專利名稱：：對弱疫苗抗原提供胸腺相關幫助的脂質體的制作方法
技術領域：
：本發明涉及通過把靶抗原與一附加組分一起摻入一脂質體，從而提高對靶抗原的抗體反應，其中該組分至少含有一T輔助淋巴細胞識別部位。一個疫苗抗原通過誘導生物產生免疫反應來使該生物具有對感染的免疫性，因此，抗原作用的大小取決于它們誘導的免疫反應強度的高低。現有強度可變的固有的強和弱的抗原。此外，抗原可以分類為胸腺(“T”)相關或T獨立抗原，這基于它們是否能夠從T細胞引發出輔助活力。這種T細胞活力與IgG和IgA類抗體的產生有關;T獨立抗原誘導IgM抗體的產生，但不誘導B細胞，以控制IgG或IgA抗體的合成與否。產生IgM類免疫球蛋白在實驗動物和人類中是暫時的反應，僅持續幾個月;但是產生IgG和IgA類抗體通常持續幾年。因此，引出對特殊抗原的T相關反應是有益的。糖類或多糖類基抗原是T獨立抗原，并且僅限于用作兒童疫苗。同樣許多表示抗體識別部位的多肽是T獨立抗原，因此，同樣也不能產生對一種疫苗所希望的IgG和IgA抗體反應。人們已經知道，通過把抗原接合(共價附著)到一個提高免疫反應的輔助蛋白質上，一個較強的抗體反應可能引出一弱抗原。例如美國專利4761283表明，通過把該抗原接合到一細菌輔助蛋白上，對特定的細菌膠囊狀聚合物的弱的產生免疫性的反應被提高，細菌輔助蛋白本身誘導一抗原反應。用一毒素作輔助蛋白是人所共知的，例如，用白喉類毒素。但是，用這樣一個有毒的輔助蛋白會引起一個問題，因為該輔助蛋白的內源毒性可能限制抗原-輔助蛋白接合體的劑量，從而限制了它的有效性。生物對引起抗原決定部位抑制效應的輔助蛋白的早期免疫接種作用會抑制對靶抗原的免疫反應，這也是眾所周知的。當宿主生物準備對輔助蛋白反應時，該生物將在它可能開始對靶抗原免疫反應前清除該靶抗原-輔助蛋白接合體。這些以前應用的接合體是通過把抗原共價連接到載體輔助蛋白上來形成的。免疫反應的提高對T獨立抗原是特別重要的，T獨立抗原可以接合到一包含至少一個T輔助細胞識別部位的肽上，從而得到一個對T獨立抗原的T相關反應。但是，現在應用的共價連接接合體效果有限，這是由于共價結合過程中帶來的結構性的限制(即構象變化，結合部位潛在的不可及度，以及無法改變這些組分比率)。此外，這些接合體可能存在劑量上的限制以及抗原決定部位抑制效應。脂質體是由類脂分散在水介質中形成的膜狀的泡。制備脂質體的方法對該領域的普通技術人員來說是公知的，并且作為例子在作為參考文獻列出的下述專利(而不限于這些專利)中被加以說明美國專利4565696和4235871。脂質體具有對一活體內載體所需的幾個性質，如低毒性，低免疫原性，并具有生物降解能力。它還表明在實驗動物中脂質體可提高對抗原的抗體反應。抗原或者被俘獲在脂質體的水溶性的部分，或者與雙層相締合。例如，美國專利4565696描述了對把免疫原共價連接到脂質體的表面雙層上，并因此加強該免疫反應的步驟。本發明涉及提供通過把該抗原與至少一個輔助肽(如至少包含一T細胞識別部位的輔助肽)一起摻進一種脂質體制劑中去，從而提高對一靶抗原的抗原反應。本發明可用于提高所引出的對任何抗原的抗原反應;包括(但不限于)聚多糖類抗原，如流感嗜血桿菌(Hemophilusinfluenza)、腦膜炎雙球菌(Meningococci)、肺炎雙球菌(Pneumocicci)和鏈球菌(Streptococci)，以及肽類，如肝炎B表面蛋白，HIV表面蛋白，流行性感冒病毒蛋白，副流行感冒病毒肽類或血球凝集素，以及霍亂表面糖蛋白。通過把靶抗原附著到包含一活性官能度的許多種不同的類脂材料之一上來，可以把靶抗原(人們希望提高對它的免疫反應)摻入到脂質體泡中去。這些類脂材料包括磷脂酰醚或磷脂酰酯(例如磷脂酰乙醇胺和磷脂酰膽堿)、甘油酯類、腦苷脂類、神經節苷脂類、神經鞘磷脂類、以及類固醇類(例如，膽固醇)等等。美國專利4565696和4235871公開了用于制備脂質體的其它類脂材料。另一方面，如果靶抗原帶有一親脂基團的話，該靶抗原可以通過疏水力摻入到脂質體泡中去，見美國專利4448765，或者，一疏水基團可附著到該抗原上。