專利名稱：一種腦提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種腦提取物及其制備方法和用途，具體地說，涉及一種由從除人以外的哺乳動物腦組織中提取的含有多肽、游離氨基酸、總糖的腦提取物，以及該提取物的制備方法和用途，屬于生物制劑領域。
背景技術：
腦組織中的游離氨基酸含量以谷氨酸為最高，其次是牛磺酸，再就是天冬氨酸。谷氨酸是大腦內主要興奮性神經遞質。腦損傷可能導致腦組織離子失衡，引起與谷氨酸和其他興奮性氨基酸相關的興奮毒性級聯反應，并導致最初損傷部位周圍腦組織的神經元死亡。賴氨酸是八種必需氨基酸之一，它在生物機體的代謝中起著重要的作用，賴氨酸缺乏會引起蛋白質功能障礙，影響生長發育，導致生長障礙。因植物性蛋白中普遍缺乏賴氨酸，故營養學家稱之為“第一必須氨基酸”。賴氨酸在醫藥上具有特殊的用途，它是合成腦神經及生殖細胞、核蛋白、血紅蛋白的必須物質。
隨著人口自然增長、結構老齡化以及飲食結構的變化，老年疾病的發生日趨嚴重，其中腦血管病主要致死病之一。動物腦蛋自水解物類藥物作為這類疾病的特效藥，近年來得到了廣泛關注，它的化學成分、藥理作用、臨床應用、生產工藝等都得到不同程度的研究。
已面市的腦蛋自水解物類藥物可分為片劑、口服液和注射液，主要成分都是動物腦脫脂后再經蛋白酶降解產生的含有游離氨基酸和分子量在10,000以下的小分子肽的混合物，但具體藥效成分有差別，如腦蛋白水解物注射液是由豬腦組織中提取的不含蛋白質，約含80％游離氨基酸和20％小分子肽，與進口腦活素為同類產品，在臨床上作為腦代謝改善藥取的了不錯的療效。腦蛋白水解物能增加腦組織內葡萄糖和氧的利用，從而增加腦組織抗氧能力和機體應激能力，減輕腦組織損傷，促進腦細胞功能恢復，具有良好的健腦、益智、修復腦損傷的功效。但除了注射劑應用的一些不便外，同時也存在不少不良反應。
因此，有必要尋找一種成分更合理、效果更好、服用更方便的腦代謝改善藥物。

發明內容
本發明的目的在于提供一種腦提取物，由除人以外的哺乳動物腦組織中提取得到。
本發明的另一目的在于提供上述腦提取物的制備方法。
本發明的再一目的是提供含有上述腦提取物的各種藥物劑型。
本發明的最后一目的是提供上述腦提取物在制備治療急慢性腦血管疾病、由腦血管疾病或腦外傷所引起的腦代謝障礙等后遺癥、先天性腦發育不全、中樞神經系統感染、閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細血管出血以及血管通透性升高引起的水腫藥物方面的用途。
本發明所述的腦提取物由從除人以外的哺乳動物腦組織中提取得到，含有多肽、游離賴氨酸、游離谷氨酸和總糖，所有組分分子量為5000～10000道爾頓。
所述的除人以外的哺乳動物為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔，從生產成本、生產工藝、產品質量穩定性、臨床療效等因素考慮，上述除人以外的哺乳動物優選豬。
上述的腦提取物與磺基水楊酸反應，混勻，不發生混濁；與雙縮脲反應，溶液應顯藍紫色至紫紅色；與茚三酮反應，應顯藍紫色；與堿性枸櫞酸銅試液反應顯藍紫色或紫色。
所述的腦提取物中多肽∶游離賴氨酸∶游離谷氨酸∶總糖的重量份比為1～200∶0.1～100∶0.1～80∶0.1～12。
該腦提取物中多肽∶游離賴氨酸∶游離谷氨酸∶總糖的重量份比進一步優選為3～40∶0.3～30∶0.3～20∶0.1～6；同時所有組分分子量優選為6000～8000道爾頓；該腦提取物中多肽∶游離賴氨酸∶游離谷氨酸∶總糖的重量份比更優選為15～30∶3～15∶2～6∶1～3；并且所有組分分子量優選為8000道爾頓。
本發明所述的腦提取物的制備方法為取除人以外的哺乳動物腦組織，加0.5-2.5倍重量注射用水，高壓勻漿，在-30℃～-40℃下冷凍，凍實后在10～40℃融化后，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，然后自然降溫至常溫，在0～5℃下以10000～12000轉/分的速度在高速冷凍離心機上離心15～30分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0.1-1.5％沉淀重量的蛋白水解酶，在35～50℃下酶解2～8小時，酶解pH值控制為7.5-8.5，然后加入前述上清液，調節pH值至3.0～4.0，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘后，自然降溫至常溫后，在0～5℃下以3500～4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