本發(fa)明涉及(ji)一(yi)種(zhong)復合多層多孔支(zhi)架(jia)及(ji)其制備(bei)方法，屬于(yu)生物醫用(yong)人工骨移植材(cai)料技術(shu)運(yun)用(yong)領(ling)域。

背景技術：

組織(zhi)工(gong)程最早(zao)的(de)研(yan)究材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)是天(tian)然(ran)材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)，隨著時間的(de)流逝(shi)，科(ke)學家進一步研(yan)究了(le)天(tian)然(ran)材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)和合(he)成材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)的(de)復合(he)，以(yi)及(ji)現(xian)在合(he)成材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)與(yu)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)的(de)雜化交聯等(deng)，同時，人們還合(he)成了(le)類(lei)天(tian)然(ran)材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)，即仿(fang)生(sheng)(sheng)材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)，但是這些材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)由于(yu)種種缺陷而不能(neng)滿(man)足組織(zhi)工(gong)程的(de)需要。材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)的(de)降解率、生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)相(xiang)容性、理化性能(neng)、毒性、生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)活(huo)性以(yi)及(ji)支(zhi)架(jia)制(zhi)備方法和工(gong)藝(yi)，都要滿(man)足特定(ding)的(de)組織(zhi)要求(qiu)，尤其是生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)相(xiang)容性更是材(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)料(liao)(liao)(liao)選(xuan)擇的(de)關鍵，因(yin)為組織(zhi)工(gong)程支(zhi)架(jia)使細(xi)胞黏附與(yu)增殖的(de)外環(huan)境。

魔芋葡甘聚糖kgm是一種天然的(de)帶有短支鏈(lian)的(de)高分子多糖，其結構式如下所示：

魔芋葡(pu)甘(gan)聚糖(tang)擁有(you)(you)良好的(de)(de)(de)溶膠(jiao)(jiao)凝膠(jiao)(jiao)性(xing)(xing)能(neng)，可(ke)(ke)形成(cheng)熱不可(ke)(ke)逆（熱穩定）凝膠(jiao)(jiao)，有(you)(you)較(jiao)好的(de)(de)(de)成(cheng)型性(xing)(xing)能(neng)，具有(you)(you)較(jiao)好的(de)(de)(de)力學和體內外的(de)(de)(de)降(jiang)解(jie)性(xing)(xing)能(neng)和生物相容性(xing)(xing)，原因主要有(you)(you)以下幾個方面：（1）魔芋葡(pu)甘(gan)聚糖(tang)是魔芋塊莖(jing)中所(suo)含(han)的(de)(de)(de)儲備性(xing)(xing)多糖(tang)，一般認為由β-d-葡(pu)萄糖(tang)和β-d-甘(gan)露糖(tang)以2：3的(de)(de)(de)摩爾比，主要通過β-1，4糖(tang)苷鍵連接起來的(de)(de)(de)高分子多糖(tang)。（2）諸多文獻(xian)也已(yi)對(dui)(dui)魔芋葡(pu)甘(gan)聚糖(tang)性(xing)(xing)質進(jin)行(xing)了研究(jiu)。魔芋葡(pu)甘(gan)聚糖(tang)的(de)(de)(de)理(li)化性(xing)(xing)質主要有(you)(you)：①流變性(xing)(xing)；②增稠性(xing)(xing)；③凝膠(jiao)(jiao)性(xing)(xing)；④水溶性(xing)(xing)；（3）近年來采(cai)用(yong)各種手段對(dui)(dui)其(qi)進(jin)行(xing)了改性(xing)(xing)，從(cong)(cong)而使它(ta)具有(you)(you)適合各種用(yong)途的(de)(de)(de)新功能(neng)，從(cong)(cong)而擴大其(qi)應用(yong)范圍，如魔芋葡(pu)甘(gan)聚糖(tang)kgm的(de)(de)(de)脫乙酰基改性(xing)(xing)、交聯改性(xing)(xing)、酯化改性(xing)(xing)、氧化改性(xing)(xing)及接枝共聚改性(xing)(xing)等都能(neng)很好地改善魔芋葡(pu)甘(gan)聚糖(tang)kgm的(de)(de)(de)使用(yong)性(xing)(xing)能(neng)。

魔(mo)芋(yu)(yu)葡(pu)(pu)甘(gan)(gan)聚(ju)(ju)糖(tang)擁有(you)良好(hao)的(de)溶膠凝(ning)膠性(xing)(xing)能(neng)，可形成(cheng)(cheng)熱不可逆(熱穩定)凝(ning)膠，有(you)較好(hao)的(de)成(cheng)(cheng)型性(xing)(xing)能(neng)，具有(you)較好(hao)的(de)力學和(he)體(ti)內外的(de)降解性(xing)(xing)能(neng)和(he)生物相容(rong)性(xing)(xing)，原因(yin)主要(yao)有(you)以(yi)下(xia)幾個方面(mian)：(1)魔(mo)芋(yu)(yu)葡(pu)(pu)甘(gan)(gan)聚(ju)(ju)糖(tang)是魔(mo)芋(yu)(yu)塊莖中所含的(de)儲備性(xing)(xing)多糖(tang)，一般認為由(you)β-d-葡(pu)(pu)萄糖(tang)和(he)β-d-甘(gan)(gan)露糖(tang)以(yi)2：3的(de)摩(mo)爾比，主要(yao)通過β-1，4糖(tang)苷(gan)鍵連接(jie)起來(lai)的(de)高分子多糖(tang)。(2)諸多文獻也已對魔(mo)芋(yu)(yu)葡(pu)(pu)甘(gan)(gan)聚(ju)(ju)糖(tang)性(xing)(xing)質進(jin)行了研究。魔(mo)芋(yu)(yu)葡(pu)(pu)甘(gan)(gan)聚(ju)(ju)糖(tang)的(de)理化性(xing)(xing)質主要(yao)有(you)：①流變性(xing)(xing)；②增稠性(xing)(xing)；③凝(ning)膠性(xing)(xing)；④水溶性(xing)(xing)；(3)近年來(lai)采用(yong)(yong)各種手段(duan)對其進(jin)行了改性(xing)(xing)，從而使它具有(you)適合各種用(yong)(yong)途(tu)的(de)新功(gong)能(neng)，從而擴大其應用(yong)(yong)范圍，如魔(mo)芋(yu)(yu)葡(pu)(pu)甘(gan)(gan)聚(ju)(ju)糖(tang)kgm的(de)脫乙酰(xian)基改性(xing)(xing)、交聯改性(xing)(xing)、酯化改性(xing)(xing)、氧化改性(xing)(xing)及接(jie)枝(zhi)共聚(ju)(ju)改性(xing)(xing)等(deng)都能(neng)很(hen)好(hao)地改善魔(mo)芋(yu)(yu)葡(pu)(pu)甘(gan)(gan)聚(ju)(ju)糖(tang)kgm的(de)使用(yong)(yong)性(xing)(xing)能(neng)。