也可用共價相互作用或疏水相互作用使肽摻入進去，例如，流行性感冒病毒的血球凝集素(HA)蛋白是由兩個多肽鏈(HA1和HA2)組成。HA2多肽鏈包含一個靠近該多肽羧基末端的疏水氨基酸的序列，并至少包含一個T輔助細胞識別部位。這樣，HA2多肽鏈可以通過貫通膜疏水區域摻入到脂質體中去。美國專利4448765描述了流行性感冒病毒亞單位摻入到脂質體中去，該專利在此列入以供參考。為了促進與脂質體膜的締合，疏水組分可以交替地加到該輔助肽中去，或者該輔助肽可以直接共價地附著到包含一活性官能度的類脂材料上。本發明與以前所用的抗原載體接合體(例如在美國專利4761283中所述的接合體)相比，有幾個優點。在共價結合的接合體中，由于共價鍵的作用，在載體蛋白構象中的變更和在抗原構象中的變更都是可能的。在本發明中這個缺點可以克服，在此，靶抗原和輔助肽與脂質體締合。本發明克服了與已有技術中存在的毒性和抗原決定部位抑制效應。本發明使用的是無毒類脂，并且最好用離析出來的、無毒的含肽的T輔助部位。本發明比以前所用的接合體的優越之處還在于它考慮到了對抗原密度以及對靶抗原對輔助肽的比的改善，并且允許多于一個攜帶輔助肽的T輔助細胞識別部位的摻入。這些因素可能影響對靶抗原所產生的特定抗體的數量。當接合體由合成法制成時，因為兩種組分一定是由共價鍵結合，這些因素不容易控制，導致對因素的數目和類型的實際限制，當保持靠近識別部位時，這些因素結合在一起。此外，本發明相對于接合體有優點，因為現已表明抗原摻入到脂質體中可以提高抗體的產量。這樣，本發明用脂質體的這個性質附帶地增進了對一給定抗原(并且特別是對不能產生足夠抗體的弱抗原)抗體的產量。本發明的脂質體泡提供了一種設計合成疫苗的新方法。靶抗原和輔助肽(或肽)的多重復制可通過一個快速簡便的方法來實現。除了能有效地提高對靶抗原的免疫接種效果之外，這個方法還易于試驗抗原和輔助肽。例如，本發明提供了一簡單的載體，用于比較各種T輔助肽增進對一給定抗原的免疫原反應的能力。這樣，本發明也提供了一個用于探測免疫反應機理的有用載體。根據下面本發明的現在優選的實施例的說明，其它和進一步的實施例、特點和優點將是明顯的。本發明的疫苗組成可以用于增進對任何靶抗原，特別適于T獨立抗原的免疫反應。本發明以DNP-CapPE為例，它作為T獨立抗原，對之人們已進行了充分的研究。但是，對本領域普通技術人員來說，本發明對任何抗都顯然適用。在本發明優選的實施例中，一合成的疫苗被合成，它誘導對一T相關抗原的T相關免疫反應。靶抗原與包含一T細胞識別部位的一個輔助肽或多個肽一起摻入到脂質體的制劑中。含有一T細胞識別部位的任何肽都可以用作輔助肽，例如，天然的或已解毒的來處類毒素(如流感、破傷風、白喉綠濃桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、百日咳和大腸桿菌)的肽。可以用一個簡單的試驗來確定一候選肽是否包含一T細胞識別部位。這個肽與一種僅包含一B細胞抗決定部位的抗原(如DNP-CapPE抗原)一起被摻入到脂質體制劑中。在宿主生物中如有對所得到的脂質體制劑的IgG反應，那么這個肽就有T細胞識別部位，并可用作本發明的輔助肽。流感血球凝集素蛋白的HA2亞單位可以優選來用作輔助肽，因為它已被準確測定，并且已知其具有至少一個T輔助細胞識別部位而沒有B細胞識別部位。這樣，這個肽引起對一接合體抗原的T相關免疫反應，而不誘導自身的抗體反應。對本發明的功能，這個限制不是必須的;如果希望產生對輔助肽的免疫反應，那么包含一B細胞識別部位的任何輔助肽都可使用，或者除了對靶抗原的反應外，該反應也是可接受的。但是輔助肽最好是純T輔助細胞抗原決定部位。如果希望產生一細胞毒性反應，或者除了對靶抗原一個反應外，該反應也允許存在，那么同樣，任何包含一個T細胞毒性淋巴細胞識別部位的輔助肽也都適用。HA2亞單位作為輔助肽更合適，因為在接近羧基未端處它攜帶一個疏水的氨基酸序列，該序列常穿過該病毒的類脂被膜而延伸，這個貫通膜區域促進與脂質體類脂雙層的締合，并且HA2是定量地與脂質體泡締合的。