專利名稱：澳洲茄胺硫酸鹽及其制備方法和在醫藥上的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及澳洲茄胺硫酸鹽及其制備方法和在醫藥上的應用。
背景技術：
國內外已有龍葵、澳洲茄和黃果茄的化學成分，澳洲茄胺的檢測方法和具有抗S180、抗炎、升高血糖等作用的報導，但尚未發現澳洲茄胺硫酸鹽、澳洲茄胺硫酸鹽的制備方法和澳洲茄胺硫酸鹽在醫藥上的應用的相關信息。

發明內容
本發明提供一種抗癌、平喘、抗炎藥效活性強，長效毒副作用小，溶解性強，性質穩定，生產方法簡便，純度高、藥效活性強的澳洲茄胺硫酸鹽及其制備方法，和將這一新的化合物做為一類抗癌、平喘、抗炎藥物的新藥源在醫藥上的應用，以取代療效差、毒副作用大、生產方法復雜、產品質量差不能進入國際市場的現有醫藥，造福于人類。
本發明澳洲茄胺硫酸鹽的制備原理是將無抗癌、平喘、抗炎活性化合物α-澳洲茄堿、β-澳洲茄堿、γ-澳洲茄堿、邊緣茄堿的混合物水解，將與糖結合的生物堿——澳洲茄堿分子中具有抗癌、抗炎作用的3-羥基由結合狀態變成游離狀態，并以藥效活性基團的形式存在于分子之中，使分子產生抗癌、抗炎活性，達到將無藥效活性成分的混合物全部轉化成藥效活性單體澳洲茄胺的目的。但該單體的抗癌活性相對較弱，20μg/ml對HeLa細胞抑制率(離體實驗)僅40％～42％；對人體肝癌SMMC7701細胞、肺癌MC1446細胞、白血病HL60細胞幾乎無抑制作用，此外，也無平喘作用；本發明的突出特點在于用強極化分子藥效活性基團，增強其分子藥效活性，將分子中第六環上的仲氨基與硫酸成鹽來強化其分子母體結構上的決定抗癌活性強弱的藥效活性基團，使其分子保持并增強3-羥基的抗癌、抗炎的藥效活性；澳洲茄胺轉變成澳洲茄胺硫酸鹽后其藥效活性增強，20μg/ml對HeLa細胞抑制率(離體實驗)達100％；澳洲茄胺成鹽后，使之形成3-羥基和第六環上的仲氨鹽基兩個活性基團共存于同一分子中，由于兩個活性基團相互作用，使其分子又產生新的藥效活性，增強了對肝癌、肺癌、白血病的抗癌藥效活性同時還增加了平喘作用5～20μg/ml對人體肝癌SMMC7701干細胞、肺癌NCI446干細胞、胃癌SGC7901干細胞抑制率為100％；10～20μg/ml對白血病HL60干細胞抑制率＞75％；注射給藥12～24mg/kg對小鼠移植性腫瘤抑制率54～72％；灌胃給藥100～200mg/kg對小鼠移植性腫瘤抑制率40～68％；50～75mg/kg灌胃給藥能明顯對抗組織胺誘發的豚鼠哮喘P＜0.05。
其反應如下

1、本發明的目的是提供一種澳洲茄胺硫酸鹽澳洲茄胺硫酸鹽的分子結構 分子式為C27H45NSO6，分子量511.6，理化性質澳洲茄胺硫酸鹽為白色針狀晶體，溶于水，難溶于乙醚、乙醇。
2、本發明的另一目的是提供澳洲茄胺硫酸鹽的制備方法本發明的澳洲茄胺硫酸鹽是以茄科植物龍葵(Solanum Nigrum L)、澳洲茄(Solanum aviculare parst)和黃果茄(Solanum xanthocar pum Schrad，etwendl)的生果或其全草為原料，提取澳洲茄胺，再以澳洲茄胺為原料制備澳洲茄胺硫酸鹽，其制備方法如下(1)原料處理及粗總生物堿的提取將龍葵、澳洲茄或黃果茄的生果或其全草經篩選后，粉碎壓汁固液分離得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，固液重量比1∶1，浸取2～3次，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸除去上浮物，過濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80～85℃時加濃氨水或NaOH、Na2CO3、KOH的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對下濁液離心固液分離，得膏狀粗總生物堿；(2)粗總生物堿的精制用2～6％醋酸水溶液溶解膏狀粗總生物堿，固液重量比1∶10～30，加熱至沸除去上浮物，過濾冷卻沉降，取上清液加熱至80～85℃時，加濃氨水或堿的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對下濁液離心固液分離得膏狀總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵、澳洲茄或黃果茄中的總生物堿，其主要成分為α、β、γ-澳洲茄堿、邊緣茄堿四種生物堿的混合物；(3)粗澳洲茄胺的提取用含3～10％鹽酸的80～95％乙醇溶液溶解總生物堿，固液重量比1∶30～40，水解加熱回流2～3小時，冷卻過濾，用95％乙醇、水，洗至中性，干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