聚(ju)(ju)己(ji)內酯pcl是一種(zhong)可完全生(sheng)物(wu)(wu)(wu)降解(jie)并且具有(you)(you)(you)良(liang)好(hao)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)相容(rong)(rong)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)肪族聚(ju)(ju)酯，而(er)且其(qi)降解(jie)產(chan)物(wu)(wu)(wu)不容(rong)(rong)易(yi)(yi)引起炎(yan)癥反應，是一種(zhong)合成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)熱塑性(xing)(xing)半結(jie)(jie)(jie)晶聚(ju)(ju)合物(wu)(wu)(wu)，柔性(xing)(xing)鏈(lian)段(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)聚(ju)(ju)己(ji)內酯比剛性(xing)(xing)鏈(lian)段(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)聚(ju)(ju)碳酸酯結(jie)(jie)(jie)晶性(xing)(xing)能強(qiang)，容(rong)(rong)易(yi)(yi)結(jie)(jie)(jie)晶，具有(you)(you)(you)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)活性(xing)(xing)、生(sheng)物(wu)(wu)(wu)相容(rong)(rong)性(xing)(xing)、生(sheng)物(wu)(wu)(wu)降解(jie)性(xing)(xing)、滲透性(xing)(xing)等(deng)優點，pcl在(zai)室(shi)溫(wen)下具有(you)(you)(you)良(liang)好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)柔韌性(xing)(xing)、加工性(xing)(xing)和(he)較好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)熱穩定(ding)性(xing)(xing)，可以作為(wei)一種(zhong)良(liang)好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)軟骨組織(zhi)(zhi)工程替代材料(liao)。而(er)細(xi)胞(bao)在(zai)其(qi)上的(de)(de)(de)(de)(de)(de)繁殖增(zeng)長(chang)(chang)、支架的(de)(de)(de)(de)(de)(de)降解(jie)率和(he)力學性(xing)(xing)能是組織(zhi)(zhi)工程支架需要(yao)同時滿足的(de)(de)(de)(de)(de)(de)三大要(yao)求，選(xuan)區激光燒結(jie)(jie)(jie)、熔(rong)融沉(chen)積(ji)成型、靜電(dian)紡絲(si)、3d打印等(deng)技術(shu)制備的(de)(de)(de)(de)(de)(de)聚(ju)(ju)己(ji)內酯組織(zhi)(zhi)工程支架盡管與(yu)(yu)細(xi)胞(bao)外(wai)基質結(jie)(jie)(jie)構相似有(you)(you)(you)利于細(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)粘附與(yu)(yu)生(sheng)長(chang)(chang)，但其(qi)力學性(xing)(xing)能較差，很難(nan)作為(wei)組織(zhi)(zhi)工程的(de)(de)(de)(de)(de)(de)承重(zhong)材料(liao)。

聚(ju)乳酸pla是一(yi)種(zhong)具(ju)有優良的生物(wu)(wu)相(xiang)容性(xing)、無毒和可(ke)生物(wu)(wu)降解的聚(ju)合物(wu)(wu)，具(ju)有較(jiao)好的化學惰性(xing)、易加工性(xing)及(ji)良好的生物(wu)(wu)相(xiang)容性(xing)，是最(zui)有前途的可(ke)生物(wu)(wu)降解高(gao)分(fen)子(zi)材料之一(yi)，早在(zai)70年(nian)代，聚(ju)乳酸在(zai)人體內的降解性(xing)和降解產物(wu)(wu)的高(gao)度安全性(xing)得到(dao)確(que)認，它作為一(yi)種(zhong)新型(xing)可(ke)生物(wu)(wu)降解的應用高(gao)分(fen)子(zi)材料開始備受關(guan)注。

聚(ju)醚(mi)醚(mi)酮peek是(shi)一種全芳香半結晶(jing)高(gao)聚(ju)物，具有多(duo)種優良的(de)綜合性能：對氧高(gao)度穩定，具有堅(jian)韌、高(gao)強(qiang)度、高(gao)剛性和耐蠕變的(de)特點，以(yi)及優越(yue)的(de)抗疲勞性、生物相容性，而且溶脹率較(jiao)低，是(shi)最(zui)佳的(de)骨關節材料(liao)。

聚乙(yi)二醇peg是由環氧乙(yi)烷與水或乙(yi)二醇逐步加(jia)成聚合得(de)到的(de)(de)一(yi)類(lei)分子量較低(di)的(de)(de)水溶(rong)性聚醚，作為一(yi)種兩親性聚合物，具有(you)良(liang)好(hao)的(de)(de)生(sheng)物相容性，而且具有(you)無毒、免(mian)疫(yi)原性低(di)等特點(dian)，可(ke)通過腎排出體外，不會積(ji)累在體內，在生(sheng)物醫藥領域具有(you)廣泛的(de)(de)應(ying)用(yong)前景。

透(tou)(tou)(tou)明(ming)質(zhi)(zhi)(zhi)酸(suan)ha是糖(tang)胺聚糖(tang)中(zhong)的(de)(de)一(yi)種(zhong)，屬于(yu)酸(suan)性(xing)粘(zhan)多(duo)(duo)糖(tang)，廣泛分布于(yu)人體各(ge)部位，皮膚也(ye)含有大量(liang)的(de)(de)透(tou)(tou)(tou)明(ming)質(zhi)(zhi)(zhi)酸(suan)。在機(ji)體內，透(tou)(tou)(tou)明(ming)質(zhi)(zhi)(zhi)酸(suan)是一(yi)種(zhong)多(duo)(duo)功(gong)(gong)能基(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)，顯示出多(duo)(duo)種(zhong)重要的(de)(de)生理功(gong)(gong)能，例(li)如調節(jie)(jie)蛋白質(zhi)(zhi)(zhi)，協助水電解質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)擴(kuo)散及運轉，潤滑關節(jie)(jie)，調節(jie)(jie)血管壁的(de)(de)通透(tou)(tou)(tou)性(xing)，促進傷口愈合等等。尤為(wei)重要的(de)(de)是，透(tou)(tou)(tou)明(ming)質(zhi)(zhi)(zhi)酸(suan)具有特殊的(de)(de)保水作用，是目前(qian)發現的(de)(de)自然(ran)界中(zhong)保濕(shi)性(xing)最好的(de)(de)物質(zhi)(zhi)(zhi)，被稱為(wei)理想的(de)(de)天然(ran)保濕(shi)因子(zi)。透(tou)(tou)(tou)明(ming)質(zhi)(zhi)(zhi)酸(suan)由于(yu)其具有獨特理化性(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)和生理功(gong)(gong)能，已經在醫學(xue)、生物材(cai)料方面(mian)得到了廣泛應用。

羥基磷灰石是目前應用最廣泛的一種良好的生物活性、生物相容性、可降解性、無毒性、骨傳導性等優良特性生物活性材料，其化學式為ca10(po4)6(oh)2，與人體的骨骼和牙齒無機成分的化學組成和結構類似，可以加工成三維孔隙結構，有利于成骨細胞的黏附、生長，誘導骨的成長，在體內能夠逐步降解為鈣磷，產生游離的ca²⁺、po4^3-，為(wei)身(shen)體(ti)帶入(ru)一(yi)定量(liang)(liang)的(de)(de)(de)活(huo)性成分(fen)，鈣磷沉積可促進骨的(de)(de)(de)生長(chang)。但它(ta)的(de)(de)(de)缺點是(shi)力(li)(li)學(xue)強度不(bu)夠，質脆，韌(ren)度不(bu)夠。相對于(yu)羥基(ji)(ji)磷灰石(shi)粉體(ti)而(er)言，羥基(ji)(ji)磷灰石(shi)晶(jing)須(xu)具有更高的(de)(de)(de)的(de)(de)(de)斷裂(lie)(lie)韌(ren)性和抗彎(wan)抗壓能(neng)力(li)(li)，在制備過(guo)程中不(bu)易(yi)斷裂(lie)(lie)。這主要(yao)是(shi)由于(yu)材(cai)料(liao)可依靠晶(jing)須(xu)的(de)(de)(de)橋接、裂(lie)(lie)紋偏轉和拔出效應(ying)來吸(xi)收能(neng)量(liang)(liang)，消除裂(lie)(lie)紋尖(jian)端(duan)集中的(de)(de)(de)應(ying)力(li)(li)；而(er)材(cai)料(liao)受力(li)(li)時，通過(guo)負(fu)荷傳(chuan)遞(di)使應(ying)力(li)(li)作用(yong)于(yu)晶(jing)須(xu)，從(cong)而(er)降低周(zhou)圍的(de)(de)(de)基(ji)(ji)底材(cai)料(liao)所承受的(de)(de)(de)應(ying)力(li)(li)，從(cong)而(er)達到提(ti)高材(cai)料(liao)力(li)(li)學(xue)性能(neng)的(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)。

