本發明涉(she)及醫藥技術領域，具體(ti)涉(she)及一種鹽酸普(pu)萘洛爾(er)凝膠及其制備(bei)方法(fa)。

背景技術：

嬰幼(you)兒血管瘤是(shi)嬰幼(you)兒常發的良性(xing)腫瘤，在新生兒中，其(qi)(qi)發病(bing)率為(wei)1.1％～2.6％，2/3發生于頭頸(jing)部，其(qi)(qi)中1歲以(yi)下的嬰幼(you)兒患病(bing)率高(gao)達(da)10％～12％，嬰幼(you)兒血管瘤發病(bing)率高(gao)，一般情況下癥(zheng)狀輕(qing)、瘤體(ti)小的可(ke)能會(hui)(hui)自行消退，但發生在特殊(shu)部位的，如(ru)面部、口(kou)腔、眼(yan)、呼(hu)吸道(dao)等可(ke)能會(hui)(hui)導致毀(hui)容、功能損傷(shang)，有(you)些情況下還會(hui)(hui)伴(ban)有(you)潰(kui)瘍、出血等并發癥(zheng)，甚至會(hui)(hui)危及生命，因此必(bi)須對其(qi)(qi)進(jin)行合理治療。

傳統上激素類藥物、手(shou)(shou)術等在(zai)治療嬰幼兒血管瘤時產生較大的(de)副(fu)作(zuo)用，自1998年發現(xian)鹽酸普(pu)萘洛爾口服制劑對嬰幼兒血管瘤的(de)治療效果顯著以來(lai)，逐(zhu)漸取代激素等治療手(shou)(shou)段，成為治療嬰幼兒血管瘤的(de)一線藥物。鹽酸普(pu)萘洛爾(Propranolol Hydrochloride)，化(hua)學(xue)結構式(shi)如(ru)下：

鹽酸普萘洛爾為(wei)非(fei)選擇性β-受體(ti)阻斷(duan)劑，其治療(liao)嬰幼(you)兒(er)血(xue)管瘤(liu)的機制為(wei)：短期(qi)(qi)內(nei)促進血(xue)管收縮，中期(qi)(qi)通過抑制多條血(xue)管生成信號(hao)通路，長期(qi)(qi)通過誘導(dao)(dao)內(nei)皮(pi)細(xi)胞凋亡，最終導(dao)(dao)致瘤(liu)體(ti)消退(tui)。但(dan)近年來(lai)有(you)研究表明其不良反應時(shi)常發(fa)生，如淺表皮(pi)膚出現褶皺，服藥期(qi)(qi)間發(fa)生腹(fu)瀉，溢奶，易激，四肢發(fa)涼等。

因此改變(bian)鹽酸普萘洛爾(er)的(de)給藥(yao)(yao)形式是治(zhi)療嬰幼兒血(xue)管瘤的(de)一(yi)個新(xin)突破。經皮給藥(yao)(yao)系統(tong)可避(bi)免(mian)肝臟的(de)首過效(xiao)應和(he)藥(yao)(yao)物在胃腸(chang)道的(de)滅活，藥(yao)(yao)物的(de)吸收不(bu)受胃腸(chang)道因素(su)的(de)影響。維持恒定有效(xiao)血(xue)藥(yao)(yao)濃度或生(sheng)理(li)效(xiao)應，維持作用時間長，避(bi)免(mian)口服給藥(yao)(yao)引(yin)起血(xue)藥(yao)(yao)濃度的(de)峰谷(gu)現象，降低(di)毒副(fu)反應，使用方便(bian)，患者可以(yi)自主用藥(yao)(yao)，也(ye)可以(yi)隨時撤(che)銷用藥(yao)(yao)等。

凝(ning)膠(jiao)劑具(ju)有外觀光滑，透(tou)明細膩，稠度、黏度適宜，易于(yu)涂布等優點，因此(ci)將鹽酸(suan)普萘洛爾(er)制成外用的(de)凝(ning)膠(jiao)劑對嬰幼兒血管瘤的(de)治療具(ju)有良好(hao)的(de)研(yan)發 價(jia)值。

中國發明專利(li)CN200410008121.7，公開了一種經皮給(gei)藥系統，.一種經皮給(gei)藥系統，包(bao)括(kuo)：一藥物(wu)貯庫、一吸附層和一隔離(li)層，所述(shu)的藥物(wu)貯庫由藥物(wu)、溶劑(ji)(ji)、透皮促進劑(ji)(ji)和凝膠(jiao)化(hua)劑(ji)(ji)組成；所述(shu)的藥物(wu)為鹽酸普萘洛爾、鹽酸維(wei)拉帕米(mi)或鹽酸氯丙(bing)嗪；所述(shu)的透皮促進劑(ji)(ji)為丙(bing)二醇(chun)、油酸、月桂氮酮、聚乙二醇(chun)四(si)種物(wu)質的混合(he)物(wu)；所述(shu)的凝膠(jiao)化(hua)劑(ji)(ji)為羥丙(bing)基甲基纖維(wei)素、聚乙烯(xi)醇(chun)的混合(he)物(wu)，以注射用(yong)水作溶劑(ji)(ji)(授權公布號：CN100386073C)。

