專利名稱：作為玻連蛋白拮抗劑的雜環甘氨酰β－丙氨酸衍生物的制作方法
本申請按照35USC§119(e)，要求在1998年4月10日呈交的美國臨時專利申請系列第60/081,394號的優先權。
本發明領域本發明涉及用作αvβ3整聯蛋白拮抗劑的和如此通過抑制或者拮抗αvβ3整聯蛋白用于治療由αvβ3介導的疾病的藥用組合物和方法中的藥物(化合物)。
本發明背景整聯蛋白是一組介導細胞粘附的細胞表面糖蛋白并由此是在多種生物過程中發生的細胞粘附相互作用的有用介質。整聯蛋白為由非共價鍵連接的α和β多肽亞基組成的異二聚體。目前已經鑒定了十一種不同的α亞基并且已經鑒定六種不同的β亞基。各種α亞基能夠與各種β亞基結合形成獨特的整聯蛋白。
鑒定為αvβ3(也稱作玻連蛋白受體)的整聯蛋白已被鑒定為在多種疾病或疾病狀態包括腫瘤轉移、實體腫瘤生長(瘤形成)、骨質疏松癥、培吉特病、惡性腫瘤體液高鈣血癥、血管發生包括腫瘤血管發生、視網膜病包括黃斑變性、關節炎包括類風濕性關節炎、牙周病、牛皮癬和平滑肌細胞遷移(例如再狹窄)中起作用的整聯蛋白。另外，已發現這樣的藥物將用作抗病毒劑、抗真菌劑和抗菌藥。因此，選擇性抑制或拮抗αvβ3的化合物將有利于治療這樣的疾病。
已顯示αvβ3整聯蛋白和其它含有αv的整聯蛋白結合多種含有Arg-Gly-Asp(RGD)的基質大分子。含有RGD序列的化合物模擬細胞外基質配體以便結合于細胞表面受體。然而，人們也已知RGD肽對RGD依賴的整聯蛋白一般是非選擇性的。例如，大多數結合αvβ3的RGD肽也結合αvβ5、αvβ1和αⅡbβ3。已知血小板αⅡbβ3(也稱作血纖蛋白原受體)拮抗作用阻斷在人體中的血小板聚集。當治療與整聯蛋白αvβ3有關的病癥或疾病狀態時，為避免出血副作用，開發為抗αⅡbβ3的選擇性拮抗劑的化合物將是有益的。
腫瘤細胞侵入的發生經過三個步驟的過程1)腫瘤細胞附著于細胞外基質；2)蛋白水解下基質溶解和3)細胞運動穿過溶解的屏障。這個過程能夠重復發生并且能夠導致轉移至遠離原來腫瘤的位置。
Seftor等(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第89卷(1992)第1557-1561頁)已顯示αvβ3整聯蛋白在黑素瘤細胞侵入中具有生物功能。Montgomery等(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第91卷(1994)，第8856-60頁)已證實在人黑素瘤細胞上表達的整聯蛋白αvβ3促進生存信號，保護細胞免于編程性細胞死亡。通過αvβ3整聯蛋白細胞粘附受體的干擾作用以阻抑腫瘤轉移的腫瘤細胞轉移途徑的介導作用將是有益的。
Brooks等(細胞，第79卷(1994)第1157-1164頁)已證實αvβ3拮抗劑提供用于治療瘤形成(抑制實體腫瘤生長)的治療方法，因為全身性給予αvβ3拮抗劑引起多種組織學上不同的人腫瘤的出人意料的退化。
粘附受體整聯蛋白αvβ3被鑒定為在小雞和人中的新生成血管的標記物，因此這樣的受體在血管發生或者新血管形成中起著至關重要的作用。血管發生的特征在于平滑肌細胞和內皮細胞的侵入、遷移和增殖。αvβ3拮抗劑通過選擇性促進新血管形成中細胞的編程性細胞死亡來抑制這個過程。新的血管生長或者血管發生也有助于病理性狀況例如糖尿病性視網膜病包括黃斑變性(Adamis等，Amer.J.Ophthal，第118卷(1994)，第445-450頁)和類風濕性關節炎(Peacock等，J.Exp.Med.，第175卷(1992)，第1135-1138頁)。因此，αvβ3拮抗劑將是用于治療與新血管生成有關疾病的有用的治療藥物(Brooks等，科學，第264卷(1994)，第569-571頁)。
已報道細胞表面受體αvβ3為負責粘附骨頭的破骨細胞上的主要的整聯蛋白。破骨細胞引起骨吸收，并且當這樣的骨吸收活性超過骨形成活性時，這導致骨質疏松癥(骨喪失)，該疾病導致增加的骨折、使殘廢的人數和增加的死亡率。已顯示αvβ3拮抗劑為體外[Sato等，J.Cell Biol.，第111卷(1990)，第1713-1723頁]和體內[Fisher等，Endocrinology，第132卷(1993)，第1411-1413頁]有效的破骨細胞活性的抑制劑。αvβ3的拮抗作用導致減少的骨吸收，因此恢復骨形成和骨吸收活性的正常平衡。因此，提供為骨吸收的有效抑制劑并且由此用于治療或阻止骨質疏松癥的破骨細胞αvβ3拮抗劑是有益的。
αvβ3整聯蛋白在平滑肌細胞遷移中的作用也使其成為用于阻止或抑制新內膜增生的治療靶，其為血管手術后再狹窄的首要因素(Choi等，J.Vasc.Surg.第19卷(1)(1994)，第125-34頁)。經藥物阻止或抑制新內膜增生來阻止或抑制再狹窄將是有利的。
White(Current Biology，第3卷(9)(1993)，第596-599頁)已報道腺病毒使用αvβ3進入宿主細胞。整聯蛋白似乎被病毒顆粒的胞吞作用所需要并且可被用于病毒基因組侵入宿主細胞胞質所需要。因此，將發現抑制αvβ3的化合物作為抗病毒藥是有用的。
本發明概述本發明涉及一類由式Ⅰ表示的化合物或者它們的藥學上可接受的鹽 其中 為含有1至4個選自O、N或S的雜原子的、任選不飽和的5-8元單環雜環，其中X1選自CH、CH2、N、NH、O和S；A為 其中Y1選自N-R2、O和S；R2選自H、烷基、芳基、羥基、烷氧基、氰基、硝基、氨基、鏈烯基、鏈炔基、酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、鹵代烷基羰基、鹵代烷氧基羰基、烷硫基羰基、芳硫基羰基、酰氧基甲氧基羰基、以一個或多個選自以下的取代基任選取代的烷基低級烷基、鹵素、羥基、鹵代烷基、氰基、硝基、羧基、氨基、烷氧基、芳基或以一個或多個鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、氰基、烷基磺酰基、烷硫基、硝基、羧基、氨基、羥基、磺酸、磺酰胺、芳基、稠合的芳基、單環雜環或稠合的單環雜環任選取代的芳基，以一個或多個選自以下的取代基任選取代的芳基鹵素、鹵代烷基、羥基、低級烷基、烷氧基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、氰基、硝基、烷硫基、烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、羧基衍生物、氨基、芳基、稠合的芳基、單環雜環和稠合的單環雜環，單環雜環和以一個或多個選自以下的取代基任選取代的單環雜環鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、氨基、硝基、羥基、羧基衍生物、氰基、烷硫基、烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、芳基或稠合的芳基；或者R2與R7一起形成以一個或多個選自低級烷基、硫代烷基、烷基氨基、羥基、酮基、烷氧基、鹵代、苯基、氨基、羧基或羧酸酯和稠合的苯基的取代基任選取代的含有兩個氮的4-12元雜環；或R2與R7一起形成含有一個或多個選自O、N和S的雜原子的、任選不飽和的4-12元雜環；或R2與R7一起形成以一個或多個選自低級烷基、苯基、烷氧基和羥基的取代基任選取代的5-9元雜芳環；或R2與R7一起形成與芳基或雜芳基環稠合的5元雜芳環；R7(當不與R2一起時)和R8獨立選自H，烷基，鏈烯基，鏈炔基，芳烷基，氨基，烷基氨基，羥基，烷氧基，芳基氨基，酰氨基，烷基羰基，芳基羰基，烷氧基羰基，芳氧基，芳氧基羰基，鹵代烷基羰基，鹵代烷氧基羰基，烷硫基羰基，芳硫基羰基，酰氧基甲氧基羰基，環烷基，雙環烷基，芳基，酰基，苯甲酰基，以一個或多個選自以下的取代基任選取代的烷基低級烷基、鹵素、羥基、鹵代烷基、氰基、硝基、羧基衍生物、氨基、烷氧基、硫代、烷硫基、磺酰基、芳基、芳烷基、以一個或多個選自以下的取代基任選取代的芳基鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、烷硫基、鹵代烷硫基、硫代、羥基、氰基、硝基、羧基衍生物、芳氧基、酰氨基、酰基氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟代烷氧基、三氟代甲基、磺酰基、烷基磺酰基、鹵代烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、芳基、稠合的芳基、單環雜環、稠合的單環雜環，以一個或多個選自以下的取代基任選取代的芳基鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、烷硫基、鹵代烷硫基、硫代、羥基、氰基、硝基、羧基衍生物、芳氧基、酰氨基、酰基氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟烷氧基、三氟甲基磺酰基、烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、芳基、稠合的芳基、單環雜環或稠合的單環雜環，單環雜環，以一個或多個選自鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、芳氧基、氨基、硝基、羥基、羧基衍生物、氰基、烷硫基、烷基磺酰基、芳基、稠合的芳基的取代基任選取代的單環雜環，單環和二環雜環烷基，其中R10選自烷基、芳基和單環雜環的-SO2R10，所有基團以一個或多個選自鹵素、鹵代烷基、烷基、烷氧基、氰基、硝基、氨基、酰基氨基、三氟烷基、酰氨基、烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基、烷基磺酰基氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟甲基硫代、三氟烷氧基、三氟甲基磺酰基、芳基、芳氧基、硫代、烷硫基和單環雜環的取代基任選取代；和其中R10如上定義的 ；或者NR7和R8一起形成含有單氮的4-12元單環或雙環，其以一個或多個選自低級烷基、羧基衍生物、芳基或羥基的取代基任選取代并且其中所述環任選含有一個選自O、N和S的雜原子；R5選自H、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芐基和苯乙基；或者A為 其中Y2選自烷基，環烷基，雙環烷基，芳基，單環雜環，由也能以一個或多個選自鹵代、鹵代烷基、烷基、硝基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳基或稠合的芳基的取代基任選取代的芳基所任選取代的烷基，以一個或多個選自鹵代、鹵代烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳基、稠合的芳基、硝基、亞甲二氧基、亞乙二氧基或烷基的取代基任選取代的芳基，鏈炔基，鏈烯基，-S-R9和-O-R9，其中R9選自H、烷基、芳烷基、芳基、鏈烯基和鏈炔基，或者R9與R7一起形成以低級烷基、羥基、酮基、苯基、羧基或羧酸酯和稠合的苯基任選取代的、含有單氮和單硫或單氧的4-12元雜環，或者R9與R7一起為噻唑、噁唑、苯并噁唑或苯并噻唑；和R5和R7如上定義；或者Y2(當Y2為碳時)與R7一起形成以烷基、芳基、酮基或羥基任選取代的、含有單氮或二氮的4-12元環；或者A為 其中R2和R7一起形成以一個或多個選自低級烷基、羥基、烷氧基、酮基、苯基或羧基衍生物的取代基任選取代的含有二氮的5-8元雜環；并且R8選自烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、鹵代烷基羰基、鹵代烷氧基羰基、烷硫基羰基、芳硫基羰基或酰氧基甲氧基羰基；和R5如上定義；或者R2和R7一起形成雜芳環例如咪唑或嘧啶酮；或者A為 其中R2和R7一起形成以羥基、酮基、苯基或烷基任選取代的含有二氮的5-8元雜環；和R8選自烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、鹵代烷基羰基、鹵代烷氧基羰基、烷硫基羰基、芳硫基羰基和酰氧基甲氧基羰基；Z1為一個或多個選自H、烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、鹵素、鹵代烷基、鹵代烷氧基、硝基、氨基、烷基氨基、酰基氨基、二烷基氨基、氰基、烷硫基、烷基磺酰基、羧基衍生物、三鹵代乙酰胺、乙酰胺、酰基、芳基、稠合的芳基、環烷基、硫代、單環雜環、稠合的單環雜環和A的取代基，其中A如上定義；V選自-N-(R6)-，其中R6選自H、低級烷基、環烷基、芳烷基、芳基和單環雜環；或者R6與Y一起形成含有單氮的4-12元環；Y、Y3、Z和Z3獨立選自氫、烷基、芳基和環烷基；或者Y與Z一起形成環烷基；或者Y3和Z3一起形成環烷基；n為整數1、2或3；t為整數0、1或2；p為整數0、1、2或3；R為其中X選自O、S和NR4的X-R3，其中R3和R4獨立選自氫、烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基、芳基、芳基烷基、糖類、甾體化合物、聚烷基醚、烷基酰氨基、烷基N,N-二烷基酰氨基、新戊酰氧基甲基；和在游離酸的情況下所有它們的藥學上可接受的鹽；R1選自氫、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、羧基衍生物、鹵代烷基、環烷基、單環雜環、以烷基、鹵素、鹵代烷基、氰基、羥基、芳基、稠合的芳基、硝基、烷氧基、芳氧基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、磺酰胺、硫代、烷硫基、羧基衍生物、氨基、酰氨基任選取代的單環雜環；以一個或多個以下基團任選取代的烷基鹵代、鹵代烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、鏈炔基、鏈烯基、烷基、芳硫基、烷基亞砜、烷基磺酰基、芳基亞砜、芳基磺酰基、氰基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、酰基酰胺、羧基衍生物、磺酰胺、磺酸、膦酸衍生物、次膦酸衍生物、在芳基環上均用鹵代、烷基、鹵代烷基、氰基、硝基、羥基、羧基衍生物、烷氧基、芳氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、酰氨基、芳基、稠合的芳基、單環雜環任選取代的芳基、芳硫基、芳基亞砜或芳基砜；和稠合的單環雜環、單環雜環硫代、單環雜環亞砜和單環雜環砜，其能夠用鹵代、鹵代烷基、硝基、羥基、烷氧基、稠合的芳基或烷基任選取代；烷基羰基、鹵代烷基羰基和芳基羰基；在一個或多個位置上用以下基團任選取代的芳基，包括鹵代、鹵代烷基、烷基、烷氧基、芳氧基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、烷硫基、鹵代烷硫基、硫代、羥基、氰基、硝基、酰氧基、羧基衍生物、羧基烷氧基、酰氨基、酰基氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟烷氧基、三氟甲基磺酰基、烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、芳基、稠合的芳基、單環雜環和稠合的單環雜環和 ，其中R7和R8如上定義并且條件是與所述氮一起，R7和R8包括氨基酸；和R11選自H、烷基、芳烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基或鹵代鏈炔基或者R11與Y一起形成含有單氮的4-12元環。
本發明另一個目的是提供含有式Ⅰ化合物的藥用組合物。這樣的化合物和組合物用于選擇性抑制或者拮抗αvβ3整聯蛋白，由此在另一個實施方案中本發明涉及選擇性抑制或者拮抗αvβ3整聯蛋白的方法。本發明另外包括在需要這樣治療的哺乳動物上治療或抑制與此有關的病理性疾病例如骨質疏松癥、惡性腫瘤體液高鈣血癥、培吉特病、腫瘤轉移、實體腫瘤生長(瘤形成)、血管發生包括腫瘤血管發生、視網膜病包括黃斑變性和糖尿病性視網膜病、關節炎包括類風濕性關節炎、牙周病、牛皮癬、平滑肌細胞遷移和再狹窄。另外，這樣的藥物用作抗病毒劑和抗菌藥。詳細描述本發明涉及一類由以上描述的式Ⅰ表示的化合物。
本發明的一個優選實施方案為式Ⅱ化合物 其中 其中R32為H、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基，其中所述烷基由一個或多個選自羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基-或烷基-磺酰基、羧基和羧基衍生物的取代基任選取代并且其它的變量如同在式Ⅰ中描述。
本發明的另一個優選實施方案為式Ⅲ化合物 其中 后者被任選取代并且其它的變量如同在式Ⅰ中定義。
本發明的另一個優選實施方案為式Ⅳ化合物 其中 后者被任選取代并且其它的變量如同在式Ⅰ中定義。
本發明另一個優選實施方案為式Ⅴ化合物 其中 后者被任選取代并且其它的變量如同在式Ⅰ中定義。
本發明的另一個優選實施方案為式Ⅵ化合物 其中 后者被任選取代并且其它的變量如同在式Ⅰ中定義。
本發明另外涉及含有治療有效量的式Ⅰ-Ⅵ化合物的藥用組合物。
本發明也涉及選擇性抑制或拮抗αvβ3整聯蛋白的方法，并且更具體地講，涉及通過給予與藥學上可接受的載體一起的、治療有效量的式Ⅰ-Ⅵ化合物(以達到這樣的抑制作用)來抑制骨吸收、牙周病、骨質疏松癥、惡性腫瘤體液高鈣血癥、培吉特病、腫瘤轉移、實體腫瘤生長(瘤形成)、血管發生包括腫瘤血管發生、視網膜病包括黃斑變性和糖尿病性視網膜病、關節炎包括類風濕性關節炎、平滑肌細胞遷移和再狹窄的方法以下列出在此使用的多種術語的定義如同在此使用的術語“烷基”或“低級烷基”指的是具有大約1至大約10個碳原子并且更優選為1至大約6個碳原子的直鏈的或分枝鏈的烴基。這樣的烷基實例為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、異己基等。
如同在此使用的術語“鏈烯基”或“低級鏈烯基”指的是含有至少一個雙鍵和2至大約6個碳原子的不飽和無環烴基，相對于在所述雙鍵碳上取代的基團，其在鏈烯基部分中的碳-碳雙鍵可具有順式或者反式幾何構型。這樣基團的實例為乙烯基、丙烯基、丁烯基、異丁烯基、戊烯基、己烯基等。
如同在此使用的術語“鏈炔基”或“低級鏈炔基”指的是含有一個或多個叁鍵和2至大約6個碳原子的無環烴基。這樣基團的實例為乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。
如同在此使用的術語“環烷基”意指飽和的或部分不飽和的含有3至大約8個碳原子并且更優選為4至大約6個碳原子的環碳基團。這樣的環烷基的實例包括環丙基、環丙烯基、環丁基、環戊基、環己基、2-環己烯-1-基等。
如同在此使用的術語“芳基”意指包括一個或多個芳香環的芳香環體系。優選芳基為那些含有一個、兩個或三個芳香環的基團。該術語包括芳基例如苯基、吡啶基、萘基、噻吩、呋喃、聯苯等。
如同在此使用的術語“氰基”由式 的基團表示。
如同在此使用的術語“羥基”由式 的基團表示。下式的基團 指的是含有1至3個選自O、N和S的雜原子的、任選含有不飽和度的5-10元單環或雙環雜環，其中X1為CH、N、O或S。所述基團代表性實例包括吡啶酮、吡啶、嘧啶、咪唑、噁唑、異噁唑、噻唑、噠嗪、噻吩、呋喃、吡唑和雙環雜環如苯并咪唑、咪唑并吡啶、苯并呋喃等。
如同在此使用的術語“低級亞烷基”或“亞烷基”指的是二價線形或分枝的飽和的1至大約6個碳原子的烴基團。
如同在此使用的術語“烷氧基”指的是直形的或分枝鏈的含有氧的式-OR20基團，其中R20為如上定義的烷基。所包括的烷氧基的實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、異丙氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
如同在此使用的術語“芳基烷基”或“芳烷基”指的是式 的基團，其中R21為如上定義的芳基和R22為如上定義的亞烷基。芳烷基的實例包括芐基、吡啶基甲基、萘基丙基、苯乙基等。
如同在此使用的術語“硝基”由式 的基團表示。
如同在此使用的術語“鹵代”或“鹵素”指的是溴代、氯代、氟代或碘代。
如同在此使用的術語“鹵代烷基”指的是在一個或多個碳原子上以一個或多個相同的或不同的鹵代基團取代的如上定義的烷基。鹵代烷基的實例包括三氟代甲基、二氯代乙基、氟代丙基等。
如同在此使用的術語“羧基”指的是式-COOH的基團。
如同在此使用的術語“羧酸酯”指的是式-COOR23的基團，其中R23選自如上定義的H、烷基、芳烷基或芳基。
如同在此使用的術語“羧基衍生物”指的是式 的基團，其中Y6和Y7獨立選自O、N或S并且R23選自如上定義的H、烷基、芳烷基或芳基。
如同在此使用的術語“氨基”由式-NH2的基團表示。
如同在此使用的術語“烷基磺酰基”或“烷基砜”指的是式 的基團，其中R24為如上定義的烷基。
如同在此使用的術語“烷硫基”指的是式-SR24的基團，其中R24為如上定義的烷基。
如同在此使用的術語“磺酸”指的是式 的基團，其中R25為如上定義的烷基。
如同在此使用的術語“磺酰胺”指的是式 的基團，其中R7和R8如上定義。
如同在此使用的術語“稠合的芳基”指的是芳香環例如以上定義的芳基稠合于一個或多個苯基環上。術語“稠合的芳基”包括的基團有萘基等。
如同在此使用的術語“單環雜環”或“單環雜環的”指的是含有4至大約12個原子并且更優選為5至大約10個原子的、其中的1至3個原子為選自氧、氮和硫的雜原子的單環，需要理解的是如果存在兩個或多個不同的雜原子，至少所述雜原子之一必須為氮。這樣的單環雜環的代表為咪唑、呋喃、吡啶、噁唑、吡喃、三唑、噻吩、吡唑、噻唑、噻二唑等。
如同在此使用的術語“稠合的單環雜環”指的是用苯稠合于其上面的如上定義的單環雜環。這樣的稠合的單環雜環的實例包括苯并呋喃、苯并吡喃、苯并二氧雜戊環、苯并噻唑、苯并噻吩、苯并咪唑等。
如同在此使用的術語“亞甲二氧基”指的是式 的基團和術語“亞乙二氧基”指的是式 的基團。
如同在此使用的術語“含有二氮的4-12元雜環”指的是式 的基團，其中m為1或2并且R19為H、烷基、芳基或芳烷基且更優選為4-9元環并包括例如咪唑啉環。
如同在此使用的術語“5-元任選取代的雜芳香環”包括例如式 的基團并且“與苯基稠合的5-元雜芳香環”指的是這樣的與苯基稠合的5-元雜芳香環。這樣的與苯基稠合的5-元雜芳香環的代表為苯并咪唑。
如同在此使用的術語“二環烷基”指的是含有其為飽和的或者部分不飽和的、6至大約12個碳原子的二環烴基。
如同在此使用的術語“酰基”指的是式 的基團，其中R26為烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基或芳烷基并如上定義那樣在其上任選取代。這樣的基團包括乙酰基、苯甲酰基等。
如同在此使用的術語“硫代”指的是式 的基團。
如同在此使用的術語“磺酰基”指的是式 的基團，其中R27為如上定義的烷基、芳基或芳烷基。
如同在此使用的術語“鹵代烷硫基”指的是式-S-R28的基團，其中R28為如上定義的鹵代烷基。
如同在此使用的術語“芳氧基”指的是式 的基團，其中R29為如上定義的芳基。
如同在此使用的術語“酰基氨基”指的是式 的基團，其中R30為如上定義的烷基、芳烷基或芳基。
如同在此使用的術語“酰氨基”指的是式 的基團。
如同在此使用的術語“烷基氨基”指的是式-NHR32的基團，其中R32為如上定義的烷基。
如同在此使用的術語“二烷基氨基”指的是式-NR33R34的基團，其中R33和R34為如上定義的相同的或不同的烷基。
如同在此使用的術語“三氟甲基”指的是式 的基團。
如同在此使用的術語“三氟烷氧基”指的是式 的基團，其中R35為如上定義的鍵或亞烷基。
如同在此使用的術語“烷基氨基磺酰基”指的是式 的基團，其中R36為如上定義的烷基。
如同在此使用的術語“烷基磺酰氨基”指的是式 的基團，其中R36為如上定義的烷基。
如同在此使用的術語“三氟甲基硫代”指的是式 的基團。
如同在此使用的術語“三氟甲基磺酰基”指的是式 的基團。
如同在此使用的術語“含有單氮的4-12元單環或雙環”指的是飽和的或者部分不飽和的、4-12個原子并且更優選為其中一個原子為氮的4-9個原子的環的單環或雙環。這樣的環任選含有另外的選自氮、氧或硫的雜原子。在這個組中包括嗎啉、哌啶、哌嗪、硫代嗎啉、吡咯烷、脯氨酸、氮雜環庚烯等。
如同在此使用的術語“芐基”指的是基團 如同在此使用的術語“苯乙基”指的是基團 如同在此使用的術語“含有單氮的、含有單硫或單氧的4-12元雜環”指的是包括4-12個原子并且更優選為4-9個原子的環，其中至少一個原子為氮并且至少一個原子為氧或硫。在此定義內包括的環如噻唑啉等。
如同在此使用的術語“芳基磺酰基”或“芳基砜”指的是其中R37為如上定義的芳基的下式基團 如同在此使用的術語“烷基亞砜”或“芳基亞砜”指的是其中R38分別為如上定義的烷基或芳基的下式基團 如同在此使用的術語“膦酸衍生物”指的是其中R39和R40為相同的或者不同的H、烷基、芳基或芳烷基的下式基團 如同在此使用的術語“次膦酸衍生物”指的是其中R41為如上定義的H、烷基、芳基或芳烷基的下式基團 如同在此使用的術語“芳硫基”指的是其中R42為如上定義的芳基的下式基團 如同在此使用的術語“單環雜環硫代”指的是其中R43為如上定義的單環雜環基團的下式基團 如同在此使用的術語“單環雜環亞砜”和“單環雜環砜”分別指的是其中R43為如上定義的單環雜環基團的下式基團 如同在此使用的術語“烷基羰基”指的是其中R50為如上定義的烷基的下式基團 如同在此使用的術語“芳基羰基”指的是其中R51為如上定義的芳基的下式基團 如同在此使用的術語“烷氧基羰基”指的是其中R52為如上定義的烷氧基的下式基團 如同在此使用的術語“芳氧基羰基”指的是其中R51為如上定義的芳基的下式基團 如同在此使用的術語“鹵代烷基羰基”指的是其中R53為如上定義的鹵代烷基的下式基團 如同在此使用的術語“鹵代烷氧基羰基”指的是其中R53為如上定義的鹵代烷基的下式基團 如同在此使用的術語“烷硫基羰基”指的是其中R50為如上定義的烷基的下式基團 如同在此使用的術語“芳硫基羰基”指的是其中R51為如上定義的芳基的下式基團 如同在此使用的術語“酰氧基甲氧基羰基”指的是其中R54為如上定義的酰基的下式基團 如同在此使用的術語“芳基氨基”指的是其中R51為如上定義的芳基的式R51-NH-基團。