技術實現要素：

本發明(ming)提供一種(zhong)復合多層多孔支架，支架具(ju)有多層結構，且各(ge)層降(jiang)解(jie)速率不同(tong)，由魔(mo)芋葡甘聚糖、人工合成高分子和(he)羥基(ji)磷灰(hui)石晶須復合而成。

所(suo)述人(ren)工(gong)合(he)成高分子為聚(ju)己內酯、聚(ju)乳(ru)酸、聚(ju)醚醚酮、聚(ju)乙(yi)二醇或透明質酸。本發明的另一目(mu)的在于提供所(suo)述復合(he)多層多孔支(zhi)架的制(zhi)備(bei)方法(fa)，具(ju)體步驟(zou)如下：

(1)按照(zhao)質量體積比g/ml為(wei)4-6︰400的(de)比例，將魔(mo)芋葡甘聚糖(tang)kgm加(jia)(jia)入(ru)到攪拌(ban)速度為(wei)500轉/分鐘的(de)溶(rong)劑中，魔(mo)芋葡甘聚糖(tang)順著溶(rong)劑攪拌(ban)時形成的(de)漩渦緩慢加(jia)(jia)入(ru)，常溫環境下(xia)攪拌(ban)3個小時至(zhi)完全混合均(jun)勻(yun)，微波加(jia)(jia)熱4min，真空脫泡，去(qu)除表面和(he)杯壁的(de)固(gu)化液，即得到溶(rong)液a；

(2)按照質量(liang)體(ti)積比g/ml為(wei)1-3︰20的比例，將人工合(he)成高(gao)分子加入(ru)到(dao)有機溶(rong)劑(ji)中(zhong)，常溫環(huan)境下(xia)用磁力攪拌(ban)(ban)器(qi)攪拌(ban)(ban)2個小時至(zhi)完全混合(he)均勻，攪拌(ban)(ban)速度為(wei)400轉/分鐘，得到(dao)溶(rong)液b；

(3)按照(zhao)羥基(ji)磷灰石晶須占步(bu)驟(2)中人工合成高分子質(zhi)量5％-15％的比例，將(jiang)羥基(ji)磷灰石晶須加(jia)入到(dao)步(bu)驟(2)制得的溶液b中，常溫環境下(xia)攪(jiao)拌2個(ge)小時，超(chao)聲震蕩20min，使(shi)其混合均(jun)勻，得到(dao)溶液c；

(4)取步驟(1)制得的(de)溶液(ye)a流(liu)延到(dao)玻璃皿中，冷(leng)凍10h，得到(dao)厚(hou)度為0.5-1.5mm的(de)魔(mo)(mo)芋(yu)葡甘(gan)聚糖(tang)膜，再(zai)在魔(mo)(mo)芋(yu)葡甘(gan)聚糖(tang)膜上流(liu)延厚(hou)度為0.5-1.5mm的(de)溶液(ye)c成膜，冷(leng)凍10h，經過多(duo)次流(liu)延，冷(leng)凍干燥(zao)后得到(dao)一層(ceng)以上魔(mo)(mo)芋(yu)葡甘(gan)聚糖(tang)膜和(he)一層(ceng)以上人工(gong)合成高分子和(he)羥基(ji)磷灰石(shi)晶須膜組(zu)成的(de)多(duo)層(ceng)多(duo)孔支架d；

(5)將步(bu)驟(zou)(4)所得的(de)多層多孔支(zhi)架d在交(jiao)聯液中交(jiao)聯12-24h后，取出置于蒸(zheng)餾水中浸泡5-10次(ci)，每次(ci)1-2h，再冷凍干(gan)燥，最終(zhong)得到魔芋葡甘聚糖/人工合成高分(fen)子/羥(qian)基磷灰石晶須復合多層多孔支(zhi)架。

步驟(zou)(1)所(suo)述溶劑為水(shui)、乳酸和(he)丙(bing)三(san)醇(chun)按照體積比為400︰1.8︰1.2混合而成。

步驟(2)所述有機溶(rong)劑為(wei)甲醇與(yu)二氯甲烷按照(zhao)體積(ji)比為(wei)1︰3混合的混合物。

步驟(4)所述冷凍干燥(zao)是在零(ling)下40℃的(de)條(tiao)件下進(jin)行的(de)。

步驟(5)所(suo)述交聯液為質量分數(shu)25％的氨水(shui)與無水(shui)乙醇按照(zhao)體積比1︰3混合而成。

本發明的有益效果：

(1)采用流(liu)延法(fa)制得復合多層多孔支架(jia)，其制備方法(fa)簡(jian)單易操作，原料來(lai)源廣泛，而且(qie)成本(ben)低廉，同(tong)時也不會破(po)壞魔芋葡甘聚(ju)糖、聚(ju)己內(nei)酯(聚(ju)乳酸(suan)(suan)、聚(ju)醚醚酮(tong)、聚(ju)乙二醇、透(tou)明質酸(suan)(suan))、羥基磷灰(hui)石晶須自身的優點，在(zai)軟骨組織工(gong)程領域中(zhong)具有(you)很大的應用前景。

(2)所得(de)復合多層多孔(kong)支架的降(jiang)解率可調(diao)，且(qie)層與層的降(jiang)解速率不同(tong)，通過改變膜的厚度(du)、試劑的含量、孔(kong)隙率來(lai)控制降(jiang)解速度(du)。

(3)所得復合多層多孔支架植入體內后，在體內能夠逐步降解為鈣磷，產生游離的ca²⁺、po4^3-，為(wei)身(shen)體帶入一(yi)定量(liang)的(de)活(huo)性成分，鈣磷沉積可促進骨的(de)生長。

(4)所得復合多層多孔支(zhi)架(jia)因(yin)具備較高的(de)孔隙率，有利(li)于細(xi)胞的(de)黏附與(yu)增殖。

附圖說明

圖(tu)1是本發明實施例(li)1魔芋葡(pu)甘聚糖/聚己(ji)內酯/羥基磷灰石晶須(xu)復合多層多孔(kong)支(zhi)架的(de)xrd圖(tu)；

圖(tu)2是本發明實施例1魔芋葡甘聚(ju)糖(tang)/聚(ju)己內酯/羥(qian)基磷灰石晶須(xu)復合多層(ceng)多孔支架(jia)的ftir圖(tu)；