，用含3～10％NaOH的95％乙醇溶液溶解澳洲茄胺鹽酸鹽，加熱回流1～2小時，熱過濾，冷卻吸濾洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺；(4)澳洲茄胺的精制將粗澳洲茄胺溶于甲醇、乙醇或氯仿中至飽和溶液，用活化后的硅膠G與粗澳洲茄胺溶液混合，調成不流動的膏狀物，在80～90℃下恒溫干燥，冷卻后裝入層析柱內，振實，用氯仿、或氯仿∶甲醇體積比10∶1～2、或氯仿∶乙醇∶丙酮體積比3∶1∶2之一進行洗脫得洗脫液，檢驗洗脫結束后，對洗脫液常壓或減壓蒸餾濃縮，將濃縮液冷卻結晶過濾干燥后，粉碎至0.1～1.0微米粉末得澳洲茄胺；(5)用澳洲茄胺制備澳洲茄胺硫酸鹽將澳洲茄胺溶于95％乙醇中加熱至沸，固液重量比1∶20-40，攪拌下向熱澳洲茄胺乙醇溶液中緩緩加入10～50％的硫酸水溶液，至pH＝1，冷卻結晶，吸濾用乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸鹽。
制備方法(4)中檢驗是否洗脫結束用1～5％SbCl3的無水乙醇或氯仿溶液為顯色劑，其判定是在濾紙上或硅膠G簿層層析板上檢驗。具體操作為用毛細管取一定時刻剛流出的洗脫液，點于濾紙或硅膠G板上，烘干，將1～5％SbCl3溶液均勻噴于點樣的濾紙或硅膠G板上，烘干，如出現紅色斑點說明洗脫尚未結束，如無紅色斑點說明洗脫完全，應停止洗脫。
用本發明制備方法得到的澳洲茄胺硫酸鹽為白色針狀晶體，澳洲茄胺硫酸鹽純度＞97％。本發明原料來源豐富廉價，制備方法采用醋酸作提取溶劑成本低，制備工藝及設備簡便，生產周期短，產品純度高、藥效活性強。
3、本發明的又一目的是提供澳洲茄胺硫酸鹽在抗癌、平喘、抗炎醫藥上的應用經藥效學實驗和臨床試驗證明，澳洲茄胺硫酸鹽具有如下作用(1)抗癌作用藥效學實驗結果證明，澳洲茄胺硫酸鹽8～30mg/kg腹腔注射給藥對小鼠移植性實體型腫瘤抑制率為60～72％；灌胃給藥對小鼠移植性實體型腫瘤抑制率為40～68％；澳洲茄胺硫酸鹽5～20μg/ml，對人體肝癌SMMC7701干細胞、肺癌NCI446干細胞、胃癌SGC7901干細胞、HeLa干細胞抑制率均為100％；10～20μg/ml時，對人體白血病HL60干細胞抑制率為60～80％。抗癌機制實驗證明，澳洲茄胺硫酸鹽的抗癌作用機理是，能顯著下調癌細胞C-myc基因和H-ras基因表達，抑制細胞增殖誘導細胞分化；能顯著下調癌細胞hTRT基因的表達，抑制端粒酶活性，抑制癌細胞生長；能阻斷其DNA從G1期向S期轉化，抑制DNA合成從而起到抗癌作用。臨床試驗結果證明，注射給藥澳洲茄胺硫酸鹽濃度為1.0mg/ml，20～30ml/次；口服用藥膠囊、片劑，劑量100mg/粒(片)，2粒(片)/日，對肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、白血病用藥10日為一療程，有60％的患者在1～2個療程內得到明顯療效，配合手術用藥效果更佳。
(2)平喘作用藥效學實驗結果證明，澳洲茄胺硫酸鹽腹腔注射10～30mg/kg，灌胃給藥50～100mg/kg能明顯對抗組織胺誘發的豚鼠哮喘P＜0.05，能顯著對抗卵清蛋白引起的豚鼠支氣管痙攣P＜0.01；1×10-6mol/ml能顯著擴張豚鼠支氣管平滑肌P＜0.01。臨床試驗結果證明，澳洲茄胺硫酸鹽注射給藥1.0mg/ml，30～50ml/次，2次/日；口服用藥膠囊或片劑，劑量100mg/粒(片)，2粒(片)/次，2次/日，有85～98％的重患在20～40分鐘內哮喘癥狀消失或明顯減輕，肺活量增大，哮鳴音消失，呼吸趨于正常，7日/療程，用藥1～2個療程生活可自理，此外，對血壓、心臟也有所改善。
(3)抗炎作用藥效學實驗結果證明，澳洲茄胺硫酸鹽注射給藥10～30mg/kg，灌胃給藥60～200mg/kg能顯著對抗角叉菜膠引起的小鼠足腫脹P＜0.01；能顯著對抗大鼠棉球肉芽腫P＜0.001。臨床試驗結果證明，澳洲茄胺硫酸鹽注射給藥1.0mg/ml，30～50ml/次，2次/日；口服用藥膠囊或片劑，劑量100mg/粒(片)，2次/日，2粒(片)/次，對肺炎、肺結核、乳腺炎、扁桃體炎、咽炎、氣管炎用藥3日內白細胞明顯減少，炎癥明顯消失，有85～98％的患者用藥1～3個療程各項檢測指標趨向正常。
澳洲茄胺硫酸鹽是一種具有顯著抗癌、平喘、抗炎作用的中藥一類新藥源，其用途主要做為治療以下疾病的醫藥制造1、抗癌藥物的制造(1)治療肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、白血病等針劑的制造。
(2)治療肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、白血病等口服制劑的制造。
2、平喘藥物的制造(1)治療免疫性哮喘針劑的制造。