心20～30分鐘，然后將上清液過濾，濾液調pH值為6.5～7.5，加熱至80～95℃，保持15～30分鐘后，自然降溫至常溫，在0～5℃下以3500～4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心20～30分鐘，離心后的上清液在-15℃～-20℃冷凍，凍實后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為5000-10000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物。
所述的高壓勻漿優選使用GRB1500-4S高壓勻漿泵(上海東華高壓勻漿廠)。
動物腦組織應為新鮮健康。
所述蛋白水解酶可以是胃蛋白酶或胰蛋白酶；優選使用胰蛋白酶；所述胰蛋白酶常用規格為1∶250(上海伯奧生物科技有限公司)。酶解適合溫度為35-50℃，優選為37～42℃；為保持溫度穩定，可采取夾層水浴保溫的方法。
酶解適合pH值為7.5-8.5，優選為7.8～8.2。
為使本發明生產工藝、產品質量穩定，使用的酶應盡可能由固定生產商提供。
所述的過濾為現有技術中通用的紙漿過濾或澄清板過濾。
上述過程調pH值使用鹽酸和/或氫氧化鈉。
上述超濾膜優選為截留分子量為6000-10000的超濾膜，更優選截留分子量為8000的超濾膜。使用的超濾膜為市售產品，其生產商應為行業認可的生產單位，使用的濾膜型號與尺寸可根據具體的生產量、選用的超濾器尺寸來確定。
本發明所述的腦提取物的制備方法優選為取新鮮健康的哺乳動物腦組織，加0.8-1.2倍重量注射用水，用高壓勻漿泵勻漿，-30℃～-40℃速凍，在10～20℃下融化；加熱至80-85℃，保持15-20分鐘，冷卻至常溫后在高速冷凍離心機上離心，0～5℃條件下以10000～12000轉/分離心25～30分鐘，上清液備用；沉淀加入按重量加入0.4-0.8％的胰蛋白酶，在37～42℃酶解3～5小時，酶解pH值控制為7.8-8.2，酶解結束將前述上清液加入，調節pH值至3.3～3.7，加熱至80-90℃，保持15-20分鐘，冷卻至常溫后在低速冷凍離心機上離心，0～5℃條件下以4000轉/分的速度離心25～30分鐘。上清液過濾，濾液調pH值為6.8～7.2，加熱至80～90℃，保持15～20分鐘，冷卻至常溫后在低速冷凍離心機上離心，0～5℃條件下以4000轉/分的速度離心25～30分鐘，上清液-15℃～-20℃冷凍，冷凍后融化，再經過濾處理，濾液用截留分子量為8000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物。
所述的腦提取物可以制成各種藥劑學上可接受的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑等，優選小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑，最優選口服液。
上述各劑型可以按照藥劑學上的常規方法進行。
本發明所述腦提取物含有一種大腦所特有的肽能神經營養物，能以多種方式作用于中樞神經，調節和改善神經元的代謝，促進突觸的形成，誘導神經元的分化，并進一步保護神經細胞免受各種缺血和神經毒素的損害。
所述腦提取物可通過血腦屏障，促進腦內蛋白質的合成，影響呼吸鏈，具有抗缺氧的保護能力，改善腦內能量代謝，可激活腺苷酸環化酶和催化其他激素系統，提供神經遞質，肽類激素及輔酶前體；可用于老年癡呆、腦供血不足，老年腦力退化及抑郁癥；帕金森氏綜合癥的支持治療；腦神經功能障礙、精神分裂癥；神經衰弱，神經性頭痛；先天性大腦發育遲緩、發育不全、智力低下，記憶障礙等；腦外傷急性期及其后遺癥；各類型腦炎、腦膜炎急性期及其后遺癥；促進神經外科手術(腦腫瘤、顱腦外傷、腦血管炎癥等)腦神經組織修復；對腦代謝不全有輔助改善作用，也用于蛋白質缺乏、神經衰弱病人以及對一般蛋白質消化吸收障礙的病例；可用于制備治療腦血栓、腦栓塞、腦痙攣等急慢性腦血管疾病，顱腦外傷及腦血管疾病、腦供血不全、腦梗塞所引起的腦代謝障礙及后遺癥，閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細血管出血以及血管通透性升高引起的水腫，先天性腦發育不全、中樞神經系統感染、老年性癡呆，周圍神經損傷疾病藥物。
本發明最優選劑型口服液的規格為10ml/支，每ml含多肽為1.7～2.3mg，含游離賴氨酸為0.8～1.2mg，含游離谷氨酸為0.4～0.6mg，含總糖不低于120μg。
服用方法為口服，一日3次，一次10ml。