圖3是本(ben)發明(ming)實施(shi)例1魔(mo)芋葡(pu)甘聚(ju)糖/聚(ju)己內酯/羥基磷灰(hui)石晶須復合多(duo)層(ceng)多(duo)孔支架的降解曲(qu)線；

圖4為本(ben)發明(ming)實(shi)(shi)(shi)施(shi)例1、實(shi)(shi)(shi)施(shi)例2和實(shi)(shi)(shi)施(shi)例3復合多層多孔支(zhi)架的抗(kang)壓強度。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例對本發明作進(jin)一步詳細說明，但(dan)本發明的(de)保護(hu)范圍并不限于所(suo)述內容。

實施例1

本(ben)實施例一種(zhong)復合多(duo)層(ceng)多(duo)孔(kong)支(zhi)架，由(you)魔芋(yu)葡甘聚糖(tang)、聚己內酯(zhi)和羥(qian)基(ji)磷(lin)灰(hui)石晶須(xu)復合而成，魔芋(yu)葡甘聚糖(tang)/聚己內酯(zhi)/羥(qian)基(ji)磷(lin)灰(hui)石晶須(xu)復合多(duo)層(ceng)多(duo)孔(kong)支(zhi)架制備(bei)所用的(de)化學(xue)物(wu)質材料為：魔芋(yu)葡甘聚糖(tang)、聚己內酯(zhi)、二氯甲烷、羥(qian)基(ji)磷(lin)灰(hui)石晶須(xu)、去離子水(shui)、丙(bing)三(san)醇、乳酸、甲醇、質量(liang)分數25％的(de)氨(an)水(shui)、無水(shui)乙醇，其準(zhun)備(bei)用量(liang)如下：

本實(shi)施例魔芋葡甘聚(ju)糖/聚(ju)己內酯/羥基磷灰石(shi)晶須(xu)復合多層(ceng)多孔支架的制備方法，具體包(bao)括以(yi)下步驟：

(1)將(jiang)1.2ml丙三(san)醇和(he)1.8ml乳酸依次加(jia)入(ru)(ru)400ml去離(li)子水中混合均(jun)勻(yun)得到溶劑(ji)，再將(jiang)5g魔芋葡(pu)甘聚糖kgm加(jia)入(ru)(ru)到攪拌速度(du)為500轉/分鐘的(de)溶劑(ji)中，魔芋葡(pu)甘聚糖順(shun)著溶劑(ji)攪拌時形(xing)成的(de)漩渦緩慢(man)加(jia)入(ru)(ru)，常溫環境下攪拌3個(ge)小時至完全混合均(jun)勻(yun)，微波加(jia)熱4min，真(zhen)空脫泡，去除表面和(he)杯壁的(de)固(gu)化液，即得到溶液a；

(2)將(jiang)2g聚己內酯加入到15ml二(er)氯甲烷和5ml甲醇混合而成的有(you)機溶劑中，常(chang)溫環境下用磁力攪拌器以(yi)400轉/分鐘的速度攪拌2個小時至完全混合均勻(yun)，得到溶液b；

(3)將0.3g羥基磷灰石晶須加入(ru)到(dao)步驟(2)制得(de)的溶液b中(zhong)，常溫環境(jing)下攪拌2個小(xiao)時(shi)，超聲震蕩20min，使(shi)其混合均勻，得(de)到(dao)溶液c；

(4)取步驟(zou)(1)制得(de)的(de)(de)溶液(ye)a流延(yan)到(dao)直徑為10cm的(de)(de)玻璃皿中，得(de)到(dao)厚度為1mm的(de)(de)魔芋葡(pu)(pu)甘聚糖(tang)kgm膜(mo)(mo)，冷(leng)凍(dong)(dong)10h，再(zai)在魔芋葡(pu)(pu)甘聚糖(tang)膜(mo)(mo)上流延(yan)厚度為1mm的(de)(de)溶液(ye)c成膜(mo)(mo)，冷(leng)凍(dong)(dong)10h；經過多(duo)次流延(yan)，直至(zhi)得(de)到(dao)由8層kgm膜(mo)(mo)和7層pcl/haw膜(mo)(mo)交替流延(yan)成膜(mo)(mo)組(zu)成的(de)(de)厚度為15mm的(de)(de)kgm/pcl/haw冷(leng)凍(dong)(dong)未(wei)干燥樣品，并在冷(leng)凍(dong)(dong)干燥機中在零下(xia)40℃的(de)(de)條件下(xia)冷(leng)凍(dong)(dong)干燥得(de)到(dao)kgm/pcl/haw復(fu)合而成的(de)(de)多(duo)層多(duo)孔支架d；

(5)將步驟(4)所得的多層(ceng)多孔支(zhi)(zhi)架(jia)d在280ml的質(zhi)量分(fen)數25％的氨(an)水(shui)與(yu)無水(shui)乙醇(chun)按照體積比(bi)1︰3混合而成(cheng)的交聯液中交聯18h后，取出置(zhi)于蒸餾水(shui)中浸泡10次(ci)，每次(ci)1h，再冷凍干燥，最終得到(dao)kgm/pcl/haw復合多層(ceng)多孔支(zhi)(zhi)架(jia)。

本實(shi)施例(li)魔芋葡(pu)(pu)甘(gan)聚(ju)糖/聚(ju)己內酯(zhi)/羥基磷灰石晶須復合多(duo)層(ceng)多(duo)孔支(zhi)(zhi)架(jia)(jia)交聯前(步驟(5)得到(dao)的多(duo)層(ceng)多(duo)孔支(zhi)(zhi)架(jia)(jia)d)和(he)交聯后(hou)(步驟(6)最終(zhong)得到(dao)kgm/pcl/haw復合多(duo)層(ceng)多(duo)孔支(zhi)(zhi)架(jia)(jia))的xrd分析，如圖1所(suo)示(shi)，從圖中(zhong)(zhong)可以(yi)看出2θ為21.4°和(he)23.8°附近均出現兩個明顯(xian)的衍射峰，說(shuo)明支(zhi)(zhi)架(jia)(jia)中(zhong)(zhong)聚(ju)己內酯(zhi)的存在(zai)(zai)，在(zai)(zai)2θ為20°可以(yi)看出明顯(xian)的饅頭峰，表明支(zhi)(zhi)架(jia)(jia)中(zhong)(zhong)含有魔芋葡(pu)(pu)甘(gan)聚(ju)糖，另外，可以(yi)明顯(xian)看到(dao)ha峰的存在(zai)(zai)，例(li)如：各衍射峰(2θ＝25.9°，2θ＝31.7°，2θ＝45.6°)的位置(zhi)與(yu)標準卡片(pian)(jcpds)相符，說(shuo)明所(suo)制備的kgm/pcl/haw復合多(duo)層(ceng)多(duo)孔支(zhi)(zhi)架(jia)(jia)中(zhong)(zhong)有ha的存在(zai)(zai)。

本實施例魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架交聯前(步驟(5)得到的多層多孔支架d)和交聯后(步驟(6)最終得到kgm/pcl/haw復合多層多孔支架)的ftir分析，如圖2所示，由圖2可看出紅外特征峰與kgm、pcl和haw完全吻合，如3440cm^-1附近的峰為-oh，2928cm^-1附近為甲基中的c-h，882cm^-1和807cm^-1附近的kgm特征吸收峰，1637cm^-1附近的吸收峰為c＝o鍵的特征峰，1150cm^-1和573cm^-1附近為p-ocm^-1鍵的吸收峰(feng)，說明最后(hou)得到的復合多(duo)層多(duo)孔支架中含有kgm、pcl和(he)haw。