(2)治療免疫性哮喘口服制劑的制造。
3、抗炎藥物的制造(1)治療肺炎、肺結核、氣管炎、扁桃體炎、乳腺炎、咽炎等針劑的制造。
(2)治療肺炎、肺結核、氣管炎、扁桃體炎、乳腺炎、咽炎等口服制劑的制造。


圖1是本發明澳洲茄胺硫酸鹽的制備工藝流程圖。
圖2是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的紫外吸收光譜圖。
圖3是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的DSC圖。
圖4是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的紅外光譜圖。
圖5是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的質子核磁共振譜圖。
圖6是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的重水交換質子核磁共振譜圖。
圖7是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的二維1H-1H質子相關核磁共振譜圖。
圖8是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的反轉門控去偶13C核磁共振譜圖。
圖9是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的13C DEPT核磁共振譜圖。
圖10是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的二維13C-1H異核相關核磁共振譜圖。
圖11是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的LCQ正、負離子電噴霧質譜圖。
圖12是本發明實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的X-射線衍射圖。
具體實施例方式
下面結合附圖和實施例、試驗例對本發明作進一步描述，但本發明并不限于實施例，本專業的普通技術人員作某些修改，均在本發明保護范圍內。
實施例1 以龍葵為原料制備澳洲茄胺硫酸鹽參照圖1，以龍葵生果制備澳洲茄胺硫酸鹽的制備方法如下(1)稱取500kg10月中旬至10月下旬采收的龍葵生果去除雜物，用磨漿機粉碎固液分離得果汁、果渣，將龍葵果渣用3％醋酸水溶液浸取2次，固液重量比1∶1，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸，除去上浮綠色膠體物，過濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80℃時加濃氨水至pH8，冷卻沉降除去上清液，對下濁液經離心固液分離得膏狀龍葵粗總生物堿。
(2)用3％的醋酸水溶液溶解膏狀龍葵粗總生物堿，固液重量比1∶30，加熱至沸除去上浮綠色膠體物，過濾冷卻沉降，取上清液加熱至80℃時，加濃氨水至pH8，冷卻沉降，使之沉淀完全除上清液，對下濁液沉淀物離心固液分離得膏狀龍葵總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵總生物堿。
(3)將龍葵總生物堿溶于含5％鹽酸的95％乙醇溶液中，固液重量比1∶40，加熱至全溶吸濾，濾液水浴加熱至沸，水解2小時，冷卻吸濾，水洗至中性，用80％乙醇洗滌3次后干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，將澳洲茄胺鹽酸鹽加熱溶于含3％NaOH的95％乙醇溶液中，加熱至沸回流1小時，熱過濾，冷卻結晶，吸濾，水洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺片狀結晶。
(4)將粗澳洲茄胺用95％乙醇溶解至飽和溶液，向溶液中加入經活化的硅膠G，時時攪拌至不流動膏狀物止，經80～90℃恒溫干燥冷卻后，振動下裝于不銹鋼層析柱中，振實，用氯仿、甲醇10∶2混液洗脫，流速1ml/秒，用SbCl3無水乙醇溶液為顯色劑，用濾紙上斑點顯色反應判斷洗脫是否結束，當無紅色斑點反應時，停止洗脫，對洗脫液常壓蒸餾濃縮至有少許結晶析出，放出濃縮液冷卻結晶吸濾，濾液再蒸餾濃縮冷卻結晶吸濾，反復操作，合并結晶干燥粉碎至0.1～1.0微米的粉末，得澳洲茄胺。
(5)將上述澳洲茄胺溶于95％乙醇，固液重量比1∶30，加熱至沸攪拌下緩緩加50％硫酸至結晶沉淀完全，使溶液至pH＝1，充分冷卻吸濾，用乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸鹽216g，經高效液相色譜法測定純度為98.9％。
