用于治療疾病的新穎的方法和組合物的制作方法
【專利摘要】本發明的實施例的一個方面涉及提供新穎的治療組合物，其包含植物物種西洋接骨木(Sambucus nigra)、紫松果菊(Echinacea purpurea)和積雪草(Centella asiatica)的草本提取物。所述組合物顯示相對于先前鑒別的組合物，增加的治療各種發炎性疾病、尤其粘膜或皮膚的發炎性疾病的治療活性。另外，所述組合物顯示相對于先前鑒別的組合物增加的溶解性。在本發明的一個實施例中，西洋接骨木:紫松果菊:積雪草的比率是7:1:2。本發明的一個實施例提供了制備包含前述植物物種的提取物的含水的治療組合物的方法，其使用至少兩次提取。
【專利說明】用于治療疾病的新穎的方法和組合物
[0001] 相關申請
[0002] 本申請依35U. S. C. 119(e)要求2012年3月14日提交的美國臨時申請61/610, 480 的權益，所述申請的公開內容以引用的方式并入本文中。

【技術領域】
[0003] 本發明的實施例涉及草本提取物的新穎組合物、其制備方法和使用所述提取物治 療疾病的方法。

【背景技術】
[0004]包含植物物種西洋接骨木（Sambucus nigra)、紫松果菊（Echinacea purpurea)和 積雪草$61^61]^381&1:;^3)的草本提取物的治療組合物已經在美國專利號7,563,466中 予以描述。


【發明內容】

[0005] 本發明的實施例的一個方面涉及提供新穎的治療組合物，其包含植物物種西洋接 骨木、紫松果菊和積雪草的草本提取物。所述組合物顯示相對于先前鑒別的組合物，增加的 治療各種發炎性疾病、尤其粘膜或皮膚的發炎性疾病的治療活性。另外，所述組合物顯示相 對于先前鑒別的組合物增加的溶解性。
[0006] 本發明的一個實施例提供了一種包含植物物種西洋接骨木、紫松果菊和積雪草的 提取物的組合物，所述組合物具有超過或等于0.055%的柚皮素（naringenin)濃度。在本 發明的一個實施例中，治療組合物可溶于丙二醇中，濃度為20 %。在本發明的一個實施例 中，西洋接骨木：紫松果菊：積雪草的比率是7:1:2。
[0007] 本發明的一個實施例提供了制備包含前述植物物種的提取物的含水的治療組合 物的方法，其使用至少兩次提取。
[0008] 本發明的一個實施例提供了治療疾病、尤其是粘膜或皮膚疾病、發炎性疾病或可 以通過組織修復來改善的疾病、病狀或創傷的方法，其包含投與包含所述植物物種的提取 物的組合物。
[0009] 在論述中，除非另有說明，否則應了解例如"實質上"和"約"等修飾本發明的一個 實施例的特征的條件或關系特性的形容詞意指所述條件或特性界定在其意圖用于的應用 的實施例操作可接受的容限內。除非另外指明，否則說明書和權利要求書中的字"或"被認 為是包括性"或"而不是排它性或，并指示其所連結的對象中的至少一個或任何組合。
[0010] 提供本
【發明內容】
是為了以簡化形式引入下文在【具體實施方式】中進一步描述的概 念選擇。本
【發明內容】
并非意圖鑒別所要求的主題的關鍵特征或基本特征，也并非意圖用于 限制所要求的主題的范圍。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011] 圖la和圖lb展示描繪用于制造包含根據本發明的實施例的來自植物物種紫松果 菊、西洋接骨木和積雪草的提取物的組合物的合成方案的流程圖；
[0012] 圖2a展示比較各種濃度下根據本發明的實施例的草本提取物與常規提取物對介 白素-10-轉化酶（ICE)活性（發炎的一種指示物）的抑制的作用的圖；
[0013] 圖2b展示比較各種濃度下根據本發明的實施例的草本提取物與常規提取物對膠 原蛋白從細胞的釋放（傷口愈合的一種指示物）的作用的圖；
[0014] 圖2c展示比較各種濃度下根據本發明的實施例的草本提取物與常規提取物對核 因子-K B (NFkB)(發炎的一種指示物）的抑制的作用的圖；
[0015] 圖2d展示比較各種濃度下根據本發明的實施例的草本提取物與常規提取物對細 胞中氧化氮（N0)活性（發炎的一種指示物）的抑制的作用的圖；
[0016] 圖3展示描繪在倉鼠中在放射誘發的口腔粘膜炎的模型中根據本發明的實施例 的提取物的調配物對降低粘膜炎評分的有益作用的圖；以及
[0017] 圖4展示描繪在六名人類患者中根據本發明的實施例的組合物對口腔粘膜炎評 分的作用的圖。

【具體實施方式】
