本申請涉及多孔(kong)材(cai)料(liao)領域(yu)，特(te)別是涉及一種(zhong)PLL-DBM多孔(kong)復合骨移植材(cai)料(liao)、其制備方法及應(ying)用。

背景技術：

自體(ti)紅(hong)骨(gu)(gu)(gu)髓經皮注射(she)治療(liao)骨(gu)(gu)(gu)不連和骨(gu)(gu)(gu)缺損已取得一定成功，但應(ying)用直接注入的(de)(de)方(fang)法，局部干細(xi)(xi)胞(bao)密度低、容易(yi)流(liu)失，影響療(liao)效(xiao)。骨(gu)(gu)(gu)髓干細(xi)(xi)胞(bao)富集(ji)技術(shu)(shu)用于修復骨(gu)(gu)(gu)缺損和脊柱融合術(shu)(shu)，可(ke)獲得與自體(ti)骨(gu)(gu)(gu)移植相當的(de)(de)效(xiao)果(guo)，已成為(wei)骨(gu)(gu)(gu)修復研究領域的(de)(de)熱點。其(qi)核心(xin)在適用于選擇性細(xi)(xi)胞(bao)滯(zhi)留技術(shu)(shu)的(de)(de)支架材(cai)料及其(qi)成骨(gu)(gu)(gu)效(xiao)果(guo)的(de)(de)研究。

鑒于此，提高骨髓細胞的選擇性滯留率成為本(ben)領域亟(ji)待解決(jue)的技術問題。

技術實現要素：

本申(shen)請(qing)主要解決的技術問題是提(ti)供一種PLL-DBM多孔復合(he)(he)骨(gu)移植材料，能夠提(ti)高骨(gu)髓(sui)細(xi)胞的選擇性(xing)滯(zhi)留率，適合(he)(he)作(zuo)為骨(gu)髓(sui)干細(xi)胞富(fu)集材料,可滿足(zu)創傷、骨(gu)病及急診骨(gu)缺損對(dui)骨(gu)修復治(zhi)療技術和骨(gu)移植物(wu)的應用(yong)需(xu)求。

為解決上述(shu)技(ji)術(shu)問題，本發明(ming)實施(shi)例采用的一個技(ji)術(shu)方案是：提供一種PLL-DBM多孔復合(he)骨移植材料，與現(xian)有技(ji)術(shu)相比(bi)，其不(bu)同之(zhi)處在(zai)于，該(gai)材料包括：

具有(you)三維多(duo)孔(kong)網絡結(jie)構的(de)礦物基材(cai)；和

設于礦物(wu)基材表面的生物(wu)聚(ju)合(he)物(wu)修飾(shi)層，所述(shu)生物(wu)聚(ju)合(he)物(wu)分布(bu)在所述(shu)三維多(duo)孔網絡的至少(shao)一部分內；

其中，所述(shu)礦物基(ji)材為脫鈣骨基(ji)質，所述(shu)生物聚(ju)合物為多聚(ju)左旋賴氨酸。

優選地，該材料通過(guo)用(yong)生(sheng)物(wu)聚合(he)物(wu)對具有三維多孔網絡(luo)結(jie)構(gou)的礦(kuang)物(wu)基材進行表(biao)面修飾而形成。

優選地，位于礦(kuang)物基材孔隙(xi)中的生物聚合物修飾層(ceng)具(ju)有二級多(duo)孔網(wang)絡結(jie)構(gou)。

優選地，所述(shu)脫鈣骨基質與所述(shu)多聚左旋(xuan)賴氨酸的(de)質量(liang)比為1000：(0.05～1)。

為解決上述技(ji)術問題，本發明(ming)實施例(li)采(cai)用的另一個(ge)技(ji)術方案是：提供(gong)一種(zhong)PLL-DBM多孔復合骨(gu)移植材料的制備方法(fa)，包括(kuo)如下步驟：

于水(shui)介質(zhi)中，將(jiang)礦物(wu)基材和(he)生(sheng)物(wu)聚合(he)(he)物(wu)混合(he)(he)形成(cheng)浸泡液，使礦物(wu)基材和(he)生(sheng)物(wu)聚合(he)(he)物(wu)充分接觸；