實施例2 以黃果茄為原料制備澳洲茄胺硫酸鹽取500kg黃果茄生果，按實施例1(1)-(4)制備方法得澳洲茄胺，稱取澳洲茄胺182g，用95％乙醇將其全部溶解固液重量比1∶30，加熱至沸攪拌下緩緩加入36％硫酸水溶液至酸性，放置充分冷卻，使結晶析出吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸鹽254g，經高效液相色譜法測定純度為97.4％。
實施例3 以澳洲茄為原料制備澳洲茄胺硫酸鹽取500kg澳洲茄生果，按實施例1(1)-(4)制備方法得澳洲茄胺，稱取澳洲茄胺100g，用3000ml95％乙醇加熱溶解至沸，趁熱攪拌下緩緩加入40％硫酸水溶液，放置冷卻過夜吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸鹽103g，經高效液相色譜法測定純度為98.1％。
試驗例1用薄層層析法檢驗實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽為同一種單體化合物具體操作如下將5％澳洲茄胺硫酸鹽樣品溶液用毛細管分別點于硅膠GF254板原點上，干燥后可用三種展開劑將澳洲茄胺硫酸根的鹽展開苯∶甲醇(4∶3)；苯∶甲醇∶丙酮(2∶1∶2)；氯仿∶乙醇∶丙酮(3∶1∶2)，在紫外光下λ＝254nm均出現一個斑點，證明樣品都是同一種化合物。
試驗例2用高效液相色譜法測定實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的純度精確稱取一定量澳洲茄胺硫酸鹽標準樣(含量已標定的樣品)和本發明所得被測樣，用40倍重量體積比的3％NaOH95％乙醇溶液混合，加熱回流2小時，冷卻加2倍體積的水，用2倍總體積的氯仿萃取3次，合并萃取液，用苯定量稀釋至刻度，得澳洲茄胺硫酸鹽的標準溶液和相應被測樣溶液，在wBondapaK18(30CM×3.9mmi.d.)用甲醇-0.01Mtris緩沖溶液(75∶25)柱流動相，流速2ml/min，溫度25℃，在UV205檢測，在15min處有最大吸收，測得澳洲茄胺硫酸鹽純度＞97％。
試驗3澳洲茄胺硫酸鹽的化學結構測試分析經中國科學院長春分院分析測試中心應化所測試部測試，實施例所得澳洲茄胺硫酸鹽的紫外吸收光譜圖、DSC圖、紅外光譜圖、質子核磁共振譜圖、重水交換質子核磁共振譜圖、二維1H-1H質子相關核磁共振譜圖、反轉門控去偶13C核磁共振譜圖、13C DEPT核磁共振譜圖、二維13C-1H異核相關核磁共振譜圖、LCQ正負離子電噴霧質譜圖、X-射線衍射圖，分別見圖2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12。試驗結果經譜圖解析、全結構歸屬證明實施例所得為澳洲茄胺硫酸鹽。譜圖解析、全結構歸屬“分析測試報告”見說明書后附件。
實施例4 膠囊劑的制造分別精確稱取純度＞97％的澳洲茄胺硫酸鹽43.0g，淀粉粒110.0g于溶器中分別混均，得1000粒一個處方量的澳洲茄胺硫酸鹽膠囊內含物，將2#藍白膠囊放于每次可進行400粒的膠囊板上，稱取60.0g膠囊內含物，裝于固定在膠囊板上的膠囊中，封囊。按上述處方配料生產3個處方量，其合格率在99.25～99.62％，得澳洲茄胺硫酸鹽膠囊3000粒，鋁塑封板，裝盒，得300盒膠囊劑。
實施例5 凍干粉針劑的制造將澳洲茄胺硫酸鹽在無菌下經微粒處理至0.1～1.0微米的微粒，精確稱取24.5g，加無菌注射蒸餾水溶解至24500ml為1000瓶的處方量(含工業損耗量)，將其分裝于1000個注射安瓶內，每瓶24ml，經凍干處理，封瓶，裝盒，得凍干粉注射劑100盒(每盒10支)。
實施例6 粉針劑的制造將澳洲茄胺硫酸鹽在無菌下經微粒處理至0.1～1.0微米，精確稱取24.5g為1000瓶1個處方量(含工業損耗量)，將其以每瓶24mg裝于1000個注射安瓶內，無菌封瓶，裝盒，得澳洲茄胺硫酸鹽粉針劑100盒，10瓶/盒，合格率≥99.84％。
附件中國科學院長春分院分析檢測中心應化所測試部分析測試報告一、分子式、分子量、化學結構式數據1(一)、對照品澳洲茄胺分子式C27H43NO2分子量413.64結構式 (二)被測樣澳洲茄胺硫酸鹽的堿基化學結構式
二、紫外吸收光譜數據2 儀器美國Cary 1E紫外-可見分光光度計溶劑甲醇條件試液濃度分別為11μg/ml、12μg/ml，掃描寬度190-600nm1.紫外吸收光譜a.對照品紫外吸收光譜b.檢測樣品紫外吸收光譜2.對照品測定數據λmax＝203nm，吸收系數為E1cm1%=412]]>3.檢測樣品測定數據λmax＝204nm，吸收系數為E1cm1%=418]]>4.解析UV中存在K帶吸收，表明化合物中含有雙鍵結構。