本實施例(li)制備得到的魔芋葡甘聚(ju)糖(tang)/聚(ju)己內酯/羥基(ji)磷灰石晶須復合多(duo)層多(duo)孔(kong)支架降解(jie)曲線如圖3所(suo)示(shi)，本降解(jie)實驗通過(guo)把樣品(pin)浸(jin)泡(pao)于(yu)人體(ti)模(mo)擬體(ti)液(ye)(sbf)溶液(ye)中來(lai)評價(jia)其降解(jie)性，由(you)圖3可知復合多(duo)層多(duo)孔(kong)支架在前(qian)7天(tian)為增(zeng)(zeng)重過(guo)程，隨(sui)著浸(jin)泡(pao)時間的增(zeng)(zeng)加(jia)逐漸(jian)表(biao)現為失重，分析可知增(zeng)(zeng)重是由(you)于(yu)降解(jie)產(chan)物(wu)的生成，例(li)如羥基(ji)磷灰石晶須中鈣磷鹽的沉(chen)積(ji)；另外一個原因為人體(ti)模(mo)擬體(ti)液(ye)中活性物(wu)質(zhi)的沉(chen)積(ji)，但浸(jin)泡(pao)7-10天(tian)后，支架材(cai)料降解(jie)導(dao)致的失重大于(yu)沉(chen)積(ji)產(chan)物(wu)造(zao)成的增(zeng)(zeng)重，因此(ci)顯示(shi)出失重的降解(jie)曲線。

如下表1為用mtt法對(dui)實(shi)施(shi)例1制備得到(dao)的(de)(de)kgm/pcl/haw復(fu)(fu)合(he)多層(ceng)(ceng)多孔支(zhi)架的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)(xing)分(fen)析的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)增(zeng)殖(zhi)(zhi)度(du)(rgr)值，本實(shi)驗將(jiang)293t細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(轉染腺病毒(du)e1a基因的(de)(de)人腎(shen)上(shang)皮(pi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao))作為實(shi)驗細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，依據國(guo)家標準(zhun)(gb/t16886.12-2005)，檢(jian)測細(xi)(xi)(xi)胞(bao)在待(dai)測材料的(de)(de)培養液(ye)中的(de)(de)增(zeng)殖(zhi)(zhi)情況，根據國(guo)家標準(zhun)(gb/t14233.2-2005)從而判定(ding)其毒(du)性(xing)(xing)等級(ji)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)(xing)結果表明，支(zhi)架濃度(du)在0.05-0.4g/ml時，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)增(zeng)殖(zhi)(zhi)度(du)均在100-120之間，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)(xing)為0級(ji)，說明制備的(de)(de)魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥(qian)基磷灰石晶須復(fu)(fu)合(he)多層(ceng)(ceng)多孔支(zhi)架無細(xi)(xi)(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)(xing)。

表1復合多層多孔支架的細胞(bao)增殖度

如(ru)圖4所(suo)示(shi)，本實(shi)施例制備的kgm/pcl/haw復合多層多孔支架抗壓強度(du)高達8.65mpa，滿足軟骨組織要求(qiu)；另外，采取(qu)稱重法測出(chu)其孔隙率(lv)為82.46％，證(zheng)明該支架具有(you)較高的孔隙率(lv)。

實施例2

本實(shi)施例一種(zhong)復(fu)合多層(ceng)多孔(kong)支架(jia)，由魔(mo)芋(yu)葡(pu)甘聚(ju)(ju)糖、聚(ju)(ju)乳(ru)酸(suan)和羥基(ji)磷灰石(shi)晶須(xu)(xu)復(fu)合而成，魔(mo)芋(yu)葡(pu)甘聚(ju)(ju)糖/聚(ju)(ju)乳(ru)酸(suan)/羥基(ji)磷灰石(shi)晶須(xu)(xu)復(fu)合多層(ceng)多孔(kong)支架(jia)制備所(suo)用的化學(xue)物質(zhi)材料為(wei)：魔(mo)芋(yu)葡(pu)甘聚(ju)(ju)糖、聚(ju)(ju)乳(ru)酸(suan)、二氯甲烷、羥基(ji)磷灰石(shi)晶須(xu)(xu)、去離(li)子水、丙三醇、乳(ru)酸(suan)、甲醇、質(zhi)量分數(shu)25％的氨水、無水乙醇，其準備用量如下：

本(ben)實施例魔芋葡甘聚糖(tang)/聚乳酸/羥(qian)基磷(lin)灰石晶須復合多層多孔支架的制(zhi)備(bei)方法(fa)，具體包括以下步驟：

(1)將(jiang)1.2ml丙(bing)三醇(chun)和1.8ml乳酸依次加入(ru)(ru)400ml去離子水中(zhong)混(hun)合均(jun)勻(yun)得(de)到(dao)溶(rong)劑(ji)，再將(jiang)4g魔芋葡甘聚(ju)(ju)糖(tang)kgm加入(ru)(ru)到(dao)攪(jiao)拌速度為500轉/分鐘的溶(rong)劑(ji)中(zhong)，魔芋葡甘聚(ju)(ju)糖(tang)順著溶(rong)劑(ji)攪(jiao)拌時形(xing)成(cheng)的漩渦緩慢加入(ru)(ru)，常溫環境下(xia)攪(jiao)拌3個(ge)小時至完全混(hun)合均(jun)勻(yun)，微波加熱4min，真空脫泡，去除表面和杯壁的固化液(ye)，即得(de)到(dao)溶(rong)液(ye)a；

(2)將1g聚(ju)乳(ru)酸加入(ru)到(dao)15ml二(er)氯甲(jia)(jia)烷和(he)5ml甲(jia)(jia)醇(chun)混合而成(cheng)的(de)有機溶劑中，常溫環境下用(yong)磁(ci)力(li)攪拌器以400轉/分鐘的(de)速度(du)攪拌2個小時至(zhi)完全混合均勻，得到(dao)溶液(ye)b；

(3)將0.05g羥基(ji)磷灰石晶須加入到步驟(2)制得的溶(rong)(rong)液(ye)b中(zhong)，常溫環境下(xia)攪(jiao)拌2個(ge)小時(shi)，超聲震蕩20min，使(shi)其(qi)混合(he)均勻，得到溶(rong)(rong)液(ye)c；

(4)取步驟(1)制得的溶液a流延到(dao)直徑(jing)為(wei)10cm的玻璃(li)皿中，得到(dao)厚(hou)度為(wei)0.5mm的魔芋葡(pu)甘聚糖kgm膜(mo)，冷凍(dong)10h，再在魔芋葡(pu)甘聚糖膜(mo)上(shang)流延厚(hou)度為(wei)0.5mm的溶液c成(cheng)膜(mo)，冷凍(dong)10h，冷凍(dong)干燥(zao)(zao)機中在零下40℃的條件下冷凍(dong)干燥(zao)(zao)得到(dao)厚(hou)度為(wei)1mm的kgm/pla/haw復合而成(cheng)的多層(ceng)多孔支架d；

(5)將(jiang)步驟(4)所(suo)得的(de)多(duo)層多(duo)孔支架(jia)d在280ml質量分數25％的(de)氨水(shui)(shui)與(yu)無水(shui)(shui)乙醇按照(zhao)體積比1︰3混合而成的(de)交聯(lian)液中(zhong)交聯(lian)12h后，取(qu)出(chu)置于蒸(zheng)餾水(shui)(shui)中(zhong)浸(jin)泡5次(ci)，每次(ci)2h，再冷凍干燥，最終得到kgm/pla/haw復合多(duo)層多(duo)孔支架(jia)。