如以前所討論的那樣，其它摻入輔助肽的方法也是可行的，如把肽共價地附著到一類脂上，或把一疏水氨基酸序列附著到肽的一端。對一個本專業的普通技術人員，很顯然，用于把輔助肽摻入到脂質體的各種方法都是可行的。挑選DNP-CapPE作靶抗原，因為對它已進行了充分的研究，并且它是一個T獨立抗原。這樣在下述的試驗中，由于輔助肽的作用，致使發生了對DNP-CapPE的T相關反應，本發明的脂質體制劑可用作在個體中增大免疫反應。術語“個體”意味著包括任何動物，哺乳動物比較合適，最好是狗、貓、母牛、馬或人。例1脂質體的制備多種類脂材料可用于實施本發明，包括(但不限于)磷脂酰醚或磷脂酰酯(例如，磷脂酰膽乙醇胺和磷脂酰膽堿)，甘油酯類，腦苷脂類，神經節苷酯類，神經鞘磷脂類，以及類固醇(例如，膽固醇)。下面是用磷脂酰膽堿制備脂質體的一個例子。當然，本領域的普通技術人員都知道只要考慮到靶抗原和輔助蛋白或蛋白的摻入，任何脂質體制劑技術都可以利用。在制備脂質體之前，可能需要按照公知的方法之一把靶抗原和/或輔助肽共價附著到類脂組分之一上，以實現摻入。由蛋黃中提取的磷脂酰膽堿(PC)(亞拉巴馬州Pelham的Avanti極性脂質體)(即EYPC)用于制備脂質體。將EYPC按所需要的量加到圓底燒瓶中，并用一個旋轉蒸發器(Buchi461)除去氯仿。干燥的類脂膜在無菌水或磷酸鹽緩沖溶液(PBS)中再懸浮，量要足夠產生10mM的EYPC溶液。當該DNP-CapPE抗原被摻入到脂質體中時，把N-2(2，4二硝基苯基)E-氨基已酰基磷脂酰乙醇胺(DNP-CapPE)加入到EYPC的氯仿溶液中，將從A/USSR-90/77H1N病毒的血細胞凝素中衍生出來的、純化的HA2亞單位(由紐約州Mt.Sinia的DorisBucher提供)也加到類脂膜中，用作在脂質體的包含物。通過在無菌PBS中該類脂混合物懸浮或通過在正辛基葡萄糖苷(在PBS中5%W/Vol)中溶解該類脂混合物，隨后對PBS透析16小時，形成脂質體。包含在制備的單個脂質體制劑中的DNP-CapPE和HA2的量根據實驗的需要而變。例2脂質體特性用I125HA2來檢驗HA2對脂質體結構的締合。為了檢驗DNP-CapPE對脂質體的摻入，把起始懸浮液的等分試樣(10ul)溶解在990ul甲醇中，在分光光度計上讀出360mM波長處的吸光度。在制劑中HA2締合百分比在隨后以PBS重結晶和透析過程中，沒有隨HA2的改變而明顯變化，一直在90%以上。在所有的制劑中，DNP-CappPE在制劑中的締合百分比在于95%。在各次注射之間沒有觀測到DNP的釋放。DNP-CapPE保持與脂質體結構的締合。例3免疫接種方案采用6-8周齡遠系繁殖的白化的IRC雌性小鼠(德克薩斯州休斯敦市T)，這些動物從尾靜脈取血，并給0.1毫升空白對照劑(PBS)，對照脂質體(無HA2或半抗原)或包含指示量的半抗原和/或HA2肽的脂質體。3-4周后這些小鼠由尾靜脈取血，以與初次接種同樣的制劑、同樣的劑量進行加強接種。9到14天后這些動物再從尾靜脈取血。任意地，這些小鼠后一次注射8周后還可進行第三次接種，并在兩周后取血。所有接種都在后腿肌肉內進行。這些小鼠在彈性籠(每籠4個)用檔板濾器保養，并且允許它們無限制地進食和飲水。在2000×g檔、4℃下離心5分鐘來分離血清，在試驗前-20℃下貯存。在單個試驗中，對每個試驗中的所有血清樣品進行一次抗體產生的檢驗。例4抗-二硝基苯基(DNP)血清抗體試驗用二硝基苯基化的牛血清清蛋白(DNP-BSA)試驗該抗原，未衍生的BSA用作對照抗原，把二硝基氟苯按10∶1的摩爾比加到BSA溶液中，制成DNP-BSA制劑;加三乙醇胺直到pH值達到9-9.5為止。在20℃下培養16小時后，用PBS透析除去未結合的DNP。初步試驗確定用這樣摩爾比衍生出的BSA測定血清抗體比包含較高或較低的DNP摩爾比的蛋白質更有效。血清抗體的水平用ELISA和SPIRA法兩者來測定。