三、DSC實驗數據3 儀器型號PE公司DSC 7型測試條件50～300℃，以5℃/min升溫1.對照品a.DSC圖b.熔點199.5℃2.檢測樣品a.DSC圖b.未觀察到明顯的熔點四、紅外吸收光譜(IR)數據4 儀器型號美國BIO-RAD公司FTS-135型付立葉變換紅外光譜儀測試條件采用KBr壓片法1.紅外光譜圖a.對照品紅外光譜圖b.檢測樣品紅外光譜圖2.檢測樣品紅外光譜測試數據表頻率(cm-1) 強度 振動類型 基團歸屬3380，3302 vs，br νOH-OH2943vs νasCH3-CH32931 s，sh νasCH2-CH22872sνsCH3-CH32846sνsCH2-CH22759sνNH2+＞NH2+1656mνC＝CC＝C1606，1594 m-ms δNH2+＞NH2+14641453 sh，s，ms δasCH3，δCH2-CH3，-CH2-14321378ms δsCH3-CH31351mδOH-OH1297，11811154，1252mωCH2-CH2-1195mνC-NC-N1132，1095 νasC-O-CC-O-C，C3-OH1064，1054ms νOPC-O(H)1022，983 s 環振動吸收六元環，五元環961，921，900 m ρCH3，νsC-O-C-CH3，-C-O-C836 m νipC-O(H)C3-OH800 vw ΓNH2+＞NH2+795 w γ＝CH＞C＝CH-739 vw ΓCH2-CH2CH2-619 m γOH-OH注強度 vs極強， s強， m中等， w弱
3.解析結果a.3380和3302cm-1的極強寬吸收來源于氫鍵結合的羥基伸縮振動，1351cm-1為其彎曲振動吸收帶，以619cm-1開始的寬吸收區是OH面外彎曲振動，1132～1054cm-1和836cm-1分別為C3-OH上的C-O異相和同相伸縮振動，這些均證明甾環上C3-OH的存在。
b.2943和2872cm-1分別為CH3的反對稱和對稱伸縮振動，2931和2846cm-1分別為CH2的反對稱和對稱伸縮振動，而1464、1453和1432cm-1則是CH3的反對稱變角振動和CH2剪式振動，1378cm-1為CH3的對稱變角振動，同時1297～1252cm-1區間的吸收峰可歸屬為CH2的非平面搖擺振動，961～900cm-1范圍重疊著CH3的面內搖擺振動，這些都證實了-CH3，-CH2-的存在，而且由于739和783cm-1的極弱CH2平面搖擺振動的出現進一步說明-CH2-CH2-和孤立CH2的存在。
c.2759cm-1的強峰是NH2+的伸縮振動特征峰，1606和1594cm-1為其變角振動，再加上1195cm-1的C-N伸縮振動和800cm-1的極弱NH2+非平面變角振動的存在，表明樣品分子中存在＞NH2+。
d.1651cm-1的中等強度吸收帶是C＝C伸縮振動，795cm-1的弱峰是雙鍵上CH非平面變角振動，可以表示分子中有＞C＝CH-的存在。
e.在1132～1054cm-1和961～900cm-1兩個區間內還分別存在C-O-C的反對稱和對稱伸縮振動，1022和983cm-1的強吸收帶可能與五元環和六元環的環振動吸收有關。
f.紅外光譜證實檢測樣品堿基與對照品結構一致。
五、1H核磁共振(1H NMR)數據5 儀器Unity-400核磁共振譜儀溶劑對照品氘代氯仿(CDCl3)，參考標準δTMS＝0.00檢測樣品氘代甲醇(CD3OD)，參考標準δTMS＝0.00(一)、一維1H核磁共振實驗1.1H核磁共振實驗a.對照品1H核磁共振譜及譜圖b.檢測樣品1H核磁共振譜及譜圖c.檢測樣品重水交換1H核磁共振譜圖2.檢測樣品1H核磁共振測定數據列表峰序號化學位移(δ)多重性 偶合常數 質子數相應質子15.35 d 5.2 1 ＝CH-24.88 br 3 NH，-OH，HCl34.62 dm 6.0 1 ＞CH-43.39 m 1 ＞CH-53.30 mCH3OD63.05 dd12.4，2.91 ＞CH-72.87 t 12.4 1 ＞CH-82.36 m 1 ＞CH-9 2.30～1.19m 21 ＞CH-，-CH2-10 1.17 d 7.23 -CH3111.15～1.05m 2 -CH2-12 1.04 s 3 -CH313 0.98 d 6.83 -CH314 0.86 s 3 -CH3(二)、二維1H-1H相關核磁共振實驗(1H-1H COSY)1. 檢測樣品二維1H-1H相關NMR譜圖2. 檢測樣品二維1H-1H相關NMR實驗數據列表序號 化學位移(δ)相關峰位移(δ)交叉峰強度1 5.35 2.00 m2 4.62 2.10，1.92 m，ms3 3.39 2.20，1.46 ms，w4 3.05 2.87 s5 2.87 3.05 s6 2.36 1.17 s7 2.20 3.39，1.14 ms，s8 2.08 1.40 s9 1.94 1.52 s10 1.80 1.45，1.22，1.08s(三)、質子NMR譜解析1.由一維質子NMR譜峰相對積分面積計算，檢測樣品共有44個質子組成，與澳洲茄胺鹽 化學分子式中質子數相符。
