治療高脂血癥、動脈粥樣硬化的藥物及制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種治療高脂血癥及動脈粥樣硬化的藥物及其制備方法以及何首烏 游離蒽醌類衍生物在制備治療高脂血癥及動脈粥樣硬化藥物中的應用，屬于醫藥技術領 域。
【背景技術】
[0002] 高脂血癥（Hyperlipidemia)與動脈粥樣硬化（AS)密切相關，是引起心腦血管病 變的重要原因之一。隨著人民生活水平的不斷提高，飲食結構的改變，我國高脂血癥的發生 率呈逐年上升趨勢，因此，防治高脂血癥一直是醫學領域的重要課題之一。降脂治療可減輕 或避免AS的發生，從而降低冠心病和腦卒中的發病率。目前雖多種西藥有降脂作用，但長 期應用多有不良反應。何首烏（FallopiamultifloraHarald)作為一味藥用歷史悠久的 中藥材，在抗衰老、抗菌、增強機體免疫功能、促進血細胞的新生和發育等方面有明顯藥理 作用，但在治療高脂血癥與動脈粥樣硬化方面的相關報道和研宄較少。

【發明內容】

[0003] 本發明所要解決的技術問題在于提供一種可有效治療高脂血癥、動脈粥樣硬化的 新藥物及其制備方法，同時提供何首烏游離蒽醌類衍生物在治療高脂血癥、動脈粥樣硬化 方面的新應用。
[0004]為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：
[0005]-種治療高脂血癥、動脈粥樣硬化的藥物，該藥物按照重量份計算，是以何首烏游 離蒽醌類衍生物中的活性成分大黃素80~100份、蘆薈大黃素4~6份為原料制成。
[0006]上述的治療高脂血癥、動脈粥樣硬化的藥物，優選方案，按照重量份計算，是以何 首烏游離蒽醌類衍生物中的活性成分大黃素80份、蘆薈大黃素4份為原料制成。
[0007]前述治療高脂血癥、動脈粥樣硬化藥物制備方法，包括以下步驟：
[0008] 1)何首烏炮制：取生何首烏飲片適量，置非鐵質容器內，按照16:1的重量比加入 黑豆汁拌勻，燜潤8小時，再將其置非鐵質蒸鍋中隔水蒸制48小時，拌回蒸液，取出間隙性 置于60°C曬干，得制首烏，備用；
[0009] 2)游離蒽醌提取：制首烏粉碎成粗粉，加乙醇回流提取三次，每次lh，減壓回收乙 醇，濃縮液加入1 :1稀鹽酸溶液分散，三氯甲烷萃取至無色，減壓回收三氯甲烷，減壓干燥， 得醇浸膏備用；
[0010] 3)大黃素、蘆薈大黃素的提取：用8%鹽酸溶液分散醇浸膏，用CH3CL2萃取，得 CH3CL2層；CH3CL2提取液用5%NaHC03萃取，得堿液層與CH3CL2液層；堿液層酸化后獲得 沉淀物，重結晶后得黃色針狀結晶即大黃酸；CH3CL2液層用5%Na3C03溶液萃取，得堿液層 與CH3CL2液層，堿液層酸化后獲得沉淀物，重結晶后得橙色大針狀結晶即大黃素；CH3CL2 液層用0. 5%NaOH溶液萃取，得堿液層與CH3CL2液層，CH3CL2層加入5%NaOH萃取，得水 層，將水層用HCL酸化，再加入熱的異戊醇溶液，得異戊醇液層與不容物，取異戊醇液層，濃 縮蒸干，得棕黑色固體，再用CH3CL2重結晶，即得蘆薈大黃素；去不容物用熱吡啶溶解，得 吡啶液，濃縮，得大黃素甲醚；
[0011] 4)將大黃素和蘆薈大黃素按處方混勻，然后按照常規制劑工藝制成臨床上常見的 藥物制劑。
[0012] 上述治療高脂血癥、動脈粥樣硬化藥物的制備方法中，所述的藥物制劑為口服制 劑，包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑或口服液。
