專利名稱：自身免疫疾病的藥劑和治療方法
本申請要求保護2002年2月21日遞交的美國臨時申請系列號60/359,419和2002年10月21日遞交的美國臨時申請系列號60/420,472的優先權，兩個申請都以全文引入作為參考。本發明是在國立衛生研究院的準許號CA81776的資助下產生的。美國政府在本申請中有一定的權利。
背景技術：
發明領域本發明涉及具有獨特生理特性的一些抗CD22的單克隆抗體的治療用途。更具體地說，本發明涉及用具有獨特的細胞凋亡前的特性的阻斷性抗CD22抗體治療B細胞惡性腫瘤，如淋巴瘤和白血病以及自身免疫疾病的方法。
相關技術的說明CD22是在接近所有的B淋巴細胞和大多數B細胞淋巴瘤上發現的膜糖磷蛋白質。交聯的CD22引發了CD22酪氨酸的磷酸化，組裝了激活應激活化蛋白激酶(SAPK)途徑的效應物蛋白質的復合物。CD22交聯在初始B細胞中提供了一個有效的共刺激信號并且在腫瘤性B細胞中提供細胞程序死亡前的信號。在結構上，CD22是免疫球蛋白(Ig)基因超家族的“唾液酸黏附素”亞類的成員，具有單一氨基端V系列Ig區域和6個C-2系列Ig區域的七個細胞外Ig區域。Wilson等，J.Exp.Med.，173137-146(1991)；Engel等，J.Exp.Med.，1811581-1586(1995)；和Torres等，免疫學雜志，1492641-2649(1992)。已有顯示，CD22是關鍵的淋巴細胞特異性的信號轉導分子，通過再集結信號效應器分子到生理上適當的位點，消極地和積極地調節B淋巴細胞抗原受體(BCR)的發信號。Tedder等人，免疫學年評，15481-504(1997)；Sato等人，Immunology 10287-297)1998)。
例如在美國專利號5,484,892；6,183,744；6,187,287；6,254,868和在Tuseano等人，血液94(4)1382-92(1999)中已經描述了抗CD22的抗體。例如通過Renner等人，白血病11(第2卷)S55-9(1997)中綜述了在非單克隆抗體，包括抗CD22的抗體霍金奇氏淋巴瘤的治療中的的用途。人源化的抗CD22抗體，LymphoCideTM(empatuzumab，Immunomedics公司)處于III期臨床實驗中，用于治療無痛的和攻擊性形式的非霍金奇氏淋巴瘤。一個yttrium-90標記版本的這一抗體目前處于I期臨床實驗，可用于同樣的適應癥。
盡管在癌癥治療方面有最新的進展，B細胞惡性腫瘤，如非霍金奇氏淋巴瘤和慢性淋巴細胞白血病的B細胞亞類是與癌癥相關的死亡的主要原因。因此，對進一步改進的治療B細胞惡性腫瘤的治療方案有巨大的需要。
自身免疫疾病作為一個整體能引起明顯的發病和失能。根據從1965到1995年收集的發病率數據，據估計，在下個5年中，約有1,186,015個人將發展成新的自身免疫疾病。Jocabsen等人(臨床免疫學免疫病理，84223(1997))評價了130多個公開的研究并估算1996年在美國8.5百萬人至少患有24種這些研究檢測到的自身免疫疾病中的一種。考慮到自身免疫疾病對公共健康的重要影響，著手這些病癥的負擔需要有效而安全的治療。所以，在本領域需要治療自身免疫疾病的經過改進的藥劑和方法。
發明概要本發明涉及在人類患者中利用阻斷的抗CD22單克隆抗體的獨特的特性治療B細胞惡性腫瘤和自身免疫疾病的改進的臨床方法。
在一個方面，本發明涉及治療被診斷患有B細胞惡性腫瘤人類患者的方法，包括(1)對患者給藥有效量的阻斷性抗CD22單克隆抗體，該抗體特異地結合SEQ ID NO1的天然的人CD22(hCD22)的開始的兩個Ig類似區域或開始的兩個Ig類似區域相關的抗原表位，和(2)檢測惡性腫瘤對治療的應答。