2.低場δ5.35為一個質子貢獻，與高場δ2.00處存在交叉信息，δ5.35化學位移峰歸屬于烯碳質子貢獻，與其相關峰δ2.00歸屬于H18。
3.δ4.62裂分為多重峰，且與δ2.10和δ1.92相偶合，又落在氧碳質子區，對應于1個質子貢獻，因此，該質子碳鄰接電負性較強的氧原子，又受鄰位質子偶合，歸屬于H8質子貢獻。
4.高場δ0.86和δ1.04為強單峰，且分別對應于3個質子貢獻，分別歸屬于H29和H27甲基質子貢獻。
5.高場δ1.17和δ0.98裂分為兩條譜線，且J值在7Hz左右，分別對應于3個質子，歸屬于H26、H28甲基質子貢獻。
6.δ4.88強峰在重水交換譜中減弱、加寬、位移，歸屬為化合物中活潑質子貢獻。
7.1H-1H COSY譜中δ2.87和δ3.05存在強相關信息，而δ2.87裂分為三重峰，J＝12.4Hz，δ3.05則為dd裂分，兩峰分別對應于1個質子，且兩峰都落在中場區，分析質子碳接于N原子，兩峰歸屬于潛手性碳兩同碳質子貢獻。
8.檢測樣品受 成鹽效應的影響，除部分峰位置有移動外，其他峰型與對照品基本一致。
六、13C核磁共振譜(13C NMR)數據6 儀器Unity-400核磁共振譜儀溶劑對照品氘代氯仿(CDCl3)，參考標準δCDCl3＝77.00檢測樣品氘代甲醇(CD3OD)，參考標準δCD3OD＝49.30(一)、一維13C核磁共振實驗1.13C核磁共振實驗a.對照品13C NNE(反轉門控去偶，以下同)核磁共振譜b.對照品13C DEPT核磁共振譜c.檢測樣品13C NNE核磁共振譜d.檢測樣品13C DEPT核磁共振譜2.檢測樣品13C NMR測定數據列表峰序 化學位移(δ)多重性C數目相應C類型1 142.66 s1 ＞C＝2 122.33 d1 -CH＝3 100.54 s1 ＞C＜485.11 d1 ＞CH-572.63 d1 ＞CH-663.29 d1 ＞CH-757.94 d1 ＞CH-851.79 d1 ＞CH-946.96 t1 -CH2-10 43.28 t1 -CH2-11 43.14 d1 ＞CH-12 42.43 s1 ＞C＜13 40.64 t1 -CH2-14 38.78 t1 -CH2-15 38.09 s1 ＞C＜
16 33.52 t1 -CH2-17 33.40 t1 -CH2-18 33.32 t1 -CH2-19 33.09 d1 ＞CH-20 32.56 t1 -CH2-21 29.68 d1 ＞CH-22 29.19 t1 -CH2-23 22.19 t1 -CH2-24 20.15 q1 -CH325 18.95 q1 -CH326 16.84 q1 -CH327 15.18 q1 -CH3(二)、二維13C-1H相關核磁共振實驗(13C-1H HETCOR)1. 檢測樣品二維13C-1H相關NMR譜圖2. 檢測樣品二維13C-1H相關NMR實驗數據序號13C化學位移(δ) 相關1H化學位移(δ) 相關峰強度1122.33 5.35 s2 85.11 4.62 s3 72.63 3.39 s4 63.29 1.91 s5 57.94 1.20 s6 51.79 0.99 s7 46.96 2.87，3.05 w8 43.28 2.21 s9 43.14 2.36 s1040.64 1.80，1.21 w1138.78 1.84 w1233.52 1.87 ms1333.40 2.00 s1433.32 1.70 s1533.09 1.80 w1632.56 1.78 w1729.68 1.87 s1829.19 1.75 w1922.19 1.58 w2020.15 1.04 s2118.95 0.98 s2216.84 0.86 s2315.18 1.17 s
(三)、13C核磁共振譜解析1.一維13C NMR譜明晰27條譜線，無重疊現象，DEPT譜呈現23條質子碳峰，甲基碳(CH3)4個，仲碳原子(-CH2-)10個，伯碳(CH)9個，與澳洲茄胺鹽酸鹽化學結構式中C原子個數和類型一致。
2.低場烯碳區只有兩條譜線，δ142.66為一季碳，δ122.33為質子烯碳貢獻，因此化合物中含有-CH＝C＜結構。
3.最高場四條譜線，同為甲基碳貢獻，與質子NMR譜分析一致，該化合物中含有4個甲基。
4.較低場δ100.54為季碳，由取代基效應可知，該季碳鄰接兩個以上電負性較強的氮、氧原子，因此歸屬于C2碳貢獻。
5.δ42.43和δ38.09同為季碳，由化合物特性可知，這兩個季碳都為環節點碳，其節點碳質子分別被-CH3取代，由于雙鍵對β位碳去屏蔽效應，δ38.09應歸屬于C21，δ42.43歸屬于C10碳貢獻。