[0013] 本發明還涉及何首烏游離蒽醌類衍生物在制備治療高脂血癥、動脈粥樣硬化藥物 中的應用。
[0014] 本發明的有益效果：本發明開發了何首烏游離蒽醌類衍生物的新應用，使作為傳 統老藥的何首烏及其活性成分的研宄具有了廣闊的應用前景和藥用價值。而且本發明以何 首烏游離蒽醌類衍生物中篩分的活性成分大黃素、蘆薈大黃素為原料制備的藥物在治療高 脂血癥及動脈粥樣硬化方面療效顯著，具有良好的應用前景。
[0015] 何首烏主要含有蒽醌類衍生物、多糖、二苯乙烯苷類化合物、磷脂類化合物及 多種微量元素等多種化學成分，其中游離蒽醌類衍生物有大黃素（Emodin)，蘆薈大黃素 (aloe-emodin)、大黃酸（rhein)、大黃酷（rhubarb)、大黃素甲釀（emodinmethylether) 等活性成分，以上哪幾種活性成分的聯合在治療高脂血癥及動脈粥樣硬化方面發揮著重要 作用，目前尚不清楚。因此從何首烏游離蒽醌類衍生物繁多的成分中準確尋找到治療高脂 血癥的成分作用靶點及最佳有效組分成為本發明重點解決的問題。
[0016] 為驗證本發明的效果，申請人進行了何首烏游離蒽醌類衍生物中最佳有效組分配 方的篩選及藥效學實驗，經篩選得到的最佳有效組分從在體的動物實驗中均得到驗證，有 效篩選出了何首烏游離蒽醌類衍生物中最佳有效組分配方的活性及藥效，能夠更多的尋找 到何首烏游離蒽醌及組分配比降血脂和抗動脈粥樣硬化物質基礎及作用靶點，更有力的保 障了其治療高脂血癥及動脈粥樣硬化的功能，同時也為臨床應用中藥有效成分研宄治療疾 病提供新思路和方法。
[0017] 本發明所用的試劑有大黃酸，大黃素，蘆薈大黃素，何首烏總蒽醌，均由貴陽中 醫學院炮制實驗室提供。何首烏游離蒽醌類衍生物中大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素三種 組分作為考察因素，共設計8種組分配比方案，完成均勻設計試驗實驗，經過高脂動物模 型的建立，給藥組動物按均勻設計表配伍進行灌胃，治療4周后，股靜脈采血，檢測血清 TG、TC、HDL-C、LDL-C含量作為篩選指標，采用SPSS17. 0軟件包進行逐步回歸分析，獲 得回歸方程，得出最佳有效組分配方。何首烏游離蒽醌類衍生物中有效組分配方藥效學 驗證實驗，再次運用高脂飲食飼料飼養加高脂乳劑灌胃4周的方法誘導大鼠高脂血癥動 物模型，將篩選出的"有效組分配方"與何首烏游離蒽醌對高脂血癥大鼠血脂水平作用 進行比較，并設立血脂平作為對照藥，以驗證篩選出的"有效組分"的藥效。根據實驗結 果，并采用加權評分法進行綜合評分，并根據評分進行逐步回歸分析。得回歸方程：y= 54. 63+0. 061A-0. 158B+2. 314C，優選配方為：大黃素 0. 8g/kg，蘆薈大黃素 0. 04g/kg。
[0018] 1?實驗材料
[0019] 1. 1動物：SD大鼠130只，SPF級，雌雄各半，體質量（200±10)g，購自中國人民解 放軍第三軍醫大學實驗動物中心，合格證號：SCXK(渝）2012-0003。
[0020] 1. 2主要藥物及試劑
[0021] 丙硫氧嘧啶片（丙賽優）：上海朝暉有限公司，批號1304F17
[0022] 吐溫-80 :重慶川江化學試劑廠
[0023] 膽固醇：北京索萊寶（solarbio)科技有限公司，批號121B102
