專利名稱：中成藥補中益氣制劑在防治骨質疏松癥的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及中成藥補中益氣湯制劑防治骨質疏松癥的新用途。補中益氣丸制劑是中醫扶正固表的經典方劑，是國家基本藥物。具有補中益氣，升陽舉陷。主治脾胃虛弱，中氣下陷，體倦乏力，食少腹脹，久瀉。本課題組研究發現該制劑對絕經期后骨質疏松和老年性骨質疏松具有較好的預防及治療作用，對腎上腺糖皮質激素，環磷酰胺等藥物造成的骨質疏松也有具有較好的預防及治療作用。
背景技術：
補中益氣丸源自金元時代李果《脾胃論》方，《中華人民共和國藥典》(2005年版)收載，主要由炙黃芪、黨參、白術、當歸、升麻、柴胡、陳皮、炙甘草八味中藥組成。臨床主要用于治療脾虛證之胃下垂、子宮下垂，脫肛，崩漏，泄瀉，重癥肌無力；乳糜尿，低熱，慢性肝炎，低血壓，失眠癥，白細胞減少，慢性結腸炎，消化性潰瘍，心絞痛.放射病等。藥理研究證明，補中益氣九具有調節胃腸運動，抗胃潰瘍和抗胃粘膜福傷，影響消化液分泌，促進小腸吸收作用。能調節免疫功能，有強心和升高血壓、抗腫瘤、抗突變作用，能興奮子宮，促進代謝，影響內分泌，并有抑菌、耐缺氧的作用。
補中益氣丸用于治療骨質疏松一直沒有見于文獻報道。本課題組在研究中藥預防骨質疏松的研究中發現補中益氣丸制劑對實驗動物的骨質疏松有良好的預防作用，可用于臨床防治骨質疏松證。骨質疏松癥是一個世界范圍的、越來越引起人們重視的健康問題。目前全世界約2億人患有骨質疏松，其發病率已躍居常見病、多發病的第七位。估計患病總人數已超過2億。骨質疏松是老年人最常見的疾病。在美國和西方國家中，在年齡超過55歲絕經后的女性中，有一半的人患程度不同的骨質疏松癥，而在65歲以上的老年人中患骨質疏松者高達95％以上。隨著科學的發展和人類的進步，人均壽命不斷延長，老年人口迅速增加，骨質疏松的發病率也隨著出現迅速的增加。預計至2050年全世界65歲以上的老年人將由目前3.23億增加到15.55億，屆時骨質疏松導致髖骨骨折發生人數也將由目前的166萬增加到626萬，其中亞洲、拉丁美洲、中東和非洲國家的患者將占70％以上。根據官方統計，美國每年用于骨質疏松方面的直接和間接耗資達100億美元；英國的健康與社會保險機構每年為骨質疏松提供的資金超過5億英鎊；法國僅支付平均每年3萬股骨頸骨折的患者的住院費用約13.5億法郎。骨質疏松所造成的如此巨大的社會和經濟負擔，構成了一個嚴重的全球性問題，已經引起世界各國的極大關注。老齡化社會的到來使骨質疏松的發生率日趨增高，嚴重威脅人們的生活質量。WHO已將2000-2010年確定為“骨關節病十年”。
我國是世界上人口最多的國家，其中老年人口占亞洲老年人口的1/2和世界人口的1/5。北京、上海和成都3市的骨質疏松流行病學調查結果顯示，60-69歲年齡段骨質疏松的發生率女性與男性分別為60％和30％左右。我國人口基數大，骨質疏松患者已達6000萬～8000萬例，這給家庭和社會帶來嚴重的負擔[2]。另據統計2000年全國65歲以上的人有1.3億，占全國人口的10.7％，已成為典型的老年型國家。而患有骨質疏松癥的患者在這些人群中約占90％，而髖骨骨折的病人在1年內將有12％～40％死于各種合并癥。在存活者中也有50％的人行動不便。這不但給病人造成了嚴重的身心摧殘，同時也給家庭和社會增加了巨大的人力及財力負擔。因此，防治骨質疏松是抗衰老，延長壽命，保證人民的生活質量的一個十分迫切的研究課題。
目前國內外防治骨質疏松癥藥物非常有限，常用的骨礦化促進劑，如鈣劑、維生素D療效有限；骨吸收抑制劑如雌激素、降鈣素、二磷酸鹽、異丙氧黃酮等雖有一定的作用，但不良反應也多，影響臨床應用，骨形成促進劑如氟化物的療效一直受爭議，美國至今還沒有上市[2-5]。在臨床治療方面，從雌激素替代療法，至二磷酸鹽類，降鈣素等藥物的防治已走過了幾個重要的發展階段，目前正轉入對骨形態蛋白及白細胞介素等細胞因子的治療研究，但是，至目前為止，這些用于防治骨質疏松的藥物，均有不少副作用，有些療效一般，有些價格昂貴，目前尚沒有一種公認的理想藥物，因此，尋找高效低毒防治骨質疏松的藥物仍然是藥理學工作者迫切的任務。
