一種包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫用生物材料技術領域，尤其是涉及一種包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑。
【背景技術】
[0002]牙周炎是影響人類口腔健康的常見病、高發病，它可導致牙周袋形成、牙周組織降解、牙周附著喪失和牙槽骨吸收，并可能最終導致牙齒松動或脫落。牙周炎是一種多因素疾病，口腔內的菌斑生物膜構成了牙周炎的始動因子，同時人自身免疫反應會引起牙周組織的破壞。因此，藥物模型對宿主反應通路的作用也可作為一種治療牙周炎的可替換的戰略。目前治療牙周炎包括全身藥物治療和局部藥物治療，局部藥物治療又包括含漱藥物、涂布消炎收斂藥物、沖洗用藥物和緩釋及控釋抗菌藥物。國內常用的為米諾環素緩釋劑和甲硝唑緩釋劑等。
[0003]阿司匹林為非留體類抗炎藥物，具有鎮痛、消炎、抗血栓的作用。近年來發現阿司匹林具有防治骨質疏松的作用，其分子機制是通過抗炎作用抑制IL-1，IL-6，TNF-α和M-CSF表達，從而抑制破骨細胞的分化生成能力；通過影響0PG/RANKL/RANK軸系統；通過直接抑制NF-kB轉導通路而抑制破骨細胞的分化成熟，抑制骨吸收功能。其作用機制同樣適用于治療牙周炎造成的牙槽骨喪失。
[0004]目前應用的藥物緩釋載體材料包括合成的高分子材料和天然生物可降解材料。但是如何獲得可以降低藥物的釋放速度，滿足原位凝膠給藥系統長期緩慢釋放的要求，成為亟待解決的問題。

【發明內容】

[0005]有鑒于此，本發明旨在提出一種包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑，以提高牙周炎癥用藥的生物相容性、機械耐受性，并使其具有更好的緩釋性能，進一步延長藥物療效，可用于緩解牙周炎癥。
[0006]為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的:
[0007]—種包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑，通過以下方法制備而成，阿司匹林乙醇溶液加入到殼聚糖乙酸溶液中，滴加多聚磷酸鈉制成包裹有阿司匹林的殼聚糖納米微球，制成的微球包埋到殼聚糖甘油磷酸鈉溫敏凝膠中，得到包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑。
[0008]優選的，納米微球中阿司匹林的重量百分比為16% -54%。
[0009]本發明還提供了一種制備如上所述的包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑的方法，包括如下制備步驟，
[0010]1)將阿司匹林乙醇溶液加入殼聚糖乙酸溶液中，在此溶液中加入多聚磷酸鈉水溶液，至溶液呈乳光色；所得乳光色溶液離心棄上清液，取沉淀冷凍干燥得到包裹有阿司匹林的殼聚糖納米微球粉末；
[0011]2)向乙酸溶液中加入包裹有阿司匹林的殼聚糖納米微球粉末，攪拌均勻后，加入殼聚糖粉末，攪拌均勻后，在冰浴條件下向混合溶液中緩慢滴加β -甘油磷酸鈉水溶液，攪拌形成均一溫敏凝膠緩釋劑。
[0012]優選的，步驟1)中，阿司匹林乙醇溶液的濃度為45-50mg/mL ;殼聚糖乙酸溶液中，乙酸濃度為0.6-1 % (v/v)，殼聚糖濃度為0.1 % -0.3% (w/v);多聚磷酸鈉溶液濃度為
2.0% -2.2% (w/v)，阿司匹林與殼聚糖乙酸溶液比例為0.05-0.15% (w/v)，殼聚糖乙酸溶液與多聚磷酸鈉溶液的體積比為0.7-0.8，所得乳光色溶液離心時間為30min-40min。
[0013]優選的，所述步驟2)中，乙酸溶液的濃度為0.08-0.12M，最終所得溶液殼聚糖濃度為2.0% -2.2% (w/v)，β -甘油磷酸鈉溶液濃度為50% -56% (w/v)。