[0024] 脫氧膽酸鈉：北京索萊寶（solarbio)科技有限公司，批號322A022豬油：自制
[0025] 大黃酸，大黃素，蘆薈大黃素，何首烏總蒽醌，均由貴陽中醫學院炮制實驗室提供。
[0026] 0-疏基乙醇（0-MercaptoethanolbiotechnologyGrade):Amresco公司，批號 0482
[0027]瓊脂糖：BI0WEST公司，批號 111860、
[0028]RNA染料（GelRedTMlO, 000Xinwater) :BI0TIUM公司，批號 4100350XTea buffer:康為世紀生物科技有限公司，批號00912G
[0029]ELISA試劑盒（HMG-CoA、ACAT2、CETP、CYP7A1、ATGL、PHTA):康為世紀生物科技有 限公司，批號20130879
[0030] 超純RNA提取試劑盒（UltrapureRNAKit):康為世紀生物有限公司，批號 00021303
[0031]HiFi-MMLVcDNA第一鏈合成試劑盒（HiFi-MMLVcDNAKit):康為世紀生物有限公 司，批號
[0032] 2XTaqMasterMix(含染料）：康為世紀生物有限公司，批號1912L
[0033]DM500:康為世紀生物有限公司，批號00021304
[0034] 無水乙醇分析純：國藥集團化學試劑廠
[0035] 2試驗方法
[0036] 2. 1尚脂乳劑及尚脂伺料的制備
[0037] 2. 1. 1高脂乳劑：①豬油200g，磁力攪拌器加熱至100°C，加膽固醇80g、丙賽優8g 充分研磨攪勻，再加入200ml吐溫80,制成油相。②同時，另一燒杯中加入640ml蒸餾水和 160ml丙二醇電路加熱至60°C，再加脫氧膽酸鈉16g攪拌至充分溶解，制成水相。③將水相 加入油相，混勻制成乳劑。
[0038] 2. 1. 2高脂飼料：用1. 5%膽固醇、0. 5%脫氧膽酸鈉、3%白糖、0. 2%丙硫氧嘧啶、 10 %豬油、5 %蛋黃、79. 8 %基礎飼料均勻混合制作高脂飼料。
[0039]2. 2均勻設計實驗方案
[0040]用以何首烏游離蒽醌衍生物大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素三種組分作為考察因素， 每個因素各設8個水平，按均勻設計表U8 (85)及其使用表進行安排，共得8種組分配比方 案，將購買到的五種單體依據方案進行配制，得到實驗用藥物，其具體配伍見表1。
[0041]表 1
[0043]
[0044] 2. 3有效組分配方篩選實驗
[0045] 大鼠80只，設對照組、模型組、均勻設計配方8組，共10組，每組各8只。除空白對 照組外，其余各組均給予高脂飲食飼料飼養加高脂乳劑（l〇ml/kg)灌胃4周，進行高脂血癥 模型的建立，在第四周隨機抽取10只大鼠眼眶取血，檢測血清1^、了6、冊1^-0、〇^-(：含量， 確定造模成功后，開始給藥。各給藥組按均勻設計表配伍用藥（表1)，各組藥物均用〇. 5% 吐溫-80配制成相應濃度的混懸液，以10ml/kg大鼠體質量進行灌胃給藥。治療4周后， 以2%戊巴比妥鈉按2ml/kg劑量腹腔注射麻醉，股靜脈采血，4°C過夜，離心分離血清，送由 貴陽中醫學院第一附屬醫院檢測血清TG、TC、HDL-C、LDL-C含量作為篩選指標，采用SPSS 17. 0軟件包進行逐步回歸分析，獲得回歸方程，得出最佳有效組分配方。
[0046] 2. 4有效組分配方藥效學驗證實驗