本發明在現有工藝上進行了多年的研究，出人意料的發現，將一般生化實驗室中應用的低溫高速離心應用到制備腦提取物中，可以收集到更多的低分子量活性多肽和重要的氨基酸，同時也將大分子的蛋白酶沉淀下來，避免了對活性物質的降解；本發明經過多次試驗，發現其中氨基酸以賴氨酸、谷氨酸為主，較一般工藝富集，同時在藥理、臨床試驗中也發現了積極的效果。
本發明的另一個有益效果是保留了提取物中的總糖，具體含有葡萄糖、果糖、及各種多糖、核糖等，一方面使本發明組合物具有高的營養、和大腦具有相同的物質，同時作為口服液應用時，糖與多肽的一定結合，保護了多肽類活性物質受到胃腸等酶的酶解，使更多的活性物質被吸收利用；同時本發明藥物組合物作為口服液應用時，使用方便，有利于患者長期服用，對患者康復、緩解病情有很大好處；避免了長期使用注射液的不便。
本發明所述的藥物組合物含有治療腦血管疾病及其引起的腦代謝障礙后遺癥的活性物質，該活性物質能調節和改善腦代謝。
本發明所述的藥物組合物含有治療腦血管疾病及其引起的腦代謝障礙后遺癥的活性物質，包括大量活性多肽和多種氨基酸。腦提取液所含的大量活性多肽、多種氨基酸等能透過血腦屏障，以多種形式作用于中樞神經，調整和改善神經元代謝，并影響其呼吸鏈，具有激活、改善腦內神經遞質和酶的活性，保護神經細胞免受各種缺血和神經毒素的損害。能增加腦組織對葡萄糖的利用，改善腦細胞缺氧狀態，對缺氧的腦組織具保護作用。可應用于制備治療腦血栓、腦栓塞、腦痙攣等急慢性腦血管疾病藥物方面的用途，可用于治療顱腦外傷及腦血管疾病(腦供血不全、腦梗塞)所引起腦代謝障礙等后遺癥，以及作為治療閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細血管出血以及血管通透性升高引起的水腫與先天性腦發育不全、中樞神經系統感染、老年性癡呆等藥物中的應用。
具體實施例方式
實施例1取新鮮健康的豬腦10Kg，加10L注射用水，使用高壓勻漿泵(GRB1500-4S，上海東華高壓勻漿)勻漿，在-35℃下冷凍，凍實后在15℃融化后，加熱至80℃，保持15分鐘，然后自然降溫至常溫，在4℃下以10000轉/分的速度在高速冷凍離心機上離心30分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0.5％沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1∶250，Amresco 0458]，在37℃下酶解4小時，酶解pH值控制為8.0，然后加入前述上清液，調節pH值至3.5，加熱至80℃，保持15分鐘后，自然降溫至常溫后，在4℃下以4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心25分鐘，然后將上清液過濾，濾液調pH值為7.0，加熱至85℃，保持15分鐘后，自然降溫至常溫，在4℃下以4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心25分鐘，離心后的上清液在-15℃冷凍，凍實后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為8000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物，其多肽含量為20mg/ml，游離賴氨酸含量為10mg/ml、游離谷氨酸含量為5mg/ml，總糖含量為1.6mg/ml。
實施例2取新鮮健康的狗腦10Kg，加10L注射用水，高壓勻漿，在-35℃下冷凍，凍實后在20℃融化后，加熱至85℃，保持15分鐘，然后自然降溫至常溫，在1℃下以10000轉/分的速度在高速冷凍離心機上離心25分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；
向沉淀中加入0.3％沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1∶250，Amresco 0458]，在40℃下酶解4小時，酶解pH值控制為8.0，然后加入前述上清液，調節pH值至3.0，加熱至85℃，保持20分鐘后，自然降溫至常溫后，在2℃下以3500轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心30分鐘，然后將上清液過濾，濾液調pH值為7.0，加熱至85℃，保持30分鐘后，自然降溫至常溫，在2℃下以3500轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心30分鐘，離心后的上清液在-20℃冷凍，凍實后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為6000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物，其多肽含量為15mg/ml，游離賴氨酸含量為10mg/ml、游離谷氨酸含量為2mg/ml，總糖含量為3mg/ml。