將所得浸泡液放(fang)置足夠時間以實現生物聚(ju)合物對礦(kuang)物基材的表面(mian)修飾；

于溫度-42℃～-47℃、負(fu)壓(ya)20～28Pa下，將所得浸(jin)泡液進行冷(leng)卻；

將冷卻的浸泡(pao)液進行(xing)冷凍(dong)干燥(zao)；

其(qi)中，所述(shu)礦物基材為脫鈣骨基質(zhi)，所述(shu)生物聚合物為多聚左旋賴氨(an)酸。

優(you)選地，在冷卻步(bu)驟(zou)之前還包括(kuo)對浸(jin)泡(pao)液進行負(fu)壓(ya)抽(chou)濾的(de)步(bu)驟(zou)。

優(you)選地，包括如(ru)下步驟：

對脫鈣骨(gu)基質進行超(chao)聲清(qing)洗(xi)；

將多(duo)聚左旋賴氨(an)(an)酸用雙蒸水配制成(cheng)濃度為(wei)0.01～0.2mg/ml的多(duo)聚左旋賴氨(an)(an)酸溶液(ye)，再將脫鈣骨(gu)基質(zhi)置于(yu)多(duo)聚左旋賴氨(an)(an)酸溶液(ye)中，形成(cheng)浸泡液(ye)，其中，脫鈣骨(gu)基質(zhi)與多(duo)聚左旋賴氨(an)(an)酸溶液(ye)的比(bi)例為(wei)1g：5ml；

將所得浸泡(pao)液放置足夠(gou)時間(jian)以實現多聚(ju)左旋賴氨酸對(dui)脫鈣骨基質的表(biao)面修飾；

將盛裝有浸泡液的容器放(fang)置于(yu)分(fen)別連接負(fu)壓抽濾瓶(ping)和負(fu)壓抽濾機的無(wu)菌干燥(zao)皿(min)中，密封好接頭與無(wu)菌干燥(zao)皿(min)蓋口，于(yu)18℃～22℃下負(fu)壓抽濾4～8小時，直至未見氣泡從孔隙(xi)溢出；

于溫度-42℃～-47℃、負壓20～28Pa下，將所得浸泡(pao)液(ye)進行冷卻(que)；

將冷卻的(de)浸(jin)泡液(ye)進行冷凍(dong)干燥。

本發(fa)明(ming)還提(ti)供(gong)了上述(shu)的PLL-DBM多(duo)孔復合(he)骨移植材料(liao)作為用(yong)(yong)于骨和/或軟骨再生(sheng)的材料(liao)的應用(yong)(yong)。

本申請實施例(li)的(de)(de)有益效果(guo)是：區別于(yu)現有技(ji)術的(de)(de)情(qing)況，本發明實施例(li)的(de)(de)多孔復合(he)骨(gu)移植(zhi)材(cai)料通過用生(sheng)物聚合(he)物對(dui)具(ju)有三維多孔網(wang)絡結構的(de)(de)礦物基材(cai)進行表面修飾而(er)形成(cheng)，對(dui)骨(gu)髓細胞(bao)的(de)(de)選(xuan)擇性(xing)(xing)滯(zhi)留率高，與骨(gu)髓干細胞(bao)快速構建的(de)(de)骨(gu)移植(zhi)材(cai)料具(ju)有良好的(de)(de)生(sheng)物相容性(xing)(xing)和成(cheng)骨(gu)活性(xing)(xing)，可滿足(zu)作為用于(yu)創(chuang)傷(shang)、骨(gu)病及急診骨(gu)缺損(sun)對(dui)骨(gu)修復高成(cheng)骨(gu)活性(xing)(xing)骨(gu)移植(zhi)材(cai)料的(de)(de)應用需(xu)求。

