本發明涉及一種再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性、以及改善皮膚紋理等的用于改善皮膚的組合物。
背景技術：
：膠原蛋白是由皮膚的成纖維細胞生成的主要基質蛋白質，存在于細胞間質，作為其重要的功能，已知有皮膚的機械堅固性、結合組織的抵抗力和組織的結合力、細胞粘接的支撐、細胞分裂和分化(有機體的成生長或處置傷口時)的誘導等。這種膠原蛋白隨著年齡的增長和紫外線照射引起的光老化而減少，并被認為與皮膚的皺紋形成有著密切的關聯。另外，隨著近年來對皮膚老化進行著廣泛的研究，確認了膠原蛋白在皮膚中的重要功能。已知有通過促進膠原蛋白的合成而顯示皺紋改善效果的有效成分。例如，視黃酸(retinoicacid)，TGF(transforminggrowthfactor)[非專利文獻1]、來自動物胎盤的蛋白質[專利文獻1]、樺木酸(betulinicacid)[專利文獻2]，小球藻萃取物[專利文獻3、4]等是已知的促進膠原蛋白合成的物質。但是，上述有效成分在適用于皮膚時，由于刺激和紅腫等安全性問題而在使用量上受到限制，或者效果微不足道而實質上無法期待促進皮膚的膠原蛋白合成而改善皮膚功能的效果。另一方面，作為皮膚表面形態的皮膚紋理的特征在于，具有由微細的線產生的三維微結構，且根據不同的年齡/部位而顯著不同。皮膚紋理根據紋理線的深度區分為1次(約20-100μm)紋，2次(約5-40μm)紋，3次(約0.5μm)紋，越是好的皮膚，各紋理線之間會形成網狀的網絡結構，且具有線之間相交而形成的多邊形和星形(starformation)越清晰的特征[非專利文獻2]。但是，已知隨著年齡增長或者由于皮膚損傷，原本致密的微細紋理線的網絡結構受到破壞，微細紋(2次、3次等)消失，1次紋則越發加深而產生皺紋[非專利文獻3]。即，隨著皮膚老化而顯現出的代表性癥候的皺紋，是長期微細變化的累積。已知在胚胎學上人皮膚的所有構成成分來自于外胚層或中胚層。表皮、毛囊、皮脂腺以及汗腺等起源于外胚層，而黑色素細胞、神經以及特殊的感受器來自于神經外胚層。根據胚胎時期，胚胎干細胞重復分化而成為符合各自的組織功能的特性細胞，即使成為成體后在組織中也留有一定數量的干細胞，而在皮膚中干細胞主要存在于兩處。首先存在于毛囊(hairfollicle)。已知此處是未引起細胞分化的細胞，對表皮的再生起到重要的作用，對于毛發的再生與生長也起到重要的作用。其次是存在于表皮的基底層(thebasallayerofepidermis)。已查明，位于此處的干細胞不僅支配表皮還支配著真皮層的成纖維細胞，起到維護皮膚健康的重要的作用。此處的干細胞具有干細胞量相對多、能夠容易獲得的優點而廣泛用于皮膚干細胞的研究中。皮膚會持續再生(renew)，存在于皮膚的上皮中的干細胞、即皮膚的上皮干細胞(epidermalstemcells)在創傷后，參與上皮的復原[非專利文獻4]。上述皮膚的上皮干細胞也被稱為皮膚干細胞(skinstemcells)，當使上述皮膚干細胞活性化時，能夠治療外傷等皮膚創傷或者促進創傷治療，還可以期待緩解皮膚皺紋。據報道，作為皮膚干細胞的指標使用整合素β1(integrinβ1)和整合素α6(integrinα6)，上皮形態的形成及分化所需的皮膚干細胞的維持是通過p63蛋白質來調節。皮膚干細胞對于維持皮膚的健康和生理學及生物化學上的恒常性起到重要的作用。存在于皮膚的干細胞也受到老化的影響而在功能上發生異常，由此皮膚的恒常性被打破，產生各種問題。因此，通過這樣的干細胞的活性可以改善皮膚老化的各種現象[非專利文獻5]。