如下表2為(wei)用mtt法對實(shi)施例(li)1制備(bei)(bei)得到(dao)的(de)kgm/pla/haw復(fu)合(he)多層多孔(kong)支架的(de)細(xi)胞(bao)(bao)毒性(xing)(xing)(xing)分析的(de)細(xi)胞(bao)(bao)增殖度(du)(rgr)值(zhi)，本實(shi)驗(yan)將293t細(xi)胞(bao)(bao)(轉染(ran)腺病毒e1a基因(yin)的(de)人腎上皮細(xi)胞(bao)(bao))作為(wei)實(shi)驗(yan)細(xi)胞(bao)(bao)，依據國家標(biao)準(gb/t16886.12-2005)，檢(jian)測細(xi)胞(bao)(bao)在(zai)待測材料的(de)培養液中的(de)增殖情況，根(gen)據國家標(biao)準(gb/t14233.2-2005)從而(er)判定(ding)其毒性(xing)(xing)(xing)等級，細(xi)胞(bao)(bao)毒性(xing)(xing)(xing)結果表明，支架濃度(du)在(zai)0.05-0.4g/ml時，細(xi)胞(bao)(bao)增殖度(du)均在(zai)100-120之間(jian)，細(xi)胞(bao)(bao)毒性(xing)(xing)(xing)為(wei)0級，說明制備(bei)(bei)的(de)魔芋葡(pu)甘聚糖/聚乳酸/羥基磷灰(hui)石晶(jing)須復(fu)合(he)多層多孔(kong)支架無細(xi)胞(bao)(bao)毒性(xing)(xing)(xing)，同時，

由圖4可知該支架的抗壓強度為11.25mpa，達到了(le)軟骨的強度要(yao)求。

表2復合多層多孔支架的(de)細胞增殖度

如圖4所示，最終(zhong)所得支架(jia)的(de)抗壓強度為11.25mpa，達到了軟骨的(de)強度要(yao)求；采取稱重法測出其孔(kong)隙率為83.15％，說明該支架(jia)具(ju)有較(jiao)高的(de)孔(kong)隙率。

實施例3

本實(shi)施例(li)一種復合(he)多(duo)(duo)層多(duo)(duo)孔(kong)支架(jia)(jia)，由魔(mo)(mo)芋葡甘(gan)聚(ju)糖(tang)、聚(ju)醚(mi)醚(mi)酮(tong)、羥(qian)基磷灰(hui)石(shi)(shi)晶(jing)須復合(he)而成，魔(mo)(mo)芋葡甘(gan)聚(ju)糖(tang)/聚(ju)醚(mi)醚(mi)酮(tong)/羥(qian)基磷灰(hui)石(shi)(shi)晶(jing)須復合(he)多(duo)(duo)層多(duo)(duo)孔(kong)支架(jia)(jia)制備所(suo)用(yong)的化(hua)學物質材料(liao)為：魔(mo)(mo)芋葡甘(gan)聚(ju)糖(tang)、聚(ju)醚(mi)醚(mi)酮(tong)、二氯甲烷(wan)、羥(qian)基磷灰(hui)石(shi)(shi)晶(jing)須、去離(li)子水、丙三(san)醇、乳酸、甲醇、質量(liang)分數(shu)25％的氨水、無水乙醇，其準備用(yong)量(liang)如下：

本實施例魔芋葡甘聚糖/聚醚醚酮/羥基磷灰石晶須復(fu)合多層(ceng)多孔支(zhi)架的(de)制備方法，具體包括(kuo)以下(xia)步驟：

(1)將(jiang)1.2ml丙三(san)醇(chun)和1.8ml乳(ru)酸依次加入400ml去離子(zi)水中混合均(jun)勻得到(dao)溶(rong)(rong)劑(ji)，再將(jiang)4g魔芋葡甘聚糖kgm加入到(dao)攪(jiao)拌(ban)速度(du)為500轉(zhuan)/分鐘(zhong)的溶(rong)(rong)劑(ji)中，魔芋葡甘聚糖順著(zhu)溶(rong)(rong)劑(ji)攪(jiao)拌(ban)時形(xing)成的漩渦緩慢加入，常溫環(huan)境下攪(jiao)拌(ban)3個小時至完全(quan)混合均(jun)勻，微(wei)波(bo)加熱4min，真空脫泡，去除(chu)表(biao)面和杯壁的固(gu)化液(ye)(ye)，即得到(dao)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)a；

(2)將2g聚醚醚酮加(jia)入到(dao)15ml二氯甲烷和5ml甲醇(chun)混(hun)合(he)而成(cheng)的(de)有機溶(rong)劑中，常溫(wen)環境(jing)下用磁力攪拌(ban)器(qi)以400轉/分鐘的(de)速度攪拌(ban)2個小時(shi)至完(wan)全混(hun)合(he)均勻(yun)，得(de)到(dao)溶(rong)液b；

(3)將0.2g羥基磷灰(hui)石晶(jing)須(xu)加入到步驟(2)制得的溶液(ye)b中，常(chang)溫環境下攪拌2個小(xiao)時，超(chao)聲震蕩20min，使其(qi)混合(he)均勻，得到溶液(ye)c；

(4)取步驟(1)制得(de)的(de)(de)溶液(ye)(ye)a流(liu)延(yan)到(dao)玻璃皿中，得(de)到(dao)厚度(du)為1mm的(de)(de)魔(mo)芋葡甘聚(ju)糖kgm膜(mo)，冷(leng)凍10h，再在魔(mo)芋葡甘聚(ju)糖膜(mo)上(shang)流(liu)延(yan)厚度(du)為1mm的(de)(de)溶液(ye)(ye)c成(cheng)膜(mo)，冷(leng)凍10h；經過多次流(liu)延(yan)，直至得(de)到(dao)6層(ceng)(ceng)kgm膜(mo)和4層(ceng)(ceng)peek/haw膜(mo)的(de)(de)厚度(du)為10mm的(de)(de)kgm/peek/haw冷(leng)凍未(wei)干(gan)燥樣品，6層(ceng)(ceng)kgm膜(mo)和4層(ceng)(ceng)peek/haw膜(mo)是(shi)(shi)先一(yi)層(ceng)(ceng)kgm膜(mo)，然后一(yi)層(ceng)(ceng)peek/haw膜(mo)，再一(yi)層(ceng)(ceng)kgm膜(mo)，兩(liang)種膜(mo)交替疊加，最上(shang)面(mian)是(shi)(shi)兩(liang)層(ceng)(ceng)kgm膜(mo)，樣品在冷(leng)凍干(gan)燥機中在零下(xia)40℃的(de)(de)條件下(xia)冷(leng)凍干(gan)燥得(de)到(dao)kgm/peek/haw復合而成(cheng)的(de)(de)多層(ceng)(ceng)多孔支(zhi)架d；