附圖說明

為了更(geng)清楚地說(shuo)明本(ben)(ben)申請實(shi)施(shi)例(li)(li)的(de)技(ji)術(shu)方案，下面將對本(ben)(ben)申請實(shi)施(shi)例(li)(li)中所需要使用的(de)附(fu)(fu)圖(tu)作簡單地介紹。顯而(er)易見(jian)地，下面所描述(shu)的(de)附(fu)(fu)圖(tu)僅僅是本(ben)(ben)申請的(de)一(yi)些(xie)實(shi)施(shi)例(li)(li)，對于本(ben)(ben)領域普通技(ji)術(shu)人(ren)員來講，在不付(fu)出創造性(xing)勞動的(de)前提下，還可以根據(ju)這(zhe)些(xie)附(fu)(fu)圖(tu)獲得其他的(de)附(fu)(fu)圖(tu)。

圖1是本發明實施例1的材料的外觀(guan)圖。

圖(tu)2是本發明實施例1的(de)材(cai)料的(de)三維視(shi)頻顯微鏡(jing)觀察圖(tu)。

圖3是本發明實施例1的(de)材料的(de)掃描電(dian)鏡圖(×600倍)。

具體實施方式

為了使(shi)本(ben)申(shen)請(qing)的目的、技(ji)術方案及優點更加清楚(chu)明白(bai)，以下結合附圖及實施(shi)(shi)例(li)，對本(ben)申(shen)請(qing)進行(xing)進一步詳細說明。應(ying)當理解，此(ci)處所描述的具體實施(shi)(shi)例(li)僅用以解釋本(ben)申(shen)請(qing)，并(bing)不(bu)用于限(xian)定本(ben)申(shen)請(qing)。

本發明實(shi)施(shi)例的(de)(de)(de)PLL-DBM多(duo)孔(kong)復合骨移(yi)植材(cai)(cai)料，包括：具(ju)有三維(wei)多(duo)孔(kong)網(wang)絡結(jie)構(gou)(gou)的(de)(de)(de)礦(kuang)(kuang)物(wu)基(ji)(ji)材(cai)(cai)；和設于礦(kuang)(kuang)物(wu)基(ji)(ji)材(cai)(cai)表(biao)(biao)面(mian)的(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)聚合物(wu)修飾層(ceng)，所述生(sheng)(sheng)物(wu)聚合物(wu)分布在所述三維(wei)多(duo)孔(kong)網(wang)絡的(de)(de)(de)至(zhi)少一(yi)部分內，其中，所述礦(kuang)(kuang)物(wu)基(ji)(ji)材(cai)(cai)為脫鈣(gai)骨基(ji)(ji)質，所述生(sheng)(sheng)物(wu)聚合物(wu)為多(duo)聚左旋(xuan)賴氨酸。該(gai)材(cai)(cai)料通過用生(sheng)(sheng)物(wu)聚合物(wu)對(dui)具(ju)有三維(wei)多(duo)孔(kong)網(wang)絡結(jie)構(gou)(gou)的(de)(de)(de)礦(kuang)(kuang)物(wu)基(ji)(ji)材(cai)(cai)進行(xing)表(biao)(biao)面(mian)修飾而形成，位于礦(kuang)(kuang)物(wu)基(ji)(ji)材(cai)(cai)孔(kong)隙中的(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)聚合物(wu)修飾層(ceng)具(ju)有二(er)級多(duo)孔(kong)網(wang)絡結(jie)構(gou)(gou)。

在(zai)本實(shi)施例的優選方案中，所述脫鈣骨基質(zhi)與所述多(duo)聚(ju)左(zuo)旋賴氨酸的質(zhi)量(liang)比(bi)為1000：(0.05～1)。