中成藥補中益氣丸收載于《中華人民共和國藥典》(2005年版)409頁，主要由由炙黃芪、黨參、白術、當歸、升麻、柴胡、陳皮、炙甘草八味中藥組成。主治脾胃虛弱，氣虛不足所致內傷發熱，中氣下陷之臟器下墜，脾失統血之崩漏，運化失常之泄瀉、帶下。方中黃芪補中益氣，升陽舉陷，通達內外為君藥。人參、甘草、白術健脾益氣為臣藥。佐以陳皮理氣和中，當歸養血和血。使以升麻引陽明清氣上行，柴胡引少陽清氣上行，使脾胃下陷之清陽可舉。全方配伍，可達升陽益氣，補中固衛，甘溫除熱之功。本項目組提出的用“中藥復方”防治“骨質疏松癥”研究的理論和思路，經動物實驗研究和篩選，我們發現該復方還具有促進骨形成，可用于防治骨質疏松。

發明內容
解決這一任務的途徑是這樣實現的，根據《中華人民共和國藥典》(2005年版)公布的處方取黃芪、防風、白術三藥，分別按下述工藝制備成可供臨床應用的制劑，供臨床和實驗應用(1)取炙黃芪200g、黨參60g、白術(炒)60g、當歸60g、升麻60g、柴胡60g、陳皮60g、炙甘草100g，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至1200ml，加入乙醇使含醇量達60％，冷藏24小時，濾過，濾液回收乙醇至每100ml含生藥426g，密封消毒，制備成玉屏風口服液，4℃冰箱保存供研究應用。
(2)取炙黃芪200g、黨參60g、白術(炒)60g、當歸60g、升麻60g、柴胡60g、陳皮60g、炙甘草100g，用80％的乙醇在室溫下浸漬提取3次，合并醇提液，藥渣加白術300g加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至1200ml，合并醇提液，加入乙醇使含醇量達60％，冷藏24小時，濾過，濾液回收乙醇至每100ml含生藥426g，密封消毒，4℃冰箱保存供研究應用。
本項目復方補中益氣丸制劑還可取炙黃芪200g、黨參60g、白術(炒)60g、當歸60g、升麻60g、柴胡60g、陳皮60g、炙甘草100g，分別按上述工藝制備成可制成片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑，口服液，外用制劑，注射劑和任何可供臨床應用的的藥物制劑。供臨床和實驗應用。
以上復方制劑，用本研究室建立成骨細胞體外培養法，小白鼠骨質疏松模型及大白鼠骨質疏松模型分別進行研究，證明了補中益氣丸有促進骨形成的作用，對小白鼠骨質疏松動物模型及大白鼠骨質疏松動物模型也有較好的預防與治療作用。
具體實施例方式為觀察補中益氣丸水提液的抗骨質疏松作用，我們選擇環磷酰胺做為工具藥，建立大鼠骨質疏松模型，本實驗同時觀察補中益氣湯能否對抗環磷酰胺致骨質疏松的作用，并與葡萄糖酸鈣進行比較。現報告如下1材料與方法1.1藥品與試劑1.1.1環磷酰胺注射劑江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號為蘇衛準字(1996第112007號)；取環磷酰胺0.2g溶于200ml水中，按每10g小鼠0.2ml灌胃給藥。
1.1.2補中益氣湯的制備稱取炙黃芪200g，黨參60g，炙甘草100g，白術60g，當歸60g，升麻60g，柴胡60g，陳皮60g，切碎，加水煎煮二次，濾過，濾液濃縮至1700ml，冰箱保存備用。
1.1.3葡萄糖酸鈣片廣西南寧制藥企業集團公司，批號為9908001，取葡萄糖酸鈣片10片溶于111ml水中，按每10g小鼠0.2ml灌胃給藥。