中(zhong)國(guo)發明(ming)專利(li)CN201210420731.2，公開了一種治療嬰幼(you)兒淺表(biao)(biao)血(xue)管瘤的鹽酸普(pu)萘洛(luo)爾(er)凝膠，由鹽酸普(pu)萘洛(luo)爾(er)、凝膠基(ji)質(zhi)、經(jing)皮促滲(shen)劑、防腐劑、保(bao)濕劑、表(biao)(biao)面活性劑等按一定比例制成，所(suo)述(shu)的經(jing)皮促滲(shen)劑選自橙花叔醇(chun)、松節油、法尼醇(chun)、四氫香葉醇(chun)、茴(hui)香腦(nao)和甘(gan)草酸二鉀；所(suo)述(shu)的凝膠基(ji)質(zhi)選自羥丙(bing)基(ji)甲基(ji)纖(xian)(xian)維(wei)素(su)、羧(suo)甲基(ji)纖(xian)(xian)維(wei)素(su)鈉(na)、卡波姆(mu)、透明(ming)質(zhi)酸、聚乙烯醇(chun)、玻(bo)璃酸鈉(na)、海藻酸鈉(na)和甲基(ji)纖(xian)(xian)維(wei)素(su)；所(suo)述(shu)的保(bao)濕劑為(wei)丙(bing)二醇(chun)或甘(gan)油；所(suo)述(shu)的表(biao)(biao)面活性劑為(wei)聚山梨酯(zhi)(zhi)-60或聚山梨酯(zhi)(zhi)-80(授權公布號：CN102871956B)。

中國發(fa)明專利CN201310647695.8，公(gong)開了一種鹽(yan)酸普(pu)萘洛爾脂質(zhi)體凝膠及其(qi)制備方(fang)法，所述(shu)的鹽(yan)酸普(pu)萘洛爾脂質(zhi)體凝膠，是(shi)由(you)以下重量(liang)份的原料(liao)藥和(he)輔(fu)料(liao)制成(cheng)的：鹽(yan)酸普(pu)萘洛爾0.012％～0.075％，磷脂酰乙醇胺0.037％～0.150％，膽固(gu)醇0.012％～0.075％，三乙醇胺2.5％～5％，卡波姆1％～2％，余量(liang)為(wei)水(授(shou)權公(gong)布(bu)號(hao)：CN 103622903B)。

中國發(fa)明專(zhuan)利申請CN201510158251.7，公開了一種鹽酸(suan)普萘(nai)洛爾外用凝膠(jiao)制劑(ji)(ji)及其(qi)制備(bei)方法(fa)和(he)用途，所述(shu)(shu)(shu)的(de)鹽酸(suan)普萘(nai)洛爾外用凝膠(jiao)制劑(ji)(ji)，包含：至少3重量％的(de)鹽酸(suan)普萘(nai)洛爾，以及10-35重量％的(de)凝膠(jiao)基質(zhi)、3-13重量％的(de)透皮促滲劑(ji)(ji)、2-12重量％的(de)保濕(shi)劑(ji)(ji)、0.02-0.2重量％的(de)抑菌劑(ji)(ji)；以及余(yu)量的(de)水。所述(shu)(shu)(shu)凝膠(jiao)基質(zhi)選(xuan)自(zi)泊(bo)洛沙(sha)姆237、泊(bo)洛沙(sha)姆338、泊(bo)洛沙(sha)姆407；所述(shu)(shu)(shu)透皮促滲劑(ji)(ji)選(xuan)自(zi)月桂氮卓酮、肉豆蔻酸(suan)異丙脂、薄荷腦(nao)；所述(shu)(shu)(shu)保濕(shi)劑(ji)(ji)選(xuan)自(zi)丙二醇、甘油和(he)山梨醇(申請公布(bu)號：CN 105434336A)。

中(zhong)國發明專利申(shen)請CN201510159074.4，公開了一種(zhong)鹽(yan)(yan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)普(pu)(pu)萘(nai)洛(luo)爾亞微(wei)乳凝(ning)膠(jiao)(jiao)及其制備(bei)方法(fa)和(he)用(yong)途，所(suo)述(shu)的鹽(yan)(yan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)普(pu)(pu)萘(nai)洛(luo)爾亞微(wei)乳凝(ning)膠(jiao)(jiao)，包含鹽(yan)(yan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)普(pu)(pu)萘(nai)洛(luo)爾、油(you)、表面(mian)活性(xing)劑(ji)(ji)、助表面(mian)活性(xing)劑(ji)(ji)、滲透促(cu)進劑(ji)(ji)、凝(ning)膠(jiao)(jiao)基(ji)質(zhi)、pH值調節劑(ji)(ji)，以及余量的水。所(suo)述(shu)的表面(mian)活性(xing)劑(ji)(ji)選自聚(ju)(ju)(ju)氧(yang)(yang)乙烯失水山(shan)梨醇脂(zhi)肪(fang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)酯、聚(ju)(ju)(ju)氧(yang)(yang)乙烯脂(zhi)肪(fang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)酯、聚(ju)(ju)(ju)氧(yang)(yang)乙烯氫(qing)化蓖麻油(you)、卵磷脂(zhi)、聚(ju)(ju)(ju)氧(yang)(yang)乙烯脂(zhi)肪(fang)醇醚、聚(ju)(ju)(ju)氧(yang)(yang)乙烯－聚(ju)(ju)(ju)氧(yang)(yang)丙烯共(gong)聚(ju)(ju)(ju)物(wu)和(he)嵌段共(gong)聚(ju)(ju)(ju)物(wu)和(he)二-(2-乙基(ji)己基(ji))琥珀酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)酯磺(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鈉(na)；所(suo)述(shu)的助 表面(mian)活性(xing)劑(ji)(ji)選自乙醇、丙二醇、異丙醇、丙三醇、正丁醇和(he)三醋酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)甘油(you)酯；所(suo)述(shu)的凝(ning)膠(jiao)(jiao)基(ji)質(zhi)選自卡波(bo)姆、纖維素(su)衍生物(wu)、黃(huang)原膠(jiao)(jiao)、阿拉伯膠(jiao)(jiao)、角叉菜膠(jiao)(jiao)和(he)海藻酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鈉(na)；所(suo)述(shu)的滲透促(cu)進劑(ji)(ji)選自氮酮(tong)、薄荷腦、冰片、樟(zhang)腦和(he)檸檬油(you)精(jing)(申(shen)請公布號：CN 105434337A)。

