專利名稱：咖啡酸、阿魏酸拮抗內皮素生物效應的新用途的制作方法
技術領域：
本發明是關于咖啡酸、阿魏酸的新制藥用途發明，具體地說是咖啡酸、阿魏酸在制備對內皮素-1生物效應有拮抗作用的藥物中的應用，屬于藥物領域。
咖啡酸和阿魏酸在化學上均屬于苯乙烯型化合物，二者的區別為苯環3位上的基團，咖啡酸的苯環3位上是羥基，而阿魏酸的苯環3位上是為甲氧基。咖啡酸和阿魏酸為我國傳統中醫藥中活血化淤藥的重要成分，如當歸、川芎嗪等藥材中含量較多。
內皮素是國際上最新報道的一種生物活性物質。許多心腦血管疾病的發生發展與內皮素有著密切的關系，如高血壓、冠心病、腦血管意外、心力衰竭等，內皮素參與這些疾病的病理、生理過程。許多國家已經把內皮素作為高血壓、冠心病、腦血管意外、心力衰竭等疾病的一項病理指標，并通過調節內皮素的生物作用來治療上述疾病。另外內皮素還與其他疾病如器官移植后的慢性排異反應、子癇、肝炎等有關。因此，篩選一種能夠拮抗內皮素生物活性的藥物是目前非常重要而有意義的事情。
本發明人基于大量的實驗研究，發現了咖啡酸和阿魏酸對內皮素的拮抗作用，從而完成了本發明。
因此，本發明目的是提供咖啡酸和阿魏酸的新制藥用途。
如上所述，咖啡酸和阿魏酸在化學上均屬于苯乙烯型化合物，其結構式分別為
咖啡酸的化學結構式阿魏酸的化學結構式本發明人通過實驗研究證明，咖啡酸、阿魏酸對內皮素-1(ET-1)的生物效應具有良好的拮抗作用，主要表現在(1)咖啡酸、阿魏酸對內皮素-1(ET-1)引起小鼠急性死亡的保護作用。
(2)咖啡酸和阿魏酸對ET-1縮血管效應的拮抗作用。
(3)咖啡酸和阿魏酸對ET-1升血壓效應的拮抗作用。
(4)咖啡酸和阿魏酸對ET-1致血管平滑肌細胞增殖效應的拮抗作用。
咖啡酸和阿魏酸是兩種在結構上非常接近的化合物，按照常規的藥物制劑工藝，可以將其作為有效成分，加入常規的賦性劑，制備成任何一種適合于臨床上使用的藥物制劑。例如，丸劑、片劑、膠囊劑、口服液體制劑、注射劑、散劑、膏劑、氣霧劑等。制備這些藥物制劑是本領域普通技術人員的常規性技術活動。
由于本發明人通過實驗研究發現了咖啡酸和阿魏酸的上述新藥理作用，因此，按照制藥領域的常規制劑工藝所制成的任何一種適合于臨床使用的藥物劑型，均具有如下作用(1)對內皮素-1引起小鼠急性死亡的保護作用。
(2)對ET-1縮血管效應的拮抗作用。
(3)對ET-1升血壓效應的拮抗作用。
(4)對ET-1致血管平滑肌細胞增殖效應的拮抗作用。
因此，本發明提供了咖啡酸、阿魏酸的如下新制藥用途咖啡酸、阿魏酸在制備對內皮素具有拮抗作用的藥物中的應用；咖啡酸、阿魏酸在制備對內皮素-1引起小鼠急性死亡具有保護作用的藥物中的應用；咖啡酸、阿魏酸在制備對內皮素-1縮血管效應具有拮抗作用的藥物中的應用；咖啡酸、阿魏酸在制備對內皮素-1升血壓效應具有拮抗作用的藥物中的應用；咖啡酸、阿魏酸在制備對內皮素-1致血管平滑肌細胞增殖效應具有拮抗作用的藥物中的應用。
咖啡酸、阿魏酸在制備成藥劑時，可以加入藥物賦性劑，如，填充劑、崩解劑、溶劑、防腐劑、矯味劑、增稠劑、乳化劑等。
在將咖啡酸、阿魏酸在制備成藥劑時，藥劑中所含咖啡酸或阿魏酸有效成分的量一般為用于人體的治療有效量。
本發明所說的藥劑優選含有0.1-99.9％重量份的咖啡酸或阿魏酸；本發明所說的藥劑優選含有10-90％重量份的咖啡酸或阿魏酸；本發明所說的藥劑優選含有15-80％重量份的咖啡酸或阿魏酸；本發明所說的藥劑優選含有20-70％重量份的咖啡酸或阿魏酸；
將本發明所說的咖啡酸或阿魏酸制成膠囊劑的方法是取咖啡酸或阿魏酸純品，加入賦性劑，入攪拌機混勻，裝膠囊，制得膠囊劑。
將本發明所說的咖啡酸或阿魏酸制成片劑的方法是取咖啡酸或阿魏酸純品，加入賦性劑，混合均勻，造粒，整粒，壓片，包糖衣，得片劑。
下述的藥理實驗進一步說明了咖啡酸或阿魏酸的新制藥用途。