如同在此使用的術語“聚烷基醚”指的是經常使用的二元醇例如三甘醇、四甘醇、聚乙二醇等。
如同在此使用的術語“烷基酰氨基”指的是其中R50為如上定義的烷基的下式基團 如同在此使用的術語“N,N-二烷基酰氨基”指的是下式基團，其中R50為相同的或不同的如上定義的烷基 如同在此使用的術語“新戊酰氧基甲基”指的是下式基團 如同在此使用的術語“酰氧基”指的是其中R55為如上定義的酰基的式R55-O-基團。
如同在此使用的術語“組合物”意指由將多于一種的要素或組分混合而得到的產物。
如同在此使用的術語“藥學上可接受的載體”意指藥學上可接受的材料、組成或溶媒，例如涉及攜帶或轉運化學藥物的液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料。
術語“治療有效量”將意指引發組織、系統或研究者或臨床醫生研究的動物的生物或醫學應答的藥物或藥劑的量。
以下列出如同在此互換使用的縮寫與相應的含義1H-NMR=核磁共振氫譜AcOH=乙酸Ar=氬BH3-THF=硼烷-四氫呋喃復合物Bn=芐基BOC=叔丁氧基羰基ButLi=丁基鋰Cat=催化量CDMT=2-氯-4,6-二甲氧基三嗪CH2Cl2=二氯甲烷CH3CN=乙腈CH3I=碘甲烷CHN分析=碳/氫/氮元素分析CHNCl分析=碳/氫/氮/氯元素分析CHNS分析=碳/氫/氮/硫元素分析DAST=二乙基氨基三氟化硫DCC=1,3-二環己基碳二亞胺DCM=二氯甲烷DIBAL=氫化二異丁基鋁DIEA=二異丙基乙基胺DI水=去離子水DMA=N,N-二甲基乙酰胺DMAC=N,N-二甲基乙酰胺DMAP=4-(N,N-二甲基氨基)吡啶
DMF=N,N-二甲基甲酰胺DSC=二琥珀酰基碳酸酯EDCI=1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽Et=乙基Et2O=乙醚Et3N=三乙胺EtOAc=乙酸乙酯EtOH=乙醇FABMS=快速原子轟擊質譜g=克GIHA=間胍基馬尿酸GIHA HCl=間胍基馬尿酸鹽酸鹽G1y=甘氨酸HMPA=六甲基磷酰胺HOBT=1-羥基苯并三唑水合物HPLC=高效液相色譜法IBCF=氯甲酸異丁酯i-Pr=異丙基i-Prop=異丙基K2CO3=碳酸鉀KMnO4=高錳酸鉀KOH=氫氧化鉀KSCN=硫氰酸鉀L=升LiOH=氫氧化鋰MCPBA=間-氯過苯甲酸Me=甲基MeI=碘甲烷
MeOH=甲醇MEMCl=甲氧基乙氧基甲基氯MesCl=甲磺酰氯mg=毫克MgSO4=硫酸鎂ml=毫升mL=毫升MS=質譜MTBE=甲基叔丁基醚N2=氮NaCNBH3=氰基硼氫化鈉NaH=氫化鈉NaHCO3=碳酸氫鈉NaOH=氫氧化鈉NaOMe=甲醇鈉Na2PO4=磷酸鈉Na2SO4=硫酸鈉NEt3=三乙胺NH4HCO3=碳酸氫銨NH4+HCO2-=甲酸銨NH4OH=氫氧化銨NMM=N-甲基嗎啉NMP=1-甲基-2-吡咯烷酮NMR=核磁共振Pd/C=披鈀炭Ph=苯基Pt/C=披鉑炭RPHPLC=反相高效液相色譜法
RT=室溫t-BOC=叔丁氧基羰基TFA=三氟乙酸THF=四氫呋喃TLC=薄層層析法TMEDA=四甲基亞乙基二胺TMS=三甲基甲硅烷基△=加熱反應混合物如同在式Ⅰ-Ⅵ中顯示的化合物能夠以多種異構形式存在并且意指包括所有這樣的異構形式。也包括互變異構形式以及這樣的異構體和互變異構體的藥學上可接受的鹽。
在此所述結構和式中，穿過環的鍵所畫出的鍵可為環上任何可利用的原子。
術語“藥學上可接受的鹽”指的是通過使式Ⅰ化合物與其一般考慮適宜于人體消耗的酸的陰離子接觸來制備的鹽。藥學上可接受的鹽的實例包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽等。可通過常規方法制備所有的藥學上可接受的鹽。(用于藥學上可接受的鹽的另外的實例參見Berge等，J.Pharm.Sci.,66(1),1-19(1977))。
為選擇性抑制或拮抗αvβ3整聯蛋白，本發明化合物可以其包括常規藥學上可接受的載體、輔助劑和溶媒的單位劑型經口服、胃腸外給藥或通過吸入噴霧或局部給藥。在此使用的術語胃腸外包括例如皮下、靜脈、肌內、胸骨內、輸注技術或腹膜內。
本發明化合物通過以適合于所述途徑的藥用組合物的形式和以用于治療的有效劑量的任何適宜的途徑給藥。使用對醫學領域熟悉的臨床前和臨床方法，本領域普通技術人員易于確定預防或阻止疾病的發展或治療疾病所需要的治療有效劑量的化合物。
因此，本發明提供治療由選擇性抑制或拮抗αvβ3細胞表面受體介導的疾病的方法，該方法包括給予治療有效量的選自式Ⅰ-Ⅵ中闡明的這類化合物的化合物，其中一種或多種式Ⅰ-Ⅵ化合物與一種或多種非毒性的、藥學上可接受的載體和/或稀釋劑和/或輔劑(總稱“載體”材料)和如果需要的話的其它活性成分一起給藥。更準確地講，本發明提供用于抑制αvβ3細胞表面受體的方法。本發明最優選提供用于抑制骨吸收、治療骨質疏松癥、抑制惡性腫瘤體液高鈣血癥、治療培吉特病、抑制腫瘤轉移、抑制瘤形成(實體腫瘤生長)、抑制血管發生包括腫瘤血管發生、治療視網膜病包括黃斑變性和糖尿病性視網膜病、抑制關節炎、牛皮癬和牙周病和抑制平滑肌細胞遷移包括再狹窄的方法。
基于本領域技術人員熟知和理解的標準實驗室實驗技術和方法以及與已知用途的化合物相比較，式Ⅰ化合物能夠用于治療患有以上病理疾病的患者。本領域技術人員將認識到選擇最適當的本發明化合物在具有本領域一般技術的人的能力范圍內并且將依多種因素包括在標準試驗和動物模型中得到的結果來確定。
治療受到所述病理癥狀之一困擾的患者的方法包括給予這樣的患者一定量的式Ⅰ化合物，其在所述疾病的控制或者延長患者的存活率中是有效的，超出不采用該治療方法所能期待的存活率。如同在此使用的術語疾病的“抑制”指的是延緩、中斷、阻止或停止疾癥而不必表明全部消除所述疾病。人們相信除了自身的明顯有利作用之外，延長患者的存活率也表明所述疾病被有利地控制到某種程度。
如同先前陳述的那樣，能夠在多種生物、預防或治療領域中使用本發明化合物。打算把這些化合物用于預防或治療其中αvβ3整聯蛋白起作用的任何疾病或者癥狀。
用于化合物和/或含有這些化合物的組合物的劑量方案基于多種因素，包括患者的類型、年齡、體重、性別和醫療條件、疾病的嚴重程度、給藥途徑和所使用特定的化合物的活性。因此，劑量方案可變化很大。劑量水平從每天每公斤體重大約0.01至大約1000mg來用于治療上述的疾病。
將經注射給予的活性成分配制為其中例如鹽水、葡萄糖或水可用作適宜的載體的組合物。依以上列出的因素而定，適宜的每日劑量一般為每日以多劑量注射大約0.01至10mg/kg體重。
為給予需要這樣治療的哺乳動物，一般將治療有效量的所述化合物與一種或多種適宜于所指明給藥途徑的輔劑混合。化合物可與乳糖、蔗糖、淀粉粉末、鏈烷酸纖維素酯、纖維素烷基酯、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸和硫酸的鈉和鈣鹽、明膠、阿拉伯膠、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，并且壓片或包封以便于給藥。或者可把化合物溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化鈉和/或多種緩沖劑中。其它的輔劑和給藥模式為藥學領域中廣泛熟知的。
用于本發明中的藥用組合物可經受常規藥用操作例如滅菌和/或可含有常規藥用輔劑例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、緩沖劑等。
制備用于本發明的化合物的一般合成順序列于流程1-15中。對于本發明的多種方面的解釋和實際方法兩者被適當描述。以下流程和實施例僅打算闡明本發明，而不限制它們的范圍或精神。本領域技術人員將易于理解在所述流程和實施例中描述的條件和方法的已知的變化形式能夠用于合成本發明化合物。
除非另外指出，所使用的所有起始原料和裝置可市售得到。
流程1
流程2
流程3
流程1-3闡明用于制備其用于偶合到甘氨酰-β-氨基酸部分的本發明胍基吡啶/環胍基吡啶羧酸部分的方法。這可以使用本領域技術人員已知的其它適當的胍基化(guanidating)試劑來完成。使用常規技術和方法能夠改進流程1-3的方法以制備用于偶合到甘氨酰-β-氨基酸部分的另外的化合物。
流程4 流程4闡明用于制備其用于偶合甘氨酰-β-氨基酸部分的本發明的胍基噻唑羧酸部分的方法。使用本領域技術人員已知的常規技術能夠改進流程4的方法以制備用于偶合到甘氨酰-β-氨基酸部分的這些和另外的化合物。
流程5
流程5闡明用于制備本發明化合物的N-甘氨酰-氨基-3-(3,5-二鹵代-2-羥基)苯基丙酸乙酯部分的方法。簡言之，通過直接鹵代制備3,5-鹵代的水楊醛(鹵代-2-羥基苯甲醛)。例如，將5-溴代水楊醛在乙酸中漿化并加入等當量或更多量的氯，以生成3-氯-5-溴-2-羥基苯甲醛。
一些產物沉淀出來并經過濾回收。經用水稀釋濾液并分離沉淀，回收剩余部分。合并固體并干燥，得到3-氯-5-溴-2-羥基苯甲醛。通過在DMF中使5-氯水楊醛與N-碘代琥珀酰亞胺反應并使該反應混合物經受常規處理條件，制備3-碘代-5-氯代水楊醛。能夠通過在乙腈中使5-溴代水楊醛與碘化鉀和氯胺T反應能夠制備3-碘代-5-溴代水楊醛。常規處理得到物料，當用己烷處理時，得到要求的3-碘代-5-氯代水楊醛。
使用改進的佩金反應(例如，Vogel’s Textbook of Practical OrganicChemistry，第5版，1989,1040頁)，從水楊醛易于制備香豆素類。將鹵代的香豆素類轉化為3-氨基氫化香豆素類(參見J.G.Rico，四面體快報，1994,35,6599-6602)，其在酸性醇中易于開環，得到3-氨基-3-(3,5-鹵代-2-羥基)苯基丙酸酯。
通過Boc-N-甘氨酰-N-羥基琥珀酰亞胺的反應，把3-氨基-3-(3,5-鹵代-2-羥基)苯基丙酸酯轉化為N-甘氨酰-3-氨基-3(3,5-鹵代-2羥基苯基丙酸酯，得到Boc-N-甘氨酰-3-氨基-3-(3,5-鹵代-2-羥基苯基丙酸酯，將其轉化為N-甘氨酰-3-氨基-3-(3,5-鹵代-2-羥基)苯基丙酸酯的HX鹽(其中X為Cl、Br或I)。
流程6
流程6闡明用于使雜環酸部分(A1-A13)偶合于本發明的甘氨酰-β-氨基部分(C)的方法。
在流程1-4中闡明A1-A13的合成并且在流程5(其中X和Y為相同的或不同的鹵素)中闡明(C)的合成。
使用本領域普通技術人員已知的常規方法，能夠進一步改進這樣的方法。
流程7步驟A 步驟B
流程7闡明以通法制備分子(F)的甘氨酰-β-氨基酸部分的方法。
在這個方法中使用的醛(R’CHO)可市售得到或者能夠使用本領域普通技術人員通常已知的用于制備醛的方法由市售得到的試劑來制備。
所有其它的試劑可市售得到或者能夠易于由本領域技術人員合成。
使用常規技術，能夠進一步改進這樣的方法和條件以生成相似要求的中間體。
流程8
流程8闡明用于使雜環部分(A1-13)偶合至甘氨酰-β-氨基酸部分(F)來制備本發明化合物的方法。
在流程1-4中闡明A1-13的合成并且在流程7中闡明(F)的合成。
使用本領域普通技術人員已知的常規方法，能夠改進這樣的方法。
流程9-12闡明制備本發明化合物的通法。
流程9
流程9闡明用于合成雜環衍生的甘氨酰-β-氨基酸偶合的目標化合物的通用方法。在肽偶合條件下，雜環羧酸與甘氨酰-β-氨基酸反應，得到中間體(2)。使用催化氫化(例如Pt/C,H2)還原硝基，得到氨基中間體(3)。使用SnCl2也可化學上實施這個轉化。使用以上討論的方法，能夠將氨基精心制備以得到式Ⅰ的胍基或其它的官能團。
流程10
或者，可通過在與甘氨酰-β-氨基酸偶合之前，建立所述分子的左手部分來合成所述目標化合物(流程10)。雜環胺(1)的氨基官能度被官能化成為胍或其它基團(A，式1)，然后在標準偶合條件下偶合于甘氨酰-β-氨基酸。
流程11
流程11顯示取代的吡啶和吡啶酮衍生的目標化合物的合成通法。把6-羥基煙酸硝化隨后經氯化，得到6-氯-5-硝基煙酸。使中間體3與甘氨酰-β-氨基酸偶合，得到產物4。在通用中間體4中的氯基團能易于由多種親核試劑置換，得到5。如同在流程9中討論的那樣，還原4或5的硝基并進一步精心加工氨基，得到目標化合物。
流程12
流程12顯示用2-氨基-6-羥基吡啶-4-甲酸起始進行取代的吡啶和吡啶酮衍生的目標化合物的合成。在本流程中使用的起始物料1可通過在高壓條件下，使市售得到的2-氯-6-甲氧基-吡啶-4-甲酸與氫氧化銨反應來制備。如同在流程10中討論的那樣，精心加工氨基隨后偶合于甘氨酰-β-氨基酸，得到目標化合物。
流程13
流程13顯示用6-氨基-4-甲氧基-吡啶甲酸起始的異構吡啶和吡啶酮的合成。在流程13中使用的起始物料1可如同在文獻(J.Am.Chem.Soc.,78,4130,1956)中描述的那樣來制備。在1中的氨基進行官能化作用，隨后經偶合反應和水解(如同在流程10中那樣)，得到目標化合物。
流程14
使用在流程14中顯示的方法，可制備異構吡啶和吡啶酮衍生的化合物。通過用6-氯-吡啶甲酸開始，可制備關鍵中間體4。氧化隨后通過硝化得到4-硝基吡啶衍生物(3)。將N-氧化物脫氧、還原硝基和親核取代氯基團，得到中間體4。可使用在流程10中討論的方法，以完成目標化合物的合成。
流程15
在流程10中顯示的方法也能用于合成嘧啶衍生的目標化合物(流程15)。按照文獻制備方法，可合成異構的嘧啶衍生物1和2(J.Org.Chem.,26,2755,1961)。
實施例A制備 將5-氨基煙酸(4.0g,0.021mole)(Helv.Chim.Acta,47,363(1964)；JACS,70,2381)、1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(4.6g,0.031mole)、二異丙基乙基胺(8.0g,0.062mole)、二噁烷(14mL)和H2O(7mL)于回流下加熱2天。將反應物冷卻至室溫，過濾沉淀，用H2O/二噁烷(50∶50)洗滌并干燥。把該沉淀在H2O中漿化并用2NHCl酸化。真空除去溶劑，得到作為白色固體的以上化合物(750mg)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
實施例B制備 步驟1向在無水乙醇(75mL)中的3,4,5,6-四氫-2-嘧啶硫醇(10g,0.086mole)(Aldrich)中加入MeI(12.2g,0.086mole)。在回流下攪拌反應物2.5小時。真空除去溶劑并干燥產物，得到作為白色固體的2-甲基硫代-3,4,5,6-四氫-2-嘧啶氫碘酸鹽(22g)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。步驟2在冰浴溫度下，向在CH2Cl2(25mL)中的來自以上步驟1的產物(5.3g,O.021mole)和三乙胺(2.07g,0.021mole)中加入BOC酸酐(4.5g,0.021mole)。然后在室溫下將反應物攪拌2天。用H2O(3X)洗滌CH2C12，經MgSO4干燥，并且真空除去，得到N-Boc-2-甲基硫代-3,4,5,6-四氫-2-嘧啶(4.14g)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。步驟3在80-85℃下，將在DMA(12mL)中的來自以上步驟2的產物(3.08g,0.0134mole)、5-氨基煙酸(1.8g,0.0134mole)加熱兩周。用CH3CN稀釋該反應混合物，過濾沉淀，用CH3CN洗滌并干燥。將該沉淀在H2O中漿化并用濃HCl使pH降至1-2。把溶液冷凍并冷凍干燥，得到作為淡棕色固體的要求的產物(1.2g)。MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
實施例C制備 步驟1在冰浴溫度下，向在CH2Cl2(100mL)中的2-甲硫基-2-咪唑啉氫碘酸鹽(20g,0.082mole)(Aldrich)和三乙胺(8.28g,0.082mole)中加入BOC酸酐(17.9g,0.082mole)。在室溫下，將反應物攪拌過夜。以H2O(2x)洗滌CH2Cl2，經MgSO4干燥，并且真空除去，得到轉化為蠟狀白色固體的粘稠油的N-BOC-2-甲硫基-2-咪唑啉(15.93g)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。步驟2在100℃下，將在DMA(60mL)中的來自以上步驟1的產物(15.93g,0.0737mole)、5-氨基煙酸(9.6g,0.07mole)和三乙胺(7.1g,0.07mole)加熱兩天，然后在130℃下加熱1天，并在150℃下加熱另外2天。冷卻后并用CH3CN稀釋該反應混合物，過濾沉淀，用乙醚洗滌并干燥(兩性離子產量為10.16g)。將其在H2O中漿化并用TFA酸化(pH1-2)。把溶液冷凍并冷凍干燥，得到淡黃色固體的要求的產物(20.15g)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
實施例D制備 步驟1制備 向配置機械攪拌器和冷凝器的2L圓底燒瓶中加入3,5-二氯水楊醛(200.0g,1.05mol,1當量)、乙酸酐(356g,3.49mol)和三乙胺(95.0g,0.94mol,0.90當量)。將該反應溶液回流下加熱過夜。把暗棕色反應混合物冷卻至50℃并伴隨攪拌下加入水(1L)。1小時后，過濾混合物并把濾液與EtOH(1L)混合。將該混合物加熱至45℃一小時，冷卻至室溫，過濾并用EtOH(0.5L)洗滌固體(部分A)。經旋轉蒸發濃縮合并的EtOH溶液至產生油(部分B)。將來自部分A的固體溶于二氯甲烷(1.5L)中并把生成的溶液通過硅膠墊(1300mL體積)。將生成的暗棕色溶液濃縮至油，該油用己烷(1.3L)研磨，得到固體，經過濾分離并洗滌(己烷)，得到基本上純的6,8-二氯香豆素(163g)。經用相似方法處理油(部分B)，得到另外31g產物；將油溶于二氯甲烷(0.5L)中，通過硅膠墊(0.5L體積)并用己烷研磨。總分離收率為194g或86％的棕色固體。
MS和1H-NMR與要求的產物相一致。步驟2制備 向配置機械攪拌器的2L三口圓底燒瓶中加入在步驟1中制備的6,8-二氯香豆素(160g,0.74mol)和干燥THF(375mL,Aldrich SureSeal)。將生成的混合物冷卻至-40℃(干冰-丙酮浴)并加入雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰(O.80mol,800ml的1M在THF中的溶液)，其間維持溫度在-40℃以下。加入完成后，撤除冷卻浴。在0.5小時后，使該混合物溫熱至-5℃。通過加入在EtOH(1.25L)中的HCl溶液(0.5L的4M在二噁烷中的溶液)猝滅。把溫度維持在0℃以下過夜。將反應混合物濃縮至其原來體積的大約一半并在EtOAc(3L)和水(2L)之間分配。用HCl水溶液(3×1L,0.5NHCl)洗滌有機層。經加入10％的NaOH水溶液把合并的水層的pH調至大約7并用二氯甲烷(3×2L)提取。干燥(MgSO4)合并的有機層，過濾，并伴隨攪拌下加入HCl(210mL的4M在二噁烷中的溶液)。沉淀完全后，過濾除去固體。將濾液濃縮至小的體積并加入甲基叔丁基醚。將得到的固體與最初形成的固體合并，且用甲基叔丁基醚洗滌合并的產物，過濾分離并干燥(真空箱中放置過周末)，得到要求的產物(172g,74％收率)。
MS和1H-NMR與要求的產物相一致。步驟3制備 在惰性氣氛(Ar)中，向配置磁力攪拌棒的火焰干燥的圓底燒瓶(0.5L)中加入N-叔丁氧基羰基-甘氨酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(Sigma,15.0g,0.055mol)、干燥的DMF(Aldrich Sure Seal,200mL)和來自步驟2的產物(21.67g,0.055mol)。將反應混合物冷卻至大約0℃(鹽-冰浴)并加入N-甲基嗎啉(5.58g,0.056mole)和催化量的DMAP。使反應進行過夜。將反應混合物濃縮至脂膏并在EtOAc(0.4L)和堿水溶液(2×0.2L,飽和的NaHCO3水溶液)之間分配。有機層用枸櫞酸水溶液(2×0.2L,10％w/v)、碳酸氫鈉水溶液(2×0.2L)、鹽水依次洗滌并干燥(Na2SO4)。在55℃下，真空下除去揮發物，得到油(22.5g,92％收率)，其放置后固化。
MS和1H-NMR與要求的產物相一致。步驟4制備 使用以下方法，將在步驟3中得到的產物脫除保護，得到所述胺鹽酸鹽。向在配備攪拌棒的火焰干燥的圓底燒瓶(0.1L)中的步驟3中得到的產物(14.0g,0.032mole)中加入干燥的二噁烷(40mL)。在0℃下，向該溶液中加入HCl(4.0N在二噁烷中，2當量，6.32mL)。使反應進行直到氣體釋放停止并且反應完全。真空除去揮發物并且用乙醚(50mL)研磨殘余物。過濾收集固體，用乙醚洗滌并干燥，得到要求的產物(12.5g)。
MS和1H-NMR與要求的產物相一致。實施例E制備 步驟1制備 向3-溴-5-氯水楊醛(175g,743.2mmol)在乙酸酐(280.5mL,3mol)的懸浮液中加入三乙胺(103.6mL,743.2mmol)。在回流下，將該反應物溶液加熱4.5小時。冷卻溶液并真空濃縮。把棕色殘余物加入到無水乙醇(730mL)中。在0℃下，將混合物貯存14小時。經過濾收集棕色固體并用冷的乙醇洗滌。真空干燥固體，得到要求的產物(123g,64％收率)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2制備 在-76℃下，向步驟1中生成的香豆素(40.0g,154.1mmol)在THF(400mL)的懸浮液中伴隨攪拌下滴加入雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰(154.1mL的1M在THF中的溶液)。10分鐘內加入完成。然后，將該反應混合物攪拌5分鐘，溫熱至-20℃并攪拌15分鐘。在5分鐘內，向該溶液中加入在THF(28mL)中的乙酸(9.25g,154.1mmol)。將混合物溫熱至室溫并真空除去揮發物。把殘余物溶于乙醚(850mL)，用飽和的NaHCO3水溶液(2×100mL)、鹽水(2×40mL)洗滌并干燥(MgSO4)。將乙醚溶液濃縮至大約160mL，并且冷卻至0℃。向該懸浮液中加入HCl(4M在二噁烷中，56.3mL,225mmol)并在0℃下將該混合物攪拌30分鐘。過濾懸浮液并用乙醚徹底洗滌濾餅。真空干燥固體，得到作為HCl鹽的要求的產物，二噁烷溶劑合物(45g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3制備 于10分鐘內向步驟2中生成的內酯(142.2g,354.5mmol)在無水乙醇(533mL)中的懸浮液中加入HCl(4M在二噁烷中，157.8mL,631.1mmol)。在室溫下，將該反應混合物攪拌2.5小時。真空除去揮發物。把殘余物溶于乙酸乙酯(450ml)中并在0℃下使該溶液保持15小時。經過濾收集褐色沉淀并用冷的乙酸乙酯洗滌。真空干燥固體，得到作為鹽酸鹽的要求的產物(100.4g,79％收率)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4制備 在惰性氣氛(Ar)中，向配置磁力攪拌棒的火焰干燥的圓底燒瓶(0.1L)中加入N-叔丁氧基羰基-甘氨酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(Sigma,2.72g,0.010mol)、干燥的THF(Aldrich Sure Seal,50mL)和步驟3的產物(3.10g,0.01mol，經P2O5真空干燥過夜)。將反應混合物冷卻至大約0℃(鹽-冰浴)并加入三乙胺(1.01g,0.010mole)。使反應進行過夜。將反應混合物濃縮至半固體并用與實施例A步驟3相似的方法處理。在55℃下，從有機層中真空除去揮發物，得到油(4.0g,83％收率)，其放置后固化。
MS和1H-NMR與要求的產物相一致。步驟5制備 使用以下方法，將在步驟4中得到的產物脫除保護，得到所述鹽酸鹽。向在配備攪拌棒的火焰干燥的圓底燒瓶(0.1L)中的步驟4中得到的產物(4.0g,0.0084mole)中加入干燥的二噁烷(20mL)。向該溶液中加入HCl(4N在二噁烷中，20mL)，并使反應進行直到氣體逸出停止并且反應完全(大約1小時)。真空除去揮發物并且用乙醚(50mL)研磨殘余物。過濾收集固體，用乙醚洗滌并干燥，得到淡棕色固體(2.7g,78％收率)。
MS和1H-NMR與要求的產物相一致。
實施例F制備 步驟1制備3-碘代-5-氯水楊醛 將N-碘代琥珀酰亞胺(144.0g,0.641mole)加入到5-氯水楊醛(100g,0.638mole)在二甲基甲酰胺(400mL)中的溶液中。在室溫下，將該反應混合物攪拌2天。另外加入N-碘代琥珀酰亞胺(20.0g)并繼續攪拌另外2天。用乙酸乙酯(1L)稀釋反應混合物，用鹽酸(300mL,0.1N)、水(300mL)、硫代硫酸鈉(5％,300mL)、鹽水(300mL)洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮至干，得到淺黃色固體的要求的醛(162g,90％收率)。
