中藥組合物在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥組合物的新用途，尤其涉及中藥組合物在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]RSV主要引起呼吸系統感染，在嬰幼兒、老年以及免疫缺陷人群引起嚴重肺炎，是人類上呼吸道感染的重要病原之一。目前市場缺乏有效安全的治療方法。

【發明內容】

[0003]本發明提供了一種中藥組合物在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應用。從藥理實驗看出，這種中藥組合物有較好的抗呼吸道合胞病毒的作用。
[0004]本發明首次公開中藥組合物在制備抗呼吸道合胞病毒方面的藥理作用，所述中藥組合物由如下重量份數的原料制備得到:六月寒15份、四季青10份、吊燈花20份、刺針草12份、滑葉跌打18份。
[0005]所述中藥組合物的制備方法為:取上述中藥，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒。
[0006]濃縮條件為:0.07MPa、60-70°C下減壓濃縮至65°C時相對密度為1.30。噴霧干燥條件為:進風溫度為120°C，出風溫度為80°C，物料溫度為90°C，霧化壓力為0.4兆帕，噴霧速度為10ml/s。
[0007]經實驗證明，中藥組合物對RSV有顯著的抑制作用:抑制RSV在HEK293細胞出現CPE 效應(Cytopathic Effect, CPE)，IC50 為 2-8.15，TI 為 116.42。
[0008]六月寒為宜昌樓梯草(Elatostema ichangense H.Schroter)，蕁麻科多年生草本。因其陰歷六月開白花，常成片生長，猶如高山積雪，給人寒意，故得此名。該藥具散寒、化積、祛瘀、消腫的功效。發表散寒，宣肺止咳，活血調經。用于感冒咳嗽，慢性支氣管炎，百日咳，通經，產后腹痛；外用治刀傷，燒燙傷，毒蛇咬傷。
[0009]四季青為冬青科的植物。分布于我國長江以南各地，常生長于疏林中。其根、葉均可制藥，拉丁學名Ilex purpurea Hassk.，清熱解毒，活血止血。用于上呼吸道肝炎，慢性氣管炎，腎盂腎炎，細菌性痢疾；外用治燒燙傷，下肢潰瘍，麻風潰瘍，創收出血，凍傷，乳腺炎，皮膚皸裂(燒灰調油外搽)。
[0010]吊燈花為蘿摩科吊燈花Ceropegia christenseniana Hand.-Mazz.，以全草入藥。
酸，平。清熱解毒。
[0011]刺針草，學名Bidens bipinnata L.，菊科，刺針草屬植物，刺針草多生于山坡、草地或路旁。廣布于全國各地。完達山區數量較多。以全草入藥。夏季開花時采收，切段，曬干。清熱解毒，祛風活血。用于上呼吸道感染，咽喉腫痛，急性闌尾炎，急性黃疸型傳染性肝炎，胃腸炎，消化不良，風濕關節痛，瘧疾；外用治瘡癤，毒蛇咬傷，跌打腫痛。本發明以全草入藥。
[0012]滑葉跌打為假鶴腎樹樹皮，拉丁名為Streblus indicus (Bur.) Corner，桑科腎昔鳥樹屬喬木，以樹皮入藥，止血，止痛。用于消化道出血，胃痛；外用治外傷出血。
[0013]本發明涉及的中藥組合物在制備治療呼吸道合胞病毒(RSV)藥物中的用途屬于首次公開，由于中藥組合物成分的復雜性，而且其對于呼吸道合胞病毒(RSV)抑制活性強得意想不到，不存在由其他中藥給出任何啟示的可能，具備突出的實質性特點，同時用于呼吸道合胞病毒(RSV)的防治顯然具有顯著的進步。
【具體實施方式】
[0014]以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
[0015]實施例1:取六月寒15g、四季青10g、吊燈花20g、刺針草12g、滑葉跌打18g，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒，濃縮條件為:0.07MPa、60-70°C下減壓濃縮至65°C時相對密度為1.30。噴霧干燥條件為:進風溫度為120°C，出風溫度為80°C，物料溫度為90°C，霧化壓力為0.4兆帕，噴霧速度為lOml/s。
[0016]實施例2:本發明中藥組合物對呼吸道合胞病毒(RSV)的作用研宄
[0017](I)按照上述實施例1的方法制備本發明中藥組合物作為試驗藥品。
[0018](2)細胞株與病毒株:人胚腎細胞(HEK293，RSV病毒敏感細胞)購自美國Clontech公司；呼吸道合胞病毒(RSV) Long株引自中國⑶C病毒病研宄所。
