尺度測定的評分之間的相關性(圖3)，發現白天平均活動量和由Zung抑郁自我評定尺度測定的評分之間存在顯著相關性(相關系數R = -0.561)，原來Zung抑郁自我評定尺度的測定的平均分為37.6分，雖沒有達到輕度抑郁癥狀的程度，但證明抑郁程度減輕可使白天活動量增加。這樣首次證明，服用含有花生四烯酸的食用油脂，能夠改善白天活動量減少及抑郁癥狀，并且首次證明其效果是由花生四烯酸產生的。
[0075]【實施例5:調制配合含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)的膠囊的例子】
[0076]在100重量份明膠和35重量份食品添加物用甘油中，加水在50°C?60°C溶解，調制黏度為2000cp的明膠被膜。接著在實施例2得到的含有32mol%8A8的油脂(甘油三酯)中，混合0.05重量％維生素E油，調制內容物2。取50重量％的實施例1得到的含有花生四烯酸的油月旨(甘油三酯)和50重量的％魚油(金槍魚油:二十碳五烯酸及二十二碳六烯酸占全部脂肪酸的比例分別為5.1 %和26.5%)混合，再混合0.05重量％的維生素E油，調制內容物3。
[0077]取80重量％的含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)和20重量％的魚油(金槍魚油:二十碳五烯酸及二十二碳六烯酸占全部脂肪酸的比例分別為5.1%和26.5%)混合，再混合0.05重量％的維生素E油，調制內容物4 ο在實施例1得到的99 %花生四烯酸乙酯內，混合
0.05重量％的維生素E油，調制內容物5。使用這些內容物2到5，根據常法進行膠囊成形和干燥，制造每粒含有180mg內容物的軟膠囊。
[0078]【實施例6:在脂肪輸液劑中使用】
[0079]取400g實施例2得到的含有96mol%8A8的油脂(甘油三酯)、48g精制卵黃卵磷脂、20g油酸、10g甘油及40ml 0.1N苛性蘇打加在一起，用均漿器分散，加入注射用蒸餾水調整為4立升。接著用高壓噴霧式乳化機乳化，調制成脂質乳液。分別取該脂質乳液200ml注入塑料制袋子，然后在121°C高壓蒸汽滅菌處理20分鐘，成為脂肪輸液劑。
[0080]【實施例7:在果汁中使用】
[0081 ] 將2gi3_環糊精添加到20ml的20%乙醇水溶液中，這里用攪拌器邊攪拌邊加入10mg實施例1得到的含有花生四烯酸的甘油三酯(配合0.05 %維生素E)，50 °C保持2小時。冷卻到室溫(約I小時)后，進一步繼續攪拌，在4°C保持10小時。將生成的沉淀離心分離然后回收，用正己烷洗凈，然后進行凍結干燥，得到1.Sg含有花生四烯酸的甘油三酯的環糊精包接化合物。取Ig該粉末均勻混合在1L果汁中，調制含有花生四烯酸的甘油三酯的果汁。
【主權項】
1.組合物，其含有花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物、對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用。2.如權利要求1所述的組合物，其中，以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物是花生四烯酸醇酯，或者是構成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂質或糖脂質。3.如權利要求2所述的組合物，其中，構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯是I，3位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯。4.如權利要求3所述的組合物，其中，中鏈脂肪酸是從具有6?12個碳原子的脂肪酸中選擇的脂肪酸。5.組合物，其含有甘油三酯、對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用，所述甘油三酯含有構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯。6.如權利要求5所述的組合物，其特征在于，甘油三酯的花生四烯酸的比例相對于構成甘油三酯的全部脂肪酸等于或大于10重量％，所述甘油三酯含有構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯。7.如權利要求5或6所述的組合物，其中，甘油三酯是從屬于被孢霉屬(MortierelIa)、耳霉屬(Conid1bolus)、腐霉屬(Pythium)、疫霉屬(Phytophthora)、青霉屬(Pencillium)、芽枝霉屬(Cladosporium)、毛霉屬(Mucor)、鐮刀菌屬(Fusarium)、曲霉屬(Aspergillus)、紅酵母屬(Rhodotorula)、蟲霉屬(Entomophthora)、Echinosporangium屬、水霉屬(Saprolegnia)的微生物中提取的組合物，所述甘油三酯含有構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯。8.如權利要求5?7中任一項所述的組合物，其中，含有構成脂肪酸的一部分或全部為花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯是幾乎不含二十碳五烯酸的甘油三酯。9.組合物，其含有甘油三酯、對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用，所述甘油三酯含有等于或大于5mol %的I，3位結合中鏈脂肪酸、2位結合花生四烯酸的甘油三酯。10.如權利要求9所述的組合物，其中，中鏈脂肪酸是從具有6?12個碳原子的脂肪酸中選擇的脂肪酸。11.如權利要求1?10中任一項所述的組合物，其中，白天活動量減少或抑郁癥狀的原因是綜合失調癥、抑郁病的精神疾患。12.如權利要求1?10中任一項所述的組合物，其中，白天活動量減少或抑郁癥狀的原因是腦變性疾患、認知癥、Parkinson癥候群的神經疾患。13.如權利要求1?10中任一項所述的組合物，其中，白天活動量減少或抑郁癥狀的原因是因老化引起的身心功能的降低。14.如權利要求1?13中任一項所述的組合物，其中，組合物是食品組合物或醫藥品組合物。15.如權利要求14所述的組合物，其特征在于，食品組合物是一般食品、飲食物、功能性食品、營養輔助食品、特定保健用食品、早產兒用調制乳、乳兒用調制乳、乳兒用食品、孕產婦食品或老人用食品。16.如權利要求1?15中任一項所述的組合物，其中還含有二十二碳六烯酸及/或以二十二碳六烯酸為構成脂肪酸的化合物。17.如權利要求16所述的組合物，其中，以二十二碳六烯酸為構成脂肪酸的化合物是二十二碳六烯酸醇酯，或者是構成脂肪酸的一部分或全部是二十二碳六烯酸的甘油三酯、磷脂質、或糖脂質。18.如權利要求16或17所述的組合物，其特征在于，在組合所述花生四烯酸和二十二碳六烯酸時，花生四烯酸/二十二碳六烯酸的重量比在0.1?15的范圍。19.如權利要求1?18中任一項所述的組合物，其特征在于，相對于組合物中的花生四烯酸，組合物中的二十碳五烯酸的量不超過五分之一。20.食品組合物的制造方法，其特征在于，是對于白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用的飲食品的制造方法，花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物可以單獨使用，或者可以與實際上不含花生四烯酸、或即使含有也只是少量的飲食品原料進行配合。21.預防或治療方法，其包括將花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物向需要使用該藥的對象進行給藥的過程，對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用。22.飲食物，其附有含有花生四烯酸及/或以花生四烯酸為構成脂肪酸的化合物、對白天活動量減少及/或抑郁癥狀具有改善作用內容的標示。
【文檔編號】A23L33/115GK105878226SQ201610081360
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2006年6月29日
【發明人】石倉義之, 古賀良彥
【申請人】三得利控股株式會社