紅杜仲及其提取物用作美白有效成分的用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及植物的新用途，特別涉及紅杜仲及其提取物用作美白有效成分的用 途。
【背景技術】
[0002] 近年來隨著生活工作節奏的加快以及環境污染的加劇，人們面對的皮膚問題也越 來越多，由各種原因引起的色斑、色素沉著等已成為普遍問題，美白和抗氧化化妝品已成為 護膚類化妝品的主流品種。隨著人們消費觀念的日益成熟，消費者對美白化妝品的關注重 點不僅僅在于其功效性同時也更注重其安全性。
[0003]造成皮膚色斑、色素沉著的原因有多種，如遺傳因素和紫外線、廢氣及活性氧等環 境因素。目前的研究結果認為黑色素主要由人體皮膚表皮基底層的黑色素細胞產生，它的 含量及分布決定了皮膚的顏色。然而，黑色素在基底層的異常蓄積形成的各類色斑給現代 人尤其是女性造成了生理和心理的困擾，祛斑已是眾多女性美容的首要目標。黑色素研究 表明，酪氨酸酶是黑色素形成的關鍵酶，通過將酪氨酸羥化，產生L-3,4_二羥基苯丙氨酸 (L-D0PA)，然后再將L-D0PA進一步氧化成多巴醌，從而形成黑色素。它的過量表達是導致色 素沉著過度的主要原因，因此，抑制酪氨酸酶的活性可以阻斷黑色素的生物合成反應鏈，減 少黑色素的生成進而實現美白的效果。
[0004] 皮膚美白劑就是作用于皮膚黑色素生成、代謝過程，抑制黑色素生成且符合規范 的物質。但傳統的皮膚美白劑，往往采用化學性物質，采用過氧化氫、氯化氨基汞以及各種 酚類衍生物，它們能使黑色素組織迅速瓦解，達到快速美白功效，但對皮膚具有很大的腐蝕 性細胞毒性和過敏性，在許多國家的衛生規范中已禁用。目前，越來越多的女性對肌膚的安 全問題十分關注，為了開發符合"回歸大自然"要求的化妝品，特別是安全，無副作用的美白 產品，綠色已成為21世紀化妝品的主題，天然美白化妝品，特別是加有中草藥活性成分的化 妝品越來越受到消費者的青睞。在國際上化妝品發展最有代表性的國家如美國、日本、法國 和德國等國家中，中草藥因其天然藥效溫和且不良作用少而被廣泛認同。目前，在日本含天 然中草藥的化妝品已占整個化妝品市場的50%以上。人們開始期待無毒、無污染化妝品的 出現。研制以中草藥為原料的功能性化妝品是化妝品業未來的必然發展趨勢，此類新產品 有著巨大的經濟發展空間。
[0005] 色素沉著是由紫外線激活表皮中的黑色素細胞內的黑色素生成酶，產生色素所引 起的。在黑色素生成過程中，酪氨酸酶將酪氨酸轉化成多巴、多巴醌，經氧化而聚合生成大 分子的黑色素。因此通過抑制酪氨酸酶的活性可以限制黑色素生成，改善皮膚的色素沉著， 實現美白的效果。因此，在化妝品領域，美白性能優劣是用抑制酪氨酸酶活性能力來表征 的。
[0006] 紅杜仲又名藤杜仲、土杜仲、白杜仲、假杜仲、松筋藤、小賽格多等，紅杜仲藥材為 夾竹桃科杜仲藤屬植物杜仲藤（Parabarium micranthum(A. DC. )Pierre)、紅杜仲藤 (卩.(：11111111丨3111111^8丨31^)及毛杜仲藤（？.11皿；[1：；[1^；[；[01111161：18丨31^)的莖皮和根皮，或花皮 膠藤屬花皮膠藤(Ecdysanthera utilisHay.et Kaw.)的干燥樹皮。我國產于廣西、廣東、云 南、四川。其生于海拔300-800米的山谷、疏林或密林、灌木叢、水旁等地方，分布于錫金、尼 泊爾、越南、印度尼西亞等。近年來，國內外學者對紅杜仲屬植物的化學成分及生物活性的 研究有了一定的進展，主要含有生物堿、酚類、有機酸、糖類、黃酮等化學成分。紅杜仲藥材 可以治療風濕骨痛、骨折、外傷出血等。但到目前為止，國內外對該屬植物的化學和藥理研 究工作還不夠系統和深入，而且紅杜仲中有效成分的作用機制尚未揭示，有關其藥理活性 的物質基礎還不明確，這些都有待今后進行深入研究。