實施例3取新鮮健康的牛腦10Kg，加15L注射用水，高壓勻漿，在-30℃下冷凍，凍實后在30℃融化后，加熱至90℃，保持30分鐘，然后自然降溫至常溫，在2℃下以11000轉/分的速度在高速冷凍離心機上離心20分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0.1％沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1∶250，Amresco 0458]，在45℃下酶解6小時，酶解pH值控制為7.5，然后加入前述上清液，調節pH值至3.5，加熱至90℃，保持25分鐘后，自然降溫至常溫后，在1℃下以3500轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心25分鐘，然后將上清液過濾，濾液調pH值為7.5，加熱至90℃，保持20分鐘后，自然降溫至常溫，在1℃下以3500轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心25分鐘，離心后的上清液在-20℃冷凍，凍實后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為10000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物，其多肽含量為3mg/ml，游離賴氨酸含量為15mg/ml、游離谷氨酸含量為15mg/ml，總糖含量為6mg/ml。
實施例4取新鮮健康的羊腦10Kg，加20L注射用水，高壓勻漿，在-35℃下冷凍，凍實后在35℃融化后，加熱至95℃，保持20分鐘，然后自然降溫至常溫，在3℃下以12000轉/分的速度在高速冷凍離心機上離心15分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0.8％沉淀重量的胃蛋白酶，在50℃下酶解2小時，酶解pH值控制為8.5，然后加入前述上清液，調節pH值至4.0，加熱至95℃，保持30分鐘后，自然降溫至常溫后，在5℃下以4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心25分鐘，然后將上清液過濾，濾液調pH值為7.5，加熱至80℃，保持25分鐘后，自然降溫至常溫，在5℃下以4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心25分鐘，離心后的上清液在-15℃冷凍，凍實后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為5000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物，其多肽含量為40mg/ml，游離賴氨酸含量為5mg/ml、游離谷氨酸含量為10mg/ml，總糖含量為3mg/ml。
實施例5取新鮮健康的馬腦10Kg，加25L注射用水，高壓勻漿，在-40℃下冷凍，凍實后在40℃融化后，加熱至80℃，保持25分鐘，然后自然降溫至常溫，在4℃下以12000轉/分的速度在高速冷凍離心機上離心25分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入1.5％沉淀重量的胃蛋白酶，在40℃下酶解4小時，酶解pH值控制為8.0，然后加入前述上清液，調節pH值至3.5，加熱至85℃，保持25分鐘后，自然降溫至常溫后，在4℃下以4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心20分鐘，然后將上清液過濾，濾液調pH值為6.5，加熱至85℃，保持15分鐘后，自然降溫至常溫，在4℃下以4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心20分鐘，離心后的上清液在-15℃冷凍，凍實后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為8000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物，其多肽含量為65mg/ml，游離賴氨酸含量為20mg/ml、游離谷氨酸含量為4mg/ml，總糖含量為5mg/ml。
實施例6取新鮮健康的兔腦10Kg，加15L注射用水，高壓勻漿，在-30℃下冷凍，凍實后在15℃融化后，加熱至85℃，保持25分鐘，然后自然降溫至常溫，在5℃下以11000轉/分的速度在高速冷凍離心機上離心30分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入1.0％沉淀重量的胃蛋白酶，在45℃下酶解5小時，酶解pH值控制為8.5，然后加入前述上清液，調節pH值至3.0，加熱至80℃，保持20分鐘后，自然降溫至常溫后，在0℃下以4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心30分鐘，然后將上清液過濾，濾液調pH值為7.0，加熱至90℃，保持30分鐘后，自然降溫至常溫，在0℃下以4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心30分鐘，離心后的上清液在-20℃冷凍，凍實后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為6000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物，其多肽含量為25mg/ml，游離賴氨酸含量為13mg/ml、游離谷氨酸含量為11mg/ml，總糖含量為8mg/ml。
實施例7～12分別取實施例1～6腦提取物，按公知的方法處理，制成顆粒，干燥后壓片，得片劑。
實施例13～18參照實施例1～6，加入適宜的調味劑(如蔗糖、檸檬酸等)，進行除菌灌裝，或按公知的方法，罐裝、滅菌、分裝的口服液，口服液中各組分含量如下

實施例19～24參照實施例1～6，加入適宜的賦型劑(如右旋糖酐40、甘露醇等)，進行除菌灌裝，按公知的方法，冷凍干燥制成凍干粉針產品。
實施例25～30參照實施例1～6，將腦提取液投入到稀配罐中；在濃配罐中投入維腦路通和0.85％最終配制總體積的氯化鈉，加入0.4‰活性炭煮沸脫炭過濾，冷卻后，將藥液過濾至稀配罐中，在稀配罐中補加注射用水至配液量，調PH為6.8～7.0，過濾。灌封于輸液瓶中，100℃流通蒸汽滅菌45分鐘，即得輸液產品。
實驗例1本實驗例為實施例18口服液外觀性狀、pH值、蛋白質及其它規定的口服劑檢查項目的檢測。
本品為無色或淺黃色澄明液體。
pH值應為6.0～8.0(中國藥典2000年版二部VIH)。
蛋白質取本品2ml，加20％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，不得發生混濁或沉淀。
其他應符合口服溶液劑項下有關的各項規定(中國藥典2000年版二部附錄IO)。
實驗例2本實驗例為實施例18口服劑液中主要組分的定性測定。
取本品1支，加水20ml溶解，作為供試品溶液。
(1)取供試品溶液5ml，加茚三酮試液數滴，加熱，溶液應顯藍紫色。
(2)取供試品溶液5ml，加氫氧化鈉溶液(6→10)2ml，加堿性枸櫞酸銅試液0.2ml，混勻，室溫放置15分鐘，溶液應顯藍紫色或紫色。
以上三種實驗為本發明藥物組合物所含組份的定性反應，說明本發明藥物組合中含有確定的組份。
實驗例3本實驗例為實施例18口服液多肽定量測定。
取本品適量，加水制成每1ml含多肽0.15mg的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0ml，照福林酚測定法(附)測定，從回歸方程中求出多肽含量。
試劑 堿性銅溶液 取氫氧化鈉10g，碳酸鈉50g，加水400ml使溶解，作為甲液；取酒石酸鉀0.5g，加水50ml使其溶解，另取硫酸銅0.25g，加水30ml使其溶解，將兩液混合，作為乙液。
臨用前，合并甲、乙兩液，并加水至500ml。
操作法 對照品溶液的制備 取牛血清白蛋白對照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。
供試品溶液的制備 照各品種項下規定的方法制備。
標準曲線的制備 精密量取對照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，各加入福林酚試液(取福林試液中的貯備液1→16)4.0ml，立即混勻，置55℃水浴中準確反應5分鐘，置冷水浴10分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IV B)在650nm的波長處測定吸收度；以0號管作為空白。以對照品溶液濃度與相應吸收度計算回歸方程。
