一種重組豬干擾素α1產品的凍干方法
【專利摘要】本發明公開了一種重組豬干擾素α1（RecombinantPorcineInterferonα1，rPoIFNα1）產品的凍干方法，包括rPoIFNα1原液預凍、重結晶、一次干燥、二次干燥和升華等工藝組成。采用本發明工藝，rPoIFNα1產品一次性凍干外觀合格率達到99.9%以上，尤其適用于rPoIFNα1產品規模化生產時使用。
【專利說明】—種重組豬干擾素α1產品的凍干方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于治療性獸用生物制品生產工藝【技術領域】，具體涉及一種重組豬干擾素α I (Recombinant Porcine Interferon α I, rPoIFNa I)產品的凍干工藝。【背景技術】
[0002]真空冷凍干燥(簡稱“凍干”)是指將含水物質預先凍結成固態，然后在真空狀態下使其中的水從固態升華成氣態，以除去水分而保存物質的方法。凍干后的固體物質呈多孔結構，保持凍結時的體積，加水極易溶解復原。凍干過程是在低溫真空條件下進行.因此對于許多熱敏性、易氧化的物質特別適用。凍干能除去95% -99%的水分，使干燥后的產品能長期保存。
[0003]干擾素是一種廣譜抗病毒，可通過與細胞表面受體作用使細胞產生抗病毒蛋白，從而抑制病毒的復制；同時還可增強自然殺傷細胞(NK細胞)、巨噬細胞和T淋巴細胞的活力，從而起到免疫調節作用，并增強抗病毒能力。該制品應用于畜牧獸醫生產實踐中存在液體劑型熱穩定性差、不易長期保存等問題。較理想的解決辦法是進行制品的凍干保存，這樣不僅可以延長保存期，而且有利于運輸。

【發明內容】

[0004]本發明的目的正是為了解決現有技術存在上述不足而提供的一種重組豬干擾素a I產品的凍干工藝。
[0005]本發明是通過以下技術方案實現的:
[0006]一種重組豬干擾素a I產品的凍干方法，包括以下步驟:·[0007](I)預凍:在-45~_30°C的條件下進行,將rPoIFN a I原液冷凍2h ；
[0008](2)凍結間隙:降溫到-10~_15°C左右時，觀察到rPoIFNa I原液已經有凍結出現，這時開啟冷阱降溫進入凍結間隙，冷阱降溫35~45min，至溫度為-18~_13°C時，再次開啟冷凍裝置進行凍干25~35min ；
[0009](3)重結晶:再次開啟冷阱降溫25~35min ；
[0010](4)將上述步驟反復操作2~3次；
[0011](5)完全結晶后，再次開啟冷凍程序凍干I~2h，降低干燥箱內的空氣溫度降為-15~_30°C，開啟冷阱降溫和抽真空，進行一次干燥；
[0012](6)—次干燥:固體表面有0.1cm干燥或者觀察到有白色干燥物時，開啟隔板加熱，設置隔板溫度為-18~-20°C，溫度顯示器顯示溫度范圍為-18~-20°C，維持18~20min ；
[0013](7) 二次干燥:調節隔板溫度為-13~-15°C，維持50~60min，干燥到0.2~
0.4cm,調節溫度為-8~-10°C，當溫控顯示范圍為_8~-10°C，維持3.8~4h，干燥至
1.6~1.9cm時將隔板溫度設定為0°C，直至干燥面到達瓶底，維持25~35min ；
[0014](8)升華:將隔板溫度設定為+5°C，維持2h，將隔板溫度控制設定為+20°C，直至隔板溫度達到+20°C，開始觀察真空度的顯示，真空度為3Pa時，維持50~60min，凍干結束，得到rPoIFNa I凍干產品。[0015]本發明的優點是:
[0016]采用本發明工藝，rPoIFNa I產品一次性凍干外觀合格率達到99.9%以上，尤其適用于rPoIFNa I產品規模化生產時使用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1rPoIFNa I凍干成品外觀圖。
【具體實施方式】 [0018]實施例1
[0019]1.rPoIFN a I 原液凍干
[0020](I)在-45~-30°C的條件下進行預凍rPoIFNa I原液2h。
[0021](2)降溫到-10~_15°C左右時，觀察到rPoIFNa I原液已經有凍結出現，這時開啟冷阱降溫進行凍結間隙。
[0022](3)使凍干箱內的溫度維持穩定一段時間，冷阱降溫40min左右。
[0023](4)冷阱大概降溫至-18~_13°C時，再次開啟冷凍裝置進行凍干大約30min。