但是，由(you)于(yu)患者多為1歲以下的嬰(ying)幼兒(er)(er)，所(suo)以對凝膠(jiao)制劑的透皮(pi)吸(xi)收性(xing)能和(he)(he)皮(pi)膚無刺(ci)(ci)激(ji)(ji)性(xing)要求更高。鹽酸(suan)普萘(nai)洛爾為水(shui)溶性(xing)藥(yao)物(wu)，其透皮(pi)吸(xi)收性(xing)能極差，現(xian)有(you)技術中(zhong)，對透皮(pi)吸(xi)收性(xing)能的改善不明(ming)顯；而且(qie)凝膠(jiao)制劑中(zhong)的常(chang)用經皮(pi)促滲劑薄荷(he)腦(nao)、樟腦(nao)、冰(bing)片等揮發性(xing)和(he)(he)刺(ci)(ci)激(ji)(ji)性(xing)較強(qiang)；松節油、茴香腦(nao)等具(ju)有(you)一(yi)定的皮(pi)膚毒性(xing)，均易造成嬰(ying)幼兒(er)(er)皮(pi)膚出現(xian)紅腫(zhong)、熱痛等刺(ci)(ci)激(ji)(ji)性(xing)和(he)(he)過敏性(xing)反應，不適合嬰(ying)幼兒(er)(er)使(shi)用。

技術實現要素：

本(ben)發(fa)明的目的在(zai)(zai)于提(ti)供(gong)一(yi)種透(tou)皮(pi)吸收性(xing)能好且對嬰幼兒(er)皮(pi)膚(fu)無(wu)刺(ci)激性(xing)、無(wu)過敏反應的鹽(yan)酸普萘洛爾凝膠制劑(ji)，本(ben)發(fa)明的另一(yi)目的是(shi)提(ti)供(gong)上述的鹽(yan)酸普萘洛爾凝膠制劑(ji)的制備方法(fa)，本(ben)發(fa)明的第三目的是(shi)提(ti)供(gong)上述的鹽(yan)酸普萘洛爾凝膠制劑(ji)在(zai)(zai)制備治療(liao)嬰幼兒(er)血管瘤藥物中的應用(yong)。

經皮(pi)給藥制(zhi)劑(ji)最(zui)關(guan)鍵(jian)的問題是(shi)藥物(wu)(wu)的透皮(pi)吸(xi)收，尤(you)其是(shi)水(shui)溶性藥物(wu)(wu)，透皮(pi)性能(neng)極差，因此促(cu)透技術(shu)成為制(zhi)劑(ji)過程的關(guan)鍵(jian)技術(shu)之一(yi)。鹽酸普萘洛爾為水(shui)溶性藥物(wu)(wu)，本發明(ming)在水(shui)凝膠(jiao)制(zhi)劑(ji)的預實驗中也發現處方中添加氮酮和(he)丙(bing)二(er)醇這兩(liang)種促(cu)透劑(ji)的含量對體外透皮(pi)累積滲透量的影(ying)響最(zui)大(da)。

繼(ji)而(er)，我們采用(yong)星(xing)點設計-效(xiao)應面法對(dui)(dui)鹽酸(suan)普萘洛爾凝(ning)膠的(de)處方進行篩選，采用(yong)Design-Expert軟件對(dui)(dui)數據進行處理，由效(xiao)應面圖和二項式回歸模型(xing)得到的(de)最優處方和累計滲(shen)透量與實測值的(de)偏差較小，表明(ming)所建(jian)模型(xing)預測性良好。