1H-NMR和MS與要求的產物相一致。步驟2制備6-氯-8-碘代香豆素 在回流下，將3-碘代-5-氯水楊醛(100g,0.354mole)、乙酸酐(300mL)和三乙胺(54mL)的混合物加熱18小時。冷卻下，要求的香豆素作為深棕色結晶物料沉淀出來。過濾沉淀，用己烷/乙酸乙酯(4∶1,200mL)洗滌并且空氣干燥[產量60g(55％收率)]。貯存后，從濾液中能夠得到另外量的要求的產物(10g,9％收率)。
1H-NMR和MS與要求的產物相一致。步驟3制備(R,S)-4-氨基-3,4-二氫-6-氯-8-碘代香豆素鹽酸鹽 在-78℃下，將六甲基二硅氮烷鋰(21.62mL,1M,21.62mmol)加入到6-氯-8-碘代香豆素(6.63g,21.62mmol)在四氫呋喃(100mL)中的溶液中。在該溫度下，將反應混合物攪拌30分鐘，然后在0℃下攪拌1小時。將乙酸(1.3g,21.62mmol)加入到反應混合物中。把反應混合物傾入到乙酸乙酯(300mL)和飽和的碳酸鈉溶液(200mL)中。分離有機層，在0℃下，用鹽水(200mL)、二噁烷/HCl(4N,30mL)先后洗滌。在室溫下，將反應混合物攪拌1小時，過濾，并真空干燥，得到作為粉末的要求的產物(4.6g,59％收率)。(反相高效液相色譜法Rf6.8分鐘。15分鐘內梯度10％乙腈-90％乙腈，然后下一個6分鐘100％乙腈。水和乙腈兩者含有O.1％TFA。Vydac C18蛋白肽柱，2mL/min流速，在254nm下監控)。
1H-NMR和MS與要求的產物相一致。步驟4制備(R,S)-乙基3-氨基-3-(5-氯-2-羥基-3-碘代)苯基丙酸酯鹽酸鹽
將氯化氫氣體鼓泡進入4-氨基-3,4-二氫-6-氯-8-碘代香豆素鹽酸鹽(22.0g,61.09mmol)在乙醇(250mL)中的溶液中，把該反應混合物維持在0-10℃下直到飽和。回流6小時后，經蒸餾除去大多數溶劑。將冷卻的殘余物加入到無水乙醚中并攪拌2小時。初始的膠狀物轉變為結晶物料。過濾結晶產物并干燥，得到作為灰白色結晶粉末的要求的產物(20g,81％收率)。(Rf.7.52分鐘。條件如同步驟3)。
1H-NMR和MS與要求的產物相一致。步驟5制備(R,S)-乙基3-(N-叔丁氧基羰基-甘氨酰)-氨基-3-(5-氯-2-羥基-3-碘代)苯基丙酸酯 在0℃下，將叔丁氧基羰基-甘氨酸(2.16g,12.31mmol)、HOBT(1.67g,12.31)、EDCl(2.36g,12.31mmol)和DMF(50mL)的混合物攪拌1小時。將3-氨基-3-(5-氯-2-羥基-3-碘代)丙酸乙酯鹽酸鹽(5.0g,12.31mmol)加入到反應混合物中，隨后加入三乙胺(3.5mL)。在室溫下，將該反應混合物攪拌18小時。真空除去DMF并且殘余物在乙酸乙酯(300mL)和碳酸氫鈉(200mL)之間分配。用鹽酸(1N,100mL)、鹽水(200mL)洗滌有機層，干燥(MgSO4)并濃縮，得到作為固體的要求的產物(6g,93％收率)。
1H-NMR和MS與要求的產物相一致。步驟6制備(R,S)-乙基3-(N-甘氨酰)-氨基-3-(5-氯-2-羥基-3-碘代)苯基丙酸酯鹽酸鹽 在0℃下，將二噁烷/HCl(4N,20mL)加入到乙基3-(N-叔丁氧基羰基-甘氨酰)-氨基-3-(5-氯-2-羥基-3-碘代)丙酸酯(6.0g,11.30mmol)中并在室溫下攪拌3小時。將該反應混合物濃縮并在加入甲苯(100mL)后再次濃縮。把得到的殘余物懸浮于乙醚中，過濾并干燥，得到結晶粉末的要求的產物(5.0g,95％收率)。(反相高效液相色譜法Rf8.3分鐘。條件如同步驟3)。
1H-NMR和MS與要求的產物相一致。
實施例G制備 步驟1制備雷佛馬茨基試劑BrZnCH2CO2-t-Bu把鋅金屬(180.0g,2.76mol,30-100目)和THF(1.25L)放入配備冷凝器、溫度探頭和機械攪拌器的4L燒瓶中。攪拌期間，借助加料管加入1,2-二溴乙烷(4.74mL,0.06mol)[或者，可替代為TMSCl(0.1當量)在室溫下1小時]。在惰性氣體(3N2/真空循環)清洗之后，將鋅在THF中的懸浮液加熱至回流(65℃)并維持這個溫度達1小時。在將混合物冷卻至50℃之后，于1.5小時內借助50mL加料管和加料泵(傳遞設置為4.1mL/min)加入溴代乙酸叔丁酯(488g,369mL,2.5mol)。整個加入期間維持反應溫度50°+/-5℃。加入完成后，在50℃下，使反應混合物攪拌一小時。隨后，使該混合物冷卻至25℃并使沉淀出來的產物沉降。使用粗玻璃料的濾棒將THF母液傾析到2L圓底燒瓶中并且部分真空轉移(20mmHg)。從該混合物中除去大約65％的THF。加入1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP,800mL)并繼續攪拌5分鐘。過濾反應混合物以除去任何殘留的鋅。分析表明要求的雷佛馬茨基試劑的滴定度為1.57M，具有摩爾收率94％。或者經過濾能夠把固體試劑與原來的反應混合物分離。用THF洗滌濾餅直到得到白色固體并在N2下干燥，得到作為一THF溶劑合物的要求的產物，其可在-20℃(干燥)下貯存用于以下階段。一般回收率為85-90％。步驟2A．制備 在室溫下，將碳酸鉀(粉末，烘箱中在100℃下真空干燥，8.82g,60mmoles)加入到3,5-氯水楊醛(11.46g,60moles)在DMF(40ml)中的溶液中，得到亮黃色漿狀物。然后加入MEMCl(純品，7.64g,61mmoles)，其間維持浴溫在20℃。在22℃下將混合物攪拌6小時并加入MEMCl(0.3g,2.4mmoles)。將混合物攪拌另外0.5小時并將反應混合物傾入到冷水(200mL)中，以沉淀出產物。在壓力濾器上過濾該漿狀物并用水(2×50mL)洗滌濾餅，并于N2下真空干燥，得到灰白色固體的產物(14.94g,89％收率)。1H-NMR(CDCl3,TMS)3.37(s,3H),3.54-3.56(m,2H),3.91-3.93(m,2H),5.30(s,2H),7.63(d,1H),7.73(d,1H),10.30(s,1H)；13C NMR(CDCl3,TMS)δ(ppm):59.03,70.11,99.57,126.60,129.57,130.81,132.07,135.36,154.66,188.30。DSC:48.24℃(內90.51J/g)；微量分析對C11H12Cl2O4的計算值C:47.33％；H:4.33％；Cl:25.40％；實測值C:47.15％；H:4.26％；Cl:25.16％。B．制備 將來自步驟2A的產物(35.0g,0.125mol)置于配備機械攪拌器和加料漏斗的1L三口圓底燒瓶中，隨后加入THF(200mL)。在22℃下，攪拌該溶液并立即加入(S)-苯基甘氨醇(17.20g,0.125mol)。在22℃下30分鐘后，加入MgSO4(20g)。在22℃下，將該混合物攪拌1小時并在粗玻璃料濾器上過濾。減壓下濃縮濾液，無需進一步純化，粗品亞胺直接用于偶合反應步驟2的C中。C．制備 在氮氣下，將在步驟1中得到的固體試劑(91.3g,0.275mol)和NMP(200mL)加入配備機械攪拌器和加料漏斗的1L三口圓底燒瓶中。然后將該溶液冷卻至-10℃并在350rpm下攪拌。在氮氣下，制備亞胺(在步驟B中制備)在NMP中的溶液，然后于20分鐘內加入到以上反應混合物中，其間溫度維持在-5℃(夾套溫度-10℃)。加入完成后，在-8℃下，將該混合物攪拌另外1.5小時并在-5℃下攪拌1小時。冷卻至-10℃之后，將濃HCl/飽和的NH4Cl溶液(100mL)、水(100mL)和鹽水(100mL)的混合物加入到所述溶液中。加入MTBE(200mL)并在23℃下以200rpm的轉速將該混合物攪拌15分鐘。停止攪拌并分層。用MTBE(100ml)提取水層。合并兩個有機層，依次用飽和的NH4Cl溶液(100ml)、水(100ml)和鹽水(100ml)洗滌。用MgSO4(30g)干燥溶液，過濾并濃縮，如同質子和碳NMR測量的那樣，得到含有作為單一非對映異構體的要求的產物的橙色的油(66.3g)(放置固化)。經從庚烷重結晶，得到作為灰白色固體的產物，將樣品純化用于分析。質子和碳NMR和IR譜與要求的產物一致。[α]D25=+8.7°(c=1.057,MeOH)。微量分析對C25H33Cl2NO6的計算值C:58.77％；H:6.47％；N:2.72％；Cl:13.78％；實測值C:58.22％；H:6.54％；N:2.70％；Cl:13.66％。步驟3制備 A．將在步驟2中制備的粗品酯[17.40g,0.033mole(理論)]和EtOH(250mL)的溶液加入到1L的三口夾套反應器中。將該溶液冷卻至0℃并立即加入Pb(OAc)4(14.63g,0.033mole)。2小時后，加入15％的NaOH溶液(30mL)并減壓下除去乙醇。加入另一份15％的NaOH(100mL)并用MTBE(2×100mL)提取混合物，以水(2×100mL)和鹽水(50mL)洗滌，用Na2SO4干燥，硅藻土過濾并減壓下濃縮，得到橙色的油(12.46g)，其經tlc測定為純的。無須進一步純化即可使用所述油。B．用EtOH(30mL)稀釋來自A的油并加入對甲苯磺酸(1.3當量，0.043mole,8.18g)。將該溶液加熱回流8小時，冷卻至環境溫度并減壓下濃縮。用THF(20mL)處理殘余物并加熱回流以形成溶液。將該溶液冷卻至室溫并且該化合物結晶。加入庚烷(30mL)和THF(10mL)以形成流體漿狀物，使其過濾。用THF/庚烷(40mL,1/1)洗滌濾餅，在氮氣氛下，于壓力濾器上真空干燥2小時，得到白色固體(7.40g)。
質子和碳NMR和IR譜與作為基本上單一的對映體的要求的產物相一致。
微量分析對C18H21Cl2NO6S,0.25C4H8O的計算值C:48.73％；H:4.95％；N:2.99％；Cl:15.14％；實測值C:48.91％；H:4.95％；N:2.90％；Cl:14.95％。步驟4制備 向配備磁力攪拌棒和氮氣通氣管的500mL圓底燒瓶中加入來自步驟3的產物(21.7g,0.065mole)、N-叔丁氧基羰基-甘氨酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(17.7g,0.065mole)和DMF(200mL)。在室溫下，于氮氣中將反應混合物攪拌3.25小時并形成淺橙色溶液。將反應混合物傾入到冰冷的乙酸乙酯(1.2L)中。用1M HCl(250mL)洗滌有機溶液，然后用鹽水(500mL)洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮幾近至干，得到油，隨后將其在50℃下干燥，得到無色油的產物(28.12g,99％收率)。從乙酸乙酯/己烷中制備晶種。把產物(大約28g)溶于乙酸乙酯(35mL)和己烷(125mL)中。以晶種接種該溶液并形成沉淀。過濾固體并在55℃下真空干燥過夜，得到無色固體(27.0g,95％收率)。1H-NMR與要求的產物相一致。步驟5制備
經P2O5和NaOH小片將在步驟4中制備的叔丁氧基羰基保護的甘氨酰胺(27.0g,0.062mole)干燥過夜。將該固體溶于二噁烷(40mL)中并把溶液冷卻至0℃。加入等量體積的4N HCl/二噁烷(0.062mole)并將反應進行2小時。如同反相高效液相色譜法測量的那樣，在此時的轉化率為80％。4小時內使反應混合物溫熱至室溫。在40℃下，將該反應混合物濃縮至泡沫，其用乙醚(200mL)研磨。過濾形成的白色固體并經P2O5干燥，得到作為鹽酸鹽的要求的甘氨酸β-氨基酸乙酯化合物(20.4％,88.5％分離收率)。
1H-NMR和MS與所述結構相一致。實施例H制備 步驟1制備 在室溫下，將碳酸鉀(粉末，烘箱中在100℃下真空干燥，22.1g,0.16moles)加入到3-氯-5-溴代水楊醛(35g,0.15moles)在DMF(175ml)中的溶液中，得到亮黃色漿狀物。然后維持浴溫在20℃下，加入MEMCl(純品，25.0g,0.2moles)。然后在22℃下將混合物攪拌6小時并傾入DI水(1200mL)中，沉淀出產物。在壓力濾器上過濾該漿狀物，用DI水(2×400mL)洗滌濾餅并在N2/真空下干燥，得到灰白色固體的產物(46g,95％收率)。1H-NMR(CDCl3,TMS)3.35(s,3H),3.54-3.56(m,2H),3.91-3.93(m,2H),5.30(s,2H),7.77(d,lH),7.85(d,1H),10.30(s,1H)；13C NMR(CDCl3,TMS)(ppm):59.05,70.11,71.49,99.50,117.93,129.69,129.78,132.37,138.14,155.12,188.22。DSC:48.24℃(內90.51J/g)；微量分析對C11H12BrClO4的計算值C:40.82％；H:3.74％；Cl:10.95％；Br:24.69％；實測值C:40.64％；H:3.48％；Cl:10.99％；Br:24.67％。步驟2制備 將在步驟1中得到的產物(32.35g,0.1mol)加入配備機械攪拌器的500ml的三口圓底燒瓶中，隨后加入THF(160ml)和(S)-苯基甘氨醇(13.71g,0.1mol)。在22℃下30分鐘后，加入MgSO4(20g)。在22℃下，將該混合物攪拌1小時并在粗玻璃料濾器上過濾。減壓下濃縮濾液，得到含有亞胺的淺黃色油(48.0g)。無需進一步純化，該粗品產物直接用于偶合反應。微量分析對C19H21BrClNO4的計算值C:51.54％；H:4.78％；N:3.16％；Br:18.04％；Cl:8.00％；實測值C:51.52％；H:5.02％；N:2.82％；Br:16.31％；Cl:7.61％。步驟3制備 在配備機械攪拌器的5L三口圓底燒瓶中，于氮氣下，將來自實施例G的步驟1的試劑(332g,0.8mol)溶于NMP(660mL)。然后將該溶液冷卻至-10℃。在氮氣下，制備步驟2中生成的亞胺在NMP(320mL)中的溶液，然后在30分鐘內將其加入到以上反應混合物中，其間溫度維持在-5℃。將該混合物攪拌另外1小時，然后冷卻至-10℃。于10分鐘內加入濃HCl/飽和的NH4Cl溶液(30mL/720mL)的混合物。加入MTBE(760mL)并在23℃下將該混合物攪拌1小時。停止攪拌并分層。用MTBE(320ml)提取水層。合并兩個有機層，依次用飽和的NH4Cl溶液(320ml)、DI水(320ml)和鹽水(320ml)洗滌。用MgSO4(60g)干燥溶液，過濾并濃縮，得到含有作為單一對映異構體的要求的產物的黃色的油(228g)。DSC:227.54℃(內61.63J/g)微量分析對C25H33BrClNO6的計算值C:53.72％；H:5.95％；N:2.50％；Br:14.29％；Cl:6.33％；實測值C:53.80％；H:6.45％；N:2.23％；Br:12.85％；Cl:6.12％。步驟4制備 于氮氣氛下，將來自步驟3的粗品酯(～111g)在乙醇(1500mL)中的溶液加入到配備機械攪拌器的3L三口圓底燒瓶中。將該反應混合物冷卻至0℃并一次性加入四乙酸鉛(88.67g,0.2mol)。在0℃下，將該反應混合物攪拌3小時，然后向5℃下的反應混合物中加入15％NaOH水溶液(150mL)。在旋轉蒸發器上減壓下除去乙醇。加入另外的15％NaOH水溶液(600mL)并用乙酸乙酯(2×300mL)、MTBE(2×200mL)和乙酸乙酯(2×200mL)提取反應混合物。合并有機層，并用DI水(2×200mL)和鹽水(2×100mL)洗滌，經無水MgSO4(30g)干燥。然后在硅藻土上過濾該溶液并減壓下濃縮，得到作為橙色的油的產物(96g)，其無需進一步純化即可用于下一步反應。DSC:233.60℃(內67.85J/g)微量分析對C24H29BrClNO5的計算值C:54.71％；H:5.54％；N:2.65％；Br:15.16％；Cl:6.72％；實測值C:52.12％；H:5.40％；N:2.47％；Br:14.77％；Cl:6.48％。步驟5制備 將來自步驟4的粗品產物(～94g)溶于無水乙醇(180mL)中并加入對甲苯磺酸一水合物(50.0g,0.26mol)。然后將該反應混合物加熱至回流8小時，之后減壓下除去溶劑。將殘留的固體以THF(100mL)處理，然后減壓下除掉THF。把殘余物溶于乙酸乙酯(500mL)中并冷卻至～5℃。過濾生成的固體并用庚烷(2×50ml)洗滌，得到白色固體。固體經空氣干燥，得到作為單一異構體的白色固體的產物(38g)。1H-NMR(DMSO,TMS)(ppm)1.12(t,3H),2.29(s,3H),3.0(m,2H),4.05(q,2H),4.88(t,1H),7.11(d,2H),7.48(d,2H),7.55(d,1H),7.68(1H,d),8.35(br,s,3H)；13C-NMR(DMSO,TMS)(ppm):13.82,20.75,37.13,45.59,60.59,110.53,122.47,125.44,127.87,128.06,129.51,131.95,137.77,145.33,150.14,168.98；DSC:69.86℃(內406.5J/g),165.72℃(內62.27J/g),211.24℃(外20.56J/g),[α]D25=+4.2°(c=0.960,MeOH)；IR(MIR)(cm-1)2922,1726,1621,1591,1494,1471,1413,1376,1324,1286,1237,1207；微量分析對C18H21BrClNO6S的計算值C:43.69％；H:4.27％；N:2.83％；Br:16.15％；Cl:7.16％；S:6.48％實測值C:43.40％；H:4.24％；N:2.73％；Br:16.40％；Cl:7.20％；S:6.54％。步驟6制備 按照在實施例G步驟4和步驟5中概述的方法，制備以上化合物，其中在步驟5中制備的等量的中間體作為游離堿替代實施例G步驟4。
1H-NMR和MS與要求的產物相一致。實施例1制備 步驟1制備
按照在實施例G步驟2A的方法，制備以上化合物，以等量的2-羥基-3,5-二溴苯甲醛替代3,5-二氯水楊醛。
收率88％；淺黃色固體m.p.46-47℃；Rf=0.6(EtOAc/己烷1∶1v/v)；1H-NMR(CDCl3)δ3.37(s,3H),3.56(m,2H),3.92(m,2H),5.29(s,2H),7.91(d,1H,J=2.4Hz),7.94(d,1H,J=2.4Hz),10.27(s,1H)；FAB-MS m/z367對C11H12Br2O4的(M+)HR-MS的計算值367.9083實測值367.9077。
1H-NMR和MS與要求的化合物相一致。步驟2 使用實施例G步驟2B和2C的方法，制備以上化合物，在所述方法中以等量的步驟1的化合物替代。
收率90％；黃色固體m.p.57-59℃；Rf=0.46(EtOAc/己烷1∶1v/v)；1H-NMR(CDCl3)δ1.45(s,9H),2.1(br,1H，可交換)，2.51(d,1H,J1=9.9Hz,J2=15.3Hz),2.66(d,1H,J1=4.2Hz,J2=15.3Hz),3.02(br,1H,可交換)，3.39(s,3H),3.58-3.62(m,4H),3.81(m,1H),3.93(m,2H),4.63(dd,1H,J=4.2Hz),5.15(s,2H),7.17-7.25(m,6H),7.49(d,1H)；FAB-MS m/z602(M+H)對C25H34NBr2O6的HR-MS的計算值602.0753實測值602.0749。
1H-NMR和MS與要求的化合物相一致。步驟3制備 按照在實施例G步驟3中的方法，制備以上化合物(對甲苯磺酸鹽)，以等量的實施例G步驟2中的產物替代步驟3A。收率62％；白色固體；1H-NMR(DMSO-d6)δ1.09(t,3H,J=7.2Hz),2.27(s,3H),2.97(dd,2H,J1=3.0Hz,J2=7.2Hz),4.02(q,2H,J=7.2Hz),4.87(t,1H,J=7.2Hz),7.08(d,2H,J=4.8Hz),7.45(m,3H),7.57(d,1H,J=2.4Hz),8.2(br,3H)；FAB-MS m/z365(M+H)對C11H14NBr2O3的HR-MS的計算值365.9340實測值365.9311。
1H-NMR和MS與要求的產物相一致。步驟4制備 使用實施例G步驟4的方法，制備以上化合物，并且替代在步驟3中制備的化合物以生成BOC保護的中間體。使用實施例G步驟5的方法，將生成的BOC保護的中間體轉變為要求的化合物。
1H-NMR和MS與要求的化合物相一致。
實施例J制備β-[(2-氨基乙酰基)氨基]吡啶-3-丙酸乙酯雙鹽酸鹽 步驟1向在2-丙醇(3升)中的3-吡啶甲醛(300ml)中加入乙酸銨(297g)，隨后加入丙二酸(398g)。在回流下將該反應混合物攪拌5小時。趁熱過濾沉淀并用熱的異丙醇(2升)洗滌。然后干燥生成的白色固體，得到作為白色固體的DL-3-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸(220g)。
NMR和MS與要求的產物相一致。步驟2將來自步驟1的DL-3-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸(220g)在無水乙醇(3.6升)中漿化。使HCl氣體(一個演示瓶-1b)鼓泡通入該反應物中，其間攪拌40分鐘。然后將該漿化物加熱回流4小時(1至1.5小時后溶液形成)。在冰浴上，把反應混合物冷卻至5℃。在5℃下攪拌1.5小時后，過濾生成的白色沉淀并用乙醚徹底洗滌。在50℃下真空干燥后，得到作為白色固體的要求的產物DL-3-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸乙酯二鹽酸鹽(331.3g)。
NMR和MS與要求的產物相一致。步驟3在5-10℃下，向在無水THF(2升)和三乙胺(167.2g,1.65moles)中的來自步驟2的DL-3-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸乙酯二鹽酸鹽(220.6g,0.83mole)中分批加入N-叔丁氧基羰基-甘氨酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(225g,0.826moles)(Sigma)。在室溫下，將該反應混合物攪拌過夜。過濾生成的沉淀并用THF洗滌。真空除去濾液中的溶劑。用乙酸乙酯(2.3升)處理殘余物。用飽和的碳酸氫鈉(2×900ml)和H2O(3×900ml)洗滌乙酸乙酯層，經MgSO4干燥并真空除去。該殘余物在10％乙酸乙酯/己烷(2.5升)中漿化過夜。過濾沉淀，用10％乙酸乙酯/己烷(1升)洗滌，然后以己烷洗滌，然后干燥，得到作為白色固體的β-[[2-[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙酰基]-氨基]-吡啶-3-丙酸乙酯(233g)。
NMR和MS與要求的產物相一致。步驟4將β-[[2-[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基]-吡啶-3-丙酸乙酯(來自步驟3)(232g,0.66mole)溶于熱的二噁烷(1升)中。在冷卻至室溫后，緩慢加入在二噁烷(1.6升)(Aldrich)中的4MHCl。幾分鐘后白色沉淀形成，然后轉變為稠粘的物料。2小時后，傾析溶劑。將該殘余物在乙醚中漿化并傾析乙醚直到生成白色固體。使其真空干燥，得到作為白色吸濕性固體的β-[(2-氨基乙酰基)氨基]吡啶-3-丙酸乙酯雙鹽酸鹽(224.2g)。
NMR和MS與要求的產物相一致。
實施例K制備2-胍基-4-羧基噻唑鹽酸鹽 步驟1向在無水EtOH(100mL)中的2-亞氨基-4-硫代縮二脲(11.1g,0.094mole)(Aldrich)中，在回流下分批加入溴代丙酮酸乙酯(20.0g,0.102mole)(Aldrich)。在回流下，將該溶液攪拌2小時。加入另外的溴代丙酮酸乙酯(2.0g)并且把該反應物繼續回流另外2小時。將反應物冷卻至10℃并加入濃NH4OH直到pH=10。過濾生成的沉淀，用乙醚洗滌并干燥，得到作為黃色固體的2-胍基-4-羧基乙基噻唑(15.1g)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。步驟2向在H2O(100mL)和乙醇(40mL)中漿化的步驟1的產物(5.0g,0.023mole)中加入NaOH(0.93g,0.023mole)。在室溫下，將該溶液攪拌過夜。將另外的乙醇(20mL)和NaOH(0.93g)加入到反應混合物中并在室溫下將該溶液攪拌另外1小時。用1NHCl使pH降至7并過濾生成的沉淀，用H2O和乙醚洗滌，然后干燥，得到作為兩性離子的產物(4.1g)。
將該兩性離子產物在H2O中漿化并用濃HCl酸化直到生成溶液。將該溶液冷凍并冷凍干燥，得到作為淡黃色固體的2-胍基-4-羧基噻唑鹽酸鹽(4.33g)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
按照所描述的流程，分別從市售2-氨基-6-甲基吡啶和2-氨基-4-甲基-吡啶起始，制備實施例L和M。