ELISA法用在0.05M碳酸鹽緩沖液(pH值9.6)中DNP-BSA(每穴10ug)涂布ImmulonI板(密執安州底特律市Dynatech提供)，對照穴以每穴10ug的BSA涂布。在4℃下16小時后該板用在PBS中5%(體積/體積)的FCS后涂布，在這次和其他培養后，用含1%FCS和0.2%吐溫20的PBS洗滌這些板。在含1%BSA的PBS中制備從1∶100開始的一系列濃度兩倍遞減的血稀釋液，每種濃度制成兩份，并把每個稀釋液的0.1毫升樣品加到抗原和對照穴中。在20℃下培養5小時后，加入專用于鼠科堿性磷酸酯結合重鏈的山羊抗體(賓州西切斯特的FCspecificCappellab提供)，或山羊抗鼠科IgG亞類，加入濃度超過預備試驗中最佳抗體測定所需濃度。在IgG亞類的情況，加入堿性磷酸酶結合體的豬抗體(專用于山羊IgG)。在10%二乙醇胺緩沖液中加入一硝基苯磷酸酯(1mg/ml)(每穴0.1ml)。半小時后在Dynatech的MR600分光光度計上讀出在410nm處的光學密度。按照最高稀釋的血清表示抗體滴定度，該血清產生高于對照穴0.2光密度。SPIRA法與ELISA法相比，用SPIRA法確定DNP抗體水平的評定方法有兩個改進采用了柔韌的聚氯乙烯微滴定板，用I125標記的親和純化(重鏈比的)兔抗鼠IgG來檢測結合到DNP抗原上的鼠科抗體。如以前所述的那樣計算抗體滴定度，而用標準交叉排線試驗(StandardCross-hatchtests)來估價標記兔抗-鼠科抗體的專一性，該試驗用如所述的鼠科-單克隆抗體具有對流行性感冒病毒的HA2單一性。當兩組鼠包括在單個試驗中時，根據Mann-Witney試驗來比較抗體滴定度。當比較多于兩組數據時，可采用Krusdall-Wallis方法。例5含有DNP-CapPE和/或HA2亞單位的脂質體的免疫原性每隔4周，用EYPC脂質體制劑(750ug)，或含HA2(3.7ug)、DNP-CapPE(30ug)的EYPC脂質體制劑，或者兩者(表1)對遠系繁殖的數組小鼠進行注射。用間接的ELISA法分析IgG和Ig反應，并以抗體滴定度的平均數表示分析結果。類脂對DNP和HA2的摩爾比是60002001。ELISA讀數表明，包含DNP-CapPE(無論帶有或不帶有HA2)的兩種制劑產生7個小鼠的7次IgM反應。但是，當滴定抗DNP的IgM血清抗體時，在脂質體DNP組的數值急劇下降，給出的滴定度類似于對照組，而用DNP/HA2脂質體免疫的小鼠有效地誘發出較高水平的血清專門抗DNPIgG。表Ⅰ在各類免疫球蛋白中的這種偏移僅僅歸于在同樣脂質體結構中HA2和DNP的締合，因為當用水溶液形式的HA2和DNP-CapPE混合物或用DNP-CapPE脂質體和HA2一起注射時，沒有IgG抗DNP產生(表2)。為了刺激IgG抗DNP抗體的產生，在同樣的脂質體中兩組分必須同時采用。表2<tablesid="table2"num="002"><tablealign="center">脂質體組分DNP-CapPEHA2IgG滴定度反應比IgG滴定度反應比10μg1μg333±1436/6344±1345/610μg3μg391±1246/6300±1656/610μg9μg766±2986/6336±1176/630μg1μg358±1656/6364±1455/630μg3μg1241±3366/6396±1196/630μg9μg2100±11276/61038±4456/610μgDNP-BSA10μgμgCNP-CapPE和HA2的水溶液10μg＊＋1μg＊＋3μg＊＋9μg＊2245±89800006/60/60/60/60/60155±63＊＊＊＊＊＊0/62/6</table></tables>＊DNP-CapPE和HA2被摻入分離的脂質體中并且一起摻入。＊＊實驗未進行。例6對脂質體的DNP和HA2的劑量反應在這個試驗中，研究了三個免疫組。對一給定量的DNP-CapPE(每次注射5，10，30ug)，改變HA2的量(1，3或9ug)，并把它摻入到由EYPC(750ug/注射)組成的脂質體制劑中。