另外，迫切希望開發出對生物體安全，有效成分穩定，尤其是與已知的具有再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理效果的物質相比，其效果更優異的具有再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的活性的成分。現有技術文獻專利文獻專利文獻1：日本特開平8-231370號專利文獻2：日本特開平8-208424號專利文獻3：日本特開平9-40523號專利文獻4：日本特開平10-36283號非專利文獻非專利文獻1：CardinaleG.etal，Adv.Enzymol.，41，p.425，1974非專利文獻2：JournaloftheEuropeanAcademyofDermatologyandVenereology.12:103-114,1999非專利文獻3：TheBritishjournalofdermatology.110：129-138,1984,Skinresearchandtechnology.5:189-194,1999非專利文獻4：EpidermalStemCellsoftheSkin,CedricBlanpain,ElaineFuchs,AnnualReviewofCellandDevelopmentalBiology,November2006,Vol.22,Pages339-373非專利文獻5：Humanskinstemcellsandtheageingprocess,CatherinNiemann,StemCellAgingandRegenerativeMedicine,November2008,Pages986-997技術實現要素：發明要解決的課題本發明人等確認了芍藥醇(Paeonol)促進皮膚成纖維細胞的膠原蛋白合成而促進皮膚的再生，皺紋的改善，皮膚彈性的增加，皮膚色調的改善所帶來的皮膚紋理改善效果，也確認了芍藥醇(Paeonol)的干細胞增殖促進效果及干性維持效果，由此完成了本發明。因此，本發明的目的在于，提供一種用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的組合物，其作為有效成分包含由下述化學式1表示的化合物。化學式1：另外，本發明另一目的在于，提供一種用于促進干細胞活性的組合物及包含該組合物的化妝品組合物，所述用于促進干細胞活性的組合物作為有效成分包含由下述化學式1表示的化合物。化學式1：解決課題所用的方法作為解決上述課題的方法，本發明提供一種用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性、以及改善皮膚紋理的皮膚外用劑，其作為有效成分包含由下述化學式1表示的化合物。化學式1：作為解決上述課題的另一方法，本發明提供一種用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的化妝品組合物，其作為有效成分包含由下述化學式1表示的化合物。化學式1：作為解決上述課題的又一方法，本發明提供一種用于促進干細胞活性的組合物及包含該組合物的化妝品組合物，所述用于促進干細胞活性的組合物作為有效成分包含由下述化學式1表示的化合物。化學式1：發明效果本發明的芍藥醇(Paeonol)顯示出促進皮膚的成纖維細胞的膠原蛋白合成，促進皮膚的再生，改善皺紋，增加皮膚彈性，改善皮膚色調帶來的改善皮膚紋理的效果，因此可用于藥物、化妝品或保健食品中。另外，還顯示出促進皮膚干細胞的增殖和維持干性效果，因此可以用作干細胞活性促進用組合物(用于促進干細胞活性的組合物)及包含該組合物的化妝品。具體實施方式以下，具體說明本發明的構成。