實施例L制備2-氨基吡啶-6-羧酸 步驟A在75℃下，向2-乙酰氨基-6-甲基吡啶(10.0g)在水(125mL)中的溶液中分批加入KMnO4(21.0g)并且繼續加熱2小時。將該反應混合物冷卻，過濾并用熱水(2×25mL)洗滌殘余物。用二氯甲烷(3×40mL)洗滌合并的濾液水溶液和洗滌液，并以冷的3N HCl酸化。過濾生成的沉淀，用水洗滌至pH呈中性，真空干燥，得到2-乙酰氨基吡啶-6-甲酸(3.8g,48％收率)。將二氯甲烷提取液濃縮至干，得到未反應的2-乙酰氨基-6-甲基吡啶(3.5g)。1H-NMR(CD3OD)δ8.32(m,1H),7.94(t,1H),7.87(m,1H),2.2(s,3H),FAB MS m/z181(M+H)。步驟B在80℃下，于氮氣氛下將2-乙酰氨基吡啶-6-甲酸(4.1g)在2.5N的NaOH(36.5ml)中的懸浮液加熱1.5小時。將生成的溶液冷卻并用冷的3N HCl酸化。過濾得到的沉淀，用水和乙腈連續洗滌。真空干燥生成的白色固體，得到2-氨基吡啶-6-甲酸(2.4g,76％收率)。1H-NMR(DMSO-d6)δ7.57(t,1H,J=8.1Hz),7.14(d,1H,J=7.2Hz),6.67(1H,J=8.1Hz),6.51(br,2H)；FAB MS m/z139(M+H)。步驟C在無水條件下，將2-氨基吡啶-6-甲酸(2g)在EtOH(10.0mL)和4NHCl/二噁烷(10.0mL)中的懸浮液加熱回流16小時。然后將反應混合物濃縮至干并且真空下在干燥器中干燥殘余物，得到作為白色粉末的2-氨基-6-乙酯基吡啶鹽酸鹽(1.6g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ8.3(br),7.94(m,1H),7.37(d,1H,J=7.2Hz),7.22(dd,1H,J=8.7Hz),4.37(q,2H,J=7.2Hz),1.32(t,3H,J=7.2Hz)；FAB MS m/z167(M+H)。
實施例M制備2-氨基吡啶-4-乙酯基吡啶鹽酸鹽 從2-乙酰氨基-4-甲基吡啶開始，通過相似于制備實施例L的2-氨基吡啶-6-乙酯基吡啶鹽酸鹽的方法，制備該化合物(M)。
1H-NMR和MS與所述的結構相一致。實施例1制備
在冰浴溫度下，向在無水DMA(5mL)中的實施例A的產物(0.5g,0.002mole)、實施例E的產物(0.83g,0.002mole)、三乙胺(0.2g,0.002mole)和DMAP(24mg)中加入EDCl(0.38g,0.002mole)。在室溫下，將反應物攪拌2天。經反相制備型HPLC分離酯產物。向在H2O(3mL)和CH3CN(3mL)中的酯中加入LiOH(0.51g,0.012mole)。在室溫下，將其攪拌1小時。用TFA使pH降至2并經反相制備型HPLC分離該產物，得到(冷凍干燥后)作為白色固體的要求的產物(350mg)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。實施例2制備 按照實施例1的方法，制備標題化合物，用等量的實施例D的產物替代實施例E的產物，得到白色固體的要求的產物(210mg)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。實施例3制備 在N2下，在冰浴溫度下，向在火焰干燥的燒瓶中的無水DMA(85mL)中的實施例C的產物(19.5g,0.045mole)和N-甲基嗎啉(9.1g,0.09mole)中緩慢加入氯甲酸異丁酯(6.2g,0.045mole)。在冰浴溫度下，將該溶液攪拌15分鐘。然后在冰浴溫度下加入實施例D的產物(15g,0.04mole)，隨后緩慢加入N-甲基嗎啉(4.1g,0.04mole)。在室溫下，將反應混合物攪拌過夜。向在H2O(50mL)/CH3CN(30mL)中的酯中加入LiOH(16g,0.38mole)。在室溫下，將其攪拌1小時。用TFA使pH降至2并經反相制備型HPLC分離產物，得到(冷凍干燥之后)作為白色固體的要求的產物(13.7g)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。實施例4制備 按照實施例3的方法，制備以上化合物，用等量的實施例E的產物替代實施例D的產物。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。實施例5制備 按照實施例3的方法，制備以上化合物，用等量的實施例F的產物替代實施例D的產物。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。實施例6制備 按照實施例3的方法，制備以上化合物，用等量的實施例B的產物替代實施例C的產物。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。實施例7制備 在冰浴溫度下，向在無水DMA(4mL)中的實施例9步驟3的產物(0.6g,0.0019mole)中加入氯甲酸異丁酯(0.27g,0.002mole)，隨后加入N-甲基嗎啉(0.4g,0.0038mole)。在冰浴溫度下，將該溶液攪拌15分鐘。在冰浴溫度下，加入實施例H的產物(0.71g,0.0017mole)，隨后加入N-甲基嗎啉(0.17g,0.0017mole)。在室溫下，將反應物攪拌過夜。HPLC分析指明產物含有明顯量的起始物料。將EDCl(0.38g,0.002mole)和DMAP(15mg)加入到反應混合物中并在室溫下將該反應物攪拌過夜。經反相制備型HPLC分離酯產物。向在H2O(10mL)和CH3CN(5mL)中的酯中加入LiOH(700mg,0.017mole)。在室溫下，將其攪拌1小時。用TFA使pH降至2并經反相制備型HPLC分離產物，得到(冷凍干燥之后)作為白色固體的要求的產物(270mg)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。實施例8制備 在冰浴溫度下，向在無水DMF(8mL)中的實施例K的產物(0.5g,0.0022mole)和N-甲基嗎啉(0.23g,0.0022mole)中加入氯甲酸異丁酯(0.31g,0.0022mole)。在冰浴溫度下攪拌5分鐘后，于冰浴溫度下一次性加入在無水DMF(8mL)中的實施例J的產物(0.73g,0.0022mole)和N-甲基嗎啉(0.45g,0.0045mole)。在室溫下，將反應混合物攪拌過夜。經反相制備型HPLC分離酯(530mg)。
向在H2O(10mL)中的該酯(400mg)中加入LiOH(91mg)。在室溫下，將其攪拌1小時。用TFA把pH降至3并且該產物經反相制備型HPLC分離，得到(冷凍干燥之后)白色固體的要求的產物(350mg)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
如同在實施例N和O中描述的流程中闡明的那樣，使用三-叔丁氧基羰基試劑，進行2-氨基-6-乙酯基吡啶鹽酸鹽和2-氨基-4-乙酯基吡啶鹽酸鹽的胍基化(Kim.S.K.,Qian,L.,四面體快報，34,7677,1993)。實施例N 向2-氨基-6-乙酯基吡啶鹽酸鹽(0.56g,2.8mmol)和三-叔丁氧基羰基試劑(91.2g,2.8mmol)在脫氣的DMF(7.0mL)中的溶液中加入氯化汞(0.76g,2.8mmol)和三乙胺(0.79g,7.8mmol)。在70℃下，于氮氣氛中將生成的混合物加熱24小時并且過濾。真空蒸餾DMF，用乙酸乙酯研磨殘余物并過濾。濃縮橙色濾液并經硅膠快速層析法純化生成的物料，使用含有1％三乙胺的乙酸乙酯作為洗脫液。合并適當的部分(藍色熒光)且減壓下濃縮至干，得到黃色粉末。MS分析[m/z565(M+H)]證實形成要求的三-叔丁氧基羰基產物N。
實施例O
使用與實施例N相似的方法，制備化合物(O)。MS分析[m/z565(M+H)]證實形成要求的三-叔丁氧基羰基產物O。
按照在實施例9步驟3-5中闡述的條件，能夠制備以下化合物P和Q。
實施例P 實施例Q 實施例R 使用在實施例G中描述的方法，制備以上化合物。以步驟2中使用的試劑3-溴-5-氯代水楊醛替代3,5-二氯代水楊醛。 步驟1在0℃下，于30分鐘內向機械攪拌著的試劑1(18.68g)在THF(1L)中的懸浮液中加入氫化鈉(19g在礦物油中的60％懸浮液)。在30分鐘后，加入純的二碳酸二叔丁酯(95g)并在溫和回流下將反應混合物加熱16小時。將該混合物冷卻至0℃并用飽和NaHCO3溶液猝滅。用乙酸乙酯提取混合物。用水洗滌有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮。使用小硅膠柱(60mm×180mm)快速層析殘余物，得到作為粘稠黃色液體的要求的產物2(68g)。NMR與指明的結構相一致。步驟2在0℃下，將攪拌著的3-氨基-吡啶-6-甲酸(25g)在乙醇(300mL)中的懸浮液用氯化氫氣體飽和。使該混合物溫熱至23℃并加熱至回流2小時。得到透明的溶液。在冷卻至23℃之后，真空濃縮混合物，用NaHCO3水溶液中和并以乙酸乙酯提取。用水洗滌有機相，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到作為淺黃色固體的3-氨基-吡啶-6-甲酸乙酯。
將步驟1的產物(40.0g)、HgCl2(25.0g)、三乙胺(27mL)和3-氨基-吡啶-6-甲酸乙酯(13g)和DMF(200mL)的混合物攪拌并加熱至55℃30小時。將反應混合物冷卻至23℃，用乙酸乙酯(500mL)稀釋并通過硅藻土過濾。用水(2X)洗滌濾液，經MgSO4干燥并真空濃縮。使用在己烷中的乙酸乙酯作為洗脫劑，經硅膠層析殘余物，得到要求的中間體3。NMR與要求的結構相一致。步驟3在23℃下，將步驟2的產物(13g)在5N鹽酸(100mL)中的懸浮液攪拌16小時。真空濃縮該混合物。用甲醇研磨殘余物并過濾白色固體，得到要求的產物4。NMR和MS與要求的結構相一致。步驟4將步驟3的產物(0.308g)懸浮于DMF(10mL)中并把4-甲基嗎啉(0.2mL)加入到懸浮液中。在23℃下，把該混合物攪拌1小時。在將反應混合物冷卻至0℃后，加入IBCF(0.129mL)。在1/2小時后，加入實施例R的產物(0.416g)和4-甲基嗎啉(0.11mL)在DMF(3mL)中的溶液。2小時內使該混合物溫熱至23℃。然后過濾混合物并真空濃縮濾液。經HPLC純化殘余物，得到5。微量分析數據、NMR和MS與要求的結構相一致。步驟5 在23℃下，使步驟4的產物在3.5N HCl中的溶液放置3小時，真空濃縮并且經HPLC純化殘余物，得到要求的產物。微量分析數據、NMR和MS與要求的產物相一致。
對C21H22BrClN6O6·2CF3CO2H·H2O的分析計算值C,36.80；H,3.21；N,10.30；實測值C,36.52；H,2.90；N,9.91。
實施例10 除了使用實施例G的產物替代實施例R在步驟4中的產物以外，使用在實施例9中描述的方法，制備該化合物。
對C21H22Cl2N6O6·2CF3CO2H·H2O的分析計算值C,38.93；H,3.40；N,10.89；實測值C,39.27；H,3.12；N,11.09。
實施例11 使用實施例Ⅰ的產物替代實施例R在步驟4中的產物，如同實施例9描述的那樣，制備該化合物。
對C21H22Br2N6O6·2CF3COOH·H2O的分析計算值C,35.65；H,2.87；N,9.98；實測值C,35.81；H,2.79；N,10.14。
實施例12制備(3S)-N-[[4-[(1,4,5,6-四氫-5-羥基-2-嘧啶基)氨基]-2-噻吩基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸三氟乙酸鹽 步驟1將5-溴-2-噻吩甲酸(5.0g)在濃硫酸(30ml)中的溶液冷卻至-30℃并滴加在濃硫酸(30ml)中的70％硝酸溶液(7.7ml)(d=1.40)來處理。在-25℃下，將該反應混合物攪拌30分鐘然后傾入冰水中漿化并攪拌幾分鐘。過濾沉淀的固體，從水中重結晶并干燥，得到白色粉末(2.3g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2在室溫下，于5磅/平方英寸(psi)的氫氣下，用催化量的5％Pd/C將來自步驟1的產物(1.7g)在THF(25ml)中的溶液處理16小時。過濾反應混合物并濃縮。用乙酸乙酯加熱殘余物并過濾，得到棕色固體(750mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3將來自步驟2的產物(725mg)和在THF(15ml)中的胍基化試劑G1和二甲基乙酰胺(10ml)的溶液回流16小時。濃縮反應混合物并用TFA(5ml)和CH2Cl2(5ml)的溶液處理殘余物。在室溫下攪拌1小時后，濃縮反應混合物并經反相HPLC純化殘余物，使用水(0.5％TFA)和乙腈梯度作為洗脫劑，得到淡黃色的粘稠液體(300mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4在火焰干燥的燒瓶中，在N2下，將來自步驟3的產物(275mg)溶于8ml二甲基乙酰胺和N-甲基嗎啉(81mg)中。將攪拌著的溶液冷卻至0℃并滴加入氯甲酸異丁酯(109mg)在二甲基乙酰胺(1ml)中的溶液處理。在0℃下，將反應混合物攪拌45分鐘，然后滴加入實施例G的產物(286mg)和N-甲基嗎啉(81mg)在二甲基乙酰胺(2ml)中的溶液處理。使反應混合物溫熱至室溫并繼續攪拌16小時。濃縮反應混合物，并如同在步驟3中描述的那樣使用反相HPLC純化殘余物，得到粘稠的無色液體(262mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5在室溫下，將來自步驟4的產物(250mg)在甲醇(8ml)中的溶液和1N氫氧化鈉溶液(8ml)攪拌16小時。用TFA(0.7ml)猝滅反應并濃縮。如同在步驟3中描述的那樣，使用反相HPLC純化殘余物，得到白色固體(144mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C20H21N5O6Cl2S·1.50TFA·0.25H2O的分析計算值C,39.13；H,3.28；N,9.92；S,4.54；Cl,10.04；實測值C,38.81；H,3.17；N,9.90；S,4.86；Cl,10.25。
實施例13制備N-[[4-[(4,5-二氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-2-噻吩基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸三氟乙酸鹽 以如同在實施例12中描述的化合物的制備中所使用的類似的反應順序，制備以上化合物。使用在實施例C(步驟1)中描述的胍基化試劑替代在實施例12步驟3中的G1。相似地用實施例D的產物來替代在實施例G步驟4中的產物。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C19H19N5O5Cl2S·1.50TFA·0.50H2O的分析計算值C,38.84；H,3.18；N,10.29；S,4.71；Cl,10.42；實測值C,38.84；H,3.01；N,10.50；S,5.08；Cl,11.01。
實施例14制備(3S)-N-[[5-甲基-4-[(1,4,5,6-四氫-5-羥基-2-嘧啶基)氨基]-2-噻吩基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸三氟乙酸鹽 步驟1使用5-甲基-2-噻吩甲酸(5.2g)，如同在實施例13的步驟1中描述的那樣，制備(A)。通過用稀氫氧化鈉溶液提取，用稀鹽酸酸化并用乙酸乙酯提取，純化該產物。干燥(Na2SO4)有機提取液并濃縮，得到黃橙色固體(2.2g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2使用步驟1的產物(2.2g)并按照如同在實施例12的步驟4中描述的偶合條件，制備(B)。濃縮該反應物并在乙酸乙酯和水之間分配殘余物。用飽和的氯化鈉溶液洗滌有機提取液。干燥(Na2SO4)并濃縮。將殘余物從乙酸乙酯中重結晶，得到褐色固體(3.5g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3在室溫下，滴加入氯化錫(Ⅱ)二水合物在濃鹽酸中的溶液(1.0g/2ml)處理步驟2的產物(2.8g)在THF(25ml)中的溶液，直到TLC表明起始原料完全消失。除去有機溶劑并用碳酸氫鈉溶液中和水溶液部分。用CH2Cl2提取水溶液部分，干燥(Na2SO4)并濃縮，得到黃色粉末(1.1g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4向在步驟3中描述的產物(375mg)和實施例9步驟1的產物(519mg)在DMF(15ml)中的溶液中加入氯化汞(326mg)和三乙胺(182mg)。在95-100℃下加熱混合物3小時。將反應混合物冷卻，用乙酸乙酯(30ml)處理，攪拌30分鐘，然后通過硅藻土墊過濾。濃縮濾液并使用快速層析法(用97.5％CHCl3-2.5％CH3OH洗脫)純化殘余物，得到黃棕色固體(415mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5在室溫下，將步驟4的產物(400mg)在CH2Cl2(7.5ml)和TFA(7.5ml)中的溶液攪拌1小時。濃縮反應物并在室溫下于CH3OH(10ml)和1N氫氧化鈉的溶液(10ml)中把殘余物攪拌16小時，使其溶解。用TFA(0.8ml)猝滅反應物并濃縮。如同先前描述的那樣，使用反相HPLC純化殘余物，得到白色固體(80mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C21H23N5O6Cl2·1.50TFA·0.50H2O的分析計算值C,39.79；H,3.55；N,9.67；S,4.43；Cl,9.79；實測值C,39.50；H,3.24；N,9.58；S,4.71；Cl,10.22。
實施例15制備(3S)-N-[[4-(4,5-氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-5-甲基-2-噻吩基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸三氟乙酸鹽 除了使用在實施例C(步驟1)中描述的胍基化試劑替代在實施例14步驟4中的試劑以外，以如同在實施例14中描述的化合物的制備中使用的類似的反應順序，制備以上化合物。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C20H21N5O5Cl2S·1.50TFA·0.25H2O的分析計算值C,40.04；H,3.36；N,10.15；S,4.65；Cl,10.28；實測值C,39.82；H,3.19；N,10.17；S,4.86；Cl,10.69。
實施例16N-[[5-(4,5-二氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-2-噻吩基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸三氟乙酸鹽
使用如同在實施例15中描述的相同的反應順序，以2-硝基-5-噻吩甲酸開始，合成標題化合物。對于胍基化反應，按照在實施例17步驟G中描述的條件進行。
對C19H19N5O5Cl2S·1.50TFA的分析計算值C,39.36；H,3.08；N,10.43；S,4.78；實測值C,39.05；H,2.79；N,10.37；S,4.90。
實施例17N-[[5-(4,5-二氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-6-甲氧基-3-吡啶基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸雙(三氟乙酸)鹽 步驟1將6-羥基煙酸(20g)和無色發煙硝酸(60ml)(d=1.50)的混合物加熱到90-95℃反應3小時。把反應物冷卻至室溫并在攪拌下傾入到1.5升冰-水漿狀物中且于15分鐘后過濾。用水洗滌沉淀并干燥，得到淡黃色粉末(9.3g)。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C6H4N2O5的分析計算值C,39.14；H,2.19；N,15.22；實測值C,39.08；H,2.17；N,15.19。步驟2將步驟1的產物(5.0g)和三氯氧化磷(15ml)的混合物回流3小時。將反應混合物冷卻至室溫并加入到冰水混合物中且攪拌30分鐘。加入另外的冰以保持混合物在此期間冷卻。用THF-乙醚(1∶2)的混合物提取反應混合物并用飽和的氯化鈉溶液洗滌有機提取物，干燥(Na2SO4)并濃縮。殘余物從1∶1乙醚-己烷中重結晶，得到黃色粉末(4.0g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3將步驟2的產物(1.6g)在亞硫酰氯(5.0ml)中的溶液回流3小時。將該反應物冷卻至室溫并在氮氣流下蒸發。減壓下干燥殘余物并未經進一步純化使用。在氮氣下，于火焰干燥的燒瓶中，將實施例D的產物(3.0g)溶于二甲基乙酰胺(30ml)和N,N-異丙基乙基胺(2.3g)中。在冰浴上冷卻溶液并滴加入酰氯(如同以上得到的)在THF(20ml)中的溶液。攪拌該反應物并使其溫熱至室溫，然后用水(25ml)猝滅。用乙酸乙酯提取混合物并用飽和的氯化鈉溶液洗滌有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮。生成的黃色固體從乙酸乙酯中重結晶，得到淡黃色粉末(3.4g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4在0℃下，向甲醇鈉(2.2g)在甲醇(30ml)中的懸浮液中滴加入步驟3的產物(4.5g)在甲醇(30ml)中的溶液。將該反應物攪拌30分鐘，然后用乙酸(2.3ml)猝滅。濃縮反應物并在乙酸乙酯和水之間分配。干燥(Na2SO4)有機提取液，濃縮并在硅膠柱(用80％乙酸乙酯-20％己烷洗脫)上純化，得到淡黃色固體(3.5g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5在室溫下，于5磅/平方英寸的氫氣壓力下，用以硫毒化的催化量的3％Pt/C將在步驟4中描述的產物(1.07g)在乙醇(25ml)中的溶液處理4小時。過濾反應混合物并濃縮，得到白色固體(930mg)，其無需進一步純化即可使用。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟6向步驟5的產物(330mg)、G2(276mg)在DMF(10ml)中的溶液中加入三乙胺(150mg)和氯化汞(258mg)并在氮氣中、于85℃下把該混合物加熱16小時。將反應物冷卻，用乙酸乙酯(25ml)處理并過濾。濃縮濾液并且在硅膠柱上純化殘余物，使用98％CH2Cl2-2％甲醇洗脫，得到白色固體(325mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟7在室溫下，將步驟6的產物(114mg)、TFA(8ml)和二氯甲烷(8ml)的溶液攪拌90分鐘。蒸發溶劑并在室溫下用1N氫氧化鈉的溶液(8ml)和甲醇(8ml)將殘余物處理16小時。用TFA(1ml)猝滅反應并濃縮。使用先前描述的反相HPLC純化殘余物，得到白色固體(76mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C21H22N6O6Cl2·2TFA的分析計算值C,41.74；H,3.88；N,12.70；實測值C,41.47；H,3.49；N,12.85。