[0014]優選的，步驟1)制備的包裹有阿司匹林的殼聚糖納米微球粉末與步驟2)制得的溫敏凝膠緩釋劑的比例為1-1.2% (w/v) ο
[0015]本發明也提供如上所述的包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑在緩釋注射劑或緩釋植入劑中的應用。
[0016]本發明也提供如上所述的包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑的制備方法制備的緩釋劑在緩釋注射劑或緩釋植入劑中的應用。
[0017]相對于現有技術，本發明所述的包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑，具有以下優勢:
[0018]本發明針對現有治療中控制牙周組織炎癥、促進牙周骨組織再生技術的不足，通過在牙周基礎治療后的牙周袋內注射一種包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑，在牙周袋內形成凝膠體。該緩釋劑在生理溫度即37°C時7-10分鐘內即可形成具有一定強度的凝膠。凝膠以殼聚糖與B-甘油磷酸鈉交聯形成的網絡結構為支架，包埋了包載阿司匹林的納米微球，阿司匹林以微球為載體，存在于溫敏凝膠支架中，大大改善了藥物釋放速率，使得藥物能夠緩慢釋放，維持局部有效的藥物濃度，發揮其局部抗炎作用，同時降低藥物全身應用的毒副作用。以納米微球為基質的納米給藥載體系統，通過控制納米微球包載方式、含量及溫敏凝膠各制劑組成含量，使緩釋劑具有較好的生物相容性、較高的載藥量和可控的釋藥速率。該產品制備條件溫和，制備原料可生物降解，且制備過程中無放熱現象，保證了緩釋藥物活性不受影響；可注射的溫敏凝膠在凝固之前無固定形狀，注入牙周袋內在幾分鐘內迅速凝固成膠，充分充填于組織內，特別適用于袋內植入；該緩釋載體殼聚糖具有良好的生物相容性及生物可降解性，生物安全性高，避免了二次手術取出。本發明貯備方法簡便，適于大規模生產，具有良好的應用前景。
【附圖說明】
[0019]構成本發明創造的一部分的附圖用來提供對本發明的進一步理解，本發明的示意性實施例及其說明用于解釋本發明，并不構成對本發明的不當限定。在附圖中:
[0020]圖1為本發明實施例3所述的包裹有阿司匹林的殼聚糖納米微球的透射電鏡形貌；
[0021]圖2為本發明實施例4所述的空白對照納米微球透射電鏡形貌；
[0022]圖3為本發明實施例5所述包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠緩釋劑表面的掃描電鏡形貌；
[0023]圖4為本發明實施例6所述空白對照溫敏凝膠表面的掃描電鏡形貌；
[0024]圖5為1#，2#，3#包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠在pH7.2磷酸鹽緩沖液中的藥物緩釋曲線，1#，2#，3#凝膠中藥物含量分別為0.2%，0.4%，0.6% (w/v);
[0025]圖6為6組包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠對于成骨細胞的細胞毒性實驗，表現為cck-8吸光度值，1-6組浸提液緩釋出的阿司匹林含量分別為12mg、6mg、3mg、
1.5mg、0.75mg、0.375mg，對照組培養基中不含阿司匹林。
【具體實施方式】
[0026]下面將參考附圖并結合實施例來詳細說明本發明。以下實施例是在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。
[0027]另外，在本發明中所提到的單位M，是指mol/L。
[0028]實施例1:制備藥物比重為18%的載阿司匹林納米微球