為了用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的成分在實際應用于皮膚時發揮優異的效果，希望其具有以下功能：在低濃度下顯示出高的再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的活性；透過皮膚被吸收的能力優異；揮發性低從而能夠停留足夠顯示出再生皮膚、改善皺紋、增加彈性及改善皮膚紋理效果所需的時間；活性成分在組合物或皮膚中得到穩定的維持；易于劑型化為藥物或化妝品；而且對皮膚安全。但是，在公知的成分中能夠全部滿足上述特性的成分并不多。例如，某些用于再生皮膚、改善皺紋、增加彈性及改善皮膚紋理的成分雖然在試驗管內實驗時在低濃度下的再生皮膚、改善皺紋、增加彈性及改善皮膚紋理的活性優異，但是透過皮膚被吸收的能力低，難以適用于實際皮膚中。另外，其他活性成分由于親水性低，因此難以劑型化為藥物或化妝品。另外，有些再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的成分在暴露于熱、光或氧氣中時，存 在上述活性成分被分解或轉變為其它化合物從而在應用于皮膚之前已經失效的情況。通過下述實施例，可確認：芍藥醇在低濃度下顯示出極其優異的促進膠原蛋白合成的效果、改善皮膚色調的效果，因此可作為用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的藥物、化妝品、保健食品等的有效成分使用。因此，本發明提供一種用于再生皮膚、改善皺紋、增加彈性及改善皮膚紋理的藥物組合物，其作為有效成分包含由下述化學式1表示的化合物。化學式1：上述化學式1的化合物的化合物名稱為1-(2-羥基-4-甲氧基苯基)乙酮(1-(2-hydroxy-4-methoxyphenyl)ethanone)；或者2'-羥基-4'-甲氧基苯乙酮((2'-Hydroxy-4'-methoxyacetophenone)；1-(2-羥基-4-甲氧基苯基)乙烷-1-酮(1-(2-hydroxy-4-methoxyphenyl)ethan-1-one)，也稱作芍藥醇(Paeonol)、牡丹酚、丹皮酚。上述化學式1的化合物可以合成而使用或者可以使用市售的化合物。本發明的用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的藥物組合物可以包含由上述化學式1表示的化合物的藥學上可接受的鹽。上述由化學式1表示的化合物的藥學上可接受的鹽可以為使用有機酸或無機酸形成的酸加成鹽，上述有機酸例如可舉出甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、丁酸、異丁酸、三氟乙酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、富馬酸、琥珀酸、琥珀酸單酰胺、谷氨酸、酒石酸、草酸、檸檬酸、羥基乙酸、葡萄糖醛酸、抗壞血酸、苯甲酸、苯二甲酸、水楊酸、鄰氨基苯甲酸、二氯乙酸、氨氧乙酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、以及甲磺酸系的鹽，上述無機酸例如可舉出鹽酸、溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、以及硼酸系的鹽。優選可以為鹽酸鹽或乙酸 鹽的形態，更優選為鹽酸鹽形態。上述提及的酸加成鹽可以通過如下常規的鹽制造方法來制造：a)將上述化學式1的化合物和酸直接混合；或b)將其中的一種溶解于溶劑或含水溶劑中后進行混合；或c)將化學式1的化合物置于溶劑或水化溶劑中的酸中，將它們混合。