實施例18N-[[5-(4,5-二氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-1,6-二氫-1-甲基-6-氧代-3-吡啶基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸(三氟乙酸)鹽 步驟1用濃硫酸(1ml)處理實施例17步驟1的產物(12.0g)在甲醇(200ml)中的懸浮液并使其回流。回流16小時后，反應混合物變成均勻的溶液，并使其冷卻至室溫。除去大約一半的溶劑，此時產物從溶液中結晶出來。在冰浴上冷卻該混合物，過濾并干燥，得到黃色粉末(16.7g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2在N2下，將來自步驟1的產物(2.6g)在DMF(40ml)中的溶液冷卻至0℃并用60％氫化鈉在礦物油中的分散液655mg)處理。在0℃下，將該混合物攪拌45分鐘，然后用碘甲烷(2.8g)一次性處理。在室溫下，將反應物攪拌16小時，然后在乙酸乙酯和水之間分配。用另外的乙酸乙酯將水部分提取幾次，然后用飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮。在硅膠柱(2％甲醇-98％二氯甲烷洗脫)上純化殘余物，得到黃色固體(1.9g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3在室溫下，將步驟2的產物(2.6g)、甲醇(60ml)和2N氫氧化鈉溶液(60ml)的溶液攪拌16小時。用冰乙酸(6.9ml)猝滅反應物并濃縮。高真空下干燥殘余物。然后在氮氣下將該物料與亞硫酰氯(100ml)回流3小時。將該反應物冷卻，濃縮并在高真空下徹底干燥，得到褐色固體(2.2g)。1H-NMR與提出的結構相一致。在氮氣下，于火焰干燥的燒瓶中把實施例D的產物(3.5g)溶于N,N二甲基乙酰胺(35ml)和二異丙基乙基胺(2.9ml)中。將該溶液冷卻至0℃并用酰氯(1.9g)(如同以上得到的)在THF(35ml)中的溶液處理。將該反應物攪拌30分鐘，然后高真空下濃縮以除去溶劑。把殘余物在乙酸乙酯和水之間分配并用另外的乙酸乙酯把水部分提取幾次。用水洗滌合并的有機提取液幾次，然后用飽和的氯化鈉溶液洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮，生成黃色固體(1.3g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4在室溫下，于5磅/平方英寸的氫氣壓力下，用催化量的5％Pt/C將來自步驟3的產物(1.0g)在THF(10ml)和DMF(10ml)中的溶液處理4小時。過濾反應混合物并濃縮。用最少量的THF處理殘余物并使其在室溫下緩慢結晶。把等體積的乙酸乙酯加入到結晶出來的混合物中并消化15分鐘。將該混合物冷卻，過濾并用冷的乙酸乙酯洗滌。干燥產物，得到白色固體(730mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5向步驟4的產物(720mg)和G2(581mg)在DMF(25ml)中的溶液中加入三乙胺(304mg)和氯化汞(544mg)并在氮氣下于85℃下把該混合物加熱反應1小時。將反應混合物冷卻并通過硅藻土墊過濾。濃縮濾液并在硅膠柱(用10％甲醇-90％氯仿洗脫)上純化，得到白色固體(375mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟6使用在實施例14(步驟5)中描述的方法，由在步驟5中制備的化合物(360mg)來制備以上化合物。使用先前描述的反相HPLC純化粗品產物，得到白色固體(223mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C21H22N6O6Cl2·2.5TFA·0.5H2O的分析計算值C,38.11；H,3.14；N,10.26；Cl,8.65實測值C,38.18；H,3.05；N,10.79；Cl,9.34。
實施例19N-[[6-氯-5-[(4,5-氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-3-吡啶基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸(三氟乙酸)鹽一水合物 步驟1制備氯化錫(Ⅱ)(6.3g)在濃鹽酸(10ml)中的溶液并滴加入實施例17步驟3的產物(1.0g)在THF(15ml)中的溶液中。將該反應物攪拌15分鐘，其間使反應物冷卻至室溫。除去有機溶劑，得到膠狀沉淀。傾析水溶液部分并把膠狀沉淀在乙酸乙酯和稀的碳酸氫鈉溶液之間分配。用另外的乙酸乙酯把水溶液部分提取幾次，然后以水和飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮。真空干燥殘余物，得到褐色粉末(375mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2使用在實施例18步驟5中概述的方法，將步驟1中描述的化合物(365mg)胍基化。在硅膠柱(用2％甲醇-98％氯仿洗脫)上純化粗品產物，得到棕色粘稠的液體(205mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3使用步驟2的產物(200mg)并按照在實施例17步驟7中描述的方法，制備標題化合物。如前所述，使用反相HPLC純化粗品產物，得到白色固體(53mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C20H19N6O5Cl3·1.7TFA.1.0H2O的分析計算值C,37.90；H,3.09；N,11.33；Cl,14.34實測值C,37.53；H,2.71；N,11.33；Cl,15.01。
實施例20N-[[5-[(4,5-氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-1,6-氫-6-氧代-3-吡啶基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸(三氟乙酸)鹽 在室溫下，通過將來自實施例17的步驟6的產物(353mg)溶于6N鹽酸溶液(50ml)中進行48小時，制備以上化合物。濃縮該反應物并如同先前描述的那樣使用反相HPLC純化殘余物，得到白色固體(115mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C20H20N6O6Cl2·1.25TFA的分析計算值C,41.33；H,3.28；N,12.85；實測值C,41.57；H,3.29；N,12.92。
實施例21制備(3S)-N-[[1,6-氫-6-氧代-5-[(1,4,5,6-四氫-5-羥基-2-嘧啶基)氨基]-3-吡啶基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸三氟乙酸鹽
使用在實施例17(步驟1-3)中描述的反應順序，合成用在制備標題化合物中的起始原料。替代實施例D產物的實施例G的手性中間體被用于在步驟3中詳述的偶合反應中。步驟1使用實施例17步驟4中給出的方法，制備(A)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2在N2下，將步驟1的物料(2.7g)在4N的無水HCl/二噁烷(100ml)中的溶液溫熱至45℃反應72小時。將反應物濃縮至干，得到淡棕色固體(2.6g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3在室溫下，于5磅/平方英寸的氫氣氛下，用催化量的5％Pt/C將來自步驟2的產物(1.85g)在乙醇(50ml)中的溶液處理2小時。過濾反應混合物并濃縮，且使用反相HPLC純化殘余物，得到白色固體(507mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4向步驟3的產物(500mg)和實施例4步驟1的產物(650mg)在DMF(15ml)中的溶液中加入三乙胺(304mg)和氯化汞(408mg)并在氮氣下把該混合物加熱至100℃反應2小時。將反應混合物冷卻至室溫并與乙酸乙酯(30ml)一起攪拌15分鐘，然后過濾。濃縮濾液并且在室溫下用TFA(7ml)和CH2Cl2(7ml)的溶液處理殘余物1小時。濃縮混合物并使用先前描述的反相HPLC純化殘余物，得到白色固體(400mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5在室溫下，將步驟4的產物(200mg)、1N氫氧化鈉(8ml)和甲醇(8ml)的溶液攪拌16小時。用TFA(1ml)猝滅該反應物并濃縮。使用先前描述的反相HPLC純化殘余物，得到白色固體(79mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C21H22N6O7Cl2·1.5TFA的分析計算值C,40.46；H,3.32；N,11.80；實測值C,40.12；H,3.57；N,12.26。
實施例22制備N-[[5-(4,5-二氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-2-甲氧基-3-吡啶基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸(三氟乙酸)鹽 步驟1向2-羥基煙酸(10.0g,71.9mmol)在濃硫酸(28.6ml)中的溶液中以滴加方式加入發煙硝酸(7.1ml)。在55℃下，將該反應混合物加熱4小時。把冷卻的反應混合物傾入到冰水上。產物作為黃色固體沉淀出來。過濾收集沉淀的固體，用水洗滌并空氣干燥，得到要求的產物(7.2g,54％收率)。NMR與提出的結構相一致。步驟2將步驟1的產物(5.0g,27.2mmol)在三氯氧化磷(13.5g)中的溶液回流4.5小時。將冷卻的反應混合物傾入到冰水(200g)上。將生成的混合物攪拌30分鐘并用四氫呋喃/乙酸乙酯(2/1)提取。用鹽水洗滌有機層，經Na2SO4干燥并過濾。濃縮濾液得到油。用己烷/乙醚(4/1)的混合物處理油，得到作為細黃色粉末的要求的產物(5.0g,91％收率)。NMR與提出的結構相一致。步驟3將步驟2的產物(3.1g,15.3mmol)在亞硫酰氯(8.1ml)中的溶液回流4.5小時。減壓下從該反應混合物中除去剩余的亞硫酰氯，得到淺棕色的油。真空干燥油，得到作為黃色固體的產物(2.7g,79％收率)。NMR與提出的結構相一致。步驟4將二異丙基乙基胺(3.7g,4.9ml)加入到實施例D的產物(5.5g,14.8mmol)在N,N-甲基乙酰胺(40ml)和四氫呋喃(15ml)中的溶液中并把該反應混合物冷卻至-5℃。于15分鐘內把步驟3的產物(3.1g,14.1mmol)在四氫呋喃(25ml)中的溶液加入到反應液中。在-5℃下，將反應物攪拌30分鐘并使其溫熱至室溫。3小時后，減壓下從該反應混合物中除去四氫呋喃。將反應混合物傾入到冰水上。過濾收集沉淀的固體，用水洗滌并空氣干燥，得到作為黃色固體的產物(6.2g,85％收率)。NMR與提出的結構相一致。步驟5在0℃下，將步驟4的產物(4.0g,7.7mmol)和甲醇鈉(1.67g,30.8mmol)在甲醇(45ml)中的溶液攪拌4小時。用乙酸中和反應物。從反應混合物中除去甲醇并經層析法(硅膠，乙酸乙酯-甲苯，6/4)純化粗品混合物，得到作為黃色固體的要求的產物(2.5g,67％收率)。NMR與提出的結構相一致。步驟6在室溫下，于5磅/平方英寸壓力下，用H2將來自步驟5的產物(0.99g,1.9mmol)、3％披鉑炭和甲醇的混合物處理16小時。過濾除去鉑催化劑。減壓下除去甲醇，得到作為黃色固體的要求的產物(0.62g,70％收率)。其無需進一步純化即可用于下一步反應。NMR與提出的結構相一致。步驟7在90-5℃下，將步驟6的產物(0.26g,0.54mmol)、G2(0.18g,0.59mmol)、三乙胺(0.25g,1.78mmol)、氯化汞(Ⅱ)(0.16g,0.59mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(15ml)的混合物加熱16小時。將冷卻的反應混合物通過短硅藻土柱過濾，用乙酸乙酯(40ml)和二氯甲烷(30ml)先后洗脫。把粗品混合物層析(硅膠，CH2Cl2-CH3OH-NH4OH,95/5/0.5)，得到黃色固體的產物(0.31g,76％收率)。NMR與提出的結構相一致。步驟8在室溫下，把步驟7的產物(0.31g,0.41mmol)、三氟乙酸(3.5ml)和二氯甲烷(7.0ml)的溶液攪拌2小時。減壓除去三氟乙酸和二氯甲烷并在室溫下用甲醇(5ml)和氫氧化鈉溶液(2N,2.5ml)把該粗品混合物處理18小時。加入乙酸以中和氫氧化鈉。除去甲醇，得到粗品混合物。使用反相HPLC純化粗品混合物，得到作為白色固體的以上化合物(0.10g,36％收率)。
對C21H22N6O6Cl2·1.3CF3COOH·0.25H2O的分析計算值C,41.80；H,3.54；N,12.39；Cl,10.46；實測值C,42.12；H,3.84；N,11.87；Cl,10.99。
實施例23制備N-[[5-(4,5-二氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-1,2-氫-2-氧代-3-吡啶基]-羰基]甘氨酰-3-(3,5-氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸(三氟乙酸)鹽 在室溫下，用6N HCl(6ml)將實施例22步驟7的產物(0.21g,0.28mmol)在二噁烷(4ml)中的溶液處理72小時。減壓下除去溶劑，并使用乙腈-水作為洗脫劑，于反相HPLC上純化粗品混合物，得到作為灰白色固體的要求的化合物(0.052g,27％收率)。
對C20H20N6O6Cl2·1.6CF3COOH的分析計算值C,40.17；H,3.14；N,12.11；實測值C,40.10；H,3.22；N,11.84。
實施例24制備N-[[5-[(4,5-氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-1-甲基-1H-吡唑-3-基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸(三氟乙酸)鹽
按照文獻方法, 實施合成目標化合物的步驟1和2(分別為JustusLiebigs.Ann.Chem,512,97,1934和J.Hetercyclic Chem.21,737,1994)。步驟3向步驟2的產物(0.9g,5.3mmol)和G2(l.9g,5.9mmol)在DMF(25ml)中的溶液中加入三乙胺(2.5ml,17.6mmol)和氯化汞(1.6g,5.9mmol)。在80-85℃下把該混合物加熱18小時后，使該反應混合物冷卻并通過硅藻土柱過濾。用二氯甲烷洗滌殘余物并濃縮合并的部分。將殘余物重新溶解于二氯甲烷中并用水和鹽水洗滌。在經硫酸鈉干燥后，過濾混合物并濃縮。使用硅膠層析法(己烷/乙酸乙酯1/1)純化粗品橙色固體(1.8g)，得到作為灰白色固體的N-叔丁氧基羰基保護的產物(1.4g)。步驟4向步驟3的產物(2.4g,5.5mmol)在乙醇(50ml)中的溶液中加入氫氧化鋰水溶液(526mg在5ml水中)。在室溫下，將反應混合物攪拌24小時。向反應物中加入乙酸(22ml)并把混合物攪拌15分鐘。減壓下除去溶劑后，在反相HPLC(含有三氟乙酸的乙腈/水)上純化該粗品混合物，得到作為粘稠白色液體的TFA鹽的產物。用氯化氫(4M在二噁烷中的溶液)處理殘余物并攪拌10分鐘。濃縮反應物以除去溶劑并將該過程重復兩次，得到作為白色固體的要求的產物(3.9g)。無需進一步純化，將所述產物用于下一步。步驟5在0℃下，向步驟4的產物(0.9g,3.7mmol)在DMF(15ml)中的溶液中依次加入N-甲基嗎啉(605ml,5.5mmol)和氯甲酸異丁酯(475ml,3.7mmol)。在攪拌5分鐘后，將步驟D的產物在含有N-甲基嗎啉(605ml,5.5mmol)的DMF(10ml)中的溶液注射到反應液中。在0℃下，將混合物攪拌1小時并在室溫下攪拌36小時。減壓下除去溶劑并在反相HPLC(含有三氟乙酸的乙腈/水)上純化殘余物，得到作為TFA鹽的產物(525mg)。步驟6向步驟5的產物(540mg,1mmol)在乙醇(50ml)中的溶液中加入氫氧化鋰水溶液(144mg在10ml水中)。在室溫下，將反應混合物攪拌24小時。向反應物中加入乙酸(305ml)并把混合物攪拌15分鐘。減壓下除去溶劑后，在反相HPLC(含有三氟乙酸的乙腈/水)上純化該粗品混合物，得到作為TFA鹽的要求的產物(486mg,75％收率)。
對C19H21N7O5Cl2·1.5CF3CO2H的分析計算值C,39.48；H,3.39；N,14.65；實測值C,39.29；H,3.14；N,14.72。
NMR和MS與要求的結構相一致。
實施例25制備N-[[5-[(4,5-氫-1H-咪唑-2-基)氨基]-1H-吡唑-3-基]羰基]甘氨酰-3-(3,5-二氯-2-羥基苯基)-β-丙氨酸(三氟乙酸)鹽 使用芐基肼替代在步驟2中的甲基肼，如同在實施例24中描述的那樣，合成所述化合物。在最后一步使用催化氫化條件(5％Pd/C,20磅/平方英寸，室溫，26小時)將生成的N-芐基吡唑化合物脫除保護。使用乙酸-三氟乙酸(4/1)作為溶劑，進行這個反應。
對C18H19N7O5Cl2·1.75CF3CO2H·1.25H2O的分析計算值C,36.56；H,3.32；N,13.88；實測值C,36.35；H,2.96；N,14.28。NMR和MS與要求的結構相一致。
實施例26 除了使用實施例S的產物替代實施例R步驟4的產物以外，如同在實施例9中描述的那樣，制備以上化合物。
對C21H22BrIN6O6·2CF3COOH·0.25H2O的分析計算值C,33.60；H,2.76；N,9.40；實測值C,34.23；H,2.35；N,9.72。
實施例27 使用實施例21步驟1的方法，合成在這個制備中所需要的起始原料。步驟1在室溫下，于5磅/平方英寸壓力的氫氣下，用催化量的5％Pt/C將起始原料(1.4g)在乙醇(50ml)中的溶液處理5小時。過濾該反應混合物，濃縮并干燥，得到白色固體(1.1g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2按照在實施例21步驟4中給出的實驗方法，制備化合物2。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3按照在實施例21步驟5中給出的實驗方法，使產物2的酯基團水解。1H-MR與提出的結構相一致。
對C22H24N6O7Cl2·1.50TFA·0.25H2O的分析計算值C,41.08；H,3.59；N,11.50；實測值C,41.03；H,3.69；N,11.45。
實施例28
如同在實施例18步驟1中描述的那樣，制備在這個制備中所需要的起始原料。步驟1除了2-甲氧基乙氧基甲基氯替代碘甲烷用作烷基化試劑以外，按照在實施例18步驟2中給出的方法，制備化合物1。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2在室溫下，于5磅/平方英寸的氫氣下，以催化量的5％Pt/C將步驟1中描述的產物(4.6g)在甲醇(50ml)中的溶液處理2小時。過濾該反應混合物，濃縮并干燥，得到粘性的油(4.3g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3使用在實施例21步驟4中描述的反應條件，使一份步驟2的產物(2.0g)胍基化，得到作為粘性金黃色油的產物3(890mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4使用在實施例21步驟5中給出的實驗方法，使產物3的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5按照實施例12步驟4中給出的方法，將步驟4的產物偶合于實施例1的產物。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟6按照在實施例21步驟5中給出的方法，使步驟5產物的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C25H31N6O9Br2·1.75TFA·0.25H2O的分析計算值C,37.07；H,3.63；N,9.10；實測值C,36.86；H,3.66；N,9.39。
實施例29 在這個方法中，實施例28步驟5的產物用作起始原料。步驟1在室溫下，用無水HCl在乙醇(10ml)中的飽和溶液將一份起始原料(425mg)處理4小時。將該反應混合物濃縮至干并且不經純化把該產物用于下一步。步驟2按照實施例21步驟5中的方法，將來自步驟1的粗品產物的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。
對C21H22N6O7Br2·1.75TFA·0.25H2O的分析計算值C,35.27；H,2.93；N,10.07；實測值C,35.21；H,3.16；N,10.27。
實施例S 按照在實施例G中描述的方法，制備以上化合物。在步驟2A中，使用3-碘代-5-溴代水楊醛替代3,5-二氯水楊醛。
實施例T 按照在實施例G中描述的方法，制備以上化合物。在步驟2A中，使用3-溴-5-氯代水楊醛替代3,5-二氯代水楊醛。相似地，在步驟2B中，使用R-苯基甘氨醇替代S-苯基甘氨醇。
實施例U 按照在實施例D中描述的方法，制備以上化合物。如同以下描述的那樣，拆分在步驟2中得到的外消旋混合物。 步驟1向在CH2Cl2(500mL)和水(380mL)中的從實施例D步驟2中得到的外消旋氨基酯鹽酸鹽(50.0g,158.9mmol)中加入NaHCO3(38.2g,454.5mmol)。在室溫下，將該混合物攪拌10分鐘，伴隨劇烈氣體逸出。伴隨快速攪拌下，于20分鐘內加入氯甲酸芐酯(43.4g,222.8mmol)在CH2Cl2(435mL)中的溶液。40分鐘后，把反應混合物傾入到分液漏斗中并收集有機溶液。用CH2Cl2(170mL)洗滌水相。干燥(MgSO4)合并的有機溶液并真空濃縮。用己烷研磨生成的膠狀固體并經過濾收集。真空干燥褐色固體，得到要求的外消旋產物(62.9g,96％收率)。使用手性柱使該物料經受反相HPLC，得到每一個純的對映體A和B。所使用的柱為10微米粒度的Whelk-O(R,R)，使用90∶10庚烷∶乙醇的流動相。使用具有相似的溶劑和條件的分析型HPLC測量光學純度是＞98％。1H NMR與提出的結構相一致。步驟2A 向步驟1的對映體A(57.9g,140.4mmol)在CH2Cl2(600ml)中的溶液中借助加料管加入在CH2Cl2(125ml)中的三甲基甲硅烷基碘(33.7g,168.5mmol)。在室溫下，將該橙色溶液攪拌1小時。滴加入甲醇(27.3mL,674.1mmol)并把該溶液攪拌15分鐘。真空濃縮反應溶液，得到橙色的油。將殘余物溶于甲基叔丁基(670ml)中并用1M HCl(420mL)和水(1×230mL,1×130mL)提取。用MTBE(130mL)回洗水提取液。向該水溶液中分小批加入固體NaHCO3(52.9g,630mmol)。用MTBE(1×1.2L,2×265mL)提取堿化的含水混合物。用鹽水洗滌合并的有機溶液并真空濃縮，得到要求的產物，(28.6g,73％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟2B 向步驟1的對映體B、實施例1化合物(38.5g,93.4mmol)在CH2Cl2(380ml)中的溶液中借助加料管加入在CH2Cl2(80ml)中的三甲基甲硅烷基碘(25.0g,125.0mmol)。在室溫下，將該橙色溶液攪拌1.5小時，滴加入甲醇(20.0mL,500.0mmol)并把該溶液攪拌20分鐘。真空濃縮反應物溶液，得到橙色的油。將殘余物溶于乙醚(450ml)中并用1M HCl(320mL)和水(1×200mL,1×100mL)提取。用乙醚(100mL)回洗水提取液。向該水溶液中分小批加入固體NaHCO3(40.1g,478mmol)。用乙醚(1×1.0L,2×200mL)提取堿化的含水混合物。用鹽水洗滌合并的有機溶液并真空濃縮，得到要求的產物(20.8g,80％收率)。
對C11H13Cl2NO3的分析計算值C,47.50；H,4.71；N,5.04；實測值C,47.11；H,4.66；N,4.93。
通過使用在實施例G的步驟4和5中描述的試劑和條件，將步驟2B的產物轉化為目標中間體。
實施例V 按照在實施例G中描述的方法，制備以上化合物，在步驟2A中，使用5-溴-3-碘代苯甲醛替代3,5-二氯水楊醛。
實施例30 步驟1制備 向攪拌著的4-甲氧基-2-氨基吡啶甲酸甲酯(602mg,3.3mmol)(JACS,78,4130,1956)在CH2Cl2(20ml)中的溶液中加入苯甲酰基異硫氰酸酯(1ml,Aldrich)，并在室溫下將該反應混合物攪拌90分鐘。用乙醚(20ml)稀釋混合物。在冰浴上冷卻混合物并過濾固體且用乙醚洗滌，干燥，得到作為白色固體的要求的化合物(828mg,73.27％收率)1H NMR:300MHz與提出的結構相一致。步驟2制備 在氮氣氛下，向攪拌著的步驟1的產物(750mg,2.17mmol)在甲醇(30ml)中的溶液中加入NaOMe(538mg)。在室溫下，把該反應混合物攪拌2小時。用冰乙酸(0.575ml)猝滅該混合物，并在室溫下攪拌15分鐘。真空過濾固體，用冷的甲醇洗滌并干燥，得到作為白色固體的要求的化合物(385mg,73％收率)1H NMR:300MHz與提出的結構相一致。步驟3制備 向攪拌著的步驟2的產物(364mg,1.5mmol)在甲醇(20ml)中的溶液中加入碘甲烷(0.25ml)。將該反應混合物加熱回流2小時。把該混合物冷卻至室溫并濃縮，得到作為白色固體的要求的化合物(560mg)1H NMR:300MHz與提出的結構相一致。步驟4制備 向攪拌著的步驟3的產物(500mg,1.30mmol)在N,N-甲基乙酰胺(10ml)中的溶液中加入1,3-二氨基-2-羥基丙烷(123mg,1.37mmol)。將該反應混合物加熱至90℃反應2小時。真空濃縮混合物，得到粗品產物，其經反相HPLC純化，得到作為白色固體的要求的化合物(228mg)1H NMR:300MHz與提出的結構相一致。步驟5制備 向攪拌著的步驟4的產物(200mg)在甲醇(3ml)和THF(3ml)中的溶液中加入1N NaOH溶液(3ml)。在室溫下，將該反應混合物攪拌1小時。真空濃縮混合物，得到油狀膠，用水(2ml)處理，并用1N HCl(3ml)中和。真空濃縮混合物，得到粗品產物，其經反相HPLC純化，得到作為白色固體的要求的化合物(228mg)。1H NMR:300MHz與提出的結構相一致。步驟6制備 向攪拌著的步驟5的產物(151.25mg,0.5mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(5ml)中的溶液中加入4-甲基嗎啉(202mg,2mmol)和1-羥基苯并三唑(67mg,0.5mmol)及實施例R的氨基酯產物(208.5mg,0.5mmol)。在室溫下，將該混合物攪拌5分鐘。用1-[3-(二甲基氨基)丙基-3-乙基碳二亞胺(96mg,0.5mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(10mg)處理反應混合物。在氮氣氛下，在室溫下把反應混合物攪拌72小時。用水(1ml)猝滅反應混合物并真空濃縮，得到粗品產物，其經反相HPLC純化，得到作為白色固體的要求的化合物(42mg)1H NMR:400MHz與提出的結構相一致。步驟7制備 向攪拌著的步驟6的產物(35mg)在甲醇(3ml)和THF(3ml)中的溶液中加入1N NaOH溶液(3ml)。在室溫下，將該反應混合物攪拌1小時。真空濃縮混合物，得到油狀膠，用水(2ml)處理，并用1N HCl(3ml)中和。真空濃縮混合物，得到粗品產物，其經反相HPLC純化，得到作為白色固體的要求的化合物(22mg)。1H NMR:400MHz與提出的結構相一致。
