專利名稱：抗重組人角質細胞生長因子-2抗體的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，具體涉及抗重組人角質細胞生長因子-2 (KGF-2)抗體在治療銀屑病方面的應用。
背景技術：
銀屑病是ー種常見的多發的受多基因控制的慢性炎癥性皮膚病，其重要組織病理學的特征性表現為角質形成細胞(keratinocyte, KC)過度增生,棘層增厚以及真皮血管擴張同時伴有炎細胞浸潤為主要表現的皮膚病。病因和發病機制尚不完全清楚，考慮與遺傳、感染、代謝障礙、內分泌紊亂及免疫因素等有夫。關于銀屑病的治療，目前國內外主要有以下幾種方法1，全身用藥，ロ服維甲酸，ロ服免疫抑制劑如環孢素、雷公藤，靜脈給與免疫調節劑等。2，光化學療法。3，外用制劑，如達力士、皮質類固醇激素和維甲酸類外用藥等。4， 中醫中藥ロ服和外用。近幾年，基于銀屑病是以淋巴細胞異常活化為始發環節的免疫炎性疾病的理論，人們開發了多種抑制T淋巴細胞異常活化和異常活化后釋放的各種細胞因子的藥物，迄今己出現了與此概念相關的20余種用于治療銀屑病的生物制品，其作用機制涵蓋了從T細胞激活的起始點及各中間環節，如抑制APC的抗原提呈功能、抑制T細胞的活化和増殖、抑制T細胞粘附、抑制炎癥細胞因子的生成或活性、利用細胞因子的免疫調節作用等。這些生物治療藥物較傳統的免疫抑制劑選擇性高，可通過聯合療法來發揮作用，表現出較好的發展前景。研究表明，活化的T淋巴細胞、炎性細胞、成纖維細胞及相互作用產生的細胞因子和炎癥介質是造成銀屑病病理生理異常的物質基礎，對于這些細胞因子和炎癥介質的異常改變，任何對銀屑病的病理生理研究和任何治療藥物必然直接或間接地涉及。體內和體外的研究都表明，在銀屑病形成過程中，在一些生長因子的作用下KC表現為異常増殖和分化，如表皮生長因子、轉化生長因子a和角質細胞生長因子等，其中角質細胞生長因子對KC的異常增殖和分化可能起的KGF、KGFR及NGF和P75NGFR的蛋白表達。結果發現KGF和KGFR0主要表達在銀屑病患者皮膚基底層和基底上層，且在銀屑病、皮損中的表達強度均顯著上調，表明在銀屑病表皮角質形成細胞的增生、分化中起重要作用。體外研究顯示KGF刺激KC的DNA增長能力較TGF和EGF強2_10倍，同時KGF也能促進KC的遷移。郗彥萍等采用組織切片免疫組化技術檢測KGF-2在尋常型銀屑病患者皮損、非皮損及正常皮膚中的分布。結果表明，尋常型銀屑病皮損、非皮損中KGF-2的陽性檢測結果均明顯高于對照組，表明KGF-2在銀屑病KC異常増殖中起重要的作用。Kovacs等研究也表明。銀屑病皮損中激活的淋巴細胞能刺激成纖維細胞產生KGF-2，從而維持KC呈持續過度增殖的狀態。本申請人發明了ー種分泌表達重組人角質細胞生長因子-2的制備方法，提供了一種重組人角質細胞生長因子-2的表達載體，它含有分泌信號肽編碼序列，能將KGF-2蛋白分泌到細胞周質中進行表達，含有此重組質粒的宿主細胞經低溫反復凍融，在不破壞細菌內膜的情況下即可使重組蛋白釋放到緩沖液中，不破壞蛋白的活性。其氨基酸序列與天然的人角質細胞生長因子_2相同，申請了中國專利，專利號ZL200810030155. 4，并獲得了專利權，授權公告號為CN101538571B。

發明內容
本發明的目的是提供ー種治療銀屑病的藥物，抗重組人角質細胞生長因子-2(KGF-2)抗體。抗重組人角質細胞生長因子-2抗體在制備治療銀屑病藥品中的應用；