(5)將(jiang)步驟(4)所得(de)的(de)(de)多(duo)層多(duo)孔(kong)支架(jia)d在280ml的(de)(de)質(zhi)量(liang)分數25％的(de)(de)氨(an)水(shui)與無水(shui)乙醇按(an)照體積比1︰3混(hun)合而(er)成的(de)(de)交(jiao)聯液中(zhong)交(jiao)聯12h后，取出置(zhi)于蒸餾水(shui)中(zhong)浸泡8次，每次1.5h，再冷凍干燥，最終得(de)到kgm/peek/haw復合多(duo)層多(duo)孔(kong)支架(jia)。

如(ru)圖4所示，本實施例制備的kgm/peek/haw復合(he)多(duo)層多(duo)孔(kong)(kong)支(zhi)架(jia)由于含有較多(duo)的羥基磷(lin)灰石(shi)晶(jing)須(xu)，抗壓強度高達12.37mpa，滿足軟骨組織要求；采取稱重法測出其孔(kong)(kong)隙率(lv)為86.29％，說明該(gai)支(zhi)架(jia)具有較高的孔(kong)(kong)隙率(lv)。

實施例4

本(ben)實施例一種(zhong)復合(he)多層多孔支架，由魔芋葡甘聚(ju)(ju)(ju)糖、聚(ju)(ju)(ju)乙二(er)醇(chun)和羥基磷(lin)(lin)灰石晶須復合(he)而成，魔芋葡甘聚(ju)(ju)(ju)糖/聚(ju)(ju)(ju)乙二(er)醇(chun)/羥基磷(lin)(lin)灰石晶須復合(he)多層多孔支架制備所用(yong)的化學(xue)物質(zhi)材料為：魔芋葡甘聚(ju)(ju)(ju)糖、聚(ju)(ju)(ju)乙二(er)醇(chun)、二(er)氯甲(jia)烷、羥基磷(lin)(lin)灰石晶須、去離子水(shui)、丙(bing)三醇(chun)、乳酸、甲(jia)醇(chun)、質(zhi)量(liang)分(fen)數25％的氨水(shui)、無水(shui)乙醇(chun)，其準備用(yong)量(liang)如下：

本實(shi)施(shi)例(li)魔芋葡甘聚(ju)(ju)糖(tang)/聚(ju)(ju)乙二醇/羥(qian)基(ji)磷灰石晶須(xu)復(fu)合多層多孔(kong)支架(jia)的(de)制備方法，具體包括以下步驟：

(1)將(jiang)(jiang)1.2ml丙(bing)三醇和1.8ml乳(ru)酸依次加(jia)(jia)入400ml去(qu)離(li)子水中混合(he)(he)均勻得(de)到溶(rong)劑，再(zai)將(jiang)(jiang)6g的魔芋(yu)葡甘聚(ju)糖(tang)kgm加(jia)(jia)入到攪(jiao)拌速度為500轉/分鐘的溶(rong)劑中，魔芋(yu)葡甘聚(ju)糖(tang)順著溶(rong)劑攪(jiao)拌時形(xing)成的漩(xuan)渦緩(huan)慢(man)加(jia)(jia)入，常溫環境下攪(jiao)拌3個小時至完全(quan)混合(he)(he)均勻，微波加(jia)(jia)熱4min，真空脫泡，去(qu)除表(biao)面和杯壁的固化液，即得(de)到溶(rong)液a；

(2)將(jiang)3g的(de)聚乙二醇(chun)加入到15ml二氯甲(jia)烷和5ml甲(jia)醇(chun)混合而成的(de)有機溶劑中，常溫環境(jing)下用磁力攪(jiao)拌器以400轉/分鐘的(de)速度攪(jiao)拌2個小(xiao)時至完全混合均(jun)勻，得(de)到溶液b；

(3)將0.15g羥基磷灰石晶須加入(ru)到(dao)步驟(zou)(2)制(zhi)得的溶液b中，常溫環境下攪拌2個小時，超聲震蕩(dang)20min，使其混合(he)均勻，得到(dao)溶液c；

(4)取步驟(1)制得的(de)溶(rong)液(ye)(ye)a流(liu)延(yan)到(dao)(dao)直徑為(wei)10cm的(de)玻(bo)璃皿中，得到(dao)(dao)厚(hou)度為(wei)0.5mm的(de)魔芋葡甘聚(ju)糖(tang)kgm膜(mo)(mo)(mo)(mo)，冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)10h，再在(zai)魔芋葡甘聚(ju)糖(tang)膜(mo)(mo)(mo)(mo)上(shang)流(liu)延(yan)厚(hou)度為(wei)1mm的(de)溶(rong)液(ye)(ye)c成(cheng)膜(mo)(mo)(mo)(mo)，冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)10h；經過(guo)多次流(liu)延(yan)，直至得到(dao)(dao)6層(ceng)kgm膜(mo)(mo)(mo)(mo)和4層(ceng)peg/haw膜(mo)(mo)(mo)(mo)的(de)厚(hou)度為(wei)20mm的(de)kgm/peg/haw冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)未干(gan)燥樣(yang)品，6層(ceng)kgm膜(mo)(mo)(mo)(mo)和4層(ceng)peg/haw膜(mo)(mo)(mo)(mo)是(shi)先一(yi)(yi)層(ceng)kgm膜(mo)(mo)(mo)(mo)，然后一(yi)(yi)層(ceng)peg/haw膜(mo)(mo)(mo)(mo)，再一(yi)(yi)層(ceng)kgm膜(mo)(mo)(mo)(mo)，兩種(zhong)膜(mo)(mo)(mo)(mo)交替(ti)疊加，最上(shang)面是(shi)兩層(ceng)kgm膜(mo)(mo)(mo)(mo)，樣(yang)品在(zai)冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)干(gan)燥機(ji)中在(zai)零下40℃的(de)條(tiao)件(jian)下冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)干(gan)燥得到(dao)(dao)kgm/peg/haw復合而成(cheng)的(de)多層(ceng)多孔(kong)支架d；

(5)將步驟(zou)(4)所得的(de)多層(ceng)多孔支(zhi)架d在280ml質量分數25％的(de)氨水與無(wu)水乙醇按照體積比1︰3混合而成(cheng)的(de)交(jiao)聯液(ye)中交(jiao)聯15h后，取出(chu)置于蒸餾水中浸泡6次，每(mei)次2h，再冷凍干燥，最終得到kgm/peg/haw復合多層(ceng)多孔支(zhi)架。

實施例5

本實施例一種復(fu)(fu)合(he)多層(ceng)多孔(kong)支架，由魔芋葡(pu)甘聚(ju)糖(tang)、透(tou)明質酸(suan)(suan)和羥基磷灰(hui)石晶(jing)(jing)須(xu)復(fu)(fu)合(he)而成(cheng)，魔芋葡(pu)甘聚(ju)糖(tang)/透(tou)明質酸(suan)(suan)/羥基磷灰(hui)石晶(jing)(jing)須(xu)復(fu)(fu)合(he)多層(ceng)多孔(kong)支架制備所用(yong)的(de)化學物(wu)質材料為(wei)：魔芋葡(pu)甘聚(ju)糖(tang)、透(tou)明質酸(suan)(suan)、二氯甲烷、羥基磷灰(hui)石晶(jing)(jing)須(xu)、去離子水(shui)、丙三醇、乳酸(suan)(suan)、甲醇、質量(liang)分(fen)數25％的(de)氨水(shui)、無(wu)水(shui)乙(yi)醇，其準備用(yong)量(liang)如下：

本實施例魔芋(yu)葡甘聚(ju)糖/透明(ming)質酸/羥(qian)基磷灰石晶須復合(he)多(duo)層多(duo)孔支架(jia)的制備方法(fa)，具體包括以下步驟：