[0018] 在以下【具體實施方式】中，將描述新的制造包含草本提取物的組合物的方法。此外， 描述展示新草本組合物的增強的質量的化學和生物學表征。描述一種展示根據本發明的實 施例的組合物增加的消炎作用的動物模型。描述一種展示根據本發明的實施例的組合物在 人類治療中的作用的臨床試驗。提供了使用新的草本組合物的治療方法。
[0019] 實例la :根據本發明的實施例的組合物的合成
[0020]圖la展示描繪用于合成包含來自植物物種西洋接骨木、紫松果菊和積雪草的提 取物的各種組合物的合成方案1〇〇的流程圖。合成方案1〇〇包含框10、20和30,所述框10、 20和30包含分別將西洋接骨木、紫松果菊和積雪草與水醇溶液（包含水和醇的溶液）混 合。框12、22和32包含去除不溶的植物物質和溶劑以分別形成西洋接骨木、紫松果菊和積 雪草的干燥提取物。框40包含將框12、22和32的干燥草本提取物組合。
[0021] 在本發明的一個實施例中，框10、20和/或30的水醇溶液包含25%與75%之間 的醇。在一個實施例中，框10、20和/或30的水醇溶液包含70%醇。在一個實施例中，水 醇溶液中的醇包含乙醇。在一個實施例中，框10、20和/或30中的溶劑與植物的比率是在 約6到約10重量份的溶劑與一重量份植物材料之間。在一個實施例中，框10、20和/或 30中的溶劑與植物的比率在按重量計約8:1之間。在一個實施例中，水醇溶液混合約8小 時。在一個實施例中，提取工藝是多階段的。在一個實施例中，水醇溶液在約30-40°C (攝 氏度）的溫度下混合。在一個實施例中，賦形劑在去除溶劑和植物物質前添加到水醇溶液 中。在一個實施例中，賦形劑是載劑，例如麥芽糊精。在一個實施例中，賦形劑是無水膠狀 二氧化硅。在一個實施例中，草本提取物與賦形劑的比率是約7:3。
[0022] 在本發明的一個實施例中，在框12、22和/或32中溶劑通過噴霧干燥來去除。
[0023] 在本發明的一個實施例中，在框40中，西洋接骨木：紫松果菊：積雪草的草本提 取物分別以2-15:0. 5-3:0. 5-3的重量比組合。在另一個實施例中，西洋接骨木：紫松果 菊：積雪草的草本提取物分別以70:10:20的重量比組合。
[0024] 合成方案100進一步包含框42,其包含將水與框40的組合的草本提取物組合。在 一個實施例中，水以每公斤（kg)草本提取物3到14升（L)水的比率組合。在一個實施例 中，水以每公斤草本提取物9L水的比率組合。在一個實施例中，水與草本提取物的混合物 混合約6到約24小時。在一個實施例中，水與草本提取物的混合物混合約12小時。
[0025] 合成方案100進一步包含框44,其包含將醇與框42中形成的混合物組合。在本發 明的一個實施例中，醇包含乙醇。在一個實施例中，96 %或100 %乙醇用于形成具有約50 % 到約90%乙醇的濃度的醇混合物。在一個實施例中，添加乙醇以達到70%乙醇的濃度。
[0026] 在本發明的一個實施例中，框44的醇混合物攪拌約6到約24小時、優選地約12 小時。
[0027] 合成方案100進一步包含框46,其包含從框44中形成的醇混合物去除不溶的物 質。在本發明的一個實施例中，使用離心、過濾、沉降或任何這些方法的組合從醇混合物去 除不溶的物質。
[0028] 合成方案100進一步包含框48,其包含去除醇以形成草本水溶液。在本發明的一 個實施例中，醇可以通過蒸餾或通過蒸發使用旋轉式蒸發器去除。在本發明的一個實施例 中，醇是乙醇并在低于30°C的溫度下使用旋轉式蒸發器去除。
[0029] 合成方案100進一步包含框50,其包含從框48的水溶液去除水以形成干草本粉 末。根據本發明的實施例，可以使用凍干（冷凍干燥）或噴霧干燥實現水的去除。
[0030] 圖lb展示描繪用于合成包含來自植物物種西洋接骨木、紫松果菊和積雪草的提 取物的各種組合物的合成方案200的流程圖。合成方案200包含框40,其包含如所描述，組 合合成方案100中框12、22和32的干燥的草本提取物。
[0031] 在本發明的一個實施例中，在框40中，西洋接骨木：紫松果菊：積雪草的草本提 取物分別以2-15:0. 5-3:0. 5-3的重量比組合。在另一個實施例中，西洋接骨木：紫松果 菊：積雪草的草本提取物分別以70:10:20的重量比組合。