[0019](3)細胞毒性測定:
[0020]參照文獻(汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對呼吸道合胞病毒抑制作用的實驗研宄，南京中醫藥大學學報，2008 ;24(1):25-27)的方法，將樣品以2倍比做系列稀釋(2°_5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的HEK293上，每孔lOOuL，每稀釋度縱向重復3孔(A、B、C行)，平行設微孔板D的1-6孔為細胞對照，7-12孔不接種細胞為空白對照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續觀察7d，中性紅染色，在540nm波長測定OD值，將實驗組與細胞對照組OD值相比計算細胞存活率，用Reed-Muench方法計算藥物半數細胞中毒濃度(TD50) ο
[0021]⑷抑毒試驗:
[0022]參照文獻(汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對呼吸道合胞病毒抑制作用的實驗研宄，南京中醫藥大學學報，2008 ;24(1):25-27)的方法，將樣品按稀釋順序(2_2_13)橫向接種于96板孔中的單層細胞上，每孔100uL，每稀釋度縱向重復4孔，微孔板的A、B、C行加含100個TCID5tl的病毒10uL作為試驗組，D行補充等容量細胞維持液為不同濃度藥物對照，平行設F行作為病毒對照，E行的1-12作為細胞對照。37°C、5% CO2培養，每日觀察CPE，連續觀察4d。病毒對照出現90%以上CPE時，加I %中性紅染色，用酶標儀在波長540nm波長讀取A值，各組A值去除病毒對照組A值，將各試驗組與細胞對照組A值相比，獲得細胞存活率，用Reed-Muench方法計算半數抑毒濃度(IC5tl)，最終將TD5tl和IC 50相比獲得抑毒指數(TI)。
[0023](5)結果:
[0024]①樣品TD5tl的測定:對照組細胞顯微鏡下觀察貼壁生長致密、形態良好。本發明中藥組合物對HEK293的TD5tl為2夂5。
[0025]②抑毒實驗:對照組細胞貼壁致密、形態良好。鏡下觀察發現，RSV病毒對照組在第2d出現90%以上的CPE，RSV在HEK293CPE以折光性增強、變圓、脫落、破碎為主要特征。而抑毒試驗各組細胞，按照樣品稀釋梯度，梯度規律出現CPE:
[0026]RSV-HEK293試驗組細胞在第9稀釋度之前，細胞完全被保護，之后出現CPE，CPE隨樣品濃度減少逐漸加重。
[0027]將上述實驗板用I %中性紅染色、用酶標儀測450nmA值，各組A值減掉病毒對照組A值后，各實驗組A值與細胞對照組A值相比獲得IC5(I，IC5tl與TD 5(|相比獲得T1:抑制RSV在 HEK293 細胞發生 CPE, IC5tl為 2 -8.15，TI 為 116.42。
[0028]結論:ASpeVerin具有顯著的抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV的作用，可以用來制備抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV藥物。
【主權項】
1.一種中藥組合物在抗呼吸道合胞病毒藥物中的應用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份數的原料制備得到:六月寒15份、四季青10份、吊燈花20份、刺針草12份、滑葉跌打18份。
2.如權利要求1所述中藥組合物在抗呼吸道合胞病毒藥物中的應用，其特征在于所述中藥組合物的制備方法為:取上述中藥，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒。
【專利摘要】本發明公開了一種中藥組合物在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應用。經實驗證明，本發明中藥組合物對呼吸道合胞病毒RSV有顯著的抑制作用，本發明為中藥組合物臨床用于治療呼吸道合胞病毒RSV感染性疾病提供實驗依據，對研制抗呼吸道合胞病毒RSV的藥物提供了一定的指導意義，具有重要的參考價值。
【IPC分類】A61K36-60, A61P31-14
【公開號】CN104758362
【申請號】CN201510213683
【發明人】田麗華
【申請人】淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年4月26日