在另外的方面，本發明涉及治療被診斷患有自身免疫疾病的受試者(例如，人患者)的方法，包括(1)對受試者給藥有效量的阻斷性抗CD22單克隆抗體，和選擇性地(2)檢測自身免疫疾病對治療的應答。
作為另一方面，本發明提供了(1)通過對受試者(例如，人患者)給藥有效量的阻斷性抗CD22單克隆抗體，降低B細胞活性，降低B細胞或B細胞亞系的數目，甚至基本去除B細胞或特定的B細胞亞系，提高B細胞的更新率和/或降低B細胞產生抗體，(2)檢測對治療的應答的方法。“降低”指的是至少降低約25％、35％、50％或75％的降低或更少。“基本去除”指的是約90％，95％，98％或更多的降低。“提高更新率”指的是在更新率上約25％，35％，50％，75％，100％，150％或更多的升高。
在一個特定的實施方案中，所用的抗體基本上與抗體選自包括HB22-7(HB11347)，HB22-23(HB11349)，HB22-33，HB22-5，HB22-13，和HB22-196，優選地HB22-7，HB22-23，或HB22-33，更優選地HB22-7或HB22-33的抗體的同一表位結合。
在另外的實施方案中，抗體阻斷與配體結合的CD22至少70％，優選地至少約80％。
在另一個實施方案中，抗體包括具有與SEQ ID NO9(HB22-5VH序列)的氨基酸1到100，或SEQ ID NO11(HB22-7VH序列)的氨基酸1到97；或SEQ ID NO13(HB22-13VH序列)的氨基酸1到100；或SEQID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ IDNO17(HB22-33VH序列)的氨基酸1到98；或SEQ ID NO19(HB22-196VH序列)的氨基酸1到100的序列至少具有大約95％的序列同一性的VH序列的重鏈。
仍然在另一個實施方案中，抗體包括具有與SEQ IDNO11(HB22-7VH序列)的氨基酸1到97；或SEQ ID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO17(HB22-23VH序列)的氨基酸1到98的序列至少大約95％的序列同一性的VH序列的重鏈。
仍然在另一個實施方案中，抗體包括選自包括SEQ IDNO11(HB22-7VH序列)；SEQ ID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100和SEQ ID NO17(HB22-33VH序列)的VH序列。
在一個不同的實施方案中，抗體包含具有與SEQ IDNO21(HB22-5Vκ序列)；或SEQ ID NO23(HB22-7Vκ序列)；或SEQ IDNO25(HB22-13Vκ序列)；或SEQ ID NO27(HB22-23Vκ序列)；或SEQID NO29(HB22-33Vκ序列)；或SEQ ID NO31(HB22-196Vκ序列)的氨基酸序列至少大約95％的序列同一性的Vκ序列的輕鏈。
在一個特定的實施方案中，抗體包括具有與SEQ IDNO23(HB22-7Vκ序列)；或SEQ ID NO27(HB22-23Vκ序列)；或SEQID NO29(HB22-23Vκ序列)的氨基酸序列具有至少大約95％的序列同一性的Vκ序列的輕鏈。
在另一個實施方案中，抗體包括選自氨基酸序列SEQ IDNO23(HB22-7Vκ序列)；SEQ ID NO27(HB22-23Vκ序列)；和SEQ IDNO29(HB22-23Vκ序列)的氨基酸序列的Vκ序列的抗體。
