佐劑組合物及使用方法
【專利說明】
[0001] 與相關申請的交叉引用
[0002] 本申請對于2009年1月5日提交的美國臨時申請No. 61/204, 316要求優先權。
[0003] 政府資助
[0004] 本發明是在國立衛生研究院授予的基金號1R43AI084690-01下由政府資助而進 行的。政府在本發明中擁有一定的權利。
技術領域
[0005] 本公開涉及佐劑組合物及其使用方法。
[0006] 背景
[0007] 疫苗是非常有成本效益的醫療干預。然而，雖然許多疾病已通過疫苗接種而被預 防，許多其它疾病仍有待預防。此外，對于許多已存在針對其的疫苗的疾病，需要改進的疫 苗。產生疫苗的主要病癥是疫苗缺乏免疫原性或免疫原性低。疫苗的功效可通過使用佐劑 和遞送系統而被增強。特別感興趣的是增加通過經由粘膜途徑的無針方法施用的疫苗的免 疫原性的佐劑。
[0008] 概述
[0009] 本公開提供了能夠調節受試者中免疫應答的佐劑組合物。此類佐劑組合物還可用 于通過增強抗原遞呈、通過例如天然殺傷細胞的活化和/或直接的B細胞活化而增強先天 免疫應答，來增強抗原的免疫原性。還提供了制備所述佐劑組合物的方法以及使用所述佐 劑組合物的方法。
[0010] 在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油；和下列的至少一種：(a)類黃酮，或 類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽；和（b)維生素，或者其衍生物或鹽，其中所述維生素 選自維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。在某些情況下，所述組合物包含芥子油和類黃 酮（例如兒茶素）或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽。在某些情況下，所述類黃酮是兒 茶素、或者其衍生物或鹽。在某些情況下，所述組合物包含芥子油和維生素，或者其衍生物 或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、類黃酮，或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生 物的鹽以以及維生素，或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油并且 所述維生素可以是維生素E或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子 油和維生素A或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油和維生素C 或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、兒茶素或者其衍生物或鹽 以及維生素A或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、兒茶素，或 者其衍生物或鹽以及維生素E，或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥 子油、類黃酮（例如兒茶素）或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽，以及異硫氰酸烯丙酯。 在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、維生素（例如維生素A)或者其衍生物或鹽，以 及異硫氰酸烯丙酯。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、類黃酮（例如兒茶素）或 類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽、維生素（例如維生素A)或者其衍生物或鹽、以及異硫 氰酸烯丙酯。在某些方面，所述組合物還包含抗原。在某些實施方案中，所述佐劑組合物包 含異硫氰酸烯丙酯以及類黃酮和維生素的至少一種。
[0011] 可通過許多途徑例如鼻內、經肺、舌下、口服、含服（buccal)、陰道內、直腸內、經 目艮、真皮內、經皮膚、經皮（transcuataneous)、皮下、靜脈內和肌內向受試者（例如哺乳動 物）施用所述組合物。
[0012] 還提供了制備所述組合物的方法，所述方法包括將芥子油與下列的至少一種混 合：類黃酮，或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽，以及維生素或者其衍生物或鹽。
[0013] 本申請還提供了包含藥學上可接受的植物油；類黃酮或類黃酮衍生物，或類黃酮 衍生物的鹽；以及維生素或維生素衍生物或維生素衍生物鹽的組合物，其中所述維生素選 自維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。在某些情況下，所述組合物包含植物油和類黃酮 (例如兒茶素）或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽。在某些情況下，所述類黃酮為兒茶素 或者其衍生物或鹽。某些情況下，所述組合物包含植物油和維生素或者其衍生物或鹽。