1.2儀器WD一10A電子萬能試驗機(廣州試驗機廠)；GZB測力傳感器(長沙紅旗儀器廠)；GB-50力傳感器(成都科儀廠)；SP-4B位移數顯儀(成都81信箱研究所)；IZ3-204XY函數記錄儀(上海大華儀器廠)；YJR-5A靜態應變儀(奉化大橋精密儀器廠)；1.3實驗方法實驗動物及分組昆明種小鼠40只，體重(20±2)g，雌雄各半，由廣東醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號(2005A024)，按體重對等原則隨機分為4組，即A組(正常對照組)、B組(環磷酰胺模型組)、C組(環磷酰胺合用補中益氣湯防治組)、D組(環磷酰胺合用葡萄糖酸鈣防治組)。每組10只。正常對照A組灌胃給予生理鹽水10ml/(kg·d)，環磷酰胺模型B組灌胃給予環磷酰胺20mg/(kg·d)；補中益氣湯防治C組灌胃給予環磷酰胺20mg/(kg·d)的同時灌胃給予補中益氣湯20ml/(kg·d)；葡萄糖酸鈣防治D組灌胃給予環磷酰胺20mg/(kg·d)的同時灌胃給予葡萄糖酸鈣0.5mg/(kg·d)。四組動物均自由飲水和進食標準飼料。于實驗第30d稱重后，處死動物，取肝臟，脾臟，胸腺稱重，根據動物體重計算器官指數，同時，取右側股骨供骨生物力學測定用。
1.4標本處理及測定方法骨生物力學參數的測定[6]取右側股骨，剔除所附著的肌肉組織，用生理鹽水紗布和錫紙包裹保濕于-20℃保存，測定時取出放入生理鹽水中，室溫(20℃)下浸泡復濕3～4小時，將解凍的股骨置于流變儀上進行股骨三點彎曲實驗，加載速度為5mm/min，跨距為8mm。記錄載荷-變形曲線，從曲線上計算最大載荷，最大橈度，彈性載荷，剛性系數及能量吸收。
1.5統計學處理實驗結果用x±s表示，計量資料用t檢驗進行組間比較。
2.實驗結果2.1實驗前后動物體重的變化實驗前后動物體重的變化見表1表1實驗前后動物體重的變化

注和A組比較*P＜0.05，**P＜0.01；和B組比較☆P＜0.05，☆☆P＜0.01由表1可見，各組體重均呈上升趨勢，各組體重無顯著性差異。
2.2實驗動物免疫器官及骨重的變化實驗動物免疫器官及骨重的變化見表2表2實驗動物免疫器官及骨重的變化(mg/10g體重)

注和A組比較*P＜0.05，**P＜0.01；和B組比較☆P＜0.05，☆☆P＜0.012.3補中益氣湯對環磷酰胺致小鼠骨質疏松骨生物力學的影響補中益氣湯對環磷酰胺致小鼠骨質疏松骨生物力學的影響結果見表3表3補中益氣湯對環磷酰胺致小鼠骨質疏松骨生物力學的影響

注和A組比較*P＜0.05，**P＜0.01；和B組比較☆P＜0.05，☆☆P＜0.01從表3可見，模型組(B組)與空白組(A組)比較，多項生物力學指標最大載荷、彈性載荷、剛度系數均呈顯著性減少(P＜0.05)；補中益氣湯組(C組)與模型組比較生物力學指標均表現出不同程度的提高，其中最大載荷和剛性系數呈顯著性提高；葡萄糖酸鈣組(D組)與模型組比較生物力學指標均表現出不同程度的提高，其中最大載荷和剛性系數呈極顯著性提高。兩給藥組和空白組比較補中益氣組和葡萄糖酸鈣組主要力學指標基本能達到空白組水平，且程度略有提高；與葡萄糖酸鈣陽性對照組比較，補中益氣組表現為各生物力學指標與葡萄糖酸鈣組相似，程度略有降低，統計學顯示無顯著性差異。
3.討論3.1環磷酰胺可使小鼠股骨的最大載荷、彈性載荷、剛性系數明顯下降本實驗我們觀察到，小鼠用環磷酰胺20mg/(kg·d)灌胃給藥30天，體重無顯著性差異，胸腺萎縮，骨生物力學檢測可見股骨的最大載荷、彈性載荷、剛性系數等明顯下降，說明了環磷酰胺在本實驗用量下對骨結構性質和骨材料性質均有明顯的不良影響，提示了環磷酰胺致骨質疏松不但有明顯的骨形態學的改變，也有明顯的骨生物力學的變化。骨質量包括骨的結構、骨量和骨的強度3個方面。力學功能是骨骼的主要功能，骨質量顯著地影響骨組織的力學性能。