所述的重組人角質細胞生長因子_2是按中國專利ZL200810030155. 4，ー種分泌表達重組人角質細胞生長因子_2的制備方法制備的；
所述的抗重組人角質細胞生長因子_2抗體為單克隆抗體。 本發明又ー個目的是ー種治療銀屑病的藥物，它是抗重組人角質細胞生長因子-2抗體的凡士林乳膏；
所述的抗重組人角質細胞生長因子-2抗體的凡士林乳膏濃度為O. 047mg/ml-0. 189mg/ml。本發明采用重組人角質細胞生長因子_2免疫小鼠，制備抗KGF-2多克隆抗體及KGF-2單克隆抗體，均對與豚鼠銀屑病模型有顯著治療作用，因劑量不同而對銀屑病模型產生不同程度的影響，除能抑制角質形成細胞的增值外，尚可通過某種機制抑制真皮內炎癥反應。


圖I為雜交瘤細胞株2G6腹水SDS-PAGE結果，其中I. Marker ;2、3.未純化的腹水；4、5.純化后腹水。圖2抗KGF-2單抗的特異性檢測結果。圖3豚鼠動物模型。圖4正常豚鼠耳背皮膚(X 40)。圖5銀屑病造模3周豚鼠耳背皮膚(X 200)。圖6銀屑病模型組(未治療)豚鼠耳背皮膚(X200)。圖7銀屑病尤卓爾組豚鼠耳背皮膚(X200)。圖8銀屑病KGF-2抗體20倍稀釋組豚鼠耳背皮膚(X 200)。圖9銀屑病KGF-2抗體40倍稀釋組豚鼠耳背皮膚(X 200)。圖10銀屑病KGF-2抗體80倍稀釋組豚鼠耳背皮膚(X 200)。
具體實施例方式 實施例I抗重組人角質細胞生長因子-2 (KGF-2)抗體的制備按中國專利(9ZL200810030155. 4) —種分泌表達重組人角質細胞生長因子_2的制備方法(公告號CN101538571B)，制備抗原KGF2，，選取6 8周齡的Balb/c小鼠4只，以10 μ gKGF2，用蒸餾水稀釋，作為免疫原免疫Balb/c小鼠，第4次免疫后采血測定血清中抗體的效價。血清的效價測定經過4次腹部皮下多點注射免疫，4只小鼠均產生抗KGF-2抗體。抗血清的效價達到1:3200，符合細胞融合的要求。
權利要求
1.抗重組人角質細胞生長因子-2抗體在制備治療銀屑病藥品中的應用。
2.根據權利要求I抗重組人角質細胞生長因子_2抗體在制備治療銀屑病藥品中的應用；其特征在于所述的重組人角質細胞生長因子_2是按中國專利ZL200810030155. 4，一種分泌表達重組人角質細胞生長因子_2的制備方法制備的。
3.根據權利要求I或2所述的抗重組人角質細胞生長因子_2抗體在制備治療銀屑病藥品中的應用，其特征在于所述的抗重組人角質細胞生長因子-2抗體為單克隆抗體。
4.ー種治療銀屑病的藥物，其特征在于它是抗重組人角質細胞生長因子-2抗體的凡士林乳膏。
5.根據權利要求4所述的ー種治療銀屑病的藥物，其特征在于所述的抗重組人角質細胞生長因子-2抗體的凡士林乳膏，其濃度為O. 047mg/ml-0. 189mg/ml。
全文摘要
本發明采用重組人角質細胞生長因子-2免疫小鼠，制備抗KGF-2多克隆抗體及KGF-2單克隆抗體，均對與豚鼠銀屑病模型有顯著治療作用，因劑量不同而對銀屑病模型產生不同程度的影響，除能抑制角質形成細胞的增值外，尚可通過某種機制抑制真皮內炎癥反應。
文檔編號A61K39/395GK102727890SQ20121023046
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月5日 優先權日2012年7月5日
發明者夏建新, 姚娜, 宮麗莉, 李校堃, 李海燕, 梅向林, 王艷芳, 金立波 申請人:吉林農業大學, 吉林大學第二醫院, 長春格魯斯特生物科技有限公司