作為與上述不同的其他的可接受的鹽的形態，有γ-氨基丁酸鹽、加巴噴丁鹽、普瑞巴林鹽、煙酸鹽、己二酸鹽、半丙二酸鹽、半胱氨酸鹽、乙酰半胱氨酸鹽、蛋氨酸鹽、精氨酸鹽、賴氨酸鹽、鳥氨酸鹽、天冬氨酸鹽等。另外，將本發明的上述化學式1的化合物用作藥物時，還可以含有1種以上顯示出相同或類似的功能的有效成分。例如，還可以包含公知的再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的成分。若追加了上述再生皮膚、改善皺紋、增加彈性及改善皮膚紋理的成分時，可更加提高本發明組合物的再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的效果。在追加上述成分時，可以考慮復合使用引起的皮膚安全性、劑型化的容易性、以及有效成分之間的穩定性。本發明的一具體實施例中，上述組合物是該領域中公知的皮膚再生成分，還可以包含選自于由視黃酸、TGF、來自動物胎盤的蛋白質，樺木酸、小球藻萃取物及它們的衍生物和各種植物萃取物所組成的組中的一種或兩種以上的成分。追加成分的含量可相對于組合物總重量為0.0001重量％～10重量％，上述含量范圍可根據皮膚安全性、上述化學式1的化合物在劑型化時的容易性等重要條件來調節。另外，本發明的用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的藥物組合物還可以包含藥學上可接受的載體。藥學上可接受的載體可以含有例如緩沖溶液、注射用滅菌水、普通的生理鹽水或磷酸鹽緩沖鹽水、蔗糖、組氨酸、鹽以及聚山梨酸酯等的各種成分。本發明的藥物組合物可以通過口服或非口服的方式給藥，可以以普通藥品制劑的形態，例如臨床給藥時的口服及非口服的各種劑型給藥，在制劑化時，可以使用通常使用的填充劑、增量劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑等的稀釋劑或賦形劑來調劑。用于口服給藥的固體制劑包括片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等，這樣的固體制劑可以通過在本發明的藥物組合物中混入至少一種以上的賦形 劑，例如淀粉、碳酸鈣(Calciumcarbonate)、蔗糖(Sucrose)或乳糖(Lactose)、明膠等來進行調劑。除了單純的賦形劑以外，還可以使用硬脂酸鎂、滑石等的潤滑劑等。作為用于口服的液狀制劑，可以舉出懸浮劑、口服溶液劑(oralsolutions)、乳劑、糖漿劑等，除了經常使用的作為單純稀釋劑的水、液體石蠟以外，可以包含各種賦形劑，例如濕潤劑、甜味劑、芳香劑、保鮮劑等。用于非口服給藥的制劑中可以包含殺菌水溶液、非水性溶劑、懸浮劑、乳劑、冷凍干燥制劑、栓劑。作為非水性溶劑、懸浮用劑，可以使用丙二醇(Propyleneglycol)、聚乙二醇、橄欖油等的植物油，油酸乙酯等的可注射的酯等。作為栓劑的基質，可以使用witepsol、聚乙二醇、吐溫(tween)61、可可脂、月桂精脂(Laurinbutter)、甘油明膠(glycerogelatin)等。本發明中，所謂“皮膚再生效果”是指，皮膚組織對于皮膚外部和內部原因引起的損傷的恢復。上述外部原因引起的損傷包括由紫外線、外部污染物質、創傷、外傷引起的損傷等，上述內部原因引起的損傷包括精神壓力等。本發明中，所謂“皺紋改善效果”是指，抑制或阻礙皮膚生成皺紋，或者緩解已經生成的皺紋。本發明中，所謂“彈性增加效果”是指，皮膚的彈性增加，抑制或阻礙皮膚彈力的損失，或者緩解已經減少的彈性。本發明中，所謂“皮膚紋理改善效果”是指，通過抑制或阻礙由于老化、壓力等的影響導致的皮膚表面變粗糙的現象，從而使皮膚表面變得光滑、賦予光澤、改善膚色變亮。