專利名稱:降鈣素精制的新工藝的制作方法
本發明屬于工業生物化學或生物化工(生化制藥)降鈣素是比較新的多肽激素，在臨床上有多種診斷和治療用途，同時可用于航天事業上宇航員的保健方面，更可用于家禽產卵率的提高上。其在國際上被列入1979年～1982年世界上新開發的激素藥物之一，我國藥物發展長遠規劃中五個新多肽之一。
國內、外情況在制備降鈣素方面，近年國外多采用合成法，雖不受原料限制，但價格昂貴。基因工程的生產方式也正在研究，但尚未成功。故提取法仍是一個可靠的途徑。與本技術相近的一些研究工作有以下幾家Brewer(1)將豬甲狀腺酸提取液經Sephadex G-25，Sephadex G-50和Bio-gel P2制備降鈣素，用了三個層析柱。
Ciba-Geigy 公司(2)報道工業規模制備降鈣素，經溶劑提取后也是經過三個柱逆流分溶(實際是很多管子連成的)、Bio-gel P-6和Sephadex G-50。
以上是與本技術最為接近的、國際上比較成熟的工藝，且為工業規模的，可見其成熟程度。這些工藝與本工藝材料都用豬甲狀腺。
本發明的目的在于用一個層析柱代替多個層析柱，用離子交換樹脂代替其他多種不同的填充物，從而簡化了工藝流程，降低成本，增進經濟效益。
具體方法是以豬甲狀腺為原料進行一系列提取，制成粗缺口，然后以具有專一吸附的弱堿性離子交換樹脂單柱法代替Sephadex G-50 Sephadex G-25和DEAE纖維素精制純化，獲得精制品。樹脂事先須用乙醇進行回流24小時，然后裝柱，再經酸、堿處理后，即可上樣。用PH8磷酸緩沖液洗脫，六十毫升后，就出現收集樣品的高峰。
經純度、活力檢測，所達到的效果指標分別表示如下1.單位效價200MRC單位/mg2.吸收光譜分析收集樣品后進行波長200nm-300nm的掃描，樣品表現出可重復的特征性吸收高峰(278nm處)。如附圖1。(使用儀器是UV-300雙光束分光光度計日本產)3.色譜分析薄板層析出現可重復的單一層析點，說明純度專一，且與標準品的Rf進行對照層析，完全一致。(Sigma產品)如附圖2。
4.活力測定結果使用純種大白鼠TRI，隨機分組按統計學設計實驗并處理數據，所得結果用直方統計圖表示，如附圖3。
由圖3可見，鈣含量隨精制品的百分濃度的增加而下降，表示出降鈣素的活力與對照組有顯著性差異(P＜0.05)，符合英國藥典(1980版)的規定。
降鈣素的活力測定取血方法過去通用的方法是先將動物開胸，再從心臟取血，此法手續繁瑣，且需事先進行麻醉等操作，故費時費力。試驗動物只能一次性使用，耗資較多，不能連續觀測。不適應生產中的需要。
為了改進上述的方法，我們設計采用直接由試驗動物的眼角取血，無需麻醉、開胸、由心臟取血。而且試驗的動物可以多次性使用，也可做多種試驗，有利于科學試驗和節約經費的開支。
實施例取純種大白鼠，隨機分組后，進行處理，以便使處理組與對照組進行比較對照，從中分析出處理組的藥效表現。為此，對各組分別處理后和對照組同時取血，直接由眼角靜脈竇快速簡捷地施行，這樣試驗動物間的個體條件易保持“對比齊同”的統計要求。取出血樣。進行檢測，及時得到所需的數據，進一步算出藥物的活力，解決了一系列的問題。
參考文獻(1)BrewerJ Biol Chem 243，5739，1968.
(2)US 4，041，022(3)李建民科學通報 19(3)136，1974(4)李建民生物化學與生物物理進展 1975(5)李建民科學通報 26(9)576，1981(6)李建民全國第一次工業生化學術會議論文匯編1983年 成都(7)李建民全國第三次生物化學學術會議論文匯編 下冊1984年 北京
權利要求
1.精制降鈣素的工藝，其特征在于只用一個離子交換層析柱來完成。
2.按照權利要求
1所說的層析柱，其特征在于可以使用具有專一性吸附的弱堿性樹脂。
3.一種開胸后從動物心臟取血測定生物活力的方法，其特征在于直接從動物眼靜脈竇取血。
4.按照權利要求
3所說的方法，其特征在于動物無需麻醉、開胸。方法快速簡捷，使檢測保持所需最佳狀態。
5.按照權利要求
3所說的方法，試驗動物可多次連續使用。
專利摘要
研究了一種生產降鈣素的新工藝及產品活力測定的取樣方法。工藝特征在于采用了弱堿性樹脂，僅以單柱替代了通用的Sephadex G-50Sephadex G-25和DEAE纖維素等三個層析柱。因而縮短了四分之三的工藝流程，降低了成本，提高了經濟效益。檢測降鈣素活力取血樣的方法，其特點是由動物的眼靜脈竇取血，比通用的開胸手術后由心臟取血(英國藥典1980年版)具有簡便、省力和經濟，動物可連續多次使用等優點，該法可適用于整個生物活力測定范圍。
文檔編號B01D15/04GK85102575SQ85102575
公開日1985年11月10日 申請日期1985年4月1日
發明者李建民, 侯文強, 馬保金 申請人:南開大學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan