專利名稱：米糠蛋白降血壓肽(ace 抑制肽)的制備方法
技術領域：
本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及生物制藥技術或功能性食品加工技術，特別是用米糠蛋白制備降血壓肽的方法。
背景技術：
血管緊張素轉化酶(ACE)在血壓調節中扮演重要的角色。降壓肽通過抑制血管緊張素I向血管緊張素II轉換以及阻止ACE降解緩激肽而起降血壓的作用。目前已有多種化學合成肽類藥物，抑制ACE活性。這類合成降血壓藥物作用時間不長，停藥后會使血壓反彈，而且，這類藥物經腎臟排出易造成腎功能的損傷。
食物蛋白質水解產生的降血壓肽具有食用安全性高、無副作用，特別是其對高血壓患者具有降血壓作用，而對血壓正常的人無降壓作用等優點，近來受到廣泛重視。目前已有研究發現膠原蛋白、酪蛋白等經胰蛋白酶水解后的產物具有ACE抑制活性，并通過高壓液相色譜分離、分析了部分有抑制活性的組分。這些研究主要采用單一的胰蛋白酶，選擇的原料多為動物蛋白質，且分離方法成本太高，不適合大規模生產。
發明目的為了克服上述方法的不足，本發明利用來源廣泛的米糠或大米渣為原料，分離提取米糠或米渣中的蛋白質，利用多種蛋白酶，如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K等，單獨或不同組合水解米糠蛋白，水解產物經過Sephadex G-15～Sephadex G-25凝膠層析及SP-Sephadex C-25離子交換層析分離獲得具有ACE抑制活性的小分子多肽。
技術方案本發明的目的可通過以下技術方案來實現。
將濃度為3-10％的米糠蛋白(或米渣蛋白)溶液，用濃度為0.15％的胃蛋白酶、胰蛋白酶先后水解米糠分離蛋白，在25-60℃反應2-24小時，攪拌酶解。酶解反應在pH2-8時進行。酶解完后經過Sephadex G-15～Sephadex G-25凝膠層析及SP-Sephadex C-25離子交換層析分離獲得具有ACE抑制活性的小分子蛋白多肽。分離產物經濃縮、噴霧或冷凍干燥即成干粉，可制成各種制劑。
本發明所具有的優點是1.提供了一種制備降血壓肽的新方法。
本發明制品具有生物學功能，對血管緊張素轉移酶(ACE)具有極強的抑制活性。同其他生物活性多肽一樣，具有直接、快速、主動、完整吸收的特點。特別是對高血壓等心血管疾病有療效。
本發明的制成品可作為藥品、健康食品、食品、食品添加劑、藥物增效劑、藥品配方等，是一種適宜于工業化生產的方法。
2.工藝科學合理、簡單易行。
本發明工藝包括3個主要步驟，即米糠蛋白的提取-蛋白質的酶解-2步分離，其中分離方法選擇2種不同性質的層析方法，這種方法較為簡單、有效。
3.原料來源廣泛。
本發明所選擇的原料來源廣泛，資源豐富，使本發明具有較強的實用性。
實施例將分離得到的米糠蛋白配置成濃度為5％米糠蛋白溶液，調節pH值為2.0，加入1∶3000的胃蛋白酶(終濃度為0.15％)。37℃水解18小時后，將pH調至7.5，加入0.15％胰蛋白酶，于37℃再水解18小時，水解產物經Sephadex G-15凝膠過濾分離后得到6個組分。測定各組分對ACE的抑制率和濃度，計算其IC50，結果列于表1。6個組分中，除組分1的抑制率接近0，而未在表1中列出外，其余各組分對ACE的抑制作用均列于表1中，其中組分6的抑制作用最強。
表1胃蛋白酶、胰蛋白酶的聯合水解組分LogIC50LogIC50(mg/mL) IC50(mg/mL) N組分2 0.33±0.052.13 24組分3 0.07±0.041.17 34組分4 0.13±0.011.35 20組分5 -0.14±0.10 0.72 24組分6 -0.52±0.08 0.32 34將上述分離的組分6繼續用SP-Sephadex C-25離子交換層析分離。采用梯度式洗脫法分離純化活性肽。洗脫條件為凝膠柱，10mm i.d×20cm；流動相A(低濃度)0.02mol/L NaCl，pH＝5的HAC；流動相B(高濃度)1mol/L NaCl，pH＝5的HAC；流速20mL/h；檢測波長280nm。分離得到3個組分，結果列于表2中。
表2離子交換層析分離后組分的LogIC50LogIC50(mg/mL) IC50(mg/mL) N組分1-1.10±0.01 0.08 14組分2-0.86±0.12 0.82 12組分30.13±0.081.35 12SP-Sephadex C-25離子交換層析分離得到的3個組分對ACE均有抑制活性，其中組分1的抑制活性最強。
將上述獲得的各活性組分冷凍干燥，即獲得具有ACE抑制活性米糠蛋白多肽，各活性組分可單獨或不同比例混合制成降血壓制品。
權利要求
1.一種用米糠蛋白制備降血壓肽的方法，其特征在于將蛋白質濃度為3-10％(W/W)的米糠蛋白溶液，用胃蛋白酶和胰蛋白酶先后水解米糠分離蛋白，水解溫度為25-60℃，pH2-8，水解反應2-24h，攪拌酶解。酶解結束后，再經凝膠層析、離子交換層析分離出具有ACE抑制活性的小分子蛋白肽。
2.根據權利要求1所述的米糠蛋白制備降血壓肽的方法，其特征在于分離出的小分子蛋白肽經濃縮、噴霧或冷凍干燥，進一步制成各種制劑。
全文摘要
一種用米糠蛋白制備降血壓肽的方法，其特征在于將蛋白質濃度為3－10％(W/W)的米糠蛋白溶液，用胃蛋白酶和胰蛋白酶先后水解米糠分離蛋白，經凝膠層析、離子交換層析分離出具有ACE抑制活性的小分子蛋白肽，再經濃縮、噴霧或冷凍干燥，可制成各種制劑。
文檔編號A61P9/12GK1563404SQ20041001295
公開日2005年1月12日 申請日期2004年4月1日 優先權日2004年4月1日
發明者劉志國, 王亞林 申請人:武漢工業學院