[0007] 近年來，從植物中提取安全而有效的天然酪氨酸酶抑制劑備受關注，而關紅杜仲 資源還未得到更為有效開發，目前還未見從紅杜仲用于天然美白化妝品的相關報道或專 利。

【發明內容】

[0008] 針對上述技術問題，本發明的目的之一在于提供一種紅杜仲提取物用作美白有效 成分的新用途。
[0009] 本發明的另一目的在于提供紅杜仲提取物的制備方法。
[0010] 具體的，本發明公開的技術方案為:紅杜仲及其提取物用作美白有效成分的用途； 所述紅杜仲提取物用于美白的有效成分是指抑制酪氨酸酶活性的有效成分。
[0011] 進一步，所述的紅杜仲是指夾竹桃科杜仲藤屬植物杜仲藤（Parabarium micranthum(A.DC. )Pierre)、紅杜仲藤（Ρ· chunnianumTsiang)、毛杜仲藤 (P.huaitingiiChunet Tsiang)的莖皮和根皮，或花皮膠藤屬花皮膠藤（Ecdysanthera utilisHay.et Kaw.)的干燥樹皮。
[0012] 優選的，所述紅杜仲提取物是指通過提取溶劑進行提取制得的提取物;所述提取 溶劑優選為乙醇水溶液。
[0013] 進一步，所述的紅杜仲提取物的制備方法:為取紅杜仲，干燥后，粉碎成粉，加乙醇 水溶液冷浸后加熱回流，然后合并濾液，再經減壓回收提取溶劑后既得紅杜仲提取物。
[0014] 進一步，所述乙醇水溶液，即為乙醇和水按體積比進行混合制得的混合溶液；乙醇 水溶液的乙醇體積濃度為30-95%，更優選為60-70%。
[0015] 優選的，乙醇水溶液與紅杜仲粉末的用量比例為10~20mL乙醇水溶液：lg紅杜仲 粉末。
[0016] 優選的，所述加熱回流的溫度為70-90°C，時間為60-120分鐘。
[0017] 優選的，所述冷浸的溫度為10_30°C。
[0018] 本發明還包括一種美白化妝品，其特征在于:所述的美白化妝中品有效成分中含 有紅杜仲或紅杜仲提取物。
[0019] 優選的，所述制備的美白化妝品包括但不限于化妝水、爽膚水、乳液、霜膏、潔面霜 等。
[0020] 本發明還包括一種用于制備治療色素沉著性疾病的藥物，其特征在于:所述的制 備治療色素沉著性疾病的藥物的有效成分中含有紅杜仲或紅杜仲提取物。
[0021] 采用上述技術方案，本發明所述的紅杜仲及其提取物用作美白有效成分的用途， 本發明提供了一種天然的植物美白提取物，對人體無副作用，在美白化妝品領域有廣泛的 應用潛能。試驗表明，紅杜仲提取物具有美白的功效，可將之與其他化妝品用輔料與添加劑 混合制成各種皮膚護理的化妝品組合物及各種劑型，具有實際應用價值；同時紅杜仲提取 物還可以用于制備治療色素沉著性疾病的藥物。
【附圖說明】
[0022]圖1為紅杜仲不同濃度乙醇提取物對B16細胞活力的影響；
[0023]圖2為不同乙醇濃度回流紅杜仲提取物對B16細胞黑色素含量的影響結果;其中：A 紅杜仲30 %乙醇回流提取物，B紅杜仲50 %乙醇回流提取物，C紅杜仲70 %乙醇回流提取物， D紅杜仲95 %乙醇回流提取物；
