一種治療腦膠質瘤的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】一種治療腦膠質瘤的藥物組合物，屬醫藥領域。以蒿甲醚和替莫唑胺為活性組分，活性組分之間的相對重量份額為蒿甲醚40～70份，替莫唑胺0.5～4.0份，進一步優化為蒿甲醚65～67份，替莫唑胺0.5～2.0份。本發明藥物組合物對體外培養的SD大鼠腦膠質瘤C6細胞株抑制作用明顯。蒿甲醚和替莫唑胺聯用或單用的效應均為時間和濃度的依賴關系，兩藥合用為協同關系。兩藥聯用時的IC50值低于二者單用時；動物實驗充分證實，蒿甲醚與替莫唑胺聯用表現出良好的抑瘤效果，效果強于二者單用時；病理切片結果顯示，蒿甲醚與替莫唑胺聯用時，腦膠質瘤的微血管數量明顯減少，抗血管生成作用強于二者單用時。優點：價格低廉，療效顯著，毒副作用低。
【專利說明】一種治療腦膠質瘤的藥物組合物
【技術領域】
[0001]本發明屬醫藥領域，具體涉及一種治療腦膠質瘤的藥物組合物。
【背景技術】
[0002]腦膠質瘤約占顱內腫瘤的46%。惡性膠質瘤是34歲以下腫瘤患者的第2位死亡原因，是35~54歲患者死亡的第3位原因。膠質瘤偏良性者生長緩慢，病程較長，自出現癥狀至就診時間平均兩年；惡性者瘤體生長快，病程短，自出現癥狀到就診大多數在3個月內，70%~80%在半年以內。常規治療癌癥的化療藥物毒性大，復發率高，且大部分不能透過血腦屏障。尋找低毒、高效、廉價且能穿透血腦屏障并可用于治療腦膠質瘤的藥物具有重要價值。[0003]蒿甲醚(Artemether，ART)為青蒿素的脂溶性衍生物，臨床上已用于治療瘧疾，更為重要的是利用該藥具有透過血腦屏障的特性，用于治療腦型瘧疾并具有顯著療效。近年的研究發現，青蒿素及其衍生物如蒿甲醚在體內外有明顯的抗腫瘤和抑制腫瘤細胞生長的作用，且不產生賴藥性及不良反應。其主要的作用機制如下所述:
[0004]1、細胞周期阻滯:青蒿素及其衍生物青蒿琥酯可誘導Kaposi’ s肉瘤細胞周期時間明顯縮短，青蒿素及其衍生物二氫青蒿素可使人乳腺癌MCF-7細胞阻滯在GcZG1期；
[0005]2、誘導細胞凋亡:青蒿琥酯可誘導Kaposi’ s肉瘤細胞凋亡,且具劑量依賴性,對正常細胞無損傷；
[0006]3、抗血管生成作用:青蒿素類藥物可以通過抑制血管內皮生長因子(VEGF)的表達而阻止腫瘤血管的生成；
[0007]4、青蒿素類藥物可以調節腫瘤相關基因的表達，從而實現抑瘤的作用，如可抑制腦膠質瘤細胞U87增殖及凋亡，并導致細胞內癌癥相關基因的表達發生變化。
[0008]5、鐵離子介導的細胞損傷:惡性腫瘤細胞中的鐵離子含量較正常細胞大很多，青蒿素類藥物可通過鐵離子介導形成內過氧化橋，產生活性氧離子(ROS)和以碳為核心的自由基，進而使細胞發生分子損傷和死亡。
[0009]替莫唑胺(Temozolomide)是治療腦膠質瘤的口服制劑,具有針對性強、特異性高，可透過血腦屏障等特性，臨床上用于治療腦膠質瘤及轉移瘤。替莫唑胺是一種新型的口服二代烷化劑一一咪唑四嗪類衍生物，口服后迅速吸收，具有近100%的生物利用度及廣譜的抗腫瘤活性。替莫唑胺進入體內不經肝臟代謝廣泛分布于全身，并可透過血腦屏障，進入腦脊液，在中樞神經系統達到有效的藥物濃度。
[0010]蒿甲醚用于治療腦膠質瘤的優勢在于該藥能夠透過血腦屏障，誘導腦膠質瘤細胞凋亡、抑制血管內皮生長因子(VEGF)的表達而阻止腫瘤血管的生成。該藥具有毒副作用低，價格低廉，不產生賴藥性，可長期服用等優點；唯一的不足在于該藥單用的療效較替莫唑胺略差。
[0011]替莫唑胺用于治療腦膠質瘤的優勢在于該藥能夠透過血腦屏障，療效顯著，但該藥單用的最大缺點在于毒副作用大。其毒副作用主要是使中性粒細胞減少、血小板減少，食欲下降、頭痛、便秘、脫發、疲乏、腹瀉和視力模糊，因而腫瘤患者難于耐受，并且易產生耐藥性而不能夠長期使用。此外，替莫唑胺價格高，患者經濟負擔重。

【發明內容】

[0012]本發明的目的在于克服現有藥物的缺點，提供一種治療腦膠質瘤的藥物組合物，該藥物組合物不但能穿透血腦屏障，療效顯著，而且毒副作用低，價格低廉，可長期使用。
[0013]本發明藥物組合物是以蒿甲醚和替莫唑胺為活性組分，組合物中所含上述活性組分之間的相對重量份額為蒿甲醚40~70份，替莫唑胺0.5~4.0份。進一步優化的相對重量份額為蒿甲醚65~67份，替莫唑胺0.5~2.0份。 [0014]本發明藥物的劑型以膠囊為首選，但也可以是其他劑型，如糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、顆粒劑、沖劑、散劑、混懸劑等。
[0015]本發明藥物的臨床使用劑量推薦為:按蒿甲醚與替莫唑胺的總量計、每天每千克體重使用40~74mg。