在相同的加強接種前一天和接種后9天抽取動物的血。用ELISA法分析血清中的抗DNP的IgG和IgM。此外，或者用10ug的DNP-BSA或用DNP-CapPE和HA2的混合水溶液對兩組小鼠進行免疫接種。當統計分析IgM的ELISA值(表2)時，代表5和10ugDNP的兩組沒有表明隨著HA2量的增加有顯著差異，因而，表中沒有示出5ugDNP-CapPE組的結果。但是，當用含有30μgDNP-CapPE和1，3或9ugHA2的脂質體對小鼠進行免疫接種時，觀察到明顯的差異，較高的比給出較高的IgM滴定度。當用10ugDNP-BSA免疫小鼠時，沒有觀察到IgM反應，而用DNP-CapPE和HA2的水溶液免疫時，該組6個小鼠中僅有2個有IgM反應。在統計分析IgG的ELISA數值(表2)時，對一給定的HA2的量(1，3或9ug)，增加DNP-CapPE(5，10或30ug)的量，反應表現出顯著的差異，該差異可確定對DNP和HA2兩者的劑量反應效應。這再次表明IgG產量的提高是由于在同樣的脂質體中同時存在靶抗原和輔助肽。用DNP-CapPE免疫的小鼠所給出的IgG反應比得上用所試驗的脂質體中最高劑量HA2和DNP免疫的那組的IgG反應。對用DNP/HA2水溶液免疫的小鼠未檢測到IgG反應。例7第三次注射DNP-CapPE脂質體對以前用DNP/HA2脂質體免疫過的小鼠的抗體的影響為了測定在以前用DNP-CapPE/HA2脂質體免疫過的小鼠對DNP靶抗原記憶反應是否出現，用僅含DNP-CapPE(這樣僅產生B細胞部位)的脂質體第三次注射一組7個小鼠。這個試驗表明，僅當DNP-CapPE和HA2一起存在于起始脂質體制劑中時記憶反應才會產生。它還表明，本發明產生一個對靶抗原的真正的胸腺相關免疫反應和一個對靶抗原的免疫記憶，該免疫記憶不再需要T細胞識別部位的存在就可產生相應于該靶抗原的IgG抗體。如前面所示，用DNP-CapPE/HA2脂質體免疫過的小鼠產生一IgG抗DNP反應，當用僅含DNP-CapPE的脂質體第三次注射這些同樣的小鼠(組1)時，SPIRA讀數與第一或第二次放血相比急劇增加，表明特異B細胞再刺激處于比用第一次免疫產生的刺激高的水平。用HA2脂質體免疫，然后用DNP-CapPE脂質體再刺激的小鼠(組3)不產生任何可測出的抗DNP的IgG抗體滴定度。曾用DNP-CapPE脂質體注射過的小鼠(組2)給出關于初次免疫的抗DNP的IgG抗體的水平。用空白EYPC脂質體注射的對照組(組4)表明沒有抗DNP的IgG抗體產生。表3例8在免疫反應中外部膜HA2與內部HA2的比較用由30ug的DNP-CapPE和不同量的HA2(3，1，0.5和0ug)組成的EYPC脂質體對四組遠系繁殖的小鼠進行免疫，另外在用菠蘿蛋白酶(100ug/ml)對脂質體進行預先處理以后用DNP-CapPE/HA2對一組小鼠進行免疫。用菠蘿蛋白酶切開表面蛋白，僅僅留下插入尾的膜和完整的內在化的HA2。在統計分析ELISA滴定度時，隨著HA2量的增加，再一次觀測到劑量反應效應，見表4。每次向DNP-CapPE脂質體中注射如同0.5ugHA2那樣小的量就足以誘導出一個與DNP-CapPE脂質體相比統計差別足夠顯著的IgG反應。然而，與從相同的未處理的脂質體得到的反應相比，當用菠蘿蛋白酶處理過的脂質體免疫小鼠時，沒有觀測到統計上差別。這些結果表明HA2以外的脂質體是不需要的，同時為了實現B細胞和T細胞抗原決定部位在免疫活性的表現，必須對脂質體進行處理。表4<tablesid="table4"num="004"><tablealign="center">脂質體組分IgG組＃DNP-CapPEHA2滴定度反應比1234530μg3μg30μg1μg30μg0.5μg30μg0菠蘿蛋白酶處理脂質體后的組1944±2917／7471±977／7438±1217／7198±882／7808±3157／7</table></tables>例9在免疫反應中IgG免疫球蛋白亞類的再分對ELISA讀數進行的分析表明，IgG1抗體是主要的亞類。