本發明的藥物組合物在包含有效量的上述化學式1的化合物時，可以帶來理想的皮膚再生效果、皺紋改善效果、彈性增加效果及皮膚紋理改善效果。本發明中，“有效量”是指是指能夠顯示出促進受損皮膚的再生、皺紋改善、彈性增加，皮膚紋理改善的效果的化合物的量。本發明的組合物中包含的上述化學式1的化合物的有效量根據組合物被制成制品時的形態、上述化合物適用于皮膚的方法以及停留在皮膚的時間等而不同。例如，將上述組合物制成藥物時，與制成通常適用于皮膚的化妝品時相比，可以以更高濃度包含上述化學式1的化合物。由此，一天的給藥量以上述化學式1的化合物的量為基準時為0.1～100mg/kg，優選為30～80mg/kg，更優選為50～60mg/kg，每天 可以給藥1～6次。本發明的藥物組合物可以單獨使用或者與手術、放射線治療、激素治療、化學治療以及使用生物反應調節劑的方法等組合使用。本發明還可作為用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的皮膚外用劑的劑型提供，其作為有效成分包含上述化學式1的化合物。將上述化學式1的化合物用作皮膚外用劑時，還可以含有脂類物質、有機溶劑、增溶劑、濃縮劑及膠凝劑、軟化劑、抗氧劑、懸浮劑、穩定劑、發泡劑(foamingagent)、芳香劑、表面活性劑、水、離子型或非離子型乳化劑、填充劑、金屬離子封鎖劑及螯合劑、保鮮劑、維生素、阻斷劑、濕潤劑、精油、染料、顏料、親水性或親油性活性劑、脂質囊泡或通常用于皮膚用外用劑的任意的其它成分等在皮膚科學領域中通常使用的佐劑(輔助劑)。另外，上述成分能夠以皮膚科學領域中通常使用的量導入。當以皮膚外用劑的劑型提供上述化學式1的化合物時，可以采用軟膏、貼劑(Patch)、凝膠、乳霜或噴霧劑等的劑型，但不限于此。另外，本發明也可以提供為作為有效成分含有上述化學式1的化合物的用于再生皮膚、改善皺紋、增加彈性及改善皮膚紋理的化妝品的劑型。將上述化學式1的化合物用作化妝品時，作為有效成分含有上述化學式1的化合物來制造的化妝品可以制造成通常的乳化劑型和可溶化劑型的形態。例如，可以為：柔軟化妝水或營養化妝水等化妝水，面部乳液(FacialLotion)、身體潤膚乳液(BodyLotion)等的乳液，營養霜、保濕霜、眼霜等的乳霜，精華、化妝軟膏、噴霧、凝膠、面膜、防曬霜、隔離霜(MakeupBase)、液態或固態或噴霧型的粉底霜，粉餅，潔面霜、潔面乳、潔面油等的卸妝劑，潔面泡沫、肥皂、沐浴露等的洗劑等劑型。另外，上述化妝品除了含有上述化學式1的化合物外還可以含有脂類物質、有機溶劑、增溶劑、濃縮劑及膠凝劑、軟化劑、抗氧劑、懸浮劑、穩定劑、發泡劑(foamingagent)、芳香劑、表面活性劑、水、離子型或非離子型乳化劑、填充劑、金屬離子封鎖劑及螯合劑、保鮮劑、維生素、阻斷劑、濕潤劑、精油、染料、顏料、親水性或親油性活性劑、脂質囊泡或通常用于化妝品的任意的其它成分等在化妝品學領域中通常使用的輔助劑。將上述化學式1的化合物制成化妝品時，若為有效成分短時間內停留在 皮膚的卸妝產品、洗劑等的洗凈(wash-off)型化妝品的情況下，可以包含較高濃度的上述化學式1的化合物。相反，若為有效成分長時間停留在皮膚的化妝水、乳液、乳霜、精華等保養(leave-on)類型的化妝品的情況下，可包含低于洗凈型化妝品濃度的上述化學式1的化合物。在本發明的一個具體例中，上述組合物中上述化學式1的化合物的含量相對于組合物總重量可以為0.0001重量％～10重量％(優選為0.0001重量％～1重量％)，但不限于此。本發明的組合物若包含小于0.0001重量％的上述化學式1的化合物，則不能期待充分的皮膚再生、皺紋改善、皮膚彈性增加以及皮膚紋理改善的效果，若包含超過10重量％，則有可能出現過敏等不希望出現的反應或者在皮膚安全性上存在問題，因此上述范圍的設定是為了防止此類問題的發生。