在一個優選的實施方案中，抗體包括選自SEQ ID NO11(HB22-7VH序列)的氨基酸1到97和SEQ ID NO23(HB22-7Vκ序列)的氨基酸序列；SEQ ID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100和SEQ IDNO27(HB22-23Vκ序列)的氨基酸序列；和SEQ ID NO17(HB22-33VH序列)的氨基酸1到98和SEQ ID NO29(HB22-33Vκ序列)的氨基酸序列的VH和Vκ序列。
在一個不同的方面，本發明涉及編碼如上所述的任意的抗體重鏈或輕鏈可變區或其任意部分的核酸。
作為另一個方面，本發明提供了具有如上所述的重或輕鏈可變區或其部分的多肽。
目標癥狀可以是任意類型的自身免疫疾病或B細胞惡性腫瘤，包括但不限于定位的B細胞惡性腫瘤，或B細胞或各種抗體參與的任何其他癥狀。一般的B細胞惡性腫瘤的代表是非霍金奇氏淋巴瘤，Burkitt淋巴瘤，多重骨髓瘤，慢性淋巴細胞白血病，毛發性細胞白血病，和原淋巴細胞白血病的B細胞亞型。
本發明的治療方法可以在沒有惡性腫瘤B細胞或自身免疫疾病的任何其他治療時進行。當與沒有治療、相同的抗體和放射性免疫治療的結合治療或單獨的放射性免疫治療相比時，對于B細胞惡性腫瘤，本發明的治療方法通常能提高治愈的速度，和/或提高生存率和/或很大地減少腫瘤的體積。
抗體可以是完整的抗體，或抗體片斷，包括例如，從抗體片斷形成的Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片斷、雙體、線性抗體、單鏈抗體分子和多重特異性的抗體。所以，該抗體可以具有其他抗原特異性，例如可以是雙特異的抗體。雙特異的抗體可以例如與CD22的另一個表位結合的。此外，雙特異抗體可以具有其他抗原的結合特異性，如CD19、CD20、CD52、CD3、CD28或HLA-DR10(Lym-1)；或Fc受體，例如CD16、CD64和CD89。
該抗體可以是嵌合的、人源化的、靈長類化的或人的。
給藥該抗體可以通過任意的常規途徑進行，如通過重復性靜脈內灌注的靜脈內(i.v)給藥。
對治療的應答可以通過本領域技術人員公知的方法來檢測，包括檢測固體腫瘤的皺縮時間，例如通過磁共振成像(MRI)，或如本領域技術人員已知的，通過測定自身免疫疾病的臨床指標的改善或穩定來檢測。
附圖的簡要說明

圖1.顯示了人CD22(hCD22)的氨基酸序列，其中標出了Ig類似區域(區域1-7)的分界。
圖2.用111In-2IT-BAD-抗CD22(HB22-7)注射的患Raji和Ramos腫瘤的裸小鼠的整個身體的放射自顯影。注射后48小時殺死小鼠，并且進行放射自顯影。上面的圖象是Raji腫瘤小鼠，下面的圖象是Ramos腫瘤小鼠。
圖3.在用125uCi90Y-DOTA-肽-Lym-1(RIT)單獨，抗CD22單獨(HB22-7)，或試驗081500中的RIT和HB22-7(CMRIT)的三個不同的序列處理或未處理的Raji異種移植的小鼠的腫瘤體積的實時評價。每星期評價腫瘤體積3次。將各個處理組的小鼠的數目列表(表2)。
圖4.在所有獨立的異種移植的試驗中觀察到的腫瘤體積的概要分析。如圖2所述處理該試驗。將各個試驗的小鼠數目列表(表2)。
圖5.如圖2中所述處理的Raji異種移植的小鼠的應答和治愈速率。將腫瘤應答如下進行歸類C，治愈(腫瘤消失，在84天的研究結束時不再生長)；CR，完全退化(腫瘤消失至少7天但后來又再生長)；PR，部分退化(腫瘤體積下降了50％或更多至少7天，然后再生長)。數據代表了所有獨立實驗的結果。