實驗例1 咖啡酸、阿魏酸對內皮素-1引起小鼠急性死亡的保護作用昆明種小鼠(購自北京醫科大學實驗動物科學部)90只，雌雄各半，體重20±2.0g，禁食不禁水16小時后，自腹腔注射咖啡酸、阿魏酸30分鐘后(給藥的劑量范圍為0.1～100mg/kg)，從尾靜脈注射FT-1 12nmol/kg，記錄動物的死亡數及死亡時間；對照組自腹腔注射與藥物處置組等同量的生理鹽水后30分鐘，從尾靜脈注射ET-112nmol/kg，記錄動物的死亡數及死亡時間，并將數據做統計學處理。
咖啡酸和阿魏酸均能有效地拮抗ET-1致小鼠急性死亡作用，死亡時間與對照組相比有顯著性意義；在給藥劑量為0.1～100mg/kg的范圍內，該作用具劑量依賴性；藥物濃度相同時，阿魏酸的拮抗效能大于咖啡酸。
表1.咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1致小鼠急性死亡的保護作用藥物 給藥劑量動物數動物死亡時間(只) (min)ET-1 12nmol/kg102.24±1.02咖啡酸+ET-1 100mg/kg 1012.72±3.11***10mg/kg 103.19±0.88*1mg/kg 102.58±0.21*0.1mg/kg 102.33±0.19*阿魏酸+ET-1 100mg/kg 1014.37±1.89***10mg/kg 105.54±1.06**1mg/kg 104.04±0.50**0.1mg/kg 103.33±1.84*實驗例2 咖啡酸和阿魏酸對ET-1縮血管效應的拮抗作用雄性SD大鼠，體重230±10g，將大鼠擊昏后快速摘取胸主動脈，經分離結締組織后，剪成2～3mm寬的血管環，分別置于Krebs-Henseleit生理溶液(K-H液，pH7.40±0.05，95％O2+5％CO2，37.0±0.5℃)中，加2g基礎張力、用10-7mol/L去甲腎上腺素預激二次、平衡、穩定后，加入ET-1 10-9mol/L，待達到最大收縮效應后，分別加入不同濃度的咖啡酸、阿魏酸和CA-1201(用2％DMSO為溶媒，實驗用2％DMSO作對照)，經張力換能器連臺式平衡記錄儀(上海大華儀表廠)，記錄血管等張收縮與舒張情況。
咖啡酸和阿魏酸能明顯地拮抗ET-1的縮血管效應，且給拮抗作用具劑量依賴性；藥物劑量-效應曲線經sigmiodal方法擬合后(參見

圖1)，從所得出的效應動力學參數可見，阿魏酸拮抗ET-1縮血管的效能較咖啡酸強(p＜0.05)。
表2.咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1縮血管效應動力學參數藥物 動力學參數Emax(％) IC50(×10-6mol/L)咖啡酸70.95±6.301.80±0.80阿魏酸92.10±0.810.063±0.005實驗例3 咖啡酸和阿魏酸對ET-1升血壓效應的拮抗作用雄性SD大鼠，體重230±10g，禁食不禁水18h后，咖啡酸和阿魏酸不同劑量尾靜脈注射后，立即按6μg/kg量自尾靜脈注射ET-1，用阻抗法測定大鼠尾動脈收縮壓變化(SBP)；對照組以等量生理鹽水處理后尾靜脈注射與藥物處置組相同劑量的ET-1；并將收縮壓變化值與對照組比較。
咖啡酸和阿魏酸能明顯地拮抗ET-1靜脈注射后對大鼠的升血壓效應；與對照組相比，在給予ET-1后30分鐘內，升壓效應明顯減弱，隨后的時間內其作用與對照組相比無顯著性差異(p＞0.05)(參見圖2)。
實驗例4咖啡酸和阿魏酸對ET-1致血管平滑肌細胞增殖效應的拮抗作用取第5代已長成致密單層的兔主動脈平滑肌細胞(RAVSMC)以傳代培養法調整細胞數為1×105·ml-1，接種于96孔培養板(100μ1·孔-1)，37℃、5％CO2孵育24h，吸去培養液，換以1％小牛血清的DMEM培養液，加入ET-1(10nmol·L-1)后繼續孵育不同時間后，得到ET 1作用與RAVSMC的時間-效應曲線；加入咖啡酸和阿魏酸后考察其對ET-1致平滑肌細胞的增殖作用。以結晶紫染色后用酶標檢測儀在570nm處測定各孔光密度(OD)值。