[0032] 合成方案200進一步包含框62,其包含將醇與框40的組合的草本提取物組合。在 一個實施例中，醇以每公斤草本提取物約3到約14L醇、優選地約9L醇的比率使用。在一 個實施例中，醇與草本提取物的混合物混合約12小時。在本發明的一個實施例中，醇包含 乙醇。在一個實施例中，乙醇是96 %-100 %乙醇。
[0033] 合成方案200進一步包含框64,其包含將水與框62中形成的混合物組合。在一個 實施例中，使用水形成具有約50%到約90%乙醇的濃度的醇混合物。在一個實施例中，使 用水達到70%乙醇的濃度。
[0034] 在本發明的一個實施例中，攪拌框64的醇混合物。在一個實施例中，混合物攪拌 約6小時到約24小時，優選地約12小時。
[0035] 合成方案200進一步包含框66,其包含從框64中形成的醇混合物去除不溶的物 質。在本發明的一個實施例中，使用離心、過濾、沉降或任何這些方法的任何組合從醇混合 物去除不溶的物質。
[0036] 合成方案200進一步包含框68,其包含去除醇以形成草本水溶液。在本發明的一 個實施例中，醇可以使用蒸餾或蒸發，例如使用旋轉式蒸發器去除。在本發明的一個實施例 中，醇是乙醇并在低于30°C的溫度下使用旋轉式蒸發器去除。
[0037] 合成方案200進一步包含框70,其包含從框68的水溶液去除水以形成干草本粉 末。根據本發明的實施例，可以使用凍干（冷凍干燥）或噴霧干燥實現水的去除。
[0038] 實例lb :提取物N的合成
[0039] 根據本發明的一個實施例，遵循在實例la中描述的合成方案100,細節如下。
[0040] 根據框10,將西洋接骨木（花梢）與70%乙醇（8:1溶劑與植物比率）混合。根 據框12去除不溶的植物物質和干燥溶劑后，形成3. 29kg干燥的西洋接骨木提取物。
[0041] 根據框20將紫松果菊（根莖和根）與70%乙醇（8:1溶劑與植物比率）混合。根 據框22去除不溶的植物物質和干燥溶劑后，形成470g(克）干燥的紫松果菊提取物。
[0042] 根據框30將積雪草（地上部分）與70 %乙醇（8:1溶劑與植物比率）接觸。根據 框32去除不溶的植物物質和干燥溶劑后，形成940g干燥的積雪草提取物。
[0043] 根據框40將來自三種草本植物的三種干燥提取物（按重量計70:10:20的比率） 組合。根據框42,添加47L水并攪拌混合物12小時。根據框44,將113. 9L96%乙醇添加到 混合物中以形成160. 9L70%乙醇的醇混合物。根據框46過濾混合物并去除不溶的物質。 根據框48蒸發乙醇并根據框50將溶液噴霧干燥以形成3. 2kg干草本粉末，稱為提取物N。 此工藝的產率（相對于根據框40添加的干燥提取物的重量百分比）是68. 7%。
[0044] 實例lc :提取物P的合成
[0045] 根據方案100中的框40將來自三種草本植物的三種干燥提取物（按重量計 70:10:20的比率）組合。隨后遵循方案200,產生提取物P。根據框62,乙醇（100% )以每 lg干燥提取物9g乙醇的比率添加。攪拌混合物12小時。隨后根據框64,緩慢添加水，直 到實現最終70%乙醇的濃度。根據框66將混合物離心并去除不溶的物質。根據框68在真 空下使用旋轉式蒸發器蒸發乙醇，并根據框70凍干溶液，以形成干草本粉末，稱為提取物 P。提取物P的產率（相對于根據框40添加的干燥提取物的重量百分比）是75%。
[0046] 實例Id :提取物D的合成
[0047] 根據方案100中的框40將來自三種草本植物的三種干燥提取物（按重量計 70:10:20的比率）組合。根據如實例lb中所描述的框42,形成含水的混合物，并混合混合 物約17-20小時。通過將水溶液離心并用0.2微米過濾器過濾來去除不溶的物質。通過凍 干過夜，將水從濾液去除。干燥的草本混合物稱為提取物D。
[0048] 實例le :提取物B的合成
[0049] 根據實例la直到框40,制備草本提取物。組合的草本提取物稱為提取物B。
[0050] 實例If :提取物M的合成：
[0051] 根據實例la(直到框40)，制備草本提取物。將100%乙醇添加到組合的草本提取 物中并攪拌12小時。將水添加到乙醇混合物，直到乙醇濃度是30%。隨后使用旋轉式蒸發 器去除乙醇并隨后通過凍干去除水。所得提取物稱為提取物M。
[0052] 實例2 :根據本發明的實施例的組合物的化學分析
[0053] 根據本發明的實施例的提取物包含多種生物活性、包括消炎的化合物。進行 HPLC (高效液相色譜法）定量分析以鑒別提取物D與提取物N之間的化學差異。