圖6.對如圖2中所述處理的Raji異種移植的小鼠評估了全面的生存率。在所患腫瘤大小超過2000mg或在84天實驗結束時將小鼠安樂死。數據代表了所有獨立實驗的結果。
圖7a，7b和7c。對在如圖2所述處理的Raji異種移植的小鼠通過一星期兩次測定白血細胞(WBC)(圖7b)、紅血細胞(RBC)(圖7c)和血小板計數(圖7a)來評估血液學毒性。當與RIT單獨比較時，CMRIT組中血液學毒性沒有差異。此外，在用HB22-7單獨處理的小鼠中沒有觀察到血液學毒性。
圖8.通過對在如圖2所述處理的Raji異種移植的小鼠中1星期兩次測定體重來評估非血液學毒性。在所有5個異種移植的試驗中，在任意的處理組中體重沒有明顯的差異。
圖9.在用RIT處理開始后5天，通過在整個身體(WB)和血液中測定放射性活性來評估RIT的清除率。根據90Y的T1/2調節衰變后對結果進行報道。在任意的CMRIT處理組中RIT清除率沒有明顯的差異。
圖10.阻斷配體結合的抗CD22抗體的VH氨基酸序列分析。各個Ab的編碼序列的氨基酸計數和起點的設計是根據Kabat等人(免疫學意義的蛋白質的序列，美國政府出版辦公室，Bethesda，MD，1991)，其中VH基因編碼了氨基酸位置1-94、CDR1和2，和FR1，2和3.與5’PCR引物交迭的序列沒有顯示。點表示序列中插入的裂隙從而使相似的氨基酸序列的比對最大化。在VH、D和J區之間，為了清楚，在序列中導入了裂隙。顯示的序列的排列順序是基于與HB22-5序列的相關性。
圖11-16.來自雜交瘤HB22-5(SEQ ID NOS8和9)，HB22-7(SEQID NOS10和11)；HB22-13(SEQ ID NOS12和13)；HB22-23(SEQ IDNOS14和15)；HB22-33(SEQ ID NOS16和17)；和HB22-196(SEQ IDNOS18和19)的抗CD22Abs的重鏈VH-D-JH連接序列的核苷酸和編碼氨基酸序列。與5’PCR引物交迭的序列用雙劃線表示。D區序列下面劃線。
圖17.阻斷配體結合的抗CD22Abs的輕鏈Vκ氨基酸序列分析。各個Ab的編碼序列的氨基酸計數和起點的設計是根據Kabat等人的慣例，出處同上。在預測的信號序列剪切位點后的氨基酸編號為1。點表示了在該序列中插入的一個裂隙，使相似的氨基酸序列的比對最大化。在Vκ，J區段和κ恒定區域(下面雙劃線)序列之間為了清楚，導入裂隙。
圖18-23.來自雜交瘤HB22-5(SEQ ID NOS20和21)；HB22-7(SEQID NOS22和23)；HB22-13(SEQ ID NOS24和25)；HB22-23(SEQ IDNOS26-27)；HB22-33(SEQ ID NOS28-29)；和HB22-196(SEQ IDNOS30-31)的抗CD22 Abs的κ輕鏈V-J-恒定區域連接序列的核苷酸和推斷的氨基酸序列。與5’PCR引物交迭的序列用雙下劃線表示。
優選的實施方案的詳細說明除非特別定義，在此處所用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬的領域的普通技術人員通常理解的相同的意義。在此處本發明的描述中所用的術語是只用于描述特定的實施方案的，并且不打算限制本發明。
本文提到的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻以全文引入作為參考。
A.定義除非特別說明，本文所用的技術和科學術語具有如本發明所屬的領域中的普通技術人員一般理解的相同意義。
本領域的技術人員將會識別可以用于本發明的實踐中的許多方法和材料或此處所述的方法和材料的等同物。事實上，本發明不以任何方式限制所述的方法和材料。為了本發明的目的，將下面的術語定義如下。