在 某些實施方案中，所述組合物包含植物油、類黃酮或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽以 及維生素或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油并且所述維生素 可以是維生素E或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油和維生素 A或其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油和維生素C或者其衍生物 或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、兒茶素或者其衍生物或鹽、以及維生素 A或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、兒茶素或者其衍生物或 鹽、以及維生素E或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、類黃酮 (例如兒茶素）或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽以及異硫氰酸烯丙酯。在某些實施方 案中，所述組合物包含植物油、維生素（例如維生素A)或者其衍生物或鹽以及異硫氰酸烯 丙酯。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、類黃酮（例如兒茶素）或類黃酮衍生物 或類黃酮衍生物的鹽、維生素（例如維生素A)或者其衍生物或鹽和異硫氰酸烯丙酯。在某 些方面，所述組合物還包含抗原。
[0014] 附圖簡述
[0015] 圖1顯示在單一肌內（頂）疫苗接種后3周時抗-HA IgGl抗體和抗-流感-HA IgG2a抗體的血清滴度。
[0016] 圖2顯示在第二次肌內（頂）疫苗接種后1周時抗-流感-HA IgGl抗體和抗-流 感-HA IgG2a抗體的血清滴度。
[0017] 圖3顯示在第二次肌內（頂）疫苗接種后1周時抗-流感-HA IgA抗體的血清滴 度。
[0018] 圖4顯示在第二次肌內（IM)疫苗接種后1周時陰道灌洗（vaginal lavage)中 抗-流感-HA IgGl抗體的滴度。
[0019] 圖5顯示在第二次肌內（頂）疫苗接種后1周時陰道灌洗中抗-流感-HA IgA抗 體的滴度。
[0020] 圖6顯示在第二次肌內（頂）疫苗接種后1周時用流感-HA離體活化后的TH1、TH2 和Treg應答。
[0021 ] 圖7顯示在第二次鼻內（IN)疫苗接種后2周時抗-HIVgpl20 IgGl抗體和 抗-HIVgp-120 IgG2a抗體的血清滴度。
[0022] 圖8顯示在第二次IN疫苗接種后2周時陰道灌洗中抗_HIVgpl20IgGl抗體和 抗-HIVgpl20 IgA抗體的滴度。
[0023] 圖9顯示在兩次IN/SL(鼻內/舌下）和兩次頂疫苗接種后1周時抗-HIVgp 120 IgGl、IgG2a和IgA抗體的血清滴度。
[0024] 圖10顯示在兩次IN/SL(鼻內/舌下）和兩次頂疫苗接種后1周時陰道灌洗中 抗-HIVgp 120 IgGl和IgA抗體的滴度。
[0025] 在描述本發明和本發明的特定示例性實施方案之前，要理解本發明不限定于所描 述的特定實施方案，這樣其當然可以變化。還應理解，本申請中所使用的術語僅是為了描述 特定實施方案的目的，而不意欲是限制性的，因為本發明的范圍將僅由所附的權利要求限 定。
[0026] 當提供數值范圍時，應理解除非語境中另有明確的指示，否則在所述范圍的上限 和下限之間的各個中間值（intervening value)(至下限的單位的十分之一）和在該所述 范圍內的任何其它的所述值或中間值均被包括在本發明內。可被獨立地包括在所述更小范 圍中的這些更小范圍的上限和下限也被包括在本發明中，受所述范圍內任何被特別排除的 限制所限。當所述范圍包括所述界限的一個或兩個時，排除這兩個所包括的界限的范圍也 被包括在本發明中。
[0027] 除非另有定義，否則本申請中所使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領 域內的普通技術人員通常理解的意義相同的意義。雖然與本申請中描述的方法和材料相 似或等同的任何方法和材料也可用于本發明的實施或測試，但現在描述了優選的方法和材 料。本申請中提及的所有出版物均通過引用而被并入，以公開和描述與所述出版物被引用 相關聯的方法和/或材料。當此類出版物可能展示與本公開所明示或暗示的定義矛盾的術 語定義時，以本公開的定義為準。
[0028] 必須指出，如本申請中和所附權利要求中所使用的，除非語境中清楚地另外指出， 否則單數形式"a"、"an"和"the"包括復數所指物。因此，例如，提及"一種（an)佐劑組合 物"包括多種佐劑組合物，提及"一種（a)維生素"包括1、2或更多種維生素，以及提及"一 種（a)類黃酮"包括1、2或更多種類黃酮等等。術語佐劑和遞送系統可互換地使用。
[0029] 本申請中所談論的出版物僅為了其在本申請的申請日之前的公開而被提供。本申 請中沒有任何內容將被解釋為承認本發明無權因為是在先發明而局先于此類出版物。此 外，所提供的出版物的日期可能與可能需要獨立地確認的實際出版日期不同。
[0030] 示例件實施方案詳沐
[0031] 本公開提供能夠調節受試者中免疫應答的佐劑組合物。此類佐劑組合物還可被用 于通過增強抗原遞呈、通過例如天然殺傷細胞的活化和/或直接的B細胞活化而增強先天 免疫應答，來增強抗原的免疫原性。還提供了制備所述佐劑組合物的方法以及使用所述佐 劑組合物的方法。
[0032] 定義
[0033] 短語"佐劑組合物"是指當向受試者施用時能夠誘導受試者中的免疫應答的組合 物。當與抗原組合而被施用時，"佐劑組合物"能夠引起抗原特異性免疫應答。