對C22H24N6O7BrCl·2TFA,0.5H2O的分析計算值C,37.22；H,3.25；N,10.04；實測值C,36.91；H,3.17；N,10.02。
實施例31 步驟1制備 向攪拌著的實施例30步驟4的產物(900mg)在冰乙酸(10ml)中的溶液中加入48％HBr(10ml)。將該反應混合物加熱回流3小時。把混合物冷卻至室溫并在室溫下攪拌18小時。真空濃縮混合物，得到粗品產物，其經反相HPLC純化，得到作為油狀膠的要求的化合物(720mg)。1H NMR:300MHz與提出的結構相一致。步驟2制備 向攪拌著的步驟1的產物(720mg,1.7mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(10ml)中的溶液中加入4-甲基嗎啉(520mg,5.2mmol)和1-羥基苯并三唑(221mg,1.71mmol)及實施例R的氨基酯產物(710mg,1.71mmol)。在室溫下，將該混合物攪拌5分鐘。用1-[3-(二甲基氨基)丙基-3-乙基碳二亞胺(211mg,1.7mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(10mg)處理反應混合物。在氮氣氛下，在室溫下把反應混合物攪拌72小時。用水(1ml)猝滅反應混合物并真空濃縮，得到粗品產物，其經反相HPLC純化，得到作為白色固體的要求的化合物(182mg)。1H NMR:300MHz與提出的結構相一致。步驟3制備 向攪拌著的步驟2的產物(100mg)在甲醇(3ml)和THF(3ml)中的溶液中加入1N NaOH溶液(3ml)。在室溫下，將該反應混合物攪拌1小時。真空濃縮混合物，得到油狀膠，用水(2ml)處理，并用1N HCl(3ml)中和。真空濃縮混合物，得到粗品產物，其經反相HPLC純化，得到作為白色固體的要求的化合物(42mg)。1H NMR:300MHz與提出的結構相一致。
對C21H22N6O7BrCl·1.5TFA,0.5H2O的分析計算值C,37.64；H,3.22；N,10.97；實測值C,37.56；H,3.05；N,10.99。
實施例32 在0℃下，向實施例9步驟3的產物(860mg,2.45mmol)和實施例T的產物(1.0g,2.41mmol)在二甲基乙酰胺(24mL)中的溶液中加入HOBT(358mg,2.64mmol)隨后加入N-甲基嗎啉(0.6mL,5.15mmol)。將該反應物溶液攪拌15分鐘并加入EDC(470mg,2.45mmol)。把該混合物溫熱至室溫過夜。真空濃縮混合物并將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。用乙酸乙酯提取水溶液，干燥(Na2SO4)合并的有機層并且濃縮。經反相HPLC(90∶10水/TFA∶MeCN開始梯度洗脫，保留時間22.5min)純化殘余物，得到含有回收的化合物B(480mg)的要求的偶合產物。用1M NaOH水溶液(6mL)處理物料(化合物B)并攪拌3小時。用TFA將溶液酸化至pH4。經反相HPLC(95∶5水/TFA∶MeCN開始梯度洗脫，保留時間24.5min)純化該混合物，得到要求的產物(160mg,8％收率對于這兩個步驟)。對C21H22BrClN5O6+2.4TFA的分析計算值C,36.74；H,2.92；N,9.96；實測值C,36.83；H,3.07；N,9.88。
1H NMR與提出的結構相一致。
實施例33 步驟1在室溫下，于5磅/平方英寸的氫氣壓力下，用催化量的5％Pd/C把實施例18步驟2的物料(5.72g)在THF(80ml)中的溶液處理2小時。過濾反應混合物并用DMF(250ml)洗滌殘余物。濃縮濾液并用乙醚處理殘余物，過濾并空氣干燥，得到棕色粉末(4.9g)，其無需進一步純化直接用于下一步。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2使用三BOC試劑和在實施例21步驟4中描述的條件，使步驟1的物料(500mg)胍基化，得到作為金黃色玻璃狀物的要求的產物(128mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3使用在實施例21步驟5中給出的實驗方法，將步驟2產物的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。對C11H14N4O4.1.5TFA的分析計算值C,38.45；H,3.57；N,12.81；實測值C,38.32；H,3.77；N,12.80。步驟4使用與在實施例12步驟4中描述的相同的方法，通過將在步驟3中描述的產物與實施例R的產物偶合，制備要求的化合物。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5使用如同在實施例12步驟5中描述的相同方法，將步驟4產物的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。對C21H22N6O7BrCl.1.5TFA.0.25H2O的分析計算值C,37.86；H,3.18；N,11.04；Cl,4.66；Br,10.50.實測值C,37.60；H,3.26；N,11.20；Cl,4.79；Br,10.19。
實施例34 使用在實施例33中描述的方法，制備以上化合物。在步驟4中，實施例H的產物被用于替代實施例R的產物。對C21H22N6O7BrCl.2.0TFA.0.5H2O的分析計算值C,36.49；H,3.06；N,10.21；實測值C,36.10；H,2.83；N,10.29。
實施例35 使用在實施例33中描述的方法，制備以上化合物。在步驟4中，實施例V的產物被用于替代實施例R的產物。對C21H22N6O6Br21.75TFA的分析計算值C,35.76；H,3.03；N,10.21；實測值C,35.58；H,3.07；N,10.61。
實施例36 步驟1使用雙-BOC試劑G2和在實施例18步驟5中描述的反應條件，將實施例33步驟1的產物(261mg)胍基化，得到作為白色固體的產物(207mg)。然后使用在實施例21步驟5中描述的實驗條件把該物料皂化。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2使用與實施例12步驟4中描述的相同的方法，制備要求的化合物。將在步驟1中描述的產物與實施例1的產物偶合。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3使用與實施例12的步驟5中描述的相同的方法，將步驟2產物的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。對C20H20N6O6Br21.75TFA0.25H2O的分析計算值C,35.10；H,2.79；N,10.45；實測值C,34.85；H,2.59；N,10.62。
實施例37 步驟1在室溫下，將2-硝基噻吩-4-甲醛(5.0g)懸浮于水(100ml)中并且一次性加入氫氧化鈉(5.2g)在水(50ml)中的溶液。在室溫下，將黑色的反應混合物攪拌1小時，然后經過硅藻土墊過濾。用1N HCl溶液使濾液酸化，然后用乙酸乙酯提取。用飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮，得到淡黃色固體(5.0g)。其無需進一步純化即可使用。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2在室溫下，將步驟1的產物(2.5g)與在DMF(30ml)中的碳酸鉀(2.0g)和碘甲烷(2.2g)一起攪拌16小時。把反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配并分層。用另外的乙酸乙酯提取含水部分，然后用水、飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮。在硅膠柱上純化深色殘余物，用15％乙酸乙酯-85％己烷洗脫，得到黃色固體(950mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3將步驟2中得到的產物(2.0g)溶于甲醇(50ml)中，并在60℃下，于50磅/平方英寸的氫氣壓力下用催化量的5％Pd/C處理32小時。將反應物冷卻并過濾，濃縮濾液。在硅膠柱上純化殘余物，用25％乙酸乙酯-75％己烷洗脫，得到淡黃色固體(920mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4將步驟3的產物(900mg)的溶液溶于乙酸乙酯(20ml)中并在室溫下用一份苯甲酰基異硫氰酸酯(947mg)處理。將反應物攪拌30分鐘并過濾沉淀，用乙酸乙酯洗滌且空氣干燥，得到淡黃色固體(1.51g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5將實施例35步驟4中得到的產物溶于甲醇(70ml)中并在室溫下分批用甲醇鈉(1.3g)處理。將反應物攪拌30分鐘，然后用冰乙酸(1.4g)猝滅。濃縮反應物并且殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。用另外的乙酸乙酯提取含水部分并用飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮，得到淡黃色粉末(900mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟6將步驟5的產物(900mg)溶于甲醇(20ml)中并用碘甲烷(1.4g)處理。將該反應物回流2小時，然后冷卻并濃縮。用乙醚處理殘余物，過濾并空氣干燥，生成白色固體(1.27g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟7在95-100℃下，將步驟6的產物(1.2g)與1,3-二氨基-2-羥基丙烷(469mg)和DMA(20ml)一起加熱8小時。將該反應物冷卻并高真空下除去溶劑。借助反相HPLC純化殘余物，以水(0.5％TFA)-乙腈梯度洗脫，得到要求的產物(255mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟8使用如同在實施例21步驟5中描述的條件，使用步驟7中生成的產物，制備要求的化合物。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟9使用與實施例12步驟4中描述的相同的方法，通過使步驟8的產物與實施例G的物料偶合，制備要求的化合物。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟10使用與實施例12步驟5中描述的相同的方法，將步驟9產物的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。對C20H21N5O6Cl2S.1.75TFA的分析計算值C,38.43；H,3.19；N,9.54；S,4.37；實測值C,38.43；H,3.39；N,9.73；S,4.27。
實施例38 步驟1在室溫下，用70％硝酸(4ml)處理乙酸酐(20ml)。然后在-30℃下將該溶液滴加到N-甲基吡咯-2-甲酸(5.0g)在乙酸酐(30ml)中的攪拌著的混合物中。將該反應物攪拌并使其溫熱至室溫30分鐘。然后把反應物重新冷卻至-25℃并通過冷的濾器過濾，用冷的己烷洗滌并空氣干燥，得到黃色粉末(1.5g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2使用在步驟1中制備的產物，使用在實施例37步驟2中描述的方法，制備要求的化合物。經硅膠柱上的層析法純化粗品產物，使用40％乙酸乙酯-己烷洗脫。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3將步驟2的產物(1.0g)溶于甲醇(25ml)中，并在室溫下，于5磅/平方英寸的氫氣壓力下用催化量的5％Pd/C處理3小時。過濾反應物并濃縮，得到深紅色液體(1.0g)，其無需進一步純化即可使用。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4使用實施例37中描述的步驟4-8的順序，使用在步驟3中描述的產物，制備要求的化合物。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5在氮氣下，將步驟4的產物(425mg)、2-氯-4,6-二甲氧基三嗪(201mg)和N-甲基嗎啉(263mg)在DMA(10ml)中的溶液于冰浴上攪拌。將該反應物溫熱至室溫，并繼續攪拌3小時。制備實施例G的產物(386mg)和N-甲基嗎啉(105mg)在DMA(5ml)中的溶液并在室溫下一次性加入到反應物中。將反應物攪拌15小時，用TFA(1.5ml)猝滅，然后高真空濃縮。借助反相HPLC純化殘余物，以水(0.5％TFA)-乙腈梯度洗脫，得到白色固體(706mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟6使用與實施例12步驟5中描述的相同的方法，將步驟5產物的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。對C21H24N6O6Cl21.5TFA·0.5H2O的分析計算值C,40.75；H,3.78；N,11.88；Cl,10.02；實測值C,40.40；H,3.68；N,12.10；Cl,10.20。
實施例39 步驟1在130-140℃下，將3-溴-4-甲基噻吩(10g)、氰化銅(Ⅰ)(11.3g)和HMPA(15ml)的混合物加熱18小時。將混合物冷卻并傾入到攪拌著的氰化鈉(18.8g)在水(28ml)中的溶液中并攪拌1小時。用一些另外的水稀釋粘稠的棕色混合物并以乙醚提取。用水、飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的乙醚提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮。殘余物在硅膠柱上純化，以90％己烷-10％乙酸乙酯洗脫，得到淺黃色液體(5.2g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2將在步驟1中制備的腈(1.5g)和2N氫氧化鈉溶液(150ml)的混合物回流1小時。使該反應物冷卻并用2N鹽酸酸化直到pH～2且以乙醚提取。干燥(Na2SO4)合并的乙醚提取液并濃縮，得到白色固體(16.4g)，其無需進一步純化即可使用。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3如同在實施例37步驟2中描述的那樣，將步驟2的產物(16.4g)酯化，硅膠柱上純化，用10％乙酸乙酯-90％己烷洗脫后，得到要求的產物(13.6g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4將N-溴代琥珀酰亞胺(6.3g)和過氧化二苯甲酰(100mg)在四氯化碳(25ml)中的混合物于90分鐘內加入到步驟3的產物(5.0g)和過氧化二苯甲酰(100mg)在CCl4(25ml)中的回流著的溶液中。在回流2小時后，使反應混合物冷卻，過濾并濃縮，且殘余物在硅膠柱上純化，使用10％乙酸乙酯-90％己烷洗脫，得到要求的化合物(4.3g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟5在氮氣氛下，于55℃下將步驟4中描述的產物(4.2g)、疊氮化鈉(2.9g)和DMF(50ml)的混合物加熱5小時。使反應混合物冷卻并在水和乙酸乙酯之間分配。分層并用另外的乙酸乙酯提取含水部分。用飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮，得到金黃色的油(3.5g)，其無需進一步純化即可使用。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟6在室溫下，將步驟5中描述的產物(1.0g)、1N氫氧化鈉溶液(15ml)和甲醇(15ml)的溶液攪拌16小時。用冰乙酸(2ml)處理反應物并濃縮。將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。分層，并用另外的乙酸乙酯提取含水部分。用水、飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的有機提取液，干燥(Na2SO4)并濃縮。在61℃下，高真空下干燥殘余物2小時，得到白色固體(860mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟7在冰浴上使步驟6中描述的產物(850mg)在二氯甲烷(10ml)中的溶液冷卻并用2N草酰氯在二氯甲烷中的溶液(5ml)一次性處理，隨后加入2滴DMF。將反應物攪拌2小時，其間使其溫熱至室溫。濃縮溶液并在室溫下高真空下干燥16小時，得到黃棕色固體(785mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟8在氮氣下，于火焰干燥的燒瓶中加入二異丙基乙基胺(1.3ml)、實施例G的產物(1.4g)和DMA(10ml)的溶液。在冰浴上使該溶液冷卻并滴加入步驟7的酰氯(770mg)在DMA(5ml)中的溶液。加入完成后，將該反應物攪拌30分鐘，然后在乙酸乙酯和水之間分配。分層并用另外的乙酸乙酯提取含水部分。在硅膠柱上純化合并的有機提取液，用50％乙酸乙酯-50％己烷洗脫，得到白色固體(1.0g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟9在室溫下，于5磅/平方英寸的氫氣下，將步驟8的產物(806mg)在乙醇(20ml)中的溶液與催化量的5％Pt/C一起加熱21小時。過濾反應物并濃縮，且殘余物經反相HPLC純化，用水(.5％TFA)-乙腈梯度洗脫，得到白色固體(480mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟10使用在實施例21步驟4中描述的條件，將步驟9中描述的產物(550mg)胍基化并純化，得到白色固體(206mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟11使用在實施例12步驟5中闡述的相同方法，將步驟10的產物的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。對C21H23N5O5Cl2S·1.5TFA,0.5H2O的分析計算值C,39.79；H,3.55；N,9.67；Cl,9.79；S,4.43實測值C,39.91；H,3.58；N,9.94；Cl,10.06；S,4.52。
實施例40 步驟1使用在實施例38步驟5中描述的方法，將實施例33步驟3中制備的產物(1.0g)與甘氨酸乙酯鹽酸鹽偶合，類似純化后得到黃色固體(1.1g)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟2使用在實施例21步驟5中描述的方法，將步驟1中描述的產物(1.0g)水解，得到白色固體(910mg)。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟3使用在實施例38步驟5中描述的方案，將步驟2的產物與3-氨基-4,4,4-三氟-丁酸乙酯鹽酸鹽偶合。1H-NMR與提出的結構相一致。步驟4使用實施例12步驟5中描述的方法，將步驟3的產物中的酯基團水解。1H-NMR與提出的結構相一致。對C17H20N5O6F3·1.5TFA的分析計算值C,38.01；H,3.67；N,11.08；實測值C,37.88；H,3.64；N,11.02。
實施例41 步驟1在氬氣下，將實施例33步驟3的產物(527mg,1.3mmol)和CDMT(244mg,1.4mmol)溶于DMAC(8ml)中。把該溶液冷卻至0℃下反應3小時并滴加入NMM(0.15ml,1.3mmol)。在0℃下，把該溶液攪拌3小時，然后加入在DMAC(10ml)中的實施例U的產物和NMM(0.15ml)。把反應物溫熱至室溫并在室溫下攪拌過夜。用TFA(2ml)猝滅反應物并真空濃縮。經反相HPLC純化粗品黃色固體，使用90∶10的H2O/TFA∶CH3CN(入=254nm)梯度洗脫。分離得到作為白色固體的產物(725mg,75％收率)。對C23H26N6O7Cl2·1.5TFA的分析計算值C,42.12；H,3.74；N,11.35；實測值C,42.26；H,3.87；N,11.45。
H.R.M.S.M+1對C23H27N6O7Cl2的計算值569.1318。實測值569.1323。步驟2將步驟1的產物(725mg,0.98mmol)溶于THF(5ml)/lCH3OH)中并加入1M NaOH(6.5ml)。在室溫下，將該反應物攪拌過夜，然后加入1M HCl(6.5ml)。在真空下濃縮后，經反相HPLC純化粗品黃色固體，使用95∶5的H2O/TFA∶CH3CN(入=254nm)梯度洗脫。分離得到作為白色固體的產物(589mg,79％收率)。對C21H22N6O7Cl2·1.9TFA的分析計算值C,39.30；H,3.18；N,11.09；實測值C,39.22；H,3.16；N,11.39。
H.R.M.S.M+1對C21H23N6O7Cl2的計算值541.1005。實測值541.1000。
實施例42 步驟1在高壓反應器中，將2-甲氧基-6-氯吡啶甲酸(10g,0.053mol)溶于過量的濃氫氧化銨水溶液中并在175℃下加熱24小時，達到500磅/平方英寸的壓力。把該溶液減壓下蒸發至干并在25℃下經2N HCl處理2天轉化為酸，然后在高真空下蒸發至于，其間加熱到60℃。12小時后，用無水乙醇共沸除去殘留的水，并且用甲醇處理生成的殘余物且減壓下蒸發三次。將生成的殘余物溶于甲醇(250ml)并把在二噁烷中的4N HCl(25mol)加入到該溶液中，然后回流2.5天。減壓下蒸發除去溶劑并經反相HPLC(梯度，95/5在H2O中的0.1％TFA/CH3CN-60/40在H2O中的0.1％TFA/CH3CN)純化生成的粗品殘余物。將要求的產物溶于甲醇中并且用固體碳酸氫鈉處理，過濾，并蒸發溶劑。將生成的固體懸浮于50/50乙酸乙酯/己烷中并過濾收集固體，得到要求的棕色固體(1.7g,20％收率)。步驟2將步驟1的化合物(300mg,1.8mmol)溶于DMF(7.1ml)中并加入實施例9步驟1的產物(927mg,2.1mmol)，隨后加入三乙胺(0.44ml,325mg,3.2mmol)和氯化汞(326mg,1.2mmol)。在25℃下，將反應混合物攪拌3.5小時，然后在60℃下加熱16小時。在冷卻至室溫后，向反應物中加入乙酸乙酯(7ml)并通過硅藻土過濾不均勻的溶液。用97/3的乙酸乙酯/乙醇徹底洗滌硅藻土。減壓下除去溶劑并把生成的紅色粗品油溶于二氯甲烷(30ml)中并用三氟乙酸(2.77ml)處理且回流1小時。將反應物冷卻并減壓下除去溶劑，得到棕色的油。經反相HPLC(Cl8，梯度90/10 0.1％TFA/H2O)純化樣品，得到不純的化合物，使其溶于甲醇(2ml)中并用1N NaOH(0.15ml)處理且解吸至干，得到深棕色的油。經反相HPLC(Cl8，梯度99/1 0.1％TFA/H2O/CH3CN)純化該油，得到褐色的固體(36mg)。步驟3將先前步驟的化合物(74mg；0.18mmol)在真空烘箱中干燥過夜并且溶于DMF(1ml)(經分子篩貯存)中，并冷卻至0℃。然后加入N-甲基哌啶(27ml；22mg；0.22mmol)，隨后加入氯甲酸異丁酯(47ml；49mg,0.36mmol)并攪拌5分鐘。加入實施例G的產物在DMF中的溶液(0.2mL)并用另外的DMF(0.2mL)洗滌殘留的β-氨基酯。加入下一份N-甲基哌啶(22ml；18mg；0.18mmol)。使該反應混合物緩慢溫熱至室溫。在25℃下攪拌12小時后，高真空下除去溶劑，得到紅棕色的油，其經反相HPLC(Cl8，梯度80/20 0.1％TFA/H2O/CH3CN)純化，得到所述偶合產物(22mg)和具有結合到吡啶酮的氧原子上的異丁基甲酰基的偶合產物(47mg)。合并這些產物并溶于甲醇(2ml)中，向其中加入1N氫氧化鈉水溶液(240ml)。在25℃下，將該反應物攪拌過夜并加入三氟乙酸(84.7ml)。減壓下除去溶劑并經反相HPLC(Cl8，梯度95/5 0.1％TFA/H2O/CH3CN)純化，得到要求的產物(37mg)。對C21H22N6O7Cl2·2.1TFA·0.2H2O的微量分析計算值C,38.58；H,3.15；N,10.71；實測值C,38.12；H,3.36；N,10.71。