對低劑量的DNP-CapPE(表1)而言，遠系繁殖的小鼠對DNP的IgG1反應在不同的HA2濃度上是相似的。對較高濃度的DNP-CapPE(30ug)，隨著HA2量的增加，觀測到劑量反應效應。EYPC、DNP-CapPE和HA2含量分別為750、30和9ug的脂質體制劑給出一個與用10ug的DNP-CapPE(一個典型的半抗原系統)免疫的小鼠組相當的IgG1反應。沒有發現采用IgG2a和IgG2b抗體亞類有明顯的差別(表5)。沒有檢測到IgG2a和IgG2b抗體的唯一的一組是用含1ugHA2、10ugDNP-CapPE(IgG2a和IgG2b)、3ugHA2和10ugDNP-CapPE脂質體(IgG2)免疫的小鼠的那些組。對較高劑量的DNP-CapPE或HA2，反應沒有表現出明顯的差異。反應與用DNP-BSA免疫的小鼠的反應相當。用IgG3抗體亞類時沒有觀測到明顯的差別。對每一組，檢測其滴定度，免疫后的6個小鼠中至少有4個出現響應(表5)。不過，只有兩個用10ugDNP-BSA免疫的小鼠所出現的反應使滴定度提高得顯著低于用脂質體制劑免疫的小鼠組。表5<p><tablesid="table6"num="006"><tablealign="center">脂質體組分DNP-CapPEHA2IgG2b反應比滴定度IgG3反應比滴定度10μg1μg10μg3μg10μg9μg30μg1μg30μg3μg30μg9μg10μgDNP-BSA10μgDNP-CapPE和3μgHA2的水劑0／6180±700／65／6308±212／6223±1045／6250±1416／6275±915／6302±980／64／6177±204／6217±935／6280±965／6280±1056／6333±1106／6376±712／6190±280／6</table></tables>現已充分地描述了本發明，對于本領域普通技術人員來說很明顯，對上述內容可以進行變化和改進，而不違反本發明所述的精神和范圍。權利要求1.一種用于抗原的脂質體免疫原載體，包括類脂、靶抗原和至少一個具有至少一個T輔助細胞識別部位的輔助肽。2.根據權利要求1所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述輔助肽是一毒素多肽單位，毒素選自下組流行性感冒，破傷風菌，白喉，綠濃桿菌，葡萄球菌，鏈球菌，百日咳，大腸桿菌，以及它們的混合物。3.根據權利要求2所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述輔助肽沒有B細胞識別部位。4.根據權利要求1所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述輔助肽有一個T細胞毒性淋巴細胞識別部位。5.根據權利要求1所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述輔助肽是流行性感冒病毒的HA2多肽亞單位。6.根據權利要求1所規定的脂質體免疫原載體，包括一個選自下組物質的類脂磷脂酰醚，磷脂酰酯，甘油酯，腦苷脂類，神經節苷脂，神經鞘磷脂、類固醇，以及它們的混合物。7.根據權利要求1所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述的輔助肽是通過疏水相互作用與脂質體締合的。8.根據權利要求1所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述的輔助肽通過共價連接到一類脂上而與脂質體締合。9.根據權利要求5所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述載體中每120000個類脂分子約含一個HA2分子。10.根據權利要求1所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述的靶抗原是T獨立抗原。