本發(fa)明(ming)的第(di)一(yi)方面，是提(ti)供一(yi)種鹽(yan)酸(suan)普萘(nai)洛爾凝膠(jiao)。

一種鹽酸普萘洛(luo)爾(er)凝(ning)膠，其主(zhu)藥和輔料的重量百分比為(wei)：

鹽酸普萘洛爾(er)1％～4.5％，

聯合(he)促透(tou)劑8％～12％，

防腐(fu)劑0.05％～0.15％，

保濕(shi)劑4％～11％，

凝(ning)膠基質(zhi)10.5％～29％，

余量為水。

所(suo)述的聯合促透劑為(wei)氮酮和丙(bing)二醇(chun)。

進(jin)一步地(di)，所述鹽酸普萘洛爾(er)凝膠劑(ji)，優(you)選地(di)，

鹽酸普萘洛爾2％～4％，

促(cu)透劑1--氮酮 3％～5％，

促透劑2--丙二醇 4％～6％，

防腐劑0.05％～0.10％，

凝膠基質15％～25％，

保濕(shi)劑5％～10％。

余量為水。

所述(shu)的凝膠基質為泊洛沙(sha)姆(P407、P188)、海藻酸鈉(na)，優(you)選(xuan)的，是(shi)泊洛沙(sha)姆(P407)。

所述(shu)的防腐劑為苯甲(jia)酸、山(shan)梨酸、羥苯乙酯，優選的，是(shi)羥苯乙酯。

所述(shu)的(de)保(bao)濕(shi)劑為甘(gan)油、丙二(er)醇(chun)，優(you)選的(de)，是甘(gan)油。

所述(shu)的水(shui)(shui)為(wei)純化(hua)水(shui)(shui)、注射用水(shui)(shui)。

進一(yi)步(bu)地(di)，所述鹽酸普萘(nai)洛爾凝膠劑(ji)，優(you)選地(di)，

鹽酸(suan)普萘洛爾(er)2.8％～3.2％，最優(you)為3％，

氮酮(tong)3.8％～4.2％，最(zui)優為4％，

丙(bing)二(er)醇4.5％～5.8％，最(zui)優(you)為5％，

羥苯乙酯0.08％～0.11％，最優為(wei)0.1％，

泊洛沙姆(P407)19％～21％，最優(you)為(wei)20％，

甘油4％～6％，最優為5％，

余量為水。

本發明的(de)第(di)二方(fang)面，是(shi)提供上述的(de)鹽酸普萘洛爾凝膠的(de)制備方(fang)法。

所述(shu)鹽酸普萘洛爾(er)的制備方法如(ru)下：

A、先將鹽酸普萘洛爾(er)和防(fang)腐劑(ji)(優(you)選羥苯乙(yi)酯)用(yong)適量純化(hua)水溶(rong)解、分散，備用(yong)；

B、向上述溶液中緩(huan)緩(huan)加入(ru)凝膠基質(優選泊洛沙姆P407)，均勻攪拌使(shi)其全部(bu)沒(mei)于水中，于4℃下充分溶脹；

C、24h后(hou)(hou)取出，在攪拌條件下加入保濕劑(ji)(優選甘油)、丙二(er)醇(chun)、氮酮，攪勻后(hou)(hou)封存；于陰涼處(chu)過夜，分裝，即得無色(se)透(tou)明的凝膠制劑(ji)。

所述的緩(huan)緩(huan)加入，為凝膠(jiao)基質(zhi)分次均勻加入溶液中。

所述的攪拌(ban)速度為(wei)100～500rpm/min，攪拌(ban)時間為(wei)5～10min。

本(ben)發明的第三方面，是提(ti)供上述的鹽酸普萘(nai)洛(luo)爾凝膠制劑在制備治療嬰(ying)幼(you) 兒血(xue)管瘤藥物中的應(ying)用。

本發明(ming)制備(bei)的(de)鹽酸普萘洛(luo)爾凝膠劑(ji)具有均勻細(xi)膩，黏性適宜，易(yi)于涂展(zhan)，對皮(pi)膚無刺激等特點。本發明(ming)的(de)水凝膠制劑(ji)中，氮酮的(de)促透機制可(ke)能與(yu)擾亂角(jiao)質(zhi)層(ceng)(ceng)的(de)有序結(jie)構、影響細(xi)胞膜的(de)流動性有關，丙二醇可(ke)能是通過提(ti)高藥(yao)物(wu)在角(jiao)質(zhi)層(ceng)(ceng)中的(de)溶解性來促進藥(yao)物(wu)的(de)經皮(pi)吸收，兩者起到聯(lian)合、協同(tong)促透的(de)作用(yong)。

本發明制備的鹽酸(suan)普萘(nai)(nai)洛爾凝(ning)膠劑在治療淺表層嬰(ying)幼兒血管瘤時替代鹽酸(suan)普萘(nai)(nai)洛爾凝(ning)膠劑口服制劑，不僅給(gei)藥方便，避免肝臟首過(guo)效應(ying)，而且(qie)凝(ning)膠劑在皮膚形成藥物貯庫，起到緩釋作用，同時患兒的順(shun)應(ying)性更(geng)好。

附圖說明

圖(tu)1本(ben)發明的體(ti)外累積透(tou)皮滲透(tou)量—時間曲線圖(tu)；

圖(tu)2為標準品HPLC色譜圖(tu)；

圖(tu)3為供試品HPLC色譜(pu)圖(tu)；

圖4為(wei)氮酮(tong)百(bai)分(fen)含量和(he)丙二醇百(bai)分(fen)含量對累積透皮量影(ying)響的三(san)維效應面圖；

圖(tu)(tu)5為氮(dan)酮百(bai)分含(han)量和丙二醇百(bai)分含(han)量對累積(ji)透皮量影響的二維等高(gao)圖(tu)(tu)。