另外，本發明還涉及包含上述化學式1的化合物的用于再生皮膚、改善皺紋、增加皮膚彈性及改善皮膚紋理的保健食品。本說明書中，“保健食品”是指，將上述化學式1的化合物添加到飲料、茶類、香料、口香糖、餅干類等的食品原料中的食品，或者制造成膠囊化、粉末化、懸浮液等的食品，當攝取這些食品時在健康上帶來特定效果，但與一般的藥物不同，以食品為原料，因而具有不存在長期服用藥物時可能發生的副作用等優點。以這種方式得到的本發明的保健食品可以在日常中攝取，因此可以期待高度的皮膚再生、皺紋改善、彈性增加及皮膚紋理改善的效果，因而非常有用。將上述化學式1的化合物用作食品添加劑時，可以將上述化學式1的化合物直接添加或者與其它食品或食品成分一起使用，可以根據常規方法適宜地使用。有效成分的混合量可以根據其使用目的(預防、保健或治療處置)而適當地決定。通常，在制造食品或飲料時，以相對于原料15重量份以下，優選10重量份以下的量添加本發明的組合物。然而，在以保健和衛生為目的或以健康調節為目的而長期攝入的情況下，上述量可以為上述范圍以下，由于在安全性方面不存在任何問題，因此有效成分也可以以上述范圍以上的量來使用。上述食品的種類無特殊限制。作為可添加上述物質的食品，例如肉類、香腸、面包、巧克力、糖類、點心類、餅干類、披薩餅、方便面、其他面類、 口香糖類、包括冰淇淋類的乳制品、各類湯、飲料、茶、清涼劑、酒精飲料、以及復合維生素劑等，通常意義上的保健食品則全部包括。本發明的保健飲料組合物與通常的飲料相同地可以含有各種增香劑或天然碳水化合物等作為追加成分。上述天然碳水化合物可以使用葡萄糖、果糖等的單糖，麥芽糖、蔗糖等的二糖，以及糊精、環糊精等的多糖，木糖醇、山梨糖醇、赤蘚糖醇等糖醇。作為甜味劑，可以使用索馬甜(Thaumatin)、甜葉菊提取物等的天然甜味劑，或糖精、阿斯巴甜等的合成甜味劑等。通常上述天然碳水化合物的比率為每本發明的組合物100mL包含約0.01～0.04g，優選為約0.02～0.03g。除了上述以外，本發明的保健食品可以含有各種營養劑、維生素、電解質、調味劑、著色劑、果膠酸及其鹽、海藻酸及其鹽、有機酸、保護性膠體增稠劑、pH調節劑、穩定劑、防腐劑、甘油、酒精、用于碳酸飲料的碳酸化劑等。除此以外，本發明的保健食品可以含有用于制造天然果汁、果汁飲料、以及蔬菜飲料的果肉。這種成分可以單獨使用或者混合而使用。這種添加劑的比例雖不重要，但通常是相對于本發明的組合物100重量份為0.01～0.1重量份的范圍。另外，本發明提供作為有效成分包括上述化學式1的化合物的用于促進干細胞活性的組合物。本發明中，術語“干細胞”為能夠自行進行細胞分裂，具有能夠分化為極其多樣形態的特定細胞類型(specificcelltype)的能力的細胞。對這種干細胞的種類沒有特別限制，在一個具體例中，上述干細胞可以為皮膚干細胞。上述“皮膚干細胞”是指能夠分化為構成皮膚(表皮、真皮和皮下脂肪層)的細胞的干細胞。構成上述皮膚的細胞包括存在于表皮的角質形成細胞(keratinocyte)、黑色素細胞(melanocyte)以及存在于真皮的成纖維細胞(主要負責膠原和彈性蛋白的生物合成)。對上述皮膚干細胞的種類沒有特別限制。本發明中使用的皮膚干細胞與其來自于何處無關地均可利用。例如，皮膚干細胞可來自于公知的皮膚干細胞來源，例如可從毛囊或表皮的基底層獲得，作為采集對象的動物可以是哺乳動物。在一個具體例中，哺乳動物可以包括人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴、豬、馬、牛、羊、羚羊、狗或貓，但不限于此。優選地，哺乳動物為人。 