[0024](5)再次開啟冷阱降溫30min左右。
[0025](6)反復兩次，以使冷凍效果更好。
[0026](7)再次開啟冷凍程序凍干1.5h，這時干燥箱內的空氣溫度降至-15~_30°C，開啟冷阱降溫和抽真空，進行一次干燥。
[0027](8)固體表面有0.1cm干燥或者觀察到有白色干燥物時,開啟隔板加熱,設置隔板溫度為-20°C。
[0028](9)溫度顯示器顯示溫度為-20°C，維持20min。
[0029](10)調節隔板溫度為-15°C，維持Ih左右，干燥到0.3cm左右，調節溫度為_10°C。
[0030](11)當溫控顯示-10°C維持4h左右，干燥大約1.8cm時將隔板溫度設定為0°C，直至干燥面到達瓶底，維持30min。
[0031](12)將隔板溫度設定為+5°C，維持2h。
[0032](13)將隔板溫度控制設定為+20°C，直至隔板溫度達到+20°C，開始觀察真空度的顯不O
[0033](14)真空度為3Pa時。
[0034](15)維持lh，凍干結束。
[0035](16)使用壓蓋裝置內部壓蓋。
[0036](17)放掉真空，取出rPoIFNa I凍干成品。
[0037]2.rPoIFN a I凍干成品檢測
[0038]隨機抽取不同批次rPoIFNa I凍干品分別按照以下方案檢測，結果表明采用本凍干工藝凍干后的rPoIFNa I成品外觀合格率達到99.9%以上，含水量1.47%，無菌檢驗、安全性實驗均合格，效價達到1.1 X 106IU/ml，蛋白含量為lmg/ml,比活性為1.lX106IU/mg，蛋白純度檢測> 95% (如表1所示)。
[0039]真空度檢測:采用真空度測試儀檢測。
[0040]含水量檢測:是利用費休氏法測定，低于3%判為合格。[0041]外觀檢測:觀察rPoIFNa I凍干品是否有塌縮、凹陷、缺損等現象，如無則判為合格。
[0042]無菌檢驗:按《中國生物制品規程》通則《生物制品無菌試驗規程》A項進行。
[0043]安全性實驗:用體重18~20g小白鼠5只，每只腹腔注射0.5ml (rPoIFN α I凍干品溶于2ml生理鹽水)，觀察7天，動物應健存，每只體重增加判為合格。
[0044]效價檢測:采用WISH細胞VSV檢測系統，以微量細胞病變抑制法測定樣品的效價。
[0045]蛋白含量檢測:Lowry法。
[0046]比活性:效價與蛋白質含量之比。
[0047]純度檢測=SDS-PAGE電泳檢測。
[0048]表1rPoIFN α I凍干成品檢測
【權利要求】
1.一種重組豬干擾素α I產品的凍干方法，其特征在于包括以下步驟: (1)預凍:在-45~-300C的條件下進行，將rPoIFNα I原液冷凍2h ； (2)凍結間隙:降溫到-1(T-15°C左右時，觀察到rPoIFNa I原液已經有凍結出現，這時開啟冷阱降溫進入凍結間隙，冷阱降溫35~45min，至溫度為-18- _13°C時，再次開啟冷凍裝置進行凍干25~35min ； (3)重結晶:再次開啟冷阱降溫25~35min； (4)將上述步驟反復操作2-3次； (5)完全結晶后，再次開啟冷凍程序凍干l_2h，降低干燥箱內的空氣溫度降為-15~-30°C，開啟冷阱降溫和抽真空，進行一次干燥； (6)—次干燥:固體表面有0.1cm干燥或者觀察到有白色干燥物時，開啟隔板加熱，設置隔板溫度為-18~_20°C，溫度顯示器顯示溫度范圍為-18- -20°C，維持18~20min; (7)二次干燥:調節隔板溫度為-13~-15°C，維持5(T60min，干燥到0.2~0.4cm，調節溫度為-8~-10°C，當溫控顯示范圍為-8~-10°C，維持3.8~4h，干燥至1.6~1.9cm時將隔板溫度設定為0°C，直至干燥面到達瓶底，維持25~35min ； (8)升華:將隔板溫度設定為+5°C，維持2h，將隔板溫度控制設定為+20°C，直至隔板溫度達到+20°C，開始觀察真空度的顯示，真空度為3Pa時，維持5(T60min，凍干結束，得到rPoIFNa I凍干產品。
【文檔編號】A61K9/19GK103585118SQ201310526180
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月29日 優先權日:2013年10月29日
【發明者】王明麗, 趙俊, 王彩玲, 關鑫 申請人:王明麗, 趙俊