具體實施方式

下(xia)面(mian)結合實施(shi)例對本發(fa)明(ming)提供的具體實施(shi)方(fang)式作詳細(xi)說明(ming)。

材料：

鹽酸普萘洛爾(批號(hao)：20150301，國(guo)藥集團化(hua)學(xue)試劑有限公司)；

1，2-丙二(er)醇(批號：Lot.No.20140503，永(yong)華化學(xue)科技有限公司)；

氮(dan)酮(批號：20131115，國藥集團化學試(shi)劑有(you)限(xian)公司)；

泊洛沙姆(mu)P407(批號：20140713，上海昌力醫藥輔料技術有限(xian)公司(si))；

甘油(批號(hao),20130907，國藥集團(tuan)化學試劑有限公(gong)司(si))；

羥(qian)苯乙酯(zhi)(批號：20121104，上海(hai)凌峰化學試劑有限公司)；

KM小鼠，雄性(xing)，體重20±2g，由第(di)二軍(jun)醫大學動物實(shi)驗中心提供。實(shi)驗動物許可證號：SCXK(滬)2015-10-20。

實施例1

稱取3g鹽(yan)酸普萘(nai)洛爾(er)，0.1g羥苯乙酯，加適量(liang)的純化水溶(rong)解、分散，

向該溶液(ye)中緩慢地加入(ru)20g泊洛沙姆(mu)(P407)，均勻攪拌該溶液(ye)，使(shi)泊洛沙姆(mu)全部(bu)沒入(ru)水面以下，放置于(yu)4℃的冰箱(xiang)內，使(shi)其充(chong)分溶脹(zhang)。

24h后，取出(chu)溶(rong)脹好的(de)溶(rong)液，邊攪(jiao)拌邊加入5g丙(bing)二醇(chun)，4g氮酮，5g甘油， 攪(jiao)拌均勻，即得無色(se)透明的(de)鹽酸普萘(nai)洛爾(er)凝膠制劑。

實施例2

稱取3g鹽酸普萘洛爾，0.1g山梨酸，加適量的純(chun)化水溶解、分散，

向該溶液(ye)中緩慢地(di)加入20g海藻酸鈉(na)，均勻攪拌該溶液(ye)，使(shi)(shi)海藻酸鈉(na)全部沒入水面以(yi)下(xia)，放置于4℃的冰(bing)箱內，使(shi)(shi)其充(chong)分溶脹。

24h后，取出溶脹好的(de)溶液，邊攪拌邊加(jia)入(ru)5g丙二醇，5g氮酮，5g甘油，攪拌均勻，即得(de)無色透明(ming)的(de)鹽酸普萘洛(luo)爾凝膠(jiao)制劑。

實施例3

稱取3g鹽酸普萘(nai)洛爾，0.1g羥(qian)苯(ben)乙酯加適量的純(chun)化水溶解(jie)、分散，

向該(gai)溶(rong)液中緩(huan)慢地加(jia)入(ru)20g泊洛(luo)沙姆P188，均勻(yun)攪拌該(gai)溶(rong)液，使(shi)泊洛(luo)沙姆全部(bu)沒入(ru)水(shui)面以下(xia)，放置于4℃的冰箱內，使(shi)其充(chong)分溶(rong)脹。

24h后，取出溶脹(zhang)好的溶液，邊(bian)攪(jiao)拌邊(bian)加入5g甘油(you)，6g丙二醇，4g氮酮，攪(jiao)拌均勻(yun)，即(ji)得(de)無色透明的鹽酸普萘洛爾凝膠制劑。

實施例4：體(ti)外透(tou)皮(pi)實驗

離體皮(pi)膚(fu)(fu)的(de)制備：將(jiang)KM小鼠腹(fu)部(bu)脫(tuo)毛，靜養(yang)1d,保(bao)證腹(fu)部(bu)皮(pi)膚(fu)(fu)無損(sun)傷(shang),處死后立即取其完整腹(fu)部(bu)脫(tuo)毛皮(pi)膚(fu)(fu)，刮去皮(pi)膚(fu)(fu)上的(de)多(duo)余脂肪、組(zu)織后，用生理(li)(li)鹽水(shui)清洗(xi)干凈(jing)，于(yu)(yu)4℃下浸泡(pao)于(yu)(yu)新鮮的(de)生理(li)(li)鹽水(shui)中。

采用(yong)Franz擴散池(chi)法進行：以32℃恒溫水(shui)浴、勻速攪拌的(de)生理(li)鹽(yan)(yan)水(shui)為接(jie)收(shou)液(ye)。將處理(li)好的(de)離體皮膚的(de)角質(zhi)層朝(chao)上(shang)(shang)固定(ding)于(yu)(yu)Franz擴散池(chi)上(shang)(shang)，均(jun)勻地涂(tu)上(shang)(shang)0.1g制(zhi)(zhi)備(bei)的(de)鹽(yan)(yan)酸普萘洛爾(er)凝(ning)膠(jiao)(實施例1制(zhi)(zhi)備(bei)的(de))，用(yong)鋁(lv)箔封好。分別于(yu)(yu)1，2，3，4，6，8，12h時取1ml接(jie)收(shou)液(ye)進行含量(liang)檢測，并于(yu)(yu)接(jie)收(shou)池(chi)中加入1ml同溫度的(de)新鮮生理(li)鹽(yan)(yan)水(shui)。

