甜菜堿銅絡合物在制備抗腫瘤藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及抗腫瘤藥物的制備技術領域，具體涉及甜菜堿銅絡合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]銅是人體必需的微量元素，其代謝平衡對機體至關重要。臨床上，許多疾病與銅代謝紊亂有關，包括冠心病、肝硬化、糖尿病、腫瘤等。
[0003]學者們研究發現癌癥患者血清銅水平明顯高于正常人，而且對化療藥不敏感的乳腺癌、結腸癌及肺癌病人，其血清銅水平高于對化療藥敏感的病人。研究發現宮頸癌病人血清總銅顯著高于正常人，而血清銅水平升高的主要原因是血清銅藍蛋白結合銅(緊密結合銅)升高。由此，許多學者認為腫瘤病人體內銅過剩，由銅產生的氧自由基損傷可能在腫瘤的發生發展中起重要作用，因此提出了利用銅螯合劑或限銅飲食來控制腫瘤發展。有體外研究表明銅螯合劑可減少腫瘤血管內皮細胞生成因子的產生，臨床上應用可有效降低腫瘤病人血清銅藍蛋白結合銅水平。與此相反，許多學者實驗證明，銅是具有抗腫瘤活性的金屬，實驗中也發現無機銅可抑制癌細胞增殖。
[0004]因此，我們認為腫瘤病人血清銅升高，可能僅是腫瘤生長過程中體內銅重新分布的一個中間環節，并不代表體內總體銅水平的過剩，而有可能是機體銅匱乏時代償的一種表現。我們對血清及組織銅測定方法進行改進后發現，肝癌及宮頸癌患者血清總銅增高，但非蛋白結合銅及可交換銅(即蛋白疏松結合銅)顯著低于正常人。該結果進一步說明腫瘤病人體內銅失衡狀態不能簡單地用總銅水平來衡量。
[0005]我們發現腫瘤病人體內存在銅代謝紊亂，癌癥病人血清總銅顯著高于常人，血清總銅升高的主要原因是血清銅藍蛋白結合銅升高，而血清非蛋白結合銅及可交換銅顯著低于正常人。體外實驗表明，氯化銅可顯著抑制肝癌細胞IfepG2增殖。X染色體連鎖的凋亡抑制基因(XIAP)是細胞內銅的感受器，XIAP直接或間接影響細胞內C0MMD1、ATP7A/ATP7B、CTR-1等銅轉運體的蛋白表達及銅轉運伴侶分子CCS的遞銅活性。XIAP過表達于多種腫瘤細胞株及腫瘤組織中，并被認為與腫瘤細胞耐藥有關。由于銅可結合XIAP并促進其降解，我們進一步發現腫瘤中XIAP過表達可能在腫瘤機體銅代謝失衡中發揮中心調節作用，而銅劑抑瘤機制可能與其結合并降解XIAP在轉錄后水平發揮抗瘤作用有關。
[0006]然而，氯化銅等無機銅劑具有一定的毒性，且抗腫瘤效果較差，限制了銅劑在抗腫瘤方面的應用。因此，需要尋找具備低毒安全、高效抗腫瘤的銅劑。

【發明內容】

[0007]本發明所要解決的技術問題是提供甜菜堿銅絡合物在制備抗腫瘤藥物中的應用，其制備的抗腫瘤藥物低毒安全且抗腫瘤效果好。采用的技術方案如下:
甜菜堿銅絡合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
[0008]優選所述的甜菜堿銅絡合物為[Cu2 (BET) 4C12] [Cu (BET) 2C12] Cl2。
[0009]所述腫瘤可為肝癌、肺癌、淋巴瘤、乳腺癌、結腸癌、胃癌、食管癌、鼻咽癌、宮頸癌、胰腺癌、膀胱癌等惡性腫瘤，特別是肝癌。
[0010]上述抗腫瘤藥物可為注射劑、口服液、片劑或膠囊。
[0011]甜菜堿銅絡合物是甜菜堿(BET)與銅形成的絡合物。甜菜堿是廣泛分布于自然界一種堿性物質，無毒，物化性質穩定；使用甜菜堿與銅形成絡合物，可有效降低銅劑的毒性，顯著提高銅的抗癌作用，促進腫瘤細胞凋亡，同時改善機體銅代謝失衡狀態。我們研究發現，甜菜堿銅絡合物安全低毒、理化性質穩定、制備簡單、協同銅劑的抗腫瘤效應、能夠提高癌細胞對化療藥物的敏感性、降低癌細胞的耐藥性、同時能夠改善機體銅代謝。
[0012]本發明具有以下有益效果:甜菜堿銅絡合物用于制備抗腫瘤藥物，由于甜菜堿銅絡合物可高效誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞生長，表現出很強的腫瘤殺傷和抑制活性，而對正常細胞的毒性作用非常微弱，因此制備的抗腫瘤藥物(如抗肝癌藥物)具有很強的抗腫瘤活性及低副作用，具有低毒安全且抗腫瘤效果好的優點。
【具體實施方式】
[0013]甜菜堿銅絡合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。該甜菜堿銅絡合物為[Cu2 (BET) 4C12] [Cu (BET) 2C12] Cl2。
[0014]上述抗腫瘤藥物可為注射劑、口服液、片劑或膠囊。
[0015]上述甜菜堿銅絡合物[Cu2 (BET) 4C12] [Cu (BET) 2C12] (:12的抗腫瘤活性研究:
一、體外實驗
利用肝癌細胞系HepG2細胞，檢測藥物的抗腫瘤作用。HepG2細胞接種后，進行不同的處理分組，設立對照組(不給予藥物)、氯化銅組(加入50 ymol/L的氯化銅)、甜菜堿組(加入50ymol/L的甜菜堿)、甜菜堿銅絡合物組(加入50ymol/L的甜菜堿銅絡合物[Cu2(BET)4C12] [Cu(BET)2C12]C12)，孵育48小時，收集細胞。然后對細胞進行以下檢測:①Western-blot檢測細胞中XIAP的蛋白表達?’②RT-PCR檢測XIAP的mRNA表達，分析氯化銅的影響是在轉錄前還是轉錄后水平分光光度法檢測細胞勻漿中caspase-3，7，9活性；@ MTT法檢測細胞生長抑制率。
[0016]使用Western-blot檢測!fepG2細胞中XIAP的表達情況，檢測表達下調效率，下調率(％)= (1 一給藥組細胞XIAP表達量/對照組細胞XIAP表達量)X 100%，下調率越高，表明藥物越能抑制ΠΑΡ表達及越高的抗腫瘤作用。XIAP蛋白下調率檢測結果為:氯化銅組27.5%，甜菜堿組5.2%，甜菜堿銅絡合物組46.2%。檢測結果表明甜菜堿銅絡合物[Cu2 (BET) 4C12] [Cu (BET) 2C12] Cl2ffl比其它藥物能夠顯著抑制XIAP表達，有更為有效的抗腫瘤作用。
[0017]使用RT-PCR檢測!fepG2細胞XIAP的mRNA表達情況，檢測表達下調效率，下調率(%)= (1 一給藥組細胞XIAP的mRNA表達量/對照組細胞XIAP的mRNA表達量)X 100%，下調率越高，表明藥物越能抑制XIAP表達及后續腫瘤生長狀況。XIAP的mRNA下調率檢測結果為:氯化銅組48.6%，甜菜堿組19.2%，甜菜堿銅