[0054] 使用菲羅門（Phenomenex) Synergi4 u m Hydro_RP80A 柱，使用含 0? 01 摩爾濃度憐 酸的水和乙腈作為流動相溶劑，進行HPLC分析。使用二極管陣列檢測器進行檢測。
[0055] 在根據本發明的實施例的提取物中鑒別的消炎化合物之一是柚皮素，其來源于草 本植物西洋接骨木。使用柚皮素（從西格馬（Sigma)獲得）制備標記物以定量草本提取物 的樣品中柚皮素的量。
[0056] 對來自各批料的提取物D和N進行HPLC分析。在進行分析前，將提取物D和N在 50%乙腈/50%水溶劑中稀釋到1%溶液。結果概述于以下表1中，其中柚皮素含量根據提 取物的百分比表示。
[0057] 表 1

【權利要求】
1. 一種用于制備含水的治療組合物的方法，其包含： 將西洋接骨木、紫松果菊和積雪草的水醇草本提取物與水組合，以形成含水的混合 物； 將所述含水的混合物與醇組合，以形成具有超過50%醇的濃度的醇混合物； 將不溶的物質和醇從醇混合物分離，以產生含水的治療組合物。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述醇混合物包含約70%醇。
3. 根據權利要求1所述的方法，其中所述含水的治療組合物進一步干燥以形成干燥的 治療組合物。
4. 根據權利要求1所述的方法，其中所述醇是乙醇。
5. 根據權利要求1所述的方法，其中使用離心、過濾或沉降將不溶的物質從所述醇混 合物分離。
6. 根據權利要求1所述的方法，其中使用真空將醇從所述醇混合物分離。
7. 根據權利要求3所述的方法，其中通過噴霧干燥或冷凍干燥將所述含水的治療組合 物干燥。
8. 根據權利要求3所述的方法，其進一步包含將所述干燥的治療組合物與至少一種醫 藥學上可接受的賦形劑組合。
9. 根據權利要求8所述的方法，其中所述賦形劑選自由以下組成的群組：丙二醇、聚乙 二醇、丙三醇和香精油。
10. 根據權利要求1所述的方法，其中西洋接骨木、紫松果菊和積雪草的水醇草本提取 物是通過將所述植物物質混合于包含約70 %醇的溶劑中來制備。
11. 根據權利要求10所述的方法，其中所述植物物質混合約8小時。
12. 根據權利要求11所述的方法，其中植物物質與溶劑的比率是約1:8。
13. 根據權利要求10所述的方法，其進一步包含從植物物質與溶劑的所述混合物去除 溶劑以形成水醇草本提取物。
14. 一種草本提取物，其包含西洋接骨木、紫松果菊和積雪草中每一者的水醇草本提取 物，所述提取物包含超過或等于〇. 055%的柚皮素濃度。
15. 根據權利要求14所述的草本提取物，其具有于丙二醇中呈20%溶液的溶解性。
16. 根據權利要求14所述的草本提取物，其中西洋接骨木：紫松果菊：積雪草的比率 是約7:1:2。
17. -種醫藥組合物，其包含根據權利要求14所述的草本提取物。
18. 根據權利要求17所述的醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受的載劑。
19. 根據權利要求18所述的醫藥組合物，其中所述載劑包含丙二醇。
20. 根據權利要求17所述的醫藥組合物，其呈漱口水、貼片、軟膏、糊劑、洗劑、乳膏、口 含片、糖果、口香糖、溶液、凝膠、泡沫或噴霧的形式。
21. -種用于治療疾病的方法，其包含投與醫藥學上可接受的量的根據權利要求17所 述的醫藥組合物。
22. 根據權利要求21所述的方法，其中所述疾病是粘膜疾病或皮膚疾病。
23. 根據權利要求21所述的方法，其中所述疾病是發炎性疾病。
24. 根據權利要求21所述的方法，其中所述疾病通過組織修復得到改善。
25. 根據權利要求21所述的方法，其中所述疾病選自由以下組成的群組：口腔粘膜炎、 發炎性腸病、放射誘發的直腸炎、萎縮性陰道炎、牙周疾病、齒齦炎、阿弗他潰瘍（aphthous ulceration)、機械性創傷、熱傷、扁平苔癬、大皰性類天皰瘡、尋常天皰瘡、皰疹樣皮炎、口 角炎和復發性皰疹。
26. 根據權利要求21所述的方法，其中所述投與的草本提取物的量在每天lmg與1. 5g 之間。
【文檔編號】A61K36/23GK104394875SQ201380014283
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2013年3月13日 優先權日:2012年3月14日
【發明者】A·D·羅森布魯, G·J·努斯鮑姆, A·羅特曼 申請人:Izun制藥公司