4.1細胞形態觀察經結晶紫固定染色的培養板晾干后，直接在倒置顯微鏡下觀察，未見明顯的細胞形態改變。4.2 ET-1刺激RAVSMC增殖的時間-效應關系表3.ET-1引起RAVSMC增殖的時間效應時間 增殖率(d)(％)133.3±25.0**250.0±13.6***740.0±9.28***p＞0.05；**p＜0.05；***p＜0.01由表3可見，ET-1可刺激RAVSMC增殖，于第2天達峰值，第1、2和第7天的數值與對照組相比，細胞增殖率的增加有顯著性意義；該作用呈時間依賴性。4.3咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1引起RAVSMC增殖由ET-1引起RAVSMC增殖的時間-效應關系，10nmol·L-1ET-1與咖啡酸、阿魏酸和CA-1201共孵第2天測定OD(570nm)值，結果見表4。
表4.咖啡酸、阿魏酸1對ET-1引起RAVSMC增殖的抑制作用組別OD值(×102)10-1110-1010-910-8空白 1.6±0.5ET-1 2.4±0.2Δ咖啡酸+ET-11.2±0.1***1.2±0.4***1.2±0.8***0.9±0.1***阿魏酸+ET-11.4±0.3***1.5±0.7***1.2±0.2***1.2±0.4***Δ與空白組相比，p＜0.05；*p＞0.05；**p＜0.05；***p＜0.01由表4可見，咖啡酸和阿魏酸可顯著性地拮抗ET-1引起的RAVSMC增殖，且該作用具劑量依賴性。
從理論上推測，內皮素可能是中醫氣滯血淤證的病因之一。本實驗結果可以得出咖啡酸、阿魏酸為內皮素拮抗劑，對內皮素相關性疾病的治療及探索氣滯血淤的成因及對其治療會有很大的發展遠景。
實施例1取咖啡酸純品10克，加入100克淀粉，入攪拌機混勻，裝膠囊，每粒裝藥粉1克，制得膠囊劑。
實施例2取阿魏酸純品100克，加入淀粉500克，混合均勻，造粒，整粒，壓片，包糖衣，得片劑。
附圖1是咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1縮血管作用劑量-效應曲線。
附圖2是咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1升血壓作用時間-效應曲線。
權利要求
1.咖啡酸在制備對內皮素具有拮抗作用的藥物中的應用。
2.咖啡酸在制備對內皮素引起小鼠急性死亡具有保護作用的藥物中的應用。
3.咖啡酸在制備對內皮素縮血管效應具有拮抗作用的藥物中的應用。
4.咖啡酸在制備對內皮素升血壓效應具有拮抗作用的藥物中的應用。
5.咖啡酸在制備對內皮素致血管平滑肌細胞增殖效應具有拮抗作用的藥物中的應用。
6.阿魏酸在制備對內皮素具有拮抗作用的藥物中的應用。
7.阿魏酸在制備對內皮素引起小鼠急性死亡具有保護作用的藥物中的應用。
8.阿魏酸在制備對內皮素縮血管效應具有拮抗作用的藥物中的應用。
9.阿魏酸在制備對內皮素升血壓效應具有拮抗作用的藥物中的應用。
10.阿魏酸在制備對內皮素致血管平滑肌細胞增殖效應具有拮抗作用的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了咖啡酸和阿魏酸的藥物新用途,具體說是咖啡酸或阿魏酸在制備對內皮素具有拮抗作用的藥物中的應用,包括咖啡酸或阿魏酸在制備對內皮素引起小鼠急性死亡具有保護作用的藥物中的應用;咖啡酸或阿魏酸在制備對內皮素縮血管效應具有拮抗作用的藥物中的應用;咖啡酸或阿魏酸在制備對內皮素升血壓效應具有拮抗作用的藥物中的應用;咖啡酸或阿魏酸在制備對內皮素致血管平滑肌細胞增殖效應具有拮抗作用的藥物中的應用。
文檔編號A61K31/185GK1192357SQ9810087
公開日1998年9月9日 申請日期1998年3月4日 優先權日1998年3月4日
發明者王峰, 王京媛, 劉敏, 季小慎, 楊連春, 李菲, 呂敏, 郝勇, 程言亮 申請人:中國人民解放軍空軍總醫院科技開發部