需(xu)要說明的(de)(de)是(shi)，本(ben)說明書中(zhong)，多聚(ju)左旋(xuan)賴(lai)氨酸(PLL)，英(ying)文(wen)為poly-L-lysine；脫鈣骨(gu)(gu)基質(zhi)(DBM)，英(ying)文(wen)為demineralized bone matrix，是(shi)一種是(shi)由膠原蛋白(bai)(bai)、非膠原蛋白(bai)(bai)以及(ji)較低濃度的(de)(de)生長因子(如(ru)骨(gu)(gu)形成(cheng)蛋白(bai)(bai)，骨(gu)(gu)中(zhong)的(de)(de)骨(gu)(gu)形成(cheng)蛋白(bai)(bai)被致密的(de)(de)礦物成(cheng)份包繞，未脫鈣骨(gu)(gu)無(wu)誘導成(cheng)骨(gu)(gu)能力，脫鈣程度不(bu)(bu)同(tong)對應的(de)(de)機械強度也不(bu)(bu)同(tong))等(deng)組成(cheng)的(de)(de)復合物天然骨(gu)(gu)移植(zhi)材(cai)料，主要來源于(yu)人或動物(豬、牛、狗、兔等(deng))的(de)(de)顱(lu)骨(gu)(gu)、股骨(gu)(gu)干和脛骨(gu)(gu)干。

該材料(liao)將多聚左(zuo)旋賴氨酸(poly-L-lysine，PLL)與脫(tuo)鈣骨(gu)基質(zhi)(zhi)(demineralized bone matrix,DBM)按優選的比例浸(jin)泡、負壓抽濾和冷凍干燥，對脫(tuo)鈣骨(gu)基質(zhi)(zhi)表(biao)面進(jin)(jin)行修飾及優化，促進(jin)(jin)人(ren)骨(gu)髓間(jian)充(chong)質(zhi)(zhi)干細(xi)胞(bao)(bone marrow stromal cells,BMSCs)的黏附、增殖與分(fen)泌基質(zhi)(zhi)等細(xi)胞(bao)功(gong)能，從而制備高成(cheng)骨(gu)活性的骨(gu)移植材料(liao)。

本實施(shi)例的(de)材料按照如下制備方(fang)法得(de)(de)到，首先，于(yu)水介(jie)質中，將(jiang)脫(tuo)鈣(gai)(gai)骨(gu)基質和多聚左旋(xuan)賴氨(an)酸(suan)混合形成浸泡(pao)(pao)(pao)(pao)液，使(shi)脫(tuo)鈣(gai)(gai)骨(gu)基質和多聚左旋(xuan)賴氨(an)酸(suan)充分接觸。其(qi)次，將(jiang)所得(de)(de)浸泡(pao)(pao)(pao)(pao)液放置足夠時間以實現多聚左旋(xuan)賴氨(an)酸(suan)對(dui)脫(tuo)鈣(gai)(gai)骨(gu)基質的(de)表面修飾。再(zai)次，于(yu)溫(wen)度(du)-42℃～-47℃、負(fu)壓(ya)20～28Pa下，將(jiang)所得(de)(de)浸泡(pao)(pao)(pao)(pao)液進(jin)行冷卻(que)。最后，將(jiang)冷卻(que)的(de)浸泡(pao)(pao)(pao)(pao)液進(jin)行冷凍干燥。

作為優選實(shi)施(shi)方式(shi)，在(zai)冷(leng)卻步(bu)驟(zou)之前還包括對浸泡液進行負壓抽濾的步(bu)驟(zou)。

具體(ti)地，本實施例的材料按照如下制備方法得(de)到：

(1)對(dui)脫鈣(gai)骨基質進(jin)行超(chao)聲清洗；

(2)將多聚(ju)左(zuo)旋(xuan)(xuan)賴(lai)氨(an)(an)酸(suan)用雙蒸水配制成(cheng)(cheng)濃度(du)為0.01～0.2mg/ml的多聚(ju)左(zuo)旋(xuan)(xuan)賴(lai)氨(an)(an)酸(suan)溶液，再將脫(tuo)鈣骨基(ji)(ji)質置于多聚(ju)左(zuo)旋(xuan)(xuan)賴(lai)氨(an)(an)酸(suan)溶液中，形成(cheng)(cheng)浸泡液，其中，脫(tuo)鈣骨基(ji)(ji)質與多聚(ju)左(zuo)旋(xuan)(xuan)賴(lai)氨(an)(an)酸(suan)溶液的比例為1g：5ml；