實施例43 按照實施例42步驟3中描述的方法，通過使實施例42步驟2的產物與實施例R的產物反應，制備以上化合物。對C21H22N6O7ClBr.1.8TFA的微量分析計算值C,37.35；H,3.03；N,10.62；實測值C,37.31；H,3.23；N,10.65。
實施例44 步驟1將實施例17步驟3的產物(3.0g,5.77mmol)溶于異丙醇(25ml)中并向該溶液中加入濃氫氧化銨(45ml)。在25℃下攪拌3小時后，該溶液減壓下蒸發至干。在25℃下，在5磅/平方英寸下，于帕爾振搖器中，把粗品樣品在乙醇(3A)(50ml)中經5％披鉑炭氫化2.5小時。過濾樣品并減壓下將濾液濃縮至干。經反相層析法(Cl8,80/20CH3CN/H2O梯度)純化化合物，得到要求的產物(1.5g,39％收率)。步驟2將步驟1的產物(200mg)溶于甲醇(2ml)中并加入碳酸氫鈉(133mg)。在25℃下，將溶液攪拌30分鐘，過濾并使生成的溶液蒸發至干。把生成的樣品(205mg；0.43mmol)溶于DMF(1.72ml)中，然后加入實施例9步驟1的產物(282.8mg,0.65)，隨后加入三乙胺(99mg；0.97mmol,0.14ml)，然后加入氯化汞(177mg；0.65mmol)。將溶液加熱至60℃下進行30分鐘，然后加熱至90℃ 12小時。冷卻反應混合物，然后用乙酸乙酯(1.7ml)稀釋并經硅藻土過濾。把生成的濾液蒸發至干。經快速層析法純化粗品，以除去未反應的原料。用50/50的TFA/CH2Cl2處理所述物料，得到不純的要求的產物。將該物料溶于甲醇(2ml)和1N氫氧化鈉(2ml)中。在25℃下攪拌12小時后，用TFA(77ml)中和該溶液，然后減壓下蒸發至干。經反相層析法(Cl8,95/5 H2O/CH3CN)純化粗品產物，得到要求的產物(6.8mg)。對C21H23N7O6Cl2·3.3TFA的微量分析計算值C,36.17；H,2.89；N,10.70；實測值C,36.57；H,3.21；N,10.37。
實施例45 步驟1向3-甲基-2-噻吩甲酸(1.0g,7.0mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(4.0ml)和碳酸鉀(1.93g,14mmol)的混合物中加入碘甲烷(1.49g,10.5mmol)。在室溫下，將反應物攪拌80小時，并用乙酸乙酯(150ml)稀釋，用H2O(100ml)和鹽水(100ml)洗滌。干燥(Mg2SO4)有機層并濃縮至作為淺棕色油的純的產物(0.87g,81％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟2在回流下，于30分鐘內向步驟1的產物(5.0g,32.0mmol)、過氧化二苯甲酰(0.08g)和四氯化碳(20ml)的溶液中加入N-溴代琥珀酰亞胺(6.3g,35.3mmol)和過氧化二苯甲酰(0.08g)和四氯化碳(20ml)的混合物。將生成的反應混合物加熱回流18小時。過濾固體并用四氯化碳(2×10ml)洗滌。濃縮濾液，得到油和固體的混合物(8.1g,80％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟3在58℃下，將步驟2的產物(8.1g,34.7mmol)、疊氮化鈉(5.6g,87mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(25ml)的混合物加熱2.5小時。用乙酸乙酯(800ml)稀釋反應物并用H2O(500ml)洗滌。用乙酸乙酯(100ml)提取水層。干燥(Mg2SO4)合并的有機層并濃縮，得到淺棕色的油(6.0g,85％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟4將步驟3的產物(6.0g,25.9mmol)、NaOH(1N,50ml)和MeOH(50ml)的溶液攪拌過夜。用乙酸(2.5ml)處理反應物。用乙酸乙酯(300ml)提取產物。以Na2SO4干燥有機層并濃縮，得到黃色的油。真空下得到黃色固體(2.0g,42％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟5在室溫下，將步驟4的產物(0.5g,2.7mmol)、草酰氯(2M在二氯甲烷中，2.7ml,5.4mmol)和二氯甲烷(20ml)的混合物攪拌2.5小時。從反應物中除去溶劑，得到作為棕色油的產物(0.51g,85％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟6在0℃下，將實施例G的產物(0.91g,2.43mmol)、二異丙基乙基胺(0.63g,4.86mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(20ml)的溶液加入到步驟5的產物(0.46g,2.43mmol)和THF(10ml)的混合物中。在0℃下，將反應混合物攪拌10分鐘并使其溫熱至室溫。16小時后，真空下從該反應物中除去溶劑。用乙酸乙酯(300ml)提取產物。用飽和的NaHCO3溶液(100ml)、H2O(100ml)洗滌有機溶液，用Na2SO4干燥并濃縮，得到粗品產物。經柱層析法(在硅膠上，CH2Cl2/MeOH/NH4OH,98/2/0.2)純化粗品產物，得到作為膠狀固體的純的產物(0.7g,58％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟7在室溫下，于5磅/平方英寸下將步驟6的產物(0.78g,1.56mmol)、5％Pt/C和EtOH的混合物攪拌20小時。過濾催化劑。用三氟乙酸(0.6ml)處理濾液并濃縮，得到粗品產物。經HPLC純化粗品產物得到白色固體(0.4g,54％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟8在室溫下，將氯化汞(Ⅱ)(0.51g,1.87mmol)加入到步驟7的產物(0.55g,1.25mmol)、實施例9步驟1的產物(0.81g,1.87mmol)、三乙胺(0.38g,3.75mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(15ml)的混合物中。在95-100℃下，將反應物加熱16小時。通過硅藻土墊(2”)過濾冷卻的反應物并用乙酸乙酯洗滌。真空下從濾液中除去溶劑，得到油。用CH2Cl2/三氟乙酸(10ml/10ml)稀釋該油并在室溫下攪拌1小時。經過濾收集形成的固體。濃縮濾液并用CH2Cl2/三氟乙酸(15ml/15ml)處理1.5小時。減壓下除去溶劑，得到棕色的油。經HPLC純化該油，得到要求的產物及其乙酯的混合物。從乙腈中重結晶得到作為白色固體的要求的化合物(0.068g)。用NaOH/乙醇(7.0ml/7.0ml)把酯產物處理18小時，并經HPLC純化，得到另外的化合物(0.055g)。
對C21H23N5O6Cl2S·2.0CF3COOH的計算值C,38.87；H,3.26；N,9.07；實測值C,38.78；H,3.6；N,9.16。
實施例46 步驟1在室溫下，將苯甲酰基異硫氰酸酯(3.34g,21.3mmol)加入到實施例33步驟1的產物(3.5g,20.8mmol)和N,N-甲基甲酰胺(45ml)的溶液中。將該反應物攪拌2小時并傾入到乙醚(300ml)中。將生成的混合物攪拌15分鐘。經過濾收集產物，用乙醚(2×40ml)洗滌并空氣干燥為黃色固體(6.95g,100％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟2在室溫下，把甲醇鈉(2.64g,48.9mmol)分小批量加入到步驟1產物(6.90g,20.8mmol)和甲醇(200ml)的懸浮液中。完成加入后，將該反應物攪拌1小時。把乙酸(2.8ml,48.9mmol)加入到該反應物中。將生成的混合物攪拌15分鐘。經過濾收集產物，用甲醇(2×30ml)洗滌并減壓下干燥，得到灰白色固體(3.8g,81％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟3在回流下，將步驟2的產物(1.90g,8.4mmol)、碘甲烷(3.56,25.1mmol)和甲醇(60ml)的混合物加熱3.5小時，并冷卻至室溫。減壓下從反應物溶液中除去溶劑，得到黃色的油。用乙醚處理油狀殘余物，得到作為黃色固體的純的產物(3.1g,100％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟4在85℃下，將步驟3的產物(0.5g,1.36mmol)、2-甲氧基乙基胺(0.12ml,1.36mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(5.0ml)的溶液加熱2.5小時。加入另外的2-甲氧基乙基胺(0.12ml,1.36mmol)。在85℃下，將反應物加熱2小時。減壓下從冷卻的反應物中除去N,N-甲基乙酰胺，得到粗品產物。經反相HPLC純化粗品產物，得到要求的純的產物(0.38g,76％收率)。1H NMR譜與提出的結構相一致。步驟5在室溫下，將步驟1的產物(0.38g,1.42mmol)、NaOH溶液(1N,15ml)和MeOH(15ml)的溶液攪拌16小時，然后用三氟乙酸(1.2ml)處理。減壓下從反應物溶液中除去溶劑，得到粗品產物。經HPLC純化粗品產物，得到作為白色固體的要求的產物(0.55g,100％收率)。1HNMR與提出的結構相一致。步驟6將N-甲基嗎啉(0.1ml,1.42mmol)加入到步驟5的產物(0.54g,1.42mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(16ml)中的溶液中。在-5℃下，于5分鐘內將氯甲酸異丁酯(0.18g,1.35mmol)加入到反應物中，并攪拌15分鐘。將實施例G的產物(0.396g,1.07mmol)和N-甲基嗎啉(0.075ml,1.07mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(10ml)的溶液加入到該反應物中。使生成的反應物溶液溫熱到室溫并攪拌16小時。減壓下從反應物溶液中除去溶劑，得到粗品產物。經HPLC純化粗品產物，得到作為白色固體的要求的產物(0.145g,14％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟7將步驟6的產物(0.145g,0.20mmol)、NaOH(1N,25ml)和MeOH(25ml)的溶液攪拌16小時，減壓下從反應混合物中除去溶劑，得到粗品產物。用三氟乙酸(2ml)處理粗品產物并經HPLC純化，得到作為灰白色固體的要求的產物(0.11g,70％收率)。對C21H24N6O7Cl2·2CF3COOH的計算值C,38.93；H,3.40；N,10.89；實測值C,39.29；H,3.47；N,11.15。
實施例47 步驟1在92-95℃下，將實施例46步驟3的產物(1.56g,4.22mmol)、2,2-二甲基-1,3-丙二胺(0.45g,4.40mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(15ml)的混合物加熱6.5小時，然后使之冷卻至室溫。過夜形成固體。過濾收集產物，用N,N-二甲基乙酰胺(5ml)和乙醚(5ml)洗滌，得到作為白色固體的純的產物(0.50g,43％收率)。1H NMR與提出的結構相一致。步驟2在室溫下，將步驟1的產物(0.48g,1.7mmol)、NaOH(1N,10ml)和MeOH(10ml)的溶液攪拌過夜。減壓下從反應混合物中除去溶劑，得到粗品產物。用三氟乙酸(2ml)處理粗品產物并經HPLC純化，得到作為要求的產物的白色固體(0.38g,58％收率)。步驟3在0℃下，將4-甲基嗎啉(0.14g,1.41mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(1.5ml)中的溶液加入到步驟2的產物(0.36g,0.94mmol)、2-氯-4,6-二甲氧基三嗪(0.18g,1.03mmol)和N,N-甲基乙酰胺(10ml)的溶液中。使生成的亮橙色溶液溫熱至室溫并攪拌3小時。將實施例G的產物(0.350g,0.94mmol)、4-甲基嗎啉(0.93g,0.94mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(4ml)的溶液加入到反應物溶液中。在室溫下，將生成的溶液攪拌過夜，并用三氟乙酸(1.0ml)處理。減壓下從反應物溶液中除去溶劑，得到粗品產物。經HPLC純化粗品產物，得到作為要求的產物的黃色固體(0.35g,54％收率)。步驟4將步驟3的產物(0.33g,0.47mmol)、NaOH(1N,9ml)和MeOH(9ml)的溶液攪拌18小時。用三氟乙酸(1.0ml)處理反應物。減壓下從反應物溶液中除去溶劑，得到粗品產物。粗品產物經HPLC純化，得到作為淺黃色固體的要求的化合物(0.285g,84％收率)。對C23H26N6O6Cl2·1.25CF3COOH·1.0H2O的計算值C,42.90；H,4.13；N,11.77；實測值C,43.03；H,4.03；N,11.26。
實施例48 使用在實施例47中描述的方法，合成以上化合物。在步驟1中，用乙二胺替代2,2-二甲基-1,3-二氨基丙二胺。在步驟3中，用實施例U的產物替代實施例G的產物。對C20H20N6O6Cl2·1.25CF3COOH·0.5H2O的計算值C,40.77；H,3.38；N,12.68；實測值C,40.98；H,3.17；N,12.57。
實施例X制備5-溴-3-碘代水楊醛 如同在文獻(J.Org.Chem.1990,55,5287-5291)中描述的那樣，通過5-溴代水楊醛的碘化，制備以上化合物。實施例Y和Z流程A1 步驟1制備 在無水條件下，伴隨劇烈攪拌下將5-氨基煙酸(10.0g,0.072mole)、苯甲酰基異硫氰酸酯(11.8g,0.072mole)和DMAP(催化量)在無水乙腈(250mL)中的混合物加熱回流過夜(流程A1)。將生成的黃色懸浮液冷卻并過濾。用水洗滌殘余物，隨后用乙腈洗滌，并且真空干燥過夜，得到作為淺黃色固體的要求的產物(21.4g,98％收率)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。步驟2制備 向步驟1的產物(11.1g,0.037mole)在無水MeOH(230mL)中的懸浮液中加入NaOMe(25wt％在甲醇中的溶液，21.1mL,0.092mole)，此時所述反應劑進入溶液，得到橙棕色的溶液(流程A1)。在室溫下，把該溶液攪拌3小時，在冰浴上冷卻并加入碘甲烷(3.45mL,0.055mole)。在10℃下，將生成的混合物攪拌30分鐘并在室溫下攪拌1.5小時。然后用乙酸(2mL)猝滅反應混合物，在冰浴上冷卻并過濾，用冷的MeOH洗滌固體并真空干燥，得到作為米黃色固體的要求的產物(2.66g,37％收率)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。步驟3制備實施例Y和Z向1,3-二氨基-2-羥基丙烷(11.2g,0.124mol)在無水DMF(80mL)中的溶液中加入步驟2的產物(8.7g,0.041mol)。在無水條件下，于85℃下將該混合物加熱3小時(流程A1)。在加熱1-2小時后，溶液變得混濁并且在加熱期間濁度增加。然后在冰浴上冷卻反應混合物并過濾。用乙腈、水、乙腈洗滌固體，并真空干燥，得到作為米黃色固體的要求的產物(實施例Y)(3.7g,38％收率)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
使用對實施例Y描述的方法，合成實施例Z，以4當量的2,2-甲基-1,3-丙二胺替代1,3-二氨基-2-羥基丙烷。
通過在10℃下，將在無水THF(對1.0g底物10mL)和TFA(1當量)或4NHCl/二噁烷(2當量)中的溶液攪拌1小時，將步驟3的每一個產物轉化為它們相應的TFA或者HCl鹽。
實施例49制備 流程A2流程A2 在-20℃下，向實施例Y(0.40g,0.00125mole，流程A2)在無水DMF(10mL)中的懸浮液中加入氯甲酸異丁酯(0.17g,0.00125mole)，隨后滴加入N-甲基嗎啉(0.14g,0.00137mole)。于-20℃下，在氬氣氛下把該混合物攪拌20分鐘之后，加入另外量的N-甲基嗎啉(0.14g,0.00137mole)，隨后加入實施例G的產物(0.46g,0.00125mole)。在-20℃下，將生成的混合物攪拌15分鐘，然后在室溫下攪拌2小時。真空蒸餾DMF并經反相HPLC純化殘余物，得到(冷凍干燥后)作為白色固體的要求的酯(0.20g,21％收率)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
在室溫下，將該酯(0.2g)與1M LiOH(2mL)一起攪拌1小時。以三氟乙酸將pH調至2并通過反相HPLC純化產物，提供(冷凍干燥后)作為白色固體的要求的酸(0.11g)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
實施例50制備 使用在實施例49中描述的方法，以等量實施例R替代實施例G，制備以上化合物(流程A2)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
在室溫下，將酯(0.19g,0.00023mole)與1M LiOH(2mL)一起攪拌1小時。以三氟乙酸將pH調至2并通過反相HPLC純化產物，提供(冷凍干燥后)作為白色固體的要求的酸(0.13g,72％收率)。
MS和1H-NMR與要求的結構相一致。
實施例51制備 流程B流程B 步驟1制備雙-N-芐氧基羰基-2-羥基-1,3-二氨基丙烷 在10℃下，向2-羥基-1,3-二氨基丙烷(5.8g,0.064mol)在含有N-甲基嗎啉(14mL)的二氯甲烷(150mL)中的懸浮溶液中分批加入芐氧基羰基琥珀酰亞胺(32g,0.129mol)(流程B)。在室溫下，把反應混合物攪拌16小時，并用二氯甲烷(100mL)稀釋生成的透明溶液，用10％檸檬酸(2×50mL)、水連續洗滌并干燥(Na2SO4)。過濾后，減壓下除去溶劑，并且生成的白色固體從二氯甲烷中結晶，得到要求的化合物(20.0g,87％)。
1H-NMR和MS與該結構相一致。步驟2制備雙-N-芐氧基羰基-1,3-二氨基丙-2-酮 于30分鐘內，向步驟1的產物(21.0g,0.058mol)和EDC(33.0g)在含有DMSO(24.0mL)的二氯甲烷(120mL)中的懸浮液中滴加入三氟乙酸吡啶鎓鹽(33.0g)在二氯甲烷(50mL)中的溶液并在10℃下攪拌。加入后，得到透明的黃色溶液。在室溫下攪拌3小時后，從反應混合物中分離白色固體。冷卻，過濾，并且用冷的二氯甲烷和水洗滌該固體。于干燥器中真空干燥得到的白色固體，得到要求的產物(15.5g,74％收率)。1H-NMR和MS與該結構相一致。步驟3制備 在無水條件下，將步驟2的產物(2.5g,0.007mol)、對甲苯磺酸(0.3g,0.0016mol)和DMSO(1.0mL)在含有乙二醇(2.0mL)的二氯乙烷(25mL)中的混合物加熱至回流(流程B)。24小時后，冷卻反應混合物，用二氯甲烷(25mL)稀釋并用10％碳酸氫鈉、水連續洗滌并干燥(Na2SO4)。減壓下除去溶劑后，殘余物從二氯甲烷/己烷中結晶，得到要求的化合物(2.5g,89％收率)。1H-NMR和MS與該結構相一致。步驟4將步驟3的產物(3.0g,0.0075mol)溶于乙醇(50.0mL)和乙酸乙酯(50.0mL)的溶劑混合物中，并且在室溫下，在Pd/C(5％,1.5g)存在下于50磅/平方英寸下氫化16小時(流程B)。過濾除去催化劑，用含有40％水的乙醇溶液(50mL)洗滌并過濾。將合并的濾液和水洗滌液減壓下濃縮至干，得到糖漿狀物。將該物料溶于DMF(10.0mL)中，與三乙胺(0.7mL)和DMAP(0.05g)一起加入到實施例1步驟2的產物(1.0g,0.0047mol)中。在無水條件下，于90℃下將生成的混合物加熱。3小時后，真空蒸餾DMF，用水研磨殘余物并過濾。其用水、乙腈洗滌，并在干燥器中真空干燥，得到作為粉末的實施例5(0.4g,30％)。在步驟B中，該物料無需進一步純化即可使用。1H-NMR和MS與該結構相一致。
實施例52制備 流程C流程C 將實施例51的化合物(0.38g,0.0014mol)懸浮于干燥的THF(5.0ml)中并加入三氟乙酸(0.1ml)且在無水條件下于10℃攪拌(流程C)。30分鐘后，減壓下蒸餾THF并把殘余物真空干燥3小時。將生成的物料溶于干燥的DMF(4.0ml)中，冷卻至-15℃，并加入氯甲酸異丁酯(0.18mL)，隨后加入N-甲基嗎啉(0.17mL)。在氬氣氛下將該溶液攪拌30分鐘。在0℃下，向該混合物中加入通過將N-甲基嗎啉(0.17mL)加入到實施例R(0.51g)在DMF(3.0mL)中的溶液中生成的胺的溶液。在-15℃下，將生成的混合物攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌16小時。然后經真空蒸餾除去溶劑，并通過反相HPLC純化殘余物，使用10-90％乙腈/水梯度(40分鐘)以70mL/min的流速洗脫。
合并適當的部分并冷凍干燥，得到作為松散白色粉末的要求的酯(0.4g)。在室溫下，將該物料與氫氧化鋰(1M,2.0mL)一起攪拌。45分鐘后，冷卻反應混合物，用水稀釋，用三氟乙酸酸化，并使用如同以上描述的10-90％乙腈/水洗脫，經反相HPLC分離要求的酸(0.25g)。1H-NMR和MS與該結構相一致。
實施例53制備 流程D流程D 步驟1制備雙-N-芐氧基羰基-2-氟-1,3-二氨基丙烷 在-50℃下，向攪拌著的雙-N-芐氧基羰基-2-羥基-1,3-二氨基丙烷(6.0g,0.017mol)在二氯甲烷(50mL)和吡啶(2.7mL)中的懸浮液中滴加入DAST(2.5mL)在二氯甲烷(7.5mL，流程D)中的溶液。在氬氣氛下，于16小時內把反應混合物逐漸溫熱至室溫。得到透明黃色溶液。冷卻該溶液并傾入到冰、水(100mL)和二氯甲烷(50mL)的混合物中。用水(2×50mL)洗滌有機相并干燥(Na2SO4)。除去溶劑后，經硅膠快速層析法純化殘余物，使用30％在己烷中的EtOAc洗脫。合并適宜的部分，濃縮至干，并且產物從二氯甲烷/己烷中結晶，得到作為白色松散粉末的要求的氟代中間體(2.0g)。1H-NMR和MS與該結構相一致。步驟2在室溫下，在Pd/C(10％,2.7g)存在下，將步驟1中得到的雙-N-芐氧基羰基-2-氟-1,3-二氨基丙烷(3.3g,0.0092mol)在EtOAc(30mL)和EtOH(30mL)中的溶液在50磅/平方英寸下氫化16小時(流程D)。過濾后，將催化劑與含有40％水的EtOH(50mL)一起攪拌并再次過濾。將濾液濃縮至干，得到糖漿狀物(0.7g)。將該糖漿狀物懸浮于DMF(8.0mL)中。加入實施例1步驟2的產物(0.7g,0.0033mol)、催化量的DMAP(0.01g)并在無水條件下于90℃下加熱3小時。真空蒸餾DMF，將殘余物懸浮于水(25mL)中并經加入1N HCl調節pH至4.5。冷卻生成的混合物。過濾分離的固體并用水、乙腈徹底洗滌，在干燥器中真空干燥，得到作為棕色粉末的要求的化合物(0.24g)。1H-NMR和MS與該結構相一致。
實施例54制備 流程E流程E
將以上得到的實施例53的化合物(0.22g)懸浮于干燥的THF(4.0mL)中。加入三氟乙酸(0.1mL)并在10℃下將該溶液攪拌30分鐘，并減壓下濃縮。在干燥器中真空干燥殘余物。將得到的物料懸浮于干燥的DMF(5mL)中。加入氯甲酸異丁酯(0.12mL)，隨后加入N-甲基嗎啉(0.11mL)。在氬氣氛下，于-15℃下攪拌該溶液(流程E)。30分鐘后，加入通過把N-甲基嗎啉(0.095mL)加入到實施例R的產物(0.37mg)在DMF(3.0mL)中的溶液中生成的胺的溶液。在-15℃下，將生成的混合物攪拌30分鐘，并且在室溫下攪拌16小時。真空蒸餾DMF并經反相HPLC純化殘余物，使用10-90％乙腈/水洗脫。合并適宜的部分并冷凍干燥，得到作為淺黃色粉末的要求的酯產物(0.35g)。1H-NMR和MS與該結構相一致。
在室溫下，將生成的產物(0.3g，流程E)與1M LiOH(3.0mL)一起攪拌。1小時后，用水(3.0mL)稀釋該溶液，冷卻并用三氟乙酸酸化。然后，生成的混合物經反相HPLC純化，使用10-90％乙腈/水(30分鐘的梯度)以流速70mL/min洗脫。合并適宜的部分并冷凍干燥，得到作為白色粉末的要求的化合物(0.22g)。
1H-NMR和MS與該結構相一致。
實施例55制備 流程F流程F 步驟1制備 向1,4-氨基-2,3-二羥基丁烷二鹽酸鹽[2.21g,0.012mole][如同在J.Carbohydrate Chemistry,5(2),183-197中描述的那樣，由二甲基-L-酒石酸酯合成]在水(6mL)和無水DMF(10mL)中的溶液中加入碳酸鈉(1.83g,0.017mole)。向該混合物中加入實施例1步驟2的產物(1.21g,0.006mole)并在85℃下把該混合物加熱3小時。在冰浴上冷卻后，真空蒸餾DMF并將生成的殘余物懸浮于水中。調節pH至5.6。冷凍干燥該溶液，得到要求的產物(0.907g,59％收率)。