[0024]圖3為同乙醇濃度回流紅杜仲提取物對B16細胞酪氨酸酶活力的影響結構;其中：E 紅杜仲30 %乙醇回流提取物，F紅杜仲50 %乙醇回流提取物，G紅杜仲70 %乙醇回流提取物， Η紅杜仲95 %乙醇回流提取物。
【具體實施方式】
[0025]以下通過特定的具體實例說明本發明的技術方案。應理解，本發明提到的一個或 多個方法步驟并不排斥在所述組合步驟前后還存在其他方法步驟或在這些明確提到的步 驟之間還可以插入其他方法步驟;還應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制 本發明的范圍。而且，除非另有說明，各方法步驟的編號僅為鑒別各方法步驟的便利工具， 而非為限制各方法步驟的排列次序或限定本發明可實施的范圍，其相對關系的改變或調 整，在無實質變更技術內容的情況下，當亦視為本發明可實施的范疇。
[0026]實施例1紅杜仲不同濃度乙醇提取物對蘑菇酪氨酸酶的抑制
[0027] 在化妝品領域中通常美白性能的優劣是用酪氨酸酶抑制活性能力測試來表征的。 酪氨酸酶抑制活性能力測試原理如下：
[0028] 色素沉著是由紫外線激活表皮中的黑色素細胞內的黑色素生成酶產生色素所引 起的。在黑色素生成過程中，酪氨酸酶將酪氨酸轉化成多巴、多巴醌，經氧化而聚合生成大 分子的黑色素。因此通過抑制酪氨酸酶的活性可以限制黑色素生成，改善皮膚的色素沉著。
[0029] 試驗方法：
[0030] 1.使用96孔板設立樣品孔，樣品對照孔，陽性對照孔，陰性對照孔。
[0031] 2.在樣品孔和樣品對照孔中各加入30yL不同濃度的樣品溶液，陽性和陰性對照孔 以磷酸緩沖液(PBS)代替。所述磷酸緩沖溶液是指磷酸氫二鈉7.16克，加上磷酸二氫鈉3.12 克，用200mL去離子水溶解，調pH值6.8;
[0032] 3.在樣品孔，樣品對照孔，陽性對照孔，陰性對照孔中各加入60yL的0.15%L-多巴 溶液，然后用磷酸緩沖液補至各孔總體積為18〇yL，混勻；
[0033] 4.在樣品孔和陽性對照孔中加入30yL酪氨酸酶溶液(酶活10〇U/mL)，樣品對照孔 和陰性對照孔以30yL磷酸緩沖液(pH=6.8)代替，使樣品和酪氨酸酶充分混勻，30°C恒溫在 475nm處測定吸光度，每5s記一次數，連續測定30s，以反應時間對吸光度作圖并進行直線擬 合，根據樣品孔與陽性對照孔直線斜率的變化計算抑制率。
[0034] 抑制率I(%) = [l-kT/kC]X100%
[0035] 式中：
[0036] kT:樣品孔直線斜率；
[0037] kC:陽性對照孔直線斜率；
[0038]半數抑制率(IC5Q)的計算：
[0039] IC5Q值定義為抑制率為50%時所需酪氨酸酶抑制劑的濃度。以樣品的濃度對酪氨 酸酶的抑制率作圖并進行擬合，讀取計算IC5〇值。
[0040] 5.實驗結果：
[0041] 紅杜仲干燥粉末分別取30g，室溫下（10~30°C)分別以體積濃度為水回流、30%、 50 %、70 %、95 %乙醇480mL冷浸、85°C回流提取120min，取濾液，減壓回收溶劑至干，取提取 物適量，配制成7mg/mL溶液備用，測定其酪氨酸酶抑制作用，以便與后續制得的紅杜仲活性 部位的活性作比較。其中，紅杜仲95%乙醇回流得到的醇提物效果最佳，其IC50為0.062mg/ mL〇
[0042] 結果如表1:
[0043] 表1紅杜仲不同濃度乙醇提取物蘑菇酪氨酸酶抑制活性IC5