6.δ72.63位移峰落在氧碳區，13C-1H異核二維相關譜中該峰與質子δ3.39存在強偶合信息，由此可知，該碳鄰接氧原子，歸屬于C24碳貢獻。
7.δ63.29、δ57.94、δ51.79落在氧碳區，但13C-1H二維相關譜中上述三峰分別與較高場質子δ1.91、δ1.20及δ0.99相關，且三個峰同為d裂分，因此上述三個峰應為環節點碳貢獻。
8.δ85.11落在氧碳區較低場，且多重性為d，相關質子峰為δ4.62，該峰應歸屬于鄰接氧原子的環節點碳，即C8碳貢獻。
七、全結構歸屬數據7 1. 澳洲茄胺鹽堿基部分骨架原子標號化學結構式 2. 化學結構-NMR譜全歸屬序號13C化學位移(δ)1H相關化學位移(δ) 結構標號1142.66 202122.33 5.35 193100.54 24 85.11 4.62 85 72.63 3.39 246 63.29 1.91 97 57.94 1.20 118 51.79 0.99 139 46.96 2.87，3.05 410 43.28 2.21 2511 43.14 2.36 1612 42.43 1013 40.64 1.80，1.21 2214 38.78 1.84 1515 38.09 2116 33.52 1.87 1717 33.40 2.00 1818 33.32 1.70 719 33.09 1.80 1220 32.56 1.78 2321 29.68 1.87 522 29.19 1.75 623 22.19 1.58 1424 20.15 1.04 2725 18.95 0.98 2826 16.84 0.86 2927 15.18 1.17 26八、質譜數據8 儀器LCQ電噴霧質譜儀條件LCQ電噴霧離子源，噴霧電壓2kV，霧化氣為氮氣N2，金屬毛細管溫度200℃，甲醇溶解，流動注入泵進樣，進樣速度5μl。
1.LCQ質譜圖a.對照品的LCQ電噴霧質譜圖b.檢測樣品的LCQ電噴霧質譜圖2.檢測樣品質譜測定數據(EI-MS數據)m/z相對豐度(％)414 100.039616.527112.325311.4
3.裂解途徑 4.解析a.圖中樣品與對照品的準分子離子峰相同，且其碎裂規律相一致。其中樣品的正離子電噴霧質譜中的m/z414峰為樣品失去HCl的準分子離子峰，與對照品的準分子離子峰相同。
b.m/z396峰為準分子離子峰的脫水峰，m/z271峰為m/z396峰離子失去 得到的碎片峰，m/z253離子為m/z271離子進一步脫去一分子水的碎片峰。
九、X-射線衍射實驗數據9 儀器型號D/max-IIB-型X-射線衍射儀測試條件CuKα輻射源，工作電壓40kV，工作電流20mA。
1.X-射線衍射圖a.對照品X-射線衍射圖b.檢測樣品X-射線衍射圖2.2θ數據列表a.對照品數據表b.檢測樣品數據表十、綜合解析數據10 1.由澳洲茄胺鹽化學分子式計算不飽和度為7。
2.澳洲茄胺鹽樣品與對照品的準分子離子峰相同，且其碎裂規律相一致。其中樣品的正離子電噴霧質譜中的m/z414峰為樣品失去HCl的準分子離子峰，與對照品的準分子離子峰相同。證明化合物中堿基部分的分子量為414。
3.一維1H NMR譜峰相對面積可得，檢測樣品共有44個質子組成，與澳洲茄胺鹽化學分子式中質子數相符。13C NMR定量實驗和13C DEPT NMR實驗結果表示，該化合物共有27個碳原子，吸收共振峰相互無重疊形象，其中-CH3碳峰4條，CH2碳峰10條，叔碳峰9條，季碳峰4條，證明該化合物由27個碳組成，與澳洲茄胺鹽中碳原子個數一致。
4.IR譜中2943和2872cm-1分別為CH3的反對稱和對稱伸縮振動，2931和2846cm-1分別為CH2的反對稱和對稱伸縮振動，而1464、1453和1432cm-1則是CH3的反對稱變角振動和CH2剪式振動，1378cm-1為CH3的對稱變角振動，同時1297～1252cm-1區間的吸收峰可歸屬為CH2的非平面搖擺振動，961～900cm-1范圍重疊著CH3的面內搖擺振動，這些都證實了-CH3，-CH2-的存在，而且由于739和783cm-1的極弱CH2平面搖擺振動的出現進一步說明-CH2-CH2-和孤立CH2的存在。
5.IR譜中3380和3302cm-1的極強寬吸收來源于氫鍵結合的羥基伸縮振動，1351cm-1為其彎曲振動吸收帶，以619cm-1開始的寬吸收區是OH而外彎曲振動，1132～1054cm-1和836cm-1分別為C3-OH上的C-O異相和同相伸縮振動，這些均證明甾環上C3-OH的存在。
6.質子NMR譜中δ4.88強峰在重水交換譜中減弱、加寬、位移。證明該峰為＞NH、-OH以及HCl等活潑質子貢獻。
7.質子NMR譜中δ4.61裂分為多重峰，且與δ2.10和δ1.92相偶合，又落在氧碳質子區，對應于1個質子貢獻，因此，該質子碳鄰接電負性較強的氧原子，又受鄰位質子偶合，歸屬于OCH質子貢獻。