[0034] 對抗原或組合物的"免疫應答"是受試者中對存在于目的抗原或組合物中的分子 的體液和/或細胞免疫應答的發生。"體液免疫應答"是指主要由抗體分子介導的免疫應 答，而"細胞免疫應答"是主要由T淋巴細胞和/或其它白血細胞介導的免疫應答。
[0035]短語"藥學上可接受的"是指通常是安全的、并且當受試者是非人時對于獸醫用途 而言是可接受的物質。對于人"藥學上可接受的"是指通常是安全的、并且對于人的藥物用 途而目是可接受的物質。
[0036] 術語"抗原"是指可在適當的條件下被免疫系統所識別（例如，被抗體結合或經加 工以引起由例如T細胞產生的細胞免疫應答）的任何物質。抗原包含一個或多個表位。B 細胞表位包括至少約3至5個氨基酸，例如4個或更多個氨基酸。半抗原或多糖也可作為 B細胞表位。T細胞表位（例如細胞毒性T細胞（CTL)表位）可包括至少約7至9個氨基 酸，例如8個或更多個氨基酸。輔助T細胞表位可包括至少約12至20個氨基酸。術語"抗 原"表示亞單位抗原（即，與抗原天然所結合的完整生物體相分離的抗原）以及被殺死的、 減毒的或滅活的細菌、病毒、真菌、寄生蟲或其它微生物、朊病毒、變應原或任何其它引起疾 病的試劑。抗原可以是經修飾的蛋白質，其包括修飾（例如對天然蛋白質序列的缺失、添加 和置換（通常在性質上是保守的））。術語抗原還表示編碼蛋白質或肽抗原的核酸（DNA或 RNA) 〇
[0037]如本申請中所使用的，"穿透促進（Penetration enhancement) "或"滲透促進 (permeation enhancement) "是指增加皮膚或粘膜層對抗原的滲透性以增加抗原穿過皮膚 或粘膜層并進入淋巴結或血流的速度。
[0038] "治療有效量"或"有效量"是指當向哺乳動物或其它受試者施用以預防或治療疾 病時，足以實現對疾病的所述預防或治療的化合物的量。"治療有效量"將取決于化合物，疾 病及其嚴重度，和待治療的受試者的年齡、體重等而變化。
[0039] 麗述
[0040]本公開提供能夠引起免疫應答的佐劑組合物。此類佐劑組合物也可被用于通過增 強抗原遞呈、通過例如天然殺傷細胞的活化和/或直接的B細胞活化而增強先天免疫應答， 來增強抗原的免疫原性。還提供了制備所述佐劑組合物的方法以及使用所述佐劑組合物的 方法。
[0041]佐劑組合物
[0042] 本申請中提供的佐劑組合物包含：藥學上可接受的植物油；類黃酮，或類黃酮衍 生物，或類黃酮衍生物的鹽；以及維生素或者其衍生物或鹽。所述維生素可以是維生素A、 維生素E、維生素D、維生素C。
[0043] 在另一個實施方案中，本申請中所提供的組合物包含：具有或不具有異硫氰酸烯 丙酯的芥子油（芥子精油）；以及下列的至少一種：(a)類黃酮或類黃酮衍生物，或類黃酮 衍生物的鹽；和（b)維生素，或者其衍生物或鹽。所述維生素可以是維生素A、維生素E、維 生素D、維生素C或者其衍生物或鹽。
[0044]在某些實施方案中，所述類黃酮是黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、兒茶素、花色素或異黃 酮，或其衍生物或衍生物的鹽。在某些實施方案中，所述佐劑組合物包含芥子油和兒茶素 (例如兒茶素水合物）。
[0045]在某些實施方案中，所述佐劑組合物包含一種或多種維生素（例如維生素A、維生 素E、維生素D、維生素C、其衍生物和鹽）以及植物油載體（例如芥子油）。此類佐劑組合 物可任選地包含類黃酮或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽。在某些實施方案中，所述佐 劑組合物包含維生素A和油載體（例如芥子油）。在某些實施方案中，所述佐劑組合物包含 維生素E和油載體（例如芥子油）。
[0046] 所述佐劑組合物可任選地包含其它添加劑，例如防腐劑、著色劑、香料 (flavorant)等。所述佐劑組合物可還包含抗原。
[0047] 藥學h可接夸的棺物油載體
[0048] 如本申請中所使用的"藥學上可接受的植物油載體"是指適合于通過所需的途徑 (例如全身性或粘膜途徑，包括口服和局部遞送途徑）向人或非人動物施用的植物油。本公 開包括了可食用的佐劑組合物。
[0049] "植物油"是指可從植物或植物產品中獲得的油，并包括可從種子（包括堅果、谷 物）、果實、根、花、莖等獲得的油。實例包括玉米油、芥子油、橄欖油、椰子油、紅花油、豆油 等。本公開的植物油包括可從非遺傳修飾和經遺傳修飾的植物獲得的油。植物油包括具有 發紅劑性質的植物油，即，例如當局部用于皮膚時促進毛細血管的擴張和增加血液循環的 油。植物油可源自植物或植物產品（例如，非遺傳修飾或經遺傳修飾的植物或植物產品）， 或可被合成產生，例如通過混合在植物油中發現的單個組分，其中所述單個組分可源自植 物或植物產品，或被合成產生。所述提供植物油或單個脂肪酸的來源的植物可以是經遺傳 修飾的。
[0050] 在某些實施方案中，所述植物油是芥子油。如本申請中所使用的"芥子油"是指 可從十字花科（Brassicacae)的芥屬植物的種子獲得的油，其中所述油可在提取過程中不 加熱而從芥屬植物獲得（例如，可通過冷榨提取法獲得）。可不加熱而從芥屬植物的種子 獲得的芥子油比使用基于加熱的提取法（例如，通過使用蒸氣）而可從相同種子獲得的油 具有更少量的（例如，不顯著的或不可檢測的）異硫氰酸烯丙酯。可從其獲得在本公開 的組合物中用作載體的芥子油的十字花科的芥屬植物包括但不必限定于芫菁（Brassica rapa)(食用綠植）、黑芥（Brassica nigra)(