[0016]試驗研究結果顯示:本發明藥物組合物對體外培養的SD大鼠腦膠質瘤C6細胞株抑制作用明顯。蒿甲醚和替莫唑胺聯用或單用的效應均為時間和濃度的依賴關系，兩藥合用為協同關系。兩藥聯用時的IC50值低于二者單用時；動物實驗充分證實，蒿甲醚與替莫唑胺聯用表現出良好的抑瘤效果，效果強于二者單用時；病理切片結果顯示，蒿甲醚與替莫唑胺聯用時，腦膠質瘤的微血管數量明顯減少，抗血管生成作用強于二者單用時。
[0017]本發明組合物的優點:價格低廉，療效顯著，毒副作用低。
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0018]圖1為實例3中對照組模型SD大鼠腦膠質瘤H.E染色病理切片(HEX 200)。
[0019]圖2為實例3中蒿甲醚組模型SD大鼠腦膠質瘤H.E染色病理切片(HEX 200)。
[0020]圖3為實例3中替莫唑胺組模型SD大鼠腦膠質瘤H.E染色病理切片(HEX 200)。
[0021]圖4為實例3中本發明兩藥聯用組模型SD大鼠腦膠質瘤H.E染色病理切片(HE X200)。
[0022]圖5為實例3中對照組模型SD大鼠腦膠質瘤免疫組化病理切片(X200)。
[0023]圖6為實例3中蒿甲醚組模型SD大鼠腦膠質瘤免疫組化病理切片(X200)。
[0024]圖7為實例3中替莫唑胺組模型SD大鼠腦膠質瘤免疫組化病理切片(X 200)。
[0025]圖8為實例3中本發明兩藥聯用組模型SD大鼠腦膠質瘤免疫組化病理切片(X200)。
【具體實施方式】
[0026]下面結合實例對本發明進一步闡述。
[0027]實例1:測定蒿甲醚與替莫唑胺單用與聯用對C6腦膠質瘤細胞的抑制作用。
[0028]實驗試劑:RPMI1640培養基購自美國GIBCO公司；胎牛血清購自美國GIBCO公司，噻唑藍(MTT)購自美國SIGMA公司，DMSO購自美國SIGMA公司。
[0029]主要儀器:二氧化碳培養箱(美國Forma公司)；酶標儀(美國Bio-Rad公司)；無菌操作臺(美國Forma公司)。[0030]細胞株及細胞培養:SD大鼠腦膠質瘤細胞株C6用含10%胎牛血清的RPMI1640細胞培養基于37 °C，5%C02恒溫培養箱中常規培養。
[0031]藥物:蒿甲醚(昆明制藥集團股份有限公司，50mg)。
[0032]替莫唑胺(江蘇天士力帝益藥業有限公司，50mg)o
[0033]試驗方法:四甲基偶氮唑鹽法(MTT法):
[0034]長期C6細胞，調整細胞懸液為I X IO5個/ml。取三個96孔板，在細胞板的外周各孔均加入200 μ I的生理鹽水，其它各孔每孔用移液器加入細胞濃度為IX IO5個/ml的細胞懸液200 μ 1，使每孔細胞數2.0 X IO4個，其中設置空白對照組I個包括6個復孔、實驗組9個在此后的實驗中依次用于加入不同濃度的藥液(200、100、50、25、12.5,6.25,3.125 μ g/ml),每個濃度的藥物組均設6個復孔，置37、V 5%C02培養箱中培養24h ;取出96孔板，用移液器小心吸去上清液，實驗組每孔分別加入用完全培養液配制的相應濃度的藥物溶液200 μ 1，每個濃度6個復孔。空白對照組加200 μ I的完全培養液，置37，°C 5%C02培養箱中分別培養24h、48h、72h ;稱取IOmgMTT溶于2ml PBS中，過濾，取濾液1.5ml與13.5ml完全培養基混勻；取出已培養到相應時間的培養板，用25ml注射器吸干孔內的液體，每孔加入200 μ IMTT溶液，放入培養箱內繼續孵育4h，去除MTT，每孔加入150 μ I DMSO,暗處振蕩15min，450型ELISA-Reader酶標儀(Bio-Rad公司)490nm主波長，630nm副波長檢測吸光度。以對照組細胞活力為100%，按公式計算不同濃度蒿甲醚對C6細胞增殖的抑制率:細胞抑制率(％) = (I 一藥物組吸光度/對照組吸光度)X 100%。借助SPSS17.0軟件求的IC50 值。
[0035]實驗結果:兩藥單用及合用時不同濃度的效應:兩藥單用及合用時隨著藥物濃度增加對細胞抑制率也增加，見表1。
[0036] 表1:不同濃度的藥物單用及合用對C6細胞的抑制率
[0037]
【權利要求】
1.一種治療腦膠質瘤的藥物組合物，其特征在于:以蒿甲醚和替莫唑胺為活性組分，組合物中所含上述活性組分之間的相對重量份額為蒿甲醚40~70份，替莫唑胺0.5~4.0份。
2.如權利要求1所說的治療腦膠質瘤的藥物組合物，其特征在于:所說相對重量份額為蒿甲醚65~67份，替 莫唑胺0.5~2.0份。
【文檔編號】A61P35/00GK103933035SQ201410152515
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月16日 優先權日:2014年4月16日
【發明者】朱啟順, 伍治平, 高誠偉, 吳永貴, 康紅梅, 陳艷 申請人:朱啟順, 康紅梅