11.根據權利要求3所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述的輔助肽或肽具有T細胞毒性淋巴細胞識別部位。12.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求1的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。13.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求2的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。14.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求3的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。15.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求4的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。16.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求5的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。17.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求6的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。18.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求7的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。19.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求8的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。20.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求9的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。21.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求10的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。22.一種用在哺乳動物中對靶抗原引出一免疫反應的方法，包括對權利要求11的脂質體免疫原載體施用一定量的免疫原。23.根據權利要求1所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述的輔助肽有B細胞識別部位。24.根據權利要求6所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述磷脂酰酯是磷脂酰乙醇胺和磷脂酰膽堿。25.根據權利要求6所規定的脂質體免疫原載體，其特征在于所述類固醇是膽固醇。全文摘要通過把抗原與一附加的組分一起摻入到一脂質體中，可以提高靶抗原的抗體反應，所述組分含有至少一個T輔助淋巴細胞識別部位。所述脂質體包括各種類脂材料。所述抗原和含有上述組分的T輔助淋巴細胞識別部位二者通過疏水相互作用或共價鍵附著到一個類脂上而與脂質體締合。文檔編號A61K9/127GK1059279SQ9110579公開日1992年3月11日申請日期1991年7月27日優先權日1990年7月27日發明者霍華德·R·西克斯,納塔莉·加肯申請人:研究發展基金會