術語“免疫球蛋白”(Ig)用于指血清的球蛋白的給予免疫性的部分，以及其他的糖蛋白，他們可以不是天然存在的但具有相同的功能特征。術語“免疫球蛋白”或“Ig”特異性地包括“抗體”(Abs)。當抗體顯示與特定的抗原的結合特異性時，免疫球蛋白包括缺乏抗原特異性的抗體和其他抗體類似分子。天然的免疫球蛋白是由命名為漿細胞的分化的B細胞分泌的，沒有任何抗原特異性的免疫球蛋白是淋巴系統低水平產生和骨髓瘤高水平產生的。如本文所用的，術語“免疫球蛋白”、“Ig”和其語法變體用于包括抗體(如此上所定義的)和沒有抗原特異性的Ig分子。
天然的免疫球蛋白通常是由兩個相同的輕(L)鏈和兩個相同的重(H)鏈組成的大約150,000道爾頓的雜四體糖蛋白。每個輕鏈與重鏈是通過一個共價的二硫鍵連接的，而二硫鍵的數目在不同的免疫球蛋白異型之間變化。每個重鏈和輕鏈也具有常規的被間隔的鏈間二硫鍵。每個重鏈在一端具有一個可變區(VH)，接著若干恒定區。每個輕鏈在一端具有一個可變區(VL)并在另一末端具有一個恒定區；輕鏈的恒定區是與重鏈的第一個恒定區一起排列的，并且輕鏈的可變區是與重鏈的可變區一起排列的。特定的氨基酸殘基據信在輕鏈和重鏈的可變區之間形成界面。
在血清中發現了主要的Ig異型(類別)，將顯示于括號中的對應的Ig重鏈列在下面IgG(γ鏈)血清中的基本Ig，應對抗原產生的主要抗體，這一抗體穿過胎盤。
IgE(ε鏈)這一Ig緊密結合肥大細胞和堿性粒細胞，當另外結合抗原時，引起釋放組胺和速發型過敏反應的其他介導物；在過敏反應中起著基本作用，這些過敏反應包括枯草熱、氣喘和過敏反應；并且可以起抗寄生蟲的保護性作用；IgA(α鏈)這一Ig存在于外分泌物中，如唾液、眼淚、粘液和初乳。
IgM(μ鏈)在應答抗原中首先誘導的Ig；它通常具有比后來產生的其他抗體異型更低的親和力，一般是五體。
IgD(δ鏈)這一Ig是在臍血中發現的相對高濃度的物質，可以是抗原的早期細胞受體，并且是主要的淋巴細胞表面分子。
本文中的術語“抗體”是在最廣泛的意義中使用的，并且特異性地覆蓋單克隆抗體(包括，但不限于全長單克隆抗體)、多克隆抗體、多重特異抗體(例如，雙特異抗體)和抗體片斷，只要它們具有需要的生物學活性。
“抗體片斷”包括全長抗體的一部分，通常為結合抗原的可變區(V)。抗體片斷的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片斷；二體；線性抗體；單鏈抗體分子；和從抗體片斷形成的多重特異性抗體。
如本文所用的術語“單克隆抗體”指從基本同源的抗體的群體得到的抗體，即包括該群體的個別抗體是相同的，除了可能以小量存在的天然存在的突變。單克隆抗體是高度特異的，定向抗單個抗原位點。另外，與通常包括不同的定向抗不同決定蔟(表位)的抗體的常規(多克隆的)抗體制劑相反，每個單克隆抗體是定向抗抗原上的單個決定簇的。
此處的單克隆抗體特定地包括“嵌合的”抗體(免疫球蛋白)，以及這樣的抗體的片斷，只要它們具有需要的生物活性(美國專利號，4,816,567；Morrison等人，美國國家科學院院刊，816851-6855(1984)；Oi等人，生物技術，4(3)214-221(1986)；和Liu等人，美國國家科學院院刊843439-43(1987))。