體(ti)外(wai)透皮(pi)累(lei)積(ji)滲透量的計算：

由Q＝[CnV+Σ(C×1)]/S計(ji)算(suan)單(dan)位面積(ji)(ji)藥(yao)(yao)物(wu)的累(lei)積(ji)(ji)滲透(tou)量。其中，Q為(wei)(wei)單(dan)位面積(ji)(ji)的藥(yao)(yao)物(wu)累(lei)積(ji)(ji)透(tou)皮滲透(tou)量，Cn為(wei)(wei)該取樣點時接收(shou)(shou)液中的藥(yao)(yao)物(wu)濃度，V為(wei)(wei)接收(shou)(shou)液體積(ji)(ji)，C為(wei)(wei)第1個(ge)取樣點至(zhi)上個(ge)取樣點時接收(shou)(shou)液中的累(lei)計(ji)藥(yao)(yao)物(wu)濃度，S為(wei)(wei)藥(yao)(yao)物(wu)的有(you)效透(tou)皮面積(ji)(ji)。

實驗結果：在(zai)不同(tong)取樣點的體(ti)外(wai)累積透(tou)皮(pi)滲透(tou)量如圖(tu)1。

從圖1可以(yi)看(kan)出，本發明的鹽酸普(pu)萘洛爾外(wai)用凝膠制劑(ji)的體外(wai)透皮效(xiao)(xiao)果良 好，能(neng)夠很好地(di)透過皮膚屏障，為有(you)效(xiao)(xiao)治療嬰幼(you)兒血(xue)管(guan)瘤(liu)提(ti)供(gong)保(bao)障，且釋藥時(shi)間較(jiao)長，減少給藥次數。

實施例5：

取實施(shi)例1制備的(de)鹽(yan)酸普(pu)萘洛(luo)爾凝膠，臨床治療嬰幼兒血管瘤患兒21例(上海(hai)長海(hai)醫院(yuan)整形外科)，年(nian)齡(ling)＜1周歲的(de)12例，年(nian)齡(ling)1～6歲的(de)患兒9例，經過4周的(de)治療，臨床有效率85.7％，且對皮膚無刺(ci)激性(xing)，無明顯不良反應發生(sheng)。

實施(shi)例(li)6：星點設計-效應面法對鹽酸普萘洛爾凝膠的處(chu)方(fang)進行優化

1含量測定方法的建立

1.1色譜條件 色譜柱：ODS C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-含0.1％庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(64:36)；流速：1.0ml/min；檢測波長：290nm；柱溫：30℃；進樣量：20μl^[10]。

1.2溶液的制備

精(jing)密(mi)稱取鹽(yan)酸普萘洛(luo)爾對(dui)照品20mg于100ml容量(liang)瓶中，加(jia)適量(liang)純(chun)化水溶解(jie)并定容，搖勻，即(ji)得鹽(yan)酸普萘洛(luo)爾標準品溶液。

精(jing)密(mi)稱(cheng)取鹽酸(suan)普萘(nai)(nai)洛(luo)爾凝膠0.9980g，加100ml純(chun)化(hua)水(shui)溶解，取該溶液1ml用純(chun)化(hua)水(shui)定容(rong)于于10ml容(rong)量瓶中，搖勻，即得(de)鹽酸(suan)普萘(nai)(nai)洛(luo)爾供試品溶液。

鹽酸(suan)普(pu)萘洛爾標準品(pin)(pin)溶(rong)液和(he)供試品(pin)(pin)溶(rong)液經0.45μm微孔濾膜過濾，在1.1項色譜條件下得到(dao)的(de)色譜圖見(jian)圖2、圖3。從(cong)色譜圖可(ke)知標準品(pin)(pin)和(he)凝膠(jiao)劑中的(de)鹽酸(suan)普(pu)萘洛爾的(de)峰(feng)形均良好，且凝膠(jiao)劑中的(de)其(qi)他成分對普(pu)萘洛爾的(de)吸收無干擾。

1.3標準曲線的建立 精密吸取1.2項中標準品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5ml于10ml容量瓶中，以純化水定容，得系列濃度，搖勻，按1.1項色譜條件進樣，測定峰面積(A)，以A對濃度(C)作線性回歸，得回歸方程：A＝28775C-2160.7(r²＝0.9997)。鹽酸(suan)普萘洛(luo)爾(er)的濃度(du)線性(xing)范圍為10.00～70.00μg/ml。

1.4精密(mi)度(du) 取1.2項中的(de)標(biao)準品溶(rong)液，按1.1項色譜條件重復進樣6次(ci)，并(bing)記錄(lu)峰(feng)面積(ji)，測定結(jie)果見表1，結(jie)果表明儀(yi)器測試的(de)精密(mi)度(du)良好。