(1)將1.2ml丙三醇和1.8ml乳酸依次加入400ml去離(li)子水中混合(he)均勻得(de)到(dao)溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)，再將6g魔芋葡(pu)甘聚糖kgm加入到(dao)攪(jiao)拌(ban)速(su)度為500轉/分(fen)鐘的(de)溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)中，魔芋葡(pu)甘聚糖順著溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)攪(jiao)拌(ban)時形成的(de)漩渦緩慢加入，常溫環(huan)境下攪(jiao)拌(ban)3個小時至完(wan)全混合(he)均勻，微波加熱(re)4min，真空脫(tuo)泡，去除表面和杯壁的(de)固化液，即得(de)到(dao)溶(rong)(rong)液a；

(2)將2g透(tou)明質酸加入到15ml二氯甲烷和5ml甲醇混合(he)而成(cheng)的(de)有(you)機溶劑中，常溫(wen)環境下用磁力(li)攪(jiao)拌器(qi)以400轉/分鐘的(de)速度(du)攪(jiao)拌2個小時(shi)至完全混合(he)均勻，得到溶液b；

(3)將0.3g羥基磷灰石晶(jing)須加(jia)入到步驟(2)制得的(de)溶液(ye)(ye)b中，常溫環境(jing)下攪拌2個小時，超聲(sheng)震蕩20min，使(shi)其混合(he)均勻，得到溶液(ye)(ye)c；

(4)取步驟(1)制(zhi)得(de)的溶液a流延(yan)到(dao)直徑為(wei)10cm的玻(bo)璃(li)皿中，得(de)到(dao)厚度為(wei)1mm的魔芋葡甘聚糖kgm膜(mo)(mo)，冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)10h，再在魔芋葡甘聚糖膜(mo)(mo)上流延(yan)厚度為(wei)1.5mm的溶液c成膜(mo)(mo)，冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)10h；經(jing)過多次流延(yan)，直至得(de)到(dao)10層kgm膜(mo)(mo)和10層ha/haw膜(mo)(mo)交替疊加的厚度為(wei)25mm的kgm/ha/haw冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)未(wei)干(gan)燥樣品，并在冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)干(gan)燥機中在零(ling)下(xia)40℃的條件下(xia)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)干(gan)燥得(de)到(dao)kgm/ha/haw復合而成的多層多孔支架d；

(5)將步驟(4)所得(de)的(de)多(duo)(duo)層(ceng)(ceng)多(duo)(duo)孔(kong)支(zhi)架d在280ml的(de)質量(liang)分(fen)數25％的(de)氨(an)水與無水乙醇(chun)按照(zhao)體積比1︰3混(hun)合而成的(de)交(jiao)聯(lian)液(ye)中(zhong)交(jiao)聯(lian)24h后，取出(chu)置于蒸餾水中(zhong)浸泡9次(ci)，每次(ci)1h，再冷凍干燥，最終得(de)到kgm/ha/haw復合多(duo)(duo)層(ceng)(ceng)多(duo)(duo)孔(kong)支(zhi)架。

實施例6

本(ben)實施(shi)例一種復(fu)合(he)多層多孔支架(jia)，由魔(mo)芋(yu)葡(pu)甘聚糖、透明(ming)質(zhi)(zhi)酸和羥基磷灰石晶(jing)須復(fu)合(he)而成，魔(mo)芋(yu)葡(pu)甘聚糖/透明(ming)質(zhi)(zhi)酸/羥基磷灰石晶(jing)須復(fu)合(he)多層多孔支架(jia)制(zhi)備所用的化學物質(zhi)(zhi)材料(liao)為：魔(mo)芋(yu)葡(pu)甘聚糖、透明(ming)質(zhi)(zhi)酸、二氯甲(jia)烷(wan)、羥基磷灰石晶(jing)須、去離子水(shui)、丙(bing)三醇、乳酸、甲(jia)醇、質(zhi)(zhi)量(liang)分數25％的氨水(shui)、無(wu)水(shui)乙醇，其準備用量(liang)如下：

本實施(shi)例魔芋(yu)葡甘聚糖(tang)/透明質酸/羥基磷灰石晶(jing)須復合多層多孔支架(jia)的制備方法，具(ju)體包括(kuo)以下步驟(zou)：

(1)將1.2ml丙三(san)醇和1.8ml乳酸依次加(jia)(jia)入400ml去離子水中(zhong)混(hun)合(he)均勻得到溶(rong)劑，再將6g魔(mo)芋葡(pu)甘(gan)聚糖(tang)kgm加(jia)(jia)入到攪拌(ban)(ban)速度為500轉(zhuan)/分鐘的溶(rong)劑中(zhong)，魔(mo)芋葡(pu)甘(gan)聚糖(tang)順(shun)著(zhu)溶(rong)劑攪拌(ban)(ban)時(shi)形(xing)成的漩渦緩慢(man)加(jia)(jia)入，常溫環境(jing)下攪拌(ban)(ban)3個(ge)小時(shi)至完(wan)全混(hun)合(he)均勻，微波加(jia)(jia)熱4min，真空(kong)脫泡，去除表面(mian)和杯壁的固化(hua)液，即得到溶(rong)液a；

(2)將3g透明質酸加入(ru)到15ml二氯(lv)甲(jia)烷和5ml甲(jia)醇混合(he)而成的(de)(de)有機溶劑(ji)中，常溫(wen)環境下用磁力攪拌器以400轉(zhuan)/分鐘的(de)(de)速度攪拌2個小時至完全混合(he)均勻，得到溶液b；

(3)將0.45g羥基磷灰石晶須加入到步(bu)驟(2)制得的溶液b中(zhong)，常溫環境下攪(jiao)拌2個小時，超聲(sheng)震蕩20min，使(shi)其混合(he)均勻，得到溶液c；

(4)取步驟(1)制得(de)的溶(rong)液(ye)a流延到直徑為10cm的玻璃皿中，得(de)到厚(hou)(hou)度為1.5mm的魔芋葡甘聚糖(tang)kgm膜，冷凍(dong)10h，再在(zai)魔芋葡甘聚糖(tang)膜上流延厚(hou)(hou)度為1.5mm的溶(rong)液(ye)c成(cheng)膜，冷凍(dong)10h；經(jing)過多(duo)次流延，直至得(de)到10層kgm膜和10層ha/haw膜交替(ti)疊(die)加的厚(hou)(hou)度為30mm的kgm/ha/haw冷凍(dong)未干燥樣品，并在(zai)冷凍(dong)干燥機中在(zai)零下40℃的條件(jian)下冷凍(dong)干燥得(de)到kgm/ha/haw復合而成(cheng)的多(duo)層多(duo)孔支架d；

(5)將步(bu)驟(4)所(suo)得的(de)多(duo)(duo)(duo)層(ceng)多(duo)(duo)(duo)孔支架d在280ml質(zhi)量分(fen)數25％的(de)氨水與(yu)無(wu)水乙醇按照體積比1︰3混合(he)而成的(de)交(jiao)聯(lian)液中(zhong)(zhong)交(jiao)聯(lian)18h后，取出置(zhi)于蒸餾(liu)水中(zhong)(zhong)浸泡8次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)1.5h，再冷凍干燥，最終得到kgm/ha/haw復(fu)合(he)多(duo)(duo)(duo)層(ceng)多(duo)(duo)(duo)孔支架。