非人(例如，小鼠)抗體的“人源化的”或“CDR移植的”形式是人免疫球蛋白(受體抗體)，其中受體的高變區殘基被來自非人物種(供體抗體)如小鼠、大鼠、兔子或具有需要的特異性、素和性和能力的非人靈長類的高變區殘基所取代。在一些情況中，人免疫球蛋白的框架區(FR)殘基也被對應的非人殘基(所謂的“回復突變”)替代。另外，人源化抗體可以進行修飾，以包含受體抗體或供體抗體中沒有發現的殘基，以便進一步改善抗體的特性如親和性。通常，人源化抗體會基本包括所有的，至少一個，通常兩個可變區，其中所有或基本所有的高變區對應非人免疫球蛋白的高變區并且所有或基本所有的FRs是免疫球蛋白序列的FRs。人源化抗體也將至少包括一部分免疫球蛋白恒定區(Fc)，一般是人的免疫球蛋白的那部分。關于其他細節，參見Jones等人，自然，321522-525(1986)；和Reichmann等人，自然332323-329(1988)。
“單鏈Fv”或“sFv”抗體片段包括抗體的VH和VL區域，其中這些區存在于單個的多肽鏈中。通常，Fv多肽另外在VH和VL區之間包括能使sFv形成抗原結合所期望的結構的多肽聯結子。一篇sFv的綜述參見Plückthun的單克隆抗體的藥物學，113卷，Rosenburg和Mooreeds.Springer-Verlag，紐約，269-315(1994)。
術語“二體”指具有兩個抗原結合位點的小抗體片段，這些片段在相同的多肽鏈(VH-VL)中，利用一個接頭將重鏈可變區(VH)與輕鏈可變區(VL)連接，這一接頭太短以致使得在相同鏈上的兩個區域之間配對，強迫這些區域與另一個鏈的互補區域配對，產生了兩個抗原結合位點。二體在例如，EP 404,097；WO93/1161；和Hollinger等人，美國國家科學院院刊，906444-6448(1993)中敘述得更充分。
當用于本申請通篇時，表達語“線性抗體”指Zapata等人，蛋白質能量8(10)1057-1062(1995)中所述的抗體。簡要地說，這些抗體包括一對串聯的Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)，形成了一對抗原結合區。線性抗體可以是雙特異或單特異的。
IgG、IgE、IgA、IgM和IgD異型的抗體可以具有相同的可變區，即相同的抗原結合腔，盡管在它們的重鏈恒定區中是有區別的。免疫球蛋白，例如抗體的恒定區沒有直接參與將抗體與抗原結合，但顯示出各種效應物功能，如抗體參與抗體依賴細胞毒性(ADCC)。
一些主要的抗體異型(類別)被分成另外的亞類。IgG具有四個已知的亞類IgG(γ1)、IgG2(γ2)、IgG3(γ3)和IgG4(γ4)，而IgA具有兩個已知的亞類IgA1(α1)和IgA2(α2)。
術語“表位”用于指蛋白質抗原上的抗體的結合位點(單克隆的或多克隆的)。
結合到天然序列人CD22的氨基酸序列內區1和/或2的抗體，或結合到與本文特異地公開的任何單克隆抗體，如HB22-7、HB22-23和HB22-33所結合的基本相同的表位的抗體可以通過“表位圖譜”來鑒定。本領域有許多已知的定位和鑒定蛋白質上的表位的位置的方法，包括溶解抗體-抗原復合物的結晶結構、競爭性試驗、基因片段的表達試驗、基于合成肽的實驗，如例如在Harlow和Lane的第11章，抗體利用，實驗室手冊，冷泉港實驗室出版，冷泉港，紐約，1999中所述的。根據基因片段表達試驗，編碼蛋白質的開放讀碼框架被任意地或通過特異的遺傳構建體片段化了，并且確定了蛋白質的表達片段與待測試的抗體的反應性。基因片段可以例如通過PCR產生，然后在存在放射活性氨基酸時體外轉錄并翻譯成蛋白質。然后，通過免疫沉淀和凝膠電泳確定抗體與放射活性標記的蛋白質片段的結合。一些表位也可以利用在噬菌體顆粒(噬菌體文庫)表面呈現的隨機肽序列的大文庫來鑒定。或者，可以在簡單的結合試驗中測試一個已確定的交迭的肽片段的文庫與測試抗體的結合。后一種方法適于確定大約5到15個氨基酸的線性表位。