MS與要求的結構相一致(M+H267)。通過在10℃下與在THF(10mL)中的4N HCl/二噁烷(2當量)一起攪拌1小時，將所得到的化合物轉化為其HCl鹽。步驟2在-20℃下，向步驟1的產物(0.11g,0.00023mole)在無水DMF(10mL)中的懸浮液中加入氯甲酸異丁酯(0.016g,0.00012mole)，隨后滴加入N-甲基嗎啉(0.013g,0.00013mole，流程F)。在氬氣氛下，于-20℃下將該混合物攪拌20分鐘后，加入另外量的N-甲基嗎啉(0.013g,0.00013mole)，隨后加入實施例R的產物(0.048g,0.00012mole)。在-20℃下，將生成的混合物攪拌15分鐘。在室溫下攪拌2小時后，真空蒸餾DMF并經反相HPLC純化殘余物，得到(冷凍干燥后)作為白色固體的要求的酯(0.03g,33％收率)。
MS(M+H627M+H629)和1H-NMR與要求的結構相一致。
1H-NMR(400MHz,Cd3OD):δ8.8(s,1H),8.5(s,1H),8.1(s,1H),7.4(s,1H),7.2(s,1H),5.6(m,1H),4.1(m,4H),3.7(m,2H),3.6(m,2H),3.3(m,2H),2.9(m,2H),1.2(m,3H)。
將生成的酯(0.03g,0.000035mole)與1N LiOH(2mL)一起攪拌。在室溫下攪拌1小時后，用三氟乙酸調節pH至2，并且經反相HPLC分離產物，得到(冷凍干燥后)作為白色固體的要求的酸(0.001g,3.5％收率)。
MS(M+H599M+H601)和1H-NMR與要求的結構相一致。
1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ8.8(s,1H),8.5(s,1H),8.0(s,1H),7.4(s,1H),7.2(s,1H),5.6(m,1H),4.1(m,2H),3.8(m,2H),3.5(m,2H),3.3(m,2H),2.8(m,2H)。
實施例56按照在以下流程1中概述的合成順序，制備二氟代類似物。流程1 使用DAST二乙基氨基三氟化硫，將芐酯基保護的酮轉化為相應的二氟代中間體。隨后經催化氫化除去芐酯基(Z)并使生成的二胺與5-氨基煙酸衍生物的S-甲基異硫脲衍生物偶合，提供相應的二氟取代的含有煙酸前體的胍。該化合物與甘氨酰-β-氨基酸酯反應隨后水解和酸化，得到最終要求的化合物。
實施例57按照以下流程，從已知的二異丙基-L-酒石酸酯開始，制備含有七元氟代/羥基取代的胍的化合物(J.Am.Chem.Soc.1988,110,7538)。流程2流程2 經過酰胺化、甲硅烷基化和N-脫甲硅烷基化，合成單甲硅烷基化中間體。乙硼烷還原該單甲硅烷基衍生物提供相應的二胺二鹽酸鹽。隨后所述游離的二胺與S-甲基異硫脲5-氨基煙酸衍生物縮合，提供相應的七元胍衍生物。該胍進一步與甘氨酰-β-氨基酸酯反應，隨后水解和酸化，得到最終要求的化合物。
實施例58按照在以下流程中概述的反應，制備二烷基/二醇取代的七元環狀胍化合物。由已知的芐酯基保護的二胺(J.Med.Chem.1996,39,2156)開始，通過使游離的二胺前體與S-甲基異硫脲5-氨基煙酸衍生物反應，合成相應的七元環狀胍。生成的胍羧酸與甘氨酰-β-氨基酸酯縮合，隨后經過水解和酸化，得到最終要求的化合物。流程3流程3 實施例59如同在以下流程中顯示的那樣，經酸催化下的環縮酮前體裂解，制備二羥基化合物。流程4流程4 實施例60如同在實施例F中概述的那樣，由D或者內消旋-酒石酸衍生物起始制備含有二醇取代的七元環狀胍的化合物。
本發明化合物的活性在以下試驗中測試。在所述試驗中的測試結果列于表1中。玻連蛋白粘附試驗材料如同以前描述的那樣[Pytela等，酶學中的方法，144:475-489(1987)]，自人胎盤純化人玻連蛋白受體(αvβ3)。如同以前描述的那樣[Yatohgo等，細胞結構與功能，13:281-292(1988)]，自新鮮冷凍的血漿純化人玻連蛋白。如同以前描述的那樣[Charo等，J.Biol.Chem.,266(3):1415-1421(1991)]，通過將Pierce化學公司(Rockford,IL)的NHS-生物素與純化的玻連蛋白偶合來制備生物素化的人玻連蛋白。從Sigma(St.Louis,MO)得到試驗緩沖液、OPD底物片和RIA級別的BSA。從Calbiochem(La Jolla,CA)得到抗生物素抗體。從FlowLabs(McLean,VA)得到Linbro微量滴定板。從Sigma(St.Louis,MO)得到ADP試劑。方法固相受體試驗這個試驗與先前報道[Niiya等，血液，70:475-483(1987)]的基本相同。在含有1.0mM的Ca++、Mg++和Mn++,pH7.4的Tris緩沖的鹽水(TBS+++)中，將純化的人玻連蛋白受體(αvβ3)從貯備液稀釋至1.0μg/mL。將稀釋的受體以100μL/孔(100ng受體/孔)立即轉移至Linbro微量滴定板中。把這些板密封并在4℃下孵育過夜以使受體結合到孔上。所有其余的步驟在室溫下進行。把這些試驗板排空并加入200μL在TBS+++中的1％RIA級別的BSA(TBS+++/BSA)，以封閉暴露的塑料表面。隨后孵育2小時，使用96孔板洗滌器，用TBS+++洗滌這些試驗板。在貯備液濃度2mM下開始并且使用在TBS+++/BSA作為稀釋液中的2nM生物素化的玻連蛋白，制備受試化合物和對照組的對數級數稀釋液。用CETUS Propette自動機進行，使受試(或者對照組)配基與標記的配基預先混合，并且隨后將50μL等分試樣轉移至試驗板上；所述標記的配基的最終濃度為1nM和受試化合物的最高濃度為1.0×10-4M。競爭作用發生兩小時后，如同以前那樣用板洗滌器洗滌所有的孔。在TBS+++/BSA中，將親合純化的辣根過氧化物酶標記的山羊抗生物素抗體稀釋為1∶3000并且將125μL加入到每一個孔中。30分鐘后，洗滌這些板并在100mM/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)中與OPD/H2O2底物一起孵育。在450nm波長下，用微量滴定板讀數器讀取這些板并且當最大結合對照組孔達到大約1.0的吸收度時，記錄最終的A450用于分析。使用以EXCELJ電子表格程序寫出的宏分析這些數據。測定平均值、標準偏差和％CV用于重復試驗濃度。將平均A450值標準化為四個最大結合對照組的平均值(不加入競爭劑)(B-MAX)。使標準化的數值經四個參數曲線擬合算法[Rodbard等，Int.Atomic Energy Agency,Vienna，第469頁(1977)]，在半-log標度上作圖表示，并且計算相應于生物素化的玻連蛋白的最大結合的50％抑制率的濃度(IC50)和相應的R2被報道用于在最高試驗濃度下呈現大于50％抑制率的那些化合物；另外，據報道所述IC50大于最高試驗濃度。為有效的αvβ3拮抗劑(IC50在3-10nM范圍內)的β-[[2-[[5-[(氨基亞氨基甲基)氨基]-1-氧代戊基]氨基]1-氧代乙基]氨基]-3-吡啶丙酸[USSN08/375,338，實施例1]作為陽性對照包含在每一個板中。純化的Ⅱb/Ⅲa受體試驗材料從過時的血小板純化人血纖蛋白原受體(αvβ3)(Pytela,R.,Pierschbacher,M.D.,Argraves,S.,Suzuki,S.和Rouslahti,E.“精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸粘附受體”，酶學中的方法，144∶475-489(1987)]。如同在Yatohgo,T.,Izumi,M.,Kashiwagi,H.和Hayashi,M.,“通過肝素親合層析法對來自人血漿中玻連蛋白的新的純化方法”，細胞結構與功能，13∶281-292(1988)中描述的那樣，將來自新鮮冷凍的血漿的人玻連蛋白純化。如同以前描述的那樣(Charo,I.F.,Nannizzi,L.,Phillips,D.R.,Hsu,M.A.,Scarborough,R.M.,“通過GPⅢa肽抑制結合于GPⅡb/Ⅲa的血纖蛋白原”，J.Biol.Chem.266(3)(1991):1415-1421)，通過將Pierce化學公司(Rockford,IL)的NHS-生物素與純化的玻連蛋白偶合來制備生物素化的人玻連蛋白。從Sigma(St.Louis,MO)得到試驗緩沖液、OPD底物片和RIA級別BSA。從Calbiochem(La Jolla,CA)得到抗生物素抗體。從Flow Labs(McLean,VA)得到Linbro微量滴定板。從Sigma(St.Louis,MO)得到ADP試劑。方法固相受體試驗這個試驗與Niiya,K.,Hodson,E.,Bader,R.,Byers-Ward,V.Koziol,J.A.,Plow,E.F.和Ruggeri,Z.M.,“由血小板活化引起的膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa復合物的增加的表面表達血纖蛋白原結合與血小板聚集的關聯”，血液，70(1987):475-483中報道的基本相同。在含有1.0mM的Ca++、Mg++和Mn++,pH7.4的Tris緩沖的鹽水(TBS+++)中，將純化的人血纖蛋白原受體(αvβ3)從貯備液稀釋至1.0μg/mL。將稀釋的受體以100μL/孔(100ng受體/孔)的量立即轉移至Linbro微量滴定板中。把這些板密封并在4℃下孵育過夜以使受體結合到孔上。所有其余的步驟在室溫下進行。把這些試驗板排空并加入200μL在TBS+++中的1％RIA級別的BSA(TBS+++/BSA)，以封閉暴露的塑料表面。隨后孵育2小時，使用96孔板洗滌器，用TBS+++洗滌這些試驗板。在貯備液濃度2mM下開始并且使用在TBS+++/BSA作為稀釋液中的2nM生物素化的玻連蛋白，制備受試化合物和對照組的對數級數稀釋液。用CETUS Propette自動機進行使標記的配基與受試(或者對照組)配基預先混合，并且隨后將50μL等分試樣轉移至試驗板上；所述標記的配基的最終濃度為1nM并且受試化合物的最高濃度為1.0×10-4M。競爭作用發生兩小時后，如同以前那樣用板洗滌器洗滌所有的孔。在TBS+++/BSA中，將親合純化的辣根過氧化物酶標記的山羊抗生物素抗體稀釋為1∶3000并且將125μL加入到每一個孔中。30分鐘后，洗滌這些板并在100mM/L枸櫞酸緩沖液(pH5.0)中與ODD/H2O2底物一起孵育。在450nm波長下，用微量滴定板讀數器讀取這些板并且當最大結合對照組孔達到大約1.0的吸收度時，記錄最終的A450用于分析。使用以EXCELJ電子表格程序寫出的宏分析這些數據。測定平均值、標準偏差和％CV用于重復試驗濃度。將平均A450值標準化為四個最大結合對照組的平均值(不加入競爭劑)(B-MAX)。使標準化的數值經四個參數曲線擬合算法[Rodbard等，Int.Atomic Energy Agency,Vienna，第469頁(1977)]，在半-log標度上作圖表示，并且計算相應于生物素化的玻連蛋白的最大結合的50％抑制率的濃度(IC50)和相應的R2被報道用于在最高試驗濃度下呈現大于50％抑制率的那些化合物；另外，據報道所述IC50大于最高試驗濃度。為有效的αvβ3拮抗劑(IC50在3-10nM范圍內)的β-[[2-[[5-[(氨基亞氨基甲基)氨基]-1-氧代戊基]氨基]-1-氧代乙基)氨基]-3-吡啶丙酸[USSN08/375,338，實施例1]作為陽性對照包含在每一個板中。人血小板富集血漿試驗從志愿者中選擇健康的不服用阿司匹林供血者。如同在Zucker,M.B．“通過光量法測量血小板聚集”，酶學中的方法169(1989):117-133中描述的那樣，收集富血小板血漿并隨后實施ADP誘導的血小板聚集試驗。使用翼形膠粘帶的標準靜脈穿刺術的技術使抽取45mL全血進入到含有5mL的3.8％枸櫞酸三鈉鹽的60mL注射器中。隨后在注射器中徹底混合，將抗凝全血轉移至50mL錐形聚乙烯試管中。在室溫下，于200xg下將該血離心12分鐘，以沉淀非血小板細胞。將富血小板血漿轉移到聚乙烯試管中并在室溫下貯存備用。于2000xg下將剩余的血第二次離心15分鐘得到貧血小板血漿。血小板計數一般為每微量滴定管300,000至500,000。將富血小板血漿(0.45mL)等分加入硅化杯中并在37℃下攪拌(1100rpm)1分鐘，然后加入50μL預先稀釋的受試化合物。在混合1分鐘后，通過加入50μL的200μM ADP引發聚集。于Payton雙道聚集儀(Payton Scientific,Buffalo,NY)上記錄聚集3分鐘。對于一系列受試化合物稀釋液的最大應答(鹽水對照組)抑制百分率用于測定劑量應答曲線。所有化合物重復試驗并對于在試驗的最高濃度下呈現50％或者更大抑制作用的化合物的劑量應答曲線作圖計算半數最大抑制作用濃度(IC50)，另外據報道所述IC50比最高試驗濃度更大。
權利要求
1．下式化合物或者它們的藥學上可接受的鹽 其中 為含有1至4個選自O、N或S的雜原子的、任選不飽和的5-8元單環雜環，其中X1選自CH、CH2、N、NH、O和S；A為 其中Y1選自N-R2、O和S；R2選自H、烷基、芳基、羥基、烷氧基、氰基、硝基、氨基、鏈烯基、鏈炔基、酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、鹵代烷基羰基、鹵代烷氧基羰基、烷硫基羰基、芳硫基羰基、酰氧基甲氧基羰基、以一個或多個選自以下的取代基任選取代的烷基低級烷基、鹵素、羥基、鹵代烷基、氰基、硝基、羧基、氨基、烷氧基、芳基或以一個或多個鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、氰基、烷基磺酰基、烷硫基、硝基、羧基、氨基、羥基、磺酸、磺酰胺、芳基、稠合的芳基、單環雜環或稠合的單環雜環任選取代的芳基，以一個或多個選自以下的取代基任選取代的芳基鹵素、鹵代烷基、羥基、低級烷基、烷氧基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、氰基、硝基、烷硫基、烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、羧基衍生物、氨基、芳基、稠合的芳基、單環雜環和稠合的單環雜環，單環雜環和以一個或多個選自以下的取代基任選取代的單環雜環鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、氨基、硝基、羥基、羧基衍生物、氰基、烷硫基、烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、芳基或稠合的芳基；或者R2與R7一起形成以一個或多個選自低級烷基、硫代烷基、烷基氨基、羥基、酮基、烷氧基、鹵代、苯基、氨基、羧基或羧酸酯、螺二氧戊環和稠合的苯基的取代基任選取代的含有兩個氮的4-12元雜環；或R2與R7一起形成含有一個或多個選自O、N和S的雜原子的、任選不飽和的4-12元雜環；或R2與R7一起形成以一個或多個選自低級烷基、苯基、烷氧基和羥基的取代基任選取代的5-9元雜芳環；或者R2與R7一起形成與芳基或雜芳基環稠合的5元雜芳環；R7(當不與R2一起時)和R8獨立選自H，烷基，鏈烯基，鏈炔基，芳烷基，氨基，烷基氨基，羥基，烷氧基，芳基氨基，酰氨基，烷基羰基，芳基羰基，烷氧基羰基，芳氧基，芳氧基羰基，鹵代烷基羰基，鹵代烷氧基羰基，烷硫基羰基，芳硫基羰基，酰氧基甲氧基羰基，環烷基，雙環烷基，芳基，酰基，苯甲酰基，以一個或多個選自以下的取代基任選取代的烷基低級烷基、鹵素、羥基、鹵代烷基、氰基、硝基、羧基衍生物、氨基、烷氧基、硫代、烷硫基、磺酰基、芳基、芳烷基、以一個或多個選自以下的取代基任選取代的芳基鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、烷硫基、鹵代烷硫基、硫代、羥基、氰基、硝基、羧基衍生物、芳氧基、酰氨基、酰基氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟代烷氧基、三氟代甲基、磺酰基、烷基磺酰基、鹵代烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、芳基、稠合的芳基、單環雜環、稠合的單環雜環，以一個或多個選自以下的取代基任選取代的芳基鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、烷硫基、鹵代烷硫基、硫代、羥基、氰基、硝基、羧基衍生物、芳氧基、酰氨基、酰基氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟烷氧基、三氟甲基磺酰基、烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、芳基、稠合的芳基、單環雜環或稠合的單環雜環，單環雜環，以一個或多個選自鹵素、鹵代烷基、低級烷基、烷氧基、芳氧基、氨基、硝基、羥基、羧基衍生物、氰基、烷硫基、烷基磺酰基、芳基、稠合的芳基的取代基任選取代的單環雜環，單環和二環雜環烷基，其中R10選自烷基、芳基和單環雜環的-SO2R10，所有基團以一個或多個選自鹵素、鹵代烷基、烷基、烷氧基、氰基、硝基、氨基、酰基氨基、三氟烷基、酰氨基、烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基、烷基磺酰基氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟甲基硫代、三氟烷氧基、三氟甲基磺酰基、芳基、芳氧基、硫代、烷硫基和單環雜環的取代基任選取代；和其中R10如上定義的 ；或者NR7和R8一起形成含有單氮的4-12元單環或雙環，其以一個或多個選自低級烷基、羧基衍生物、芳基或羥基的取代基任選取代并且其中所述環任選含有一個選自O、N和S的雜原子；R5選自H、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芐基和苯乙基；或者A為 其中Y2選自烷基，環烷基，雙環烷基，芳基，單環雜環，由也能以一個或多個選自鹵代、鹵代烷基、烷基、硝基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳基或稠合的芳基的取代基任選取代的芳基所任選取代的烷基，以一個或多個選自鹵代、鹵代烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳基、稠合的芳基、硝基、亞甲二氧基、亞乙二氧基或烷基的取代基任選取代的芳基，鏈炔基，鏈烯基，-S-R9和-O-R9，其中R9選自H、烷基、芳烷基、芳基、鏈烯基和鏈炔基，或者R9與R7一起形成以低級烷基、羥基、酮基、苯基、羧基或羧酸酯和稠合的苯基任選取代的、含有單氮和單硫或單氧的4-12元雜環，或者R9與R7一起為噻唑、噁唑、苯并噁唑或苯并噻唑；和R5和R7如上定義；或者Y2(當Y2為碳時)與R7一起形成以烷基、芳基、酮基或羥基任選取代的、含有單氮或二氮的4-12元環；或者A為 其中R2和R7一起形成以一個或多個選自低級烷基、羥基、烷氧基、酮基、苯基或羧基衍生物的取代基任選取代的含有二氮的5-8元雜環；并且R8選自烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、鹵代烷基羰基、鹵代烷氧基羰基、烷硫基羰基、芳硫基羰基或酰氧基甲氧基羰基；和R5如上定義；或者R2和R7一起形成雜芳環例如咪唑或嘧啶酮；或者A為 其中R2和R7一起形成以羥基、酮基、苯基或烷基任選取代的含有二氮的5-8元雜環；和R8選自烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、鹵代烷基羰基、鹵代烷氧基羰基、烷硫基羰基、芳硫基羰基和酰氧基甲氧基羰基；Z1為一個或多個選自H、烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、鹵素、鹵代烷基、鹵代烷氧基、硝基、氨基、烷基氨基、酰基氨基、二烷基氨基、氰基、烷硫基、烷基磺酰基、羧基衍生物、三鹵代乙酰胺、乙酰胺、酰基、芳基、稠合的芳基、環烷基、硫代、單環雜環、稠合的單環雜環和A的取代基，其中A如上定義；V選自-N-(R6)-，其中R6選自H、低級烷基、環烷基、芳烷基、芳基和單環雜環；或者R6與Y一起形成含有單氮的4-12元環；Y、Y3、Z和Z3獨立選自氫、烷基、芳基和環烷基；或者Y與Z一起形成環烷基；或者Y3和Z3一起形成環烷基；n為整數1、2或3；t為整數0、1或2；p為整數0、1、2或3；R為其中X選自O、S和NR4的X-R3，其中R3和R4獨立選自氫、烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基、芳基、芳基烷基、糖類、甾體化合物、聚烷基醚、烷基酰氨基、烷基N,N-二烷基酰氨基、新戊酰氧基甲基；和在游離酸的情況下所有它們的藥學上可接受的鹽；R1選自氫、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、羧基衍生物、鹵代烷基、環烷基、單環雜環、以烷基、鹵素、鹵代烷基、氰基、羥基、芳基、稠合的芳基、硝基、烷氧基、芳氧基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、磺酰胺、硫代、烷硫基、羧基衍生物、氨基、酰氨基任選取代的單環雜環；以一個或多個以下基團任選取代的烷基鹵代、鹵代烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、鏈炔基、鏈烯基、烷基、芳硫基、烷基亞砜、烷基磺酰基、芳基亞砜、芳基磺酰基、氰基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、酰基酰胺、羧基衍生物、磺酰胺、磺酸、膦酸衍生物、次膦酸衍生物、在芳基環上均用鹵代、烷基、鹵代烷基、氰基、硝基、羥基、羧基衍生物、烷氧基、芳氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、酰氨基、芳基、稠合的芳基、單環雜環任選取代的芳基、芳硫基、芳基亞砜或芳基砜；和稠合的單環雜環、單環雜環硫代、單環雜環亞砜和單環雜環砜，其能夠用鹵代、鹵代烷基、硝基、羥基、烷氧基、稠合的芳基或烷基任選取代；烷基羰基、鹵代烷基羰基和芳基羰基；在一個或多個位置上用以下基團任選取代的芳基，包括鹵代、鹵代烷基、烷基、烷氧基、芳氧基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、烷硫基、鹵代烷硫基、硫代、羥基、氰基、硝基、酰氧基、羧基衍生物、羧基烷氧基、酰氨基、酰基氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟烷氧基、三氟甲基磺酰基、烷基磺酰基、磺酸、磺酰胺、芳基、稠合的芳基、單環雜環和稠合的單環雜環和 ，其中R7和R8如上定義并且條件是與所述氮一起，R7和R8包括氨基酸；和R11選自H、烷基、芳烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基或鹵代鏈炔基或者R11與Y一起形成含有單氮的4-12元環；或者它們的藥學上可接受的鹽。
2．權利要求1的下式化合物 其中 其中R32為H、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基，其中所述烷基由一個或多個選自羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基-或烷基-磺酰基、羧基和羧基衍生物的取代基任選取代。
3．權利要求2的化合物，其中所述化合物選自
4．權利要求1的下式化合物 其中
5．權利要求4的化合物，其中所述化合物選自
6．權利要求1的下式化合物 其中
7．權利要求6的化合物選自
8．權利要求1的化合物，其中所述化合物為下式化合物 其中
9．權利要求8的下式化合物
10．權利要求1的下式化合物 其中
11．權利要求10的下式化合物
12．藥用組合物，包括治療有效量的權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11的化合物和藥學上可接受的載體。
13．在需要這樣的治療的哺乳動物上治療由αvβ3介導的疾病的方法，包括給予治療上有效抑制αvβ3量的權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11的化合物。
14．權利要求13的方法，其中所治療的疾病為腫瘤轉移。
15．權利要求13的方法，其中所治療的疾病為實體腫瘤的生長。
16．權利要求13的方法，其中所治療的疾病為血管生成。
17．權利要求13的方法，其中所治療的疾病為骨質疏松癥。
18．權利要求13的方法，其中所治療的疾病為惡性腫瘤體液高鈣血癥。
19．權利要求13的方法，其中所治療的疾病為平滑肌細胞遷移。
20．權利要求13的方法，其中抑制再狹窄。
21．權利要求13的方法，其中所治療的疾病為類風濕性關節炎。
22．權利要求13的方法，其中所治療的疾病為黃斑變性。
全文摘要
本發明涉及一類由式(Ⅰ)表示的化合物或者它們的藥學上可接受的鹽,含有這類化合物的藥用組合物和治療由α
文檔編號A61P3/14GK1304406SQ99807091
公開日2001年7月18日 申請日期1999年4月9日 優先權日1998年4月10日
發明者N·S·錢德拉庫馬, B·N·德賽, B·德瓦達斯, R·胡夫, I·K·克漢納, S·N·勞, J·G·里科, T·E·羅杰斯, P·G·魯明斯基, M·A·魯瑟爾, Y·于, A·F·加斯基, J·W·馬勒查, J·M·米亞施羅 申請人:G·D·瑟爾公司