(3)將所(suo)得浸泡液(ye)放置足夠(gou)時間以實現(xian)多聚左(zuo)旋(xuan)賴氨(an)酸對脫鈣骨基質的(de)表面修飾；

(4)將盛(sheng)裝有浸(jin)泡液的容器放置于分別連接負(fu)壓(ya)抽濾瓶(ping)和負(fu)壓(ya)抽濾機的無(wu)(wu)菌干(gan)燥(zao)皿中，密封好接頭(tou)與無(wu)(wu)菌干(gan)燥(zao)皿蓋口，于18℃～22℃下負(fu)壓(ya)抽濾4～8小時(shi)，直至(zhi)未(wei)見(jian)氣泡從(cong)孔隙溢出；

(5)于溫度(du)-42℃～-47℃、負壓(ya)20～28Pa下，將(jiang)所得浸泡液進行(xing)冷卻；

(6)將(jiang)冷卻的浸(jin)泡液(ye)進(jin)行冷凍干燥(zao)。

實施例1

本實施例(li)提供了一種PLL-DBM多孔復(fu)合骨移植材料(liao)，該材料(liao)為骨髓干細胞富集(ji)材料(liao)，是由(you)DBM與PLL復(fu)合構(gou)成(cheng)，其PLL的濃度為0.1％(0.1mg/ml)，DBM的重量：PLL的體積＝1g：5ml。所述PLL-DBM的制備方法步驟(zou)如下：

(1)DBM的清洗

取DBM置于超聲波(bo)清洗機中，再次用無菌雙蒸水洗滌3次，每2小時(shi)跟換雙蒸水一次，至(zhi)PH7.3±0.1(酸度計(ji)測定)。無菌操作臺(tai)上瀝干4h，并置38℃恒溫箱(xiang)烘(hong)干24h，,稱重封裝(zhuang)并標記待用。

(2)PLL浸泡DBM

無菌(jun)操作(zuo)下(xia)，用雙蒸(zheng)水與(yu)PLL配(pei)制0.1％的PLL并經0.22μm濾(lv)器過(guo)濾(lv)除菌(jun)。分(fen)別(bie)用上述(shu)配(pei)置好的PLL浸泡自(zi)制DBM(DBM重量:PLL體積＝1g:5ml)15h，每3h震(zhen)蕩搖(yao)勻浸泡液，使PLL與(yu)DBM充分(fen)接觸。

(3)負壓抽濾

將上述浸(jin)泡容器置(zhi)于連接負(fu)壓(ya)抽(chou)濾瓶、負(fu)壓(ya)抽(chou)濾機的無菌干燥皿中，密(mi)封(feng)好接頭與干燥皿蓋口(kou)，20℃持(chi)續負(fu)壓(ya)抽(chou)濾5h，直至(zhi)未見任何氣泡自骨塊表面孔隙(xi)溢出，取出浸(jin)泡容器置(zhi)－20℃冰箱(xiang)冷凍隔夜。

(4)冷凍干燥

將(jiang)(jiang)浸(jin)泡容器置于(yu)冷(leng)凍(dong)干燥機托盤，冷(leng)凍(dong)干燥機預置―42℃～―47℃，負壓(ya)20－28Pa，預冷(leng)30min后(hou)開始抽真(zhen)空，真(zhen)空度(du)100MT以下(xia)。冷(leng)凍(dong)干燥48h，見材料已(yi)完全顯露，白色多(duo)(duo)聚(ju)(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)已(yi)絕大(da)部分吸附到材料中，材料邊緣與瓶底僅余很少量多(duo)(duo)聚(ju)(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)白色沉淀(dian)物，將(jiang)(jiang)材料稱(cheng)重(zhong)并封裝，貼(tie)上標簽，外面再(zai)用一(yi)層聚(ju)(ju)乙烯(xi)袋封口。

(5)滅菌與保存

鈷-60γ射(she)線照射(she)滅(mie)菌(jun)，常用劑量為15-25kGyCo,置-20℃低(di)溫冰箱保(bao)存待用。取少許(xu)DBM送需氧(yang)、厭(yan)氧(yang)菌(jun)、霉菌(jun)培(pei)養。