骨生物力學特性的檢測是評價骨質量不可缺少的指標。它將經典力學與骨科學相結合，對骨的力學問題進行分析，直接反映骨的結構與骨宏觀力學效應(強度、硬度、韌性等)之間的關系。小鼠骨生物力學測試以彎曲試驗最適用，常用的是3點彎曲試驗，測定骨組織在外力作用下的力學特征和骨在受力后的生物學效應。三點彎曲實驗中骨的結構力學指標有最大載荷、彈性載荷、能量吸收，反映骨的結構力學特征的變化，主要反映其抵抗破壞的能力大小；而骨的材料力學指標有剛性系數、彈性模量，則是反映骨的內在質量，即其抵抗變形的能力的大小。本實驗中，我們發現環磷酰胺會使骨生物學的各項指標，如最大載荷、彈性載荷、剛性系數等下降，提示我們環磷酰胺對骨結構性質和骨材料性質均有影響。本實驗室在前期的實驗中，發現環磷酰胺會使小鼠骨鈣及骨羥脯氨酸含量下降[2]，骨羥脯氨酸是骨膠原的重要組成成分，主要由成骨細胞合成與分泌，是骨合成的一個重要環節。因此環磷酰胺使骨結構性質和材料性質下降，可能是其對成骨細胞產生抑制作用，使其合成和分泌膠原減少，進而引起骨鈣沉積減少，并最終導致骨的質量下降。
3.2葡萄糖酸鈣對環磷酰胺致小鼠骨質疏松骨生物力學的影響本實驗結果顯示，葡萄糖酸鈣能提高骨生物學的各項指標，能夠提高骨質量。骨的形成是鈣磷形成羥磷灰石等骨礦物質沉積在骨中的過程，鈣是骨礦物質的主要成份，是骨形成過程中不可缺少的重要元素。應用葡萄糖酸鈣可以對抗環磷酰胺引起的骨質量下降，可能與其能夠提供鈣離子，從而增加骨中礦物質的含量有關。
3.3補中益氣湯對環磷酰胺致小鼠骨質疏松骨生物力學的影響本實驗結果顯示，補中益氣湯能夠改善環磷酰胺引起的骨質量下降，其中，反映骨結構力學指標的最大載荷、彈性載荷，反映骨材料力學指標剛性系數都有顯著性提高，提示我們補中益氣湯能從整體上改善環磷酰胺引起的骨質量下降。補中益氣湯的君藥黃芪能夠抑制去卵巢大鼠的骨吸收，體外試驗表明它能夠提高成骨細胞的增殖，黃芪是“補藥之長”，補氣固表、利尿化毒、斂瘡生肌。現代醫學證明黃芪能“促進蛋白質合成”，從而促使膠原蛋白合成增加，促進成骨細胞分泌類骨質；黃芪“護肝”，可促進肝臟膽固醇的合成，為類固醇激素的合成提供原料，間接促進性激素的生成；黃芪補脾健脾，為“補骨”提供物質源泉，故黃芪能從整體上改善去卵巢大鼠的骨代謝。補中益氣湯能從整體改善環磷酰胺引起的骨質量，可能與黃芪對骨的這些作用有關。
4.結論環磷酰胺能使小鼠環磷酰胺使骨結構性質和材料性質下降；葡萄糖酸鈣能夠提高環磷酰胺致小鼠骨質疏松的骨生物力學指標，對環磷酰胺致小鼠骨質疏松具有防治作用；補中益氣湯對環磷酰胺致小鼠骨質疏松也有一定的改善。
權利要求
1.由黃芪、黨參、白術、當歸、升麻、柴胡、陳皮、炙甘草八味中藥組成的中成藥補中益氣制劑在防治骨質疏松癥的應用。
2.如權利要求1所述的由黃芪、黨參、白術、當歸、升麻、柴胡、陳皮、炙甘草八味中藥組成的中成藥補中益氣制劑，可制成片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑，口服液，外用制劑，注射劑和任何可供臨床應用的的藥物制劑。
全文摘要
本發明公開了由炙黃芪、黨參、白術、當歸、升麻、柴胡、陳皮、炙甘草八味中藥組成的中成藥補中益氣制劑防治骨質疏松癥的新用途，該復方制劑對絕經期后骨質疏松和老年性骨質疏松具有較好的預防及治療作用，對腎上腺糖皮質激素，環磷酰胺等藥物造成的骨質疏松也有具有較好的預防及治療作用。以上復方制劑，可制成臨床可接受的丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、注射劑、皮膚外用制劑中的任何一種。
文檔編號A61K9/16GK1973868SQ20061014915
公開日2007年6月6日 申請日期2006年11月18日 優先權日2006年11月18日
發明者吳鐵, 崔燎, 林堅濤, 于瓊 申請人:廣東醫學院