[0029]制作阿司匹林的乙醇溶液為儲備液，濃度為50mg/ml。移液槍吸取20 μ 1冰乙酸，去離子水定容至20ml，制得1% (v/v)乙酸溶液。稱量0.04g殼聚糖粉末，加入乙酸溶液中，在燒杯中以800rpm的速度攪拌lOmin，使溶液呈均質狀態。移液槍吸取200 μ 1儲備液，加入到殼聚糖乙酸溶液中，以800rpm的速度均勻攪拌30min。稱量0.6g多聚磷酸鈉粉末，溶解在30ml去離子水中，配制成2% (w/v)多聚磷酸鈉溶液。向20ml加入了阿司匹林的殼聚糖乙酸溶液中，以2秒一滴的速率，800rpm的轉速下滴加26ml多聚磷酸鈉溶液，溶液由澄清變為乳光色。所得溶液放入50ml離心管，以1500rpm的速度離心30min，棄上清，取沉淀于濾紙上過濾，放入_80°C冰箱冷凍24h，冷凍干燥機干燥8h，得到包載阿司匹林的納米微球粉末，藥物比重為18%。
[0030]實施例2:制備藥物比重為35%的載阿司匹林納米微球
[0031]制作阿司匹林的乙醇溶液為儲備液，濃度為50mg/ml。移液槍吸取20 μ 1冰乙酸，去離子水定容至20ml，制得1% (v/v)乙酸溶液。稱量0.04g殼聚糖粉末，加入乙酸溶液中，在燒杯中以800rpm的速度攪拌lOmin，使溶液呈均質狀態。移液槍吸取400 μ 1儲備液，加入到殼聚糖乙酸溶液中，以800rpm的速度均勻攪拌30min。稱量0.6g多聚磷酸鈉粉末，溶解在30ml去離子水中，配制成2% (w/v)多聚磷酸鈉溶液。向20ml加入了阿司匹林的殼聚糖乙酸溶液中，以2秒一滴的速率，800rpm的轉速下滴加26ml多聚磷酸鈉溶液，溶液由澄清變為乳光色。所得溶液放入50ml離心管，以1500rpm的速度離心30min，棄上清，取沉淀于濾紙上過濾，放入_80°C冰箱冷凍24h，冷凍干燥機干燥8h，得到包載阿司匹林的納米微球粉末，藥物比重為35%。
[0032]實施例3:制備藥物比重為53%的載阿司匹林納米微球
[0033]制作阿司匹林的乙醇溶液為儲備液，濃度為50mg/ml。移液槍吸取20 μ 1冰乙酸，去離子水定容至20ml，制得1% (v/v)乙酸溶液。稱量0.04g殼聚糖粉末，加入乙酸溶液中，在燒杯中以800rpm的速度攪拌lOmin，使溶液呈均質狀態。移液槍吸取600 μ 1儲備液，加入到殼聚糖乙酸溶液中，以800rpm的速度均勻攪拌30min。稱量0.6g多聚磷酸鈉粉末，溶解在30ml去離子水中，配制成2%多聚磷酸鈉溶液。向20ml加入了阿司匹林的殼聚糖乙酸溶液中，以2秒一滴的速率，800rpm的轉速下滴加26ml多聚磷酸鈉溶液，溶液由澄清變為乳光色。所得溶液放入50ml離心管，以1500rpm的速度離心30min，棄上清，取沉淀于濾紙上過濾，放入_80°C冰箱冷凍24h，冷凍干燥機干燥8h，得到包載阿司匹林的殼聚糖納米微球粉末，藥物比重為53%。
[0034]實施例4:制備空白對照納米微球
[0035]移液槍吸取20 μ 1冰乙酸，去離子水定容至20ml，制得1 % (v/v)乙酸溶液。稱量0.04g殼聚糖粉末，加入乙酸溶液中，在燒杯中以800rpm的速度攪拌lOmin，使溶液呈均質狀態。稱量0.6g多聚磷酸鈉粉末，溶解在30ml去離子水中，配制成2%多聚磷酸鈉溶液。向20ml殼聚糖乙酸溶液中，以2秒一滴的速率，800rpm的轉速下滴加26ml多聚磷酸鈉溶液，溶液由澄清變為乳光色。所得溶液放入50ml離心管，以1500rpm的速度離心30min，棄上清，取沉淀于濾紙上過濾，放入_80°C冰箱冷凍24h，冷凍干燥機干燥8h，得到空白對照納米微球粉末。
[0036]實施例5:制備包載阿司匹林的納米微球復合溫敏凝膠
[0037]第一步，按照實施例3，制備包載阿司匹林的殼聚糖納米微球，藥物比重為53%。
[0038]第二步，移液槍吸取冰乙酸57 μ 1，去離子水定容至10ml配成0.1M乙酸溶液。取4.5ml乙酸溶液，加入實施例3制備的納米微球，800rpm攪拌30min，使納米微球粉末均勾懸浮在乙酸溶液中。
[0039]第三步，向溶液中加入0.lg殼聚糖，800rpm條件下充分攪拌30min