實施例2

本(ben)實(shi)施例(li)提供了一(yi)種PLL-DBM多孔復合(he)骨移植材(cai)料，與實(shi)施例(li)1相比，區別在(zai)于PLL的濃度為0.01％(0.01mg/ml)。

實施例3

本實(shi)施(shi)例(li)提供了一種PLL-DBM多孔(kong)復合(he)骨移植材料，與實(shi)施(shi)例(li)1相比(bi)，區別在(zai)于(yu)PLL的濃度為0.05％(0.05mg/ml)。

實施例4

本實施(shi)例(li)提供了一種PLL-DBM多孔復合骨移(yi)植材料，與實施(shi)例(li)1相比，區別在于(yu)PLL的濃度為(wei)0.08％(0.08mg/ml)。

實施例5

本實施例(li)提供了一種PLL-DBM多孔復合骨(gu)移植材料，與實施例(li)1相比(bi)，區別在于PLL的濃度(du)為0.15％(0.15mg/ml)。

實施例6

本實施(shi)例提供了一種PLL-DBM多(duo)孔(kong)復(fu)合(he)骨(gu)移植(zhi)材料，與實施(shi)例1相(xiang)比，區別在于PLL的(de)濃度為(wei)0.20％(0.20mg/ml)。

以實施例(li)1所得產品為(wei)例(li)進行產品驗(yan)證：

結構特點和表征

PLL-DBM具有三(san)維網(wang)(wang)(wang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)結(jie)構(gou)(gou)，密度約(yue)為0.25～0.29g/ml，平均為(0.27±0.02)g/ml，孔(kong)(kong)(kong)(kong)隙(xi)率為(73±11)％。材料及(ji)孔(kong)(kong)(kong)(kong)隙(xi)表(biao)面有厚(hou)度約(yue)2～7μm的(de)(de)乳白(bai)色PLL覆(fu)蓋，且在孔(kong)(kong)(kong)(kong)隙(xi)中(zhong)形成更小(xiao)的(de)(de)、孔(kong)(kong)(kong)(kong)徑約(yue)20～65μm的(de)(de)網(wang)(wang)(wang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)結(jie)構(gou)(gou)，大部分(fen)孔(kong)(kong)(kong)(kong)與(yu)孔(kong)(kong)(kong)(kong)之(zhi)間有約(yue)100μm左(zuo)右小(xiao)孔(kong)(kong)(kong)(kong)貫通，三(san)維視頻顯微鏡觀察(cha)可見材料整體及(ji)孔(kong)(kong)(kong)(kong)隙(xi)表(biao)面有均勻的(de)(de)乳白(bai)色PLL覆(fu)蓋，拉曼光譜(pu)分(fen)析表(biao)明材料內(nei)外表(biao)面任(ren)一位點由DBM和多聚賴氨酸構(gou)(gou)成，組織學觀察(cha)PLL-DBM在膠原(yuan)孔(kong)(kong)(kong)(kong)狀結(jie)構(gou)(gou)內(nei)表(biao)面有淺(qian)色PLL涂層與(yu)網(wang)(wang)(wang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)結(jie)構(gou)(gou)，請參閱圖1至圖3所示，圖中(zhong)可見在脫(tuo)鈣骨基質天然的(de)(de)網(wang)(wang)(wang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)結(jie)構(gou)(gou)中(zhong)形成了更細小(xiao)的(de)(de)多聚左(zuo)旋賴氨酸網(wang)(wang)(wang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)。

PLL-DBM的細胞毒性檢測

參照ISO10993及(ji)GB/T10886的有關標(biao)準(zhun)，將PLL-DBM材料及(ji)其浸(jin)提(ti)液分(fen)別與人(ren)骨髓基質干(gan)細胞(bao)(bao)(BMSCs)體外共(gong)培養(yang)(yang)，于培養(yang)(yang)20h、3d、7d行細胞(bao)(bao)形態學觀察(cha),四甲基偶氮唑鹽法(fa)測定(ding)培養(yang)(yang)1、3、5、7d的細胞(bao)(bao)增(zeng)(zeng)殖活性(xing)，應用(yong)分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa)進行溶(rong)血試驗。結果示(shi)：與PLL-DBM及(ji)其浸(jin)提(ti)液共(gong)培養(yang)(yang)的人(ren)BMSCs表現出(chu)更(geng)好的黏附與增(zeng)(zeng)殖特性(xing)，且隨浸(jin)提(ti)液濃度增(zeng)(zeng)加而增(zeng)(zeng)加，細胞(bao)(bao)毒性(xing)為0～1級。浸(jin)提(ti)液組溶(rong)血指(zhi)數為2.17％，達到標(biao)準(zhun)要求。