對于從上述皮膚干細胞來源獲取皮膚干細胞的方法，在本領域是周知的。本發明中，“干細胞活性促進效果”包括干細胞增殖促進效果和/或干性維持效果。皮膚干細胞對于維持皮膚的健康和生理學及生物化學上的恒常性起到重要的作用。存在于皮膚的干細胞也會受到老化的影響而在功能上發生異常，由此皮膚的恒常性被打破，產生各種問題。通過這種干細胞的活性可以改善皮膚老化的各種現象[非專利文獻5]，對此，本發明中確認了皮膚再生、皺紋改善、彈性增加及皮膚紋理改善的效果。由此，本發明可以提供包含上述用于促進干細胞活性的組合物的化妝品組合物。對于這種化妝品劑型，與之前關于包含化學式1的化合物的化妝品劑型的說明中記載的內容相同。以下，通過實施例對本發明進行詳細的說明。但是，以下實施例只是用于舉例說明本發明，本發明的內容并非限定于下述實施例。參考例1：芍藥醇(Paeonol)物質信息化學式1：CASNo.：552-41-0供應商：SichuanHongjieImport&ExportCO.，LTD參考例2：無血清培養基條件下皮膚干細胞的培養利用48-孔板(6×103cells/well)中添加有與胎牛血清(fetalbovineserum)類似的BPE(Bovinepituitaryextract)的CNT-57培養基(Cellntec公司)，在5％CO2和37℃條件下培養24小時從Cellntec公司購入的人皮膚干細胞(Humanepidermalstemcell)。之后，通過吸入管去除培養液后，利用PBS 溶液(GibcoBRL公司)去除培養基成分，用不包含BPE的CNT-57培養基處理化學式1的化合物20μg/mL，在5％CO2和37℃條件下培養了72小時。實驗例1：利用CCK-8評價法的皮膚干細胞增殖促進效果對上述參考例2中培養的皮膚干細胞進行CCK-8(Cellcountingkit-8)評價。CCK-8評價是對細胞內電子傳遞體系內的脫氫酶(Dehydrogenase)分解四唑鹽(TetrazoliumSalt)而生成的甲(Formazan)的吸光度進行測定，從而間接地顯示存活的細胞密度的分析方法。在37℃下用CCK-8溶液(處理培養基體積的1/10)對細胞處理2小時后，通過測定波長450nm下的吸光度來進行光譜學測定。對于化學式1的化合物的皮膚干細胞的增殖促進效果，根據將所測定的吸光度值與對照組(添加了BPE的CNT-57培養基)進行比較的下述數學式1，求出增殖率(％)，將其值示于下述表1中。數學式1：增殖率(％)＝(試樣處理組的吸光度/對照組的吸光度)×100表1皮膚干細胞的增殖促進效果添加試樣濃度與對照組比較的細胞增殖率(％)化學式1的化合物20μg/mL128％對照組-100％由上述表1的結果可以看出，用本發明的化學式1的化合物處理的培養基條件下的皮膚干細胞顯示出優異的增殖促進效果。實驗例2：皮膚干細胞的干性(stemness)維持效果確認為了確認在上述參考例2中培養的皮膚干細胞的干性維持效果，評價p63表達程度。p63作為細胞內轉錄因子且作為皮膚干細胞的維持標志物而周知。將細胞的RNA分離而合成cDNA之后，用Taqman染色液實施實時-PCR來測定p63的表達程度。本實驗中，用S16核糖體RNA對RNA的濃度進行了標準化。將上述實驗結果示于下述表2中。下述表2中的p63增加倍數的數值表示與對照組(添加了BPE的CNT-57培養基)比較的倍數。表2干性(stemness)維持效果(重復數＝3)添加試樣濃度p63增加倍數(倍)化學式1的化合物20μg/mL1.243對照組-1.0從上述表2的結果可以看出，用本發明的化學式1的化合物處理的培養基條件促進了皮膚干細胞的p63表達，因此干性維持效果優異。