測定法 精密量取供試品溶液1.0ml，照標準曲線的制備項下的方法，“自加入堿性銅試液”起，依法測定，從回歸方程計算多肽的含量，并乘以稀釋倍數，即得。
實驗例4本實驗例為實施例18口服液中總糖的定量測定。
對照品溶液的制備稱取干燥至恒重的葡萄糖約50mg，置50ml量瓶中，加蒸餾水溶解并定容至刻度，混勻。取此溶液5.0ml，加水定容至50ml，混勻，即得。
供試品溶液的制備取本品10ml，加水定容至50ml，作為供試品溶液。
標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分別置具塞試管中，各加入水至1.0ml，各加入5％苯酚溶液1.0ml，搖勻，加5ml硫酸，置37℃水浴中準確加熱10分鐘，迅速冷卻至室溫，以0號管為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)，在487nm的波長處測定吸收度，以濃度為橫坐標，吸收度為縱坐標繪制標準曲線并進行線性回歸，其相關系數應大于0.99。
測定法精密量取供試品溶液1ml，照標準曲線的制備方法，自“各加入5％苯酚溶液1.0ml”起，依法測定。從回歸方程中求出總糖含量。
實驗例5本實驗例說明了實施例18口服液治療顱腦外傷后遺癥的效果。
1、一般資料 本組38例，年齡38～70歲；病程1個月至3年；顱腦挫裂傷20例，腦震蕩10例，顱內血腫術后8例，其中有昏迷病史22例。后遺癥的主要表現為均有不同程度的頭痛，頭昏，頭暈，失眠，多夢易驚，近事遺忘，記憶力減退，精神障礙以及偏癱，失語，個別病例尚有陣發性抽搐。
2、治療方法治療組本發明實施例15口服液10ml，每天3次，14天為一療程3、療效觀察3、療效標準 痊愈癥狀基本消失，恢復正常工作。顯效癥狀大部分消失，時有輕微頭痛、頭昏、頭暈、記憶力較前下降者，但能堅持工作。無效經治療4個療程，病情無明顯改善者。
治療結果38例中痊愈32例，顯效3例，無效5例，總有效率為92.1％。
本試驗證明本發明腦提取物口服液治療顱腦外傷后遺癥有很好的療效。
比較例1、病例選擇本組50例，男30例，女20例，年齡40～78歲，平均56歲；腦血栓28例，腦出血16例(出血量25ml以下9例，血腫清除術后7例)，腦梗死6例；急性期12例，恢復期21例，后遺癥期17例；病程最長者為8年，對患者作頭顱CT和MRI檢查，均有不同程度腦軟化或腦萎縮，并作血尿糞常規、肝功、血脂、全血比粘度、纖維蛋白原、血沉等測定；分成治療組、對照組。
2、用藥及觀察方法治療組5％GS250ml+本發明實施例18口服液10ml，iv gtt，qd，14天為一療程；對照組5％GS250ml+腦復康8g+胞二磷膽堿針0175g，iv gtt，qd，14天為一療程。用藥前后進行簡易智能測驗，智力障礙、語言障礙程度及偏癱程度用國際標準長谷川簡易智力量表檢測和評估。
3、臨床療效評定顯效智力恢復正常或語言障礙提高I級，肌力在原基礎上提高I級；有效在原基礎上智力、語言提高I級，肌力提高I級；無效智力、語言及肌力無變化。
4、統計學處理治療組及對照組神經功能缺損評分比較，采用t檢驗，臨床療效行卡方檢驗。治療組與對照組臨床癥狀改善有效率比較，見表1。結果治療組顯效47例，有效28例，4例無效，總有效率達94％，其中23例智力低下者用藥后肌力提高I級以上者10例，3例用藥后感肢體無力，1例無明顯變化，22例語言障礙者18例提高I級以上表1兩組療效比較

腦血管障礙造成腦缺血缺氧，引起腦細胞壞死，神經細胞損傷，使其失去功能，隨著病情的發展，出現腦軟化、腦萎縮。傳統治療均以抗凝、溶栓、降脂、擴張血管、改善微循環、改善腦部供血，盡量減少腦細胞死亡，改善臨床癥狀，但對已死亡的腦細胞或喪失功能的神經無能為力，而本發明所述的腦提取物主要成分為腦器官特異性多肽，并含有游離氨基酸和總糖，可通過血腦屏障，直接參與中樞和外周神經組織的代謝，使受損神經組織的核酸代謝和糖代謝恢復正常。它能促進交感、感覺等效應神經元的發育和分化。營養成熟的效應神經元，維持其存活與功能，就此我們臨床觀察腦血管障礙引起的腦萎縮患者獲得了滿意療效，它對一些后遺癥期患者智力恢復、語言障礙改善及肢體功能恢復起到良好的作用。
權利要求
1.一種腦提取物，由除人以外的哺乳動物腦組織中提取得到，其特征在于所述的腦提取物含有多肽、游離賴氨酸、游離谷氨酸和總糖，所有組分分子量為5000～10000道爾頓。
2.根據權利要求1所述的腦提取物，其特征在于，所述的除人以外的哺乳動物為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔，優選豬。