8.13C NMR實驗表明本品中只含有兩條雙鍵碳峰，UV譜λmax為204nm，構成單烯結構。
9.13C NMR譜δ42.43和δ38.09同為季碳，由化合物特性可知，這兩個季碳都為環節點碳，其節點碳質子分別被-CH3取代，由于雙鍵對β位碳去屏蔽效應，δ38.09應歸屬于C21，δ42.43歸屬于C10碳貢獻。
10.13C NMR譜最高場四條譜線，同為甲基碳貢獻，與質子NMR譜分析一致，該化合物中含有4個甲基。較低場δ100.54為季碳，由取代基效應可知，該季碳鄰接兩個以上電負性較強的氮、氧原子，因此歸屬于＞C-O碳貢獻。
11.IR譜中2759cm-1的強峰是NH2+的伸縮振動特征峰，1606和1594cm-1為其變角振動，再加上1195cm-1的C-N伸縮振動和800cm-1的極弱NH2+非平面變角振動的存在，表明樣品分子中存在NH2+。
12.綜合各譜分析，檢測樣品為對照品的鹽化合物。檢測樣品化學結構式為
權利要求
1.一種下述通式(I)的澳洲茄胺硫酸鹽
2.權利要求1的化合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)原料處理及粗總生物堿的提取將龍葵、澳洲茄或黃果茄的生果或其全草經篩選后，粉碎壓汁固液分離得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，固液重量比1∶1，浸取2～3次，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸除去上浮物，過濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80～85℃時加濃氨水或NaOH、Na2CO3、KOH的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對下濁液離心固液分離，得膏狀粗總生物堿；(2)粗總生物堿的精制用2～6％醋酸水溶液溶解膏狀粗總生物堿，固液重量比1∶10～30，加熱至沸除去上浮物，過濾冷卻沉降，取上清液加熱至80～85℃時，加濃氨水或堿的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對下濁液離心固液分離得膏狀總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵、澳洲茄或黃果茄中的總生物堿；(3)粗澳洲茄胺的提取用含3～10％鹽酸的80～95％乙醇溶液溶解總生物堿，固液重量比1∶30～40，水解加熱回流2～3小時，冷卻過濾，用95％乙醇、水，洗至中性，干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，用含3～10％NaOH的95％乙醇溶液溶解澳洲茄胺鹽酸鹽，加熱回流1～2小時，熱過濾，冷卻吸濾洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺；(4)澳洲茄胺的精制將粗澳洲茄胺溶于甲醇、乙醇或氯仿中至飽和溶液，用活化后的硅膠G與粗澳洲茄胺溶液混合，調成不流動的膏狀物，在80～90℃下恒溫干燥，冷卻后裝入層析柱內，振實，用氯仿、或氯仿∶甲醇體積比10∶1～2、或氯仿∶乙醇∶丙酮體積比3∶1∶2之一進行洗脫得洗脫液，檢驗洗脫結束后，對洗脫液常壓或減壓蒸餾濃縮，將濃縮液冷卻結晶過濾干燥后，粉碎至0.1～1.0微米粉末得澳洲茄胺；(5)用澳洲茄胺制備澳洲茄胺硫酸鹽將澳洲茄胺溶于95％乙醇中加熱至沸，攪拌下向熱澳洲茄胺乙醇溶液中緩緩加入10～50％的硫酸水溶液，至pH＝1，冷卻結晶，吸濾用乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺硫酸鹽。
3.權利要求1的化合物在制備抗癌藥物中的應用。
4.權利要求1的化合物在制備平喘藥物中的應用。
5.權利要求1的化合物在制備抗炎藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供一種具有顯著抗癌、平喘、抗炎作用的新的化合物澳洲茄胺硫酸鹽，分子結構為右式，本發明還涉及澳洲茄胺硫酸鹽的制備方法，該方法以龍葵、澳洲茄或黃果茄為原料來源豐富廉價，制備方法采用醋酸作提取溶劑成本低，制備工藝及設備簡便，生產周期短，產品純度高、藥效活性強。本發明還涉及以該化合物做為中藥一類新藥的新藥源，在抗癌、平喘、抗炎的醫藥上的應用。
文檔編號A61K31/58GK1552725SQ200310115858
公開日2004年12月8日 申請日期2003年11月29日 優先權日2003年11月29日
發明者劉良, 劉芯辰, 崔淑華, 劉 良 申請人:劉良, 劉 良