實施例1：膠原蛋白合成促進效果將化學式1的化合物添加至人成纖維細胞的培養液中，在細胞水平上測試了膠原蛋白合成的促進效果。通過PICPEIAkit(ProcollagenTypeIC-PeptideEnzymeImmunoAssayKIT)測定生物合成的膠原蛋白。以使化學式1的化合物的最終濃度成為10μg/mL、20μg/mL的方式，與維生素C和對照組(無添加)一同分別添加在人成纖維細胞(7x104cells/cm2)的培養基中，培養1天，之后取培養液，通過PICPEIAKit，并利用分光光度計，在450nm下測定各濃度的膠原蛋白生物合成程度。對膠原蛋白生物合成能力而言，以相對于對照組的相對合成能力來計算出增加率，并將其結果示于表3中。表3根據濃度的膠原蛋白合成促進效果(重復數＝3)添加試樣使用濃度(μg/mL)與對照組對比的膠原蛋白合成增加率(％)化學式1的化合物10μg/mL47.2％化學式1的化合物20μg/mL65.0％維生素C50μg/mL30.6％從上述表3的結果可知，本發明的化學式1的化合物對于人成纖維細胞 具有優異的膠原蛋白合成能力，與使用了通常認為具有膠原蛋白合成能力的維生素C相比，能夠以更低的濃度得到更優異的膠原蛋白合成效果。實施例2：對于角質剝離(turn-over)改善的功效性以健康的20歲至50歲的女性為對象，以如下方式試驗了下述制劑例2的營養乳霜的角質剝離改善效果。對20名20歲至50歲的女性的試驗部位，用DHA(Dihydroxyacetone，SigmaAldrich，USA)1.5％溶液進行8小時封閉斑貼(ClosedPatch)使其沉積后，將制造例的營養乳霜每天2次涂敷到試驗部位上。在涂敷4天后、涂敷8天后、以及涂敷12天后，利用ChromameterCR-400(Minolta，Japan)對沉積部位的皮膚色調進行儀器測定以及利用DSLR進行照片拍攝。測定值通過求出除了最大值和最小值以外的3次平均值來進行評價，沉積部位的皮膚色調的改善越大，顯示出角質剝離改善效果越好。在表4中示出了結果。表4皮膚色調改善效果區分涂覆4天后涂覆8天后涂覆12天后改善率(％)1.234.6911.58從上述表4中可知，當使用了本發明的制劑例的營養乳霜時，能夠得到角質剝離效果。制劑例1：藥物制劑的制造1.片劑的制造化學式1的化合物0.2㎎玉米淀粉100㎎乳糖100㎎硬脂酸鎂2㎎混合上述成分后，根據常規的片劑的制造方法進行壓片，制造了片劑。制劑例2：化妝品的制造1.營養乳霜的制造按照下述組成，根據常規方法制造了作為有效成分包含化學式1的化合物的營養乳霜。化學式1的化合物0.2重量％β-1,3-葡聚糖5.0重量％蜂蠟10.0重量％聚山梨酸酯601.5重量％PEG60氫化蓖麻油2.0重量％山梨糖醇酐倍半異硬脂酸酯0.5重量％液體石蠟10.0重量％角鯊烷5.0重量％辛酸/癸酸三酸甘油酯5.0重量％甘油5.0重量％丁二醇3.0重量％丙二醇3.0重量％三乙醇胺0.2重量％防腐劑0.05重量％色素0.05重量％香料0.05重量％純凈水加至100重量％制劑例3：皮膚外用劑的制造1.軟膏的制造按照下述組成，根據常規方法制造作為有效成分包含化學式1的化合物的軟膏。化學式1的化合物0.5重量％β-1,3-葡聚糖10.0重量％蜂蠟10.0重量％聚山梨酸酯605.0重量％PEG60氫化蓖麻油2.0重量％山梨糖醇酐倍半異硬脂酸酯0.5重量％凡士林5.0重量％液體石蠟10.0重量％角鯊烷5.0重量％牛油樹脂(SheaButter)3.0重量％辛酸/癸酸三酸甘油酯5.0重量％甘油10.0重量％丙二醇10.2重量％三乙醇胺0.2重量％防腐劑0.05重量％色素0.05重量％香料0.05重量％純凈水加至100重量％當前第1頁1 2 3