表1精密度實驗結果

1.5重(zhong)復性 平行配制(zhi)6份鹽酸普萘洛爾(er)凝(ning)膠供(gong)試品溶液(實(shi)施例1制(zhi)備的樣品)，按1.1項(xiang)色譜條件進樣，測(ce)定結果見表2，結果表明該方法重(zhong)復性良(liang)好。

表2重復性實驗結果

1.6加樣回(hui)收 在6份已知含(han)量的鹽酸普萘洛爾(er)凝膠(實施(shi)例(li)1制備的樣品(pin))中分(fen)別加入精密量取的對(dui)照品(pin)溶(rong)液適量，3份為1組，加適量純(chun)化(hua)水溶(rong)解過濾(lv)，按1.1項色(se)譜(pu)條(tiao)件進樣，記錄峰面積(ji)，測定(ding)(ding)結果見(jian)表3。結果表明本方法回(hui)收率良(liang)好，制劑中其他成分(fen)對(dui)鹽酸普萘洛爾(er)的含(han)量測定(ding)(ding)無(wu)干擾。

表3加樣回(hui)收率實(shi)驗結果

1.7含量測(ce)(ce)定 取3批(pi)3％鹽酸(suan)普(pu)萘洛爾凝膠，按1.2項方法(fa)制備樣品溶液，按1.1項色(se)譜條件進樣，記錄峰面積(ji)，根(gen)據(ju)線性(xing)回歸計算凝膠劑中鹽酸(suan)普(pu)萘洛爾的(de)含量。由表4中的(de)測(ce)(ce)定結(jie)果表明(ming)，該(gai)測(ce)(ce)定方法(fa)符合(he)含量測(ce)(ce)的(de)要求。

表4 3批鹽酸普萘洛爾凝膠(jiao)樣品含(han)量(liang)測定結果

2普(pu)萘洛爾凝膠制備(bei)工藝

2.1鹽(yan)酸普(pu)萘洛爾(er)凝膠的(de)處方組成 鹽(yan)酸普(pu)萘洛爾(er)3.0g，羥苯乙酯0.1g，泊(bo)洛沙姆(P407)20.0g，甘油5.0g，丙二醇(chun)10.0g，氮酮3.0g，加純化水適量至100g。

2.2鹽酸(suan)普萘(nai)洛(luo)(luo)爾(er)凝(ning)膠(jiao)的(de)制(zhi)備 先將鹽酸(suan)普萘(nai)洛(luo)(luo)爾(er)和羥苯乙酯用適量純化(hua)水溶解、分散，再(zai)緩緩加入泊洛(luo)(luo)沙姆(mu)P407，均勻攪拌(ban)(ban)使(shi)其全部(bu)沒于(yu)(yu)水中，于(yu)(yu)4℃下溶脹(zhang)24h后取出，再(zai)在攪拌(ban)(ban)條件下依次加入甘油、丙二醇、氮(dan)酮，攪勻后封存。于(yu)(yu)陰涼處過夜，分裝，即得無色透明的(de)凝(ning)膠(jiao)制(zhi)劑。制(zhi)得該凝(ning)膠(jiao)制(zhi)劑的(de)pH 6.5～6.8。

3體外透皮實驗

3.1離(li)體(ti)皮(pi)膚的制備 將KM小鼠(shu)腹(fu)部(bu)(bu)脫毛，保證腹(fu)部(bu)(bu)皮(pi)膚無損(sun)傷。1d后將小鼠(shu)處死(si)，立即(ji)取其完整(zheng)腹(fu)部(bu)(bu)脫毛皮(pi)膚，刮去皮(pi)膚上的多余(yu)脂肪、組織后，用生理鹽水(shui)清洗(xi)、浸泡(pao)，于4℃下短期保存，備用。

3.2體外透(tou)皮(pi)實驗 采用(yong)Franz擴散(san)池(chi)(chi)法進(jin)行。所用(yong)裝置(zhi)為(wei)Franz擴散(san)池(chi)(chi)和(he)自制的(de)(de)透(tou)皮(pi)擴散(san)儀，有效擴散(san)內徑0.9cm，接(jie)(jie)收(shou)(shou)室體積為(wei)5ml，以(yi)生(sheng)理鹽(yan)水為(wei)接(jie)(jie)收(shou)(shou)液，于(yu)32℃恒溫(wen)水浴中勻(yun)速攪(jiao)拌。取3.1項下處(chu)理好的(de)(de)離體皮(pi)膚，用(yong)濾(lv)紙吸干表面上(shang)多余的(de)(de)水分(fen)，將(jiang)角(jiao)質層朝上(shang)固定于(yu)Franz擴散(san)池(chi)(chi)上(shang)，將(jiang)0.1g的(de)(de)鹽(yan)酸普萘(nai)洛爾凝(ning)膠均勻(yun)地涂(tu)在小(xiao)鼠皮(pi)膚上(shang)，用(yong)鋁箔封好。分(fen)別于(yu)1，2，3，4，6，8，12h時取1ml接(jie)(jie)收(shou)(shou)液，并于(yu)接(jie)(jie)收(shou)(shou)池(chi)(chi)中加(jia)入1ml同溫(wen)度的(de)(de)新鮮生(sheng)理鹽(yan)水。取出的(de)(de)接(jie)(jie)收(shou)(shou)液經(jing)0.45μm微孔濾(lv)膜(mo)過(guo)濾(lv)，按1.1項色譜(pu)條件進(jin)樣(yang)，記錄峰面積。