PLL-DBM成骨效果檢測

將(jiang)成(cheng)人骨(gu)(gu)髓干(gan)細胞通(tong)過骨(gu)(gu)髓富集裝(zhuang)置復合PLL-DBM后(hou)植(zhi)入裸鼠(shu)皮下，術后(hou)X線攝片和(he)組(zu)(zu)織(zhi)學(xue)檢查均顯示其成(cheng)骨(gu)(gu)效果良好，與自體(ti)骨(gu)(gu)組(zu)(zu)比較無明顯差異，并(bing)在各時間點與明顯強于DBM組(zu)(zu)。

PLL-DBM選擇性細胞滯留效果檢測

①對(dui)骨髓(sui)有核細(xi)胞、血小板和(he)骨髓(sui)干細(xi)胞的(de)選(xuan)擇性(xing)(xing)滯留效(xiao)果的(de)觀(guan)察(cha)(cha)：PLL-DBM對(dui)有核細(xi)胞選(xuan)擇性(xing)(xing)滯留的(de)倍(bei)數(shu)為(wei)(wei)3.18±0.31倍(bei)，粘附(fu)率達(da)53％±12％；對(dui)血小板選(xuan)擇性(xing)(xing)滯留的(de)倍(bei)數(shu)為(wei)(wei)3.88±0.68倍(bei)，粘附(fu)率達(da)34％±10％；對(dui)人骨髓(sui)干細(xi)胞選(xuan)擇性(xing)(xing)滯留的(de)倍(bei)數(shu)為(wei)(wei)5.25±1.40倍(bei)，粘附(fu)率達(da)73％±13％，選(xuan)擇率達(da)1.41±0.34。②對(dui)促成骨生長(chang)因子(zi)的(de)選(xuan)擇性(xing)(xing)滯留效(xiao)果的(de)觀(guan)察(cha)(cha)：PLL-DBM與紅骨髓(sui)富集(ji)處理后可以顯(xian)著提高(gao)TGF-β1和(he)PDGF含量。

綜上所(suo)述(shu)，PLL-DBM是經多(duo)聚賴(lai)氨酸表面修飾的脫(tuo)鈣骨(gu)(gu)(gu)基質，對骨(gu)(gu)(gu)髓細(xi)(xi)胞的選擇性(xing)滯(zhi)留(liu)率高(gao)，與骨(gu)(gu)(gu)髓干細(xi)(xi)胞快速構建的骨(gu)(gu)(gu)移(yi)植材料具有良好的生(sheng)物(wu)相容性(xing)和成(cheng)骨(gu)(gu)(gu)活性(xing)，可滿足創(chuang)傷、骨(gu)(gu)(gu)病及急診(zhen)骨(gu)(gu)(gu)缺損對骨(gu)(gu)(gu)修復高(gao)成(cheng)骨(gu)(gu)(gu)活性(xing)骨(gu)(gu)(gu)移(yi)植物(wu)的需求(qiu)。

以上所(suo)(suo)述僅為本(ben)申請的(de)實施(shi)例，并非因此限制本(ben)發明的(de)專(zhuan)利(li)范(fan)圍(wei)，凡是(shi)利(li)用(yong)(yong)本(ben)申請說明書(shu)及(ji)附圖內容(rong)所(suo)(suo)作的(de)等效結構或(huo)等效流程變換(huan)，或(huo)直接或(huo)間接運用(yong)(yong)在其他相關(guan)的(de)技術(shu)領域，均同(tong)理包括在本(ben)申請的(de)專(zhuan)利(li)保護(hu)范(fan)圍(wei)內。