3.根據權利要求2所述的腦提取物，其特征在于，所述的腦提取物中多肽∶游離賴氨酸∶游離谷氨酸∶總糖的重量份比為1～200∶0.1～100∶0.1～80∶0.1～12；進一步優選為3～40∶0.3～30∶0.3～20∶0.1～6；同時所有組分分子量優選為6000～8000道爾頓；更優選為15～30∶3～15∶2～6∶1～3；并且所有組分分子量優選為8000道爾頓。
4.一種腦提取物的制備方法，其特征在于，所述方法為取除人以外的哺乳動物腦組織，加0.5-2.5倍重量注射用水，高壓勻漿，在-30℃～-40℃下冷凍，凍實后在10～40℃融化后，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，然后自然降溫至常溫，在0～5℃下以10000～12000轉/分的速度在高速冷凍離心機上離心15～30分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0.1-1.5％沉淀重量的蛋白水解酶，在35～50℃下酶解2～8小時，酶解pH值控制為7.5-8.5，然后加入前述上清液，調節pH值至3.0～4.0，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘后，自然降溫至常溫后，在0～5℃下以3500～4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心20～30分鐘，然后將上清液過濾，濾液調pH值為6.5～7.5，加熱至80～95℃，保持15～30分鐘后，自然降溫至常溫，在0～5℃下以3500～4000轉/分的速度在低速冷凍離心機上離心20～30分鐘，離心后的上清液在-15℃～-20℃冷凍，凍實后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為5000-10000超濾膜超濾，超濾液即為腦提取物。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述蛋白水解酶是胃蛋白酶或胰蛋白酶；優選使用胰蛋白酶；所述胰蛋白酶常用規格為1∶250；酶解適合溫度為35-50℃，優選為37～42℃；為保持溫度穩定，可采取夾層水浴保溫的方法；酶解適合pH值為7.5-8.5，優選為7.8～8.2。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的過濾為現有技術中通用的紙漿過濾或澄清板過濾；上述過程調pH值使用鹽酸和/或氫氧化鈉；上述超濾膜優選為截留分子量為6000-10000的超濾膜，更優選截留分子量為8000的超濾膜。
7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的除人以外的哺乳動物為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔，優選豬。
8.含有權利要求1所述腦提取物的各種劑型藥物，所述的劑型為各種藥劑學上可接受的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑等，優選小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑，最優選口服液。
9.權利要求1所述的腦提取物在制備治療急慢性腦血管疾病、由腦血管疾病或腦外傷所引起的腦代謝障礙等后遺癥、先天性腦發育不全、中樞神經系統感染、閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細血管出血以及血管通透性升高引起的水腫藥物方面的用途。
全文摘要
本發明提供了一種腦提取物，由除人以外的哺乳動物腦組織中提取得到，所述的除人以外的哺乳動物為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔，腦提取物含有多肽、游離賴氨酸、游離谷氨酸和總糖，所有組分分子量為5000～10000道爾頓。所述的腦提取物中多肽∶游離賴氨酸∶游離谷氨酸∶總糖的重量份比為1～200∶0.1～100∶0.1～80∶0.1～12。本發明所述的藥物組合物含有治療腦血管疾病及其引起的腦代謝障礙后遺癥的活性物質，該活性物質能調節和改善腦代謝。
文檔編號A61K9/16GK1771992SQ20051011729
公開日2006年5月17日 申請日期2005年11月2日 優先權日2005年11月2日
發明者楊尚華 申請人:諾氏制藥(吉林)有限公司