3.3體外累(lei)計(ji)滲(shen)透(tou)量(liang)的(de)計(ji)算 由回(hui)歸方程計(ji)算不(bu)同時(shi)間點接(jie)收(shou)(shou)池(chi)中(zhong)(zhong)鹽酸(suan)普萘(nai)洛爾的(de)含量(liang)，由Q＝[CnV+Σ(C×1)]/S計(ji)算單位面積(ji)藥(yao)物的(de)累(lei)積(ji)滲(shen)透(tou)量(liang)。其中(zhong)(zhong)，Q為(wei)單位面積(ji)的(de)藥(yao)物累(lei)積(ji)透(tou)皮滲(shen)透(tou)量(liang)，Cn為(wei)該取樣點時(shi)接(jie)收(shou)(shou)液中(zhong)(zhong)的(de)藥(yao)物濃(nong)度，V為(wei)接(jie)收(shou)(shou)液體積(ji)，C為(wei)第1個(ge)取樣點至上(shang)個(ge)取樣點時(shi)接(jie)收(shou)(shou)液中(zhong)(zhong)的(de)累(lei)計(ji)藥(yao)物濃(nong)度，S為(wei)藥(yao)物的(de)有效透(tou)皮面積(ji)。

4星(xing)點(dian)設計-效(xiao)應(ying)面法優化處(chu)方(fang)

4.1星點設計

單因素考察發現，促透劑氮酮和丙二醇的含量對鹽酸普萘洛爾凝膠體外透皮滲透量影響最為顯著。在二水平析因設計的基礎上，利用Design-Expert軟件(8.0.5b原版)設計2因素5水平的處方優化實驗。5個水平的代碼分別為0，±1，±α，α＝F^1/4，F＝2k，F為析因設計的部分試驗次數，k為因素數。以氮酮含量(X₁)和丙二醇含量(X₂)為自變(bian)量(liang)，以透(tou)皮(pi)累(lei)積滲透(tou)量(liang)(Y)為因(yin)變(bian)量(liang)。因(yin)素水平設置和(he)實驗星點設計(ji)見表5，表6。

表5星點(dian)設計(ji)的因素(su)水平(ping)表

表(biao)6星(xing)點設計(ji)實驗表(biao)及結果

9～13號為重復實驗，數值以(yi)平均值表示

4.2效應面法優化

利用Design-Expert軟件(8.0.5b原版)進行回歸分析，以置信度(P)作為模型判斷的標準^[12]，建立二次多項式回歸模型：Y＝a₁X₁+a₂X₂+a₃X₁X₂+a₄X₁²+a₅X₂²+a₆。依據多項式回歸方程繪制三維效應面和二維等高線圖 ^[13],從(cong)效應值與考察因素關系中確定(ding)較(jiao)佳的促透劑含量。

依據各因素水平的累積滲透量(見表6)，得到的二次多項式回歸方程為：Y＝1606.595－556.426*X₁－224.665*X₂－44.926*X₁*X₂+212.211*X₁²+21.308*X₂²。由多項式回歸方程繪制出三維(wei)效應面和二維(wei)等高線圖(tu)(tu)，見(jian)圖(tu)(tu)4、圖(tu)(tu)5。

根據擬合方程和效應面綜合評價，由軟件得到的優化方案為X₁＝4％，X₂＝5％，Y＝1287.11μg/cm²。

4.3最優處方驗證

按照最優處方制備3批鹽酸普萘洛爾凝膠劑，按照體外透皮實驗方法進行透皮實驗，由公式計算體外累積透皮滲透量。以偏差作為所建模型預測性良好與否的指標，偏差(％)＝(實測值－預測值)/預測值×100％，將這3批制劑的平均累積透皮滲透量(1377.81μg/cm²)和預測值(1287.11μg/cm²)代入該偏差公式(shi)得該偏差為(wei)7.05％。由此(ci)表(biao)明本實驗的可預測(ce)性良好。詳(xiang)見表(biao)7。

表7處方驗證結果

實驗結果表明：當鹽酸普萘洛爾凝膠促透劑的最優配比為氮酮4％，丙二醇5％，12h的累積透皮滲透量為1377.81μg/cm²，與預測(ce)值(zhi)具(ju)有良好的相(xiang)符性。

以上已對本(ben)(ben)發(fa)明創(chuang)(chuang)造的較(jiao)佳(jia)實(shi)施例進行了具體說明，但(dan)本(ben)(ben)發(fa)明創(chuang)(chuang)造并不限于所(suo)述(shu)實(shi)施例，熟悉本(ben)(ben)領域的技術(shu)人員在(zai)不違背本(ben)(ben)發(fa)明創(chuang)(chuang)造精神的前提下還可做出種(zhong)種(zhong)的等(deng)(deng)同的變(bian)型(xing)或(huo)替換，這些等(deng)(deng)同的變(bian)型(xing)或(huo)替換均(jun)包含在(zai)本(ben)(ben)申請權利(li)要求所(suo)限定的范圍內。