當兩個抗體識別相同的或空間上交迭的表位時，抗體結合“基本相同的表位”作為參照抗體。確定是否兩個表位結合相同的或空間上交迭的表位的最廣泛利用的和快速的方法是競爭性測試(例如，競爭性ELISA測試方法)，它可以利用標記過的抗原或標記過的抗體構成所有不同的格式。通常，將抗原固定在96孔板上，利用放射活性或酶標記測定阻斷標記的抗體的結合的未標記抗體的能力。
如本文所用的術語氨基酸或氨基酸殘基指如下所述的與變異體相關的天然存在的L氨基酸或D氨基酸。通常使用的氨基酸的一個和三個字母縮寫為本文所用(Bruce Alberts等人，細胞分子生物學，格蘭特出版社，紐約(第三版，1994)。
如本文所用，術語“多肽”包括肽和蛋白質，包括融合蛋白質。
將“序列同一性”定義為在比對該序列和導入的裂隙后，在候選序列中的氨基酸殘基的百分數，必要的話達到序列同一性的最大百分數，并且不考慮作為序列同一性的一部分的任何保守取代。序列同一性的百分數值可以通過NCBI BLAST2.0軟件產生，如Altschul等人，(1997)所確定的，“Gapped BLAST和PSI-BLAST新產生的蛋白質數據庫研究程序”，核酸研究，253389-3402。將參數設定為缺省值，除了設定為-1的錯配的罰分。
如本文所用，“治療”或“處理”是得到有益的或期望的臨床結果的途徑。為了本發明的目的，有益的或期望的臨床結果包括，但不限于，癥狀的緩解、疾病程度的消失、疾病的穩定(即沒有惡化)狀態、疾病發展的推遲或減慢、疾病狀態的改善或舒減，和減輕(無論部分或全部)，不論是可檢測的或不可檢測的。“治療”或“處理”也可以指與如果不接受治療的期望的生存期相比的延長了的生存。“治療”或“處理”是出于防止進一步發展或改變疾病的病理的目的而進行的干預。因此，“治療”或“處理”既指治療性的處理也指預防或防止性的措施。需要治療的那些包括疾病已經有的以及其中病癥可以預防的。對于自我免疫疾病，治療產生了一些改善、改良、穩定和/或受試者中的自我免疫疾病的至少一個臨床癥狀的穩定和/或延遲。在B細胞惡性腫瘤中，治療可以減少惡性腫瘤細胞的數目，減少腫瘤的大小；抑制(減慢或終止)惡性腫瘤細胞的傳播，包括滲入周邊器官，例如軟組織或骨；抑制(減慢或終止)轉移；抑制腫瘤生長；提供與B細胞惡性腫瘤相關的癥狀的緩解；降低死亡率；提高生活質量等。用本文的抗體的治療可以導致細胞抑制和/或細胞毒性的效果。
術語“B細胞惡性腫瘤”和其語法變體在最廣的意義上被使用以指B細胞的惡性腫瘤或贅生物，通常在淋巴組織中產生，如骨髓或淋巴結，但也可以在非淋巴類組織中產生，如甲狀腺、胃腸道、唾液腺和關節。本發明的治療方法特異性地涉及CD22-陽性B的細胞惡性腫瘤，包括但不限于非霍金奇氏淋巴瘤的B細胞亞型、Burkitt淋巴瘤、多發性骨髓瘤、慢性淋巴細胞白血病、毛發性細胞白血病和前淋巴細胞白血病。
術語“自身免疫疾病”指與正常的身體組織反應的抗體的產生導致的或加重的的癥狀。這是免疫系統錯誤攻擊身體自身器官和組織的癥狀。
B.詳細的描述1.抗體稱為HB22-7、HB22-23、HB22-33、HB22-5、HB22-13和HB22-196的阻斷性抗CD22單克隆抗體是已知的，并且已經在美國專利號5,484,892，Tuscano等人，當代免疫學雜志，261246(1996)，和Tuscano等人，血液，94(4)，1382-1392(1999)中公開了。HB22-7和HB22-23可以從美國典型培養物收藏中心(ATCC)，12302帕克蘭加伏，洛克菲勒，Md.20852，登記號HB22347和HB11349下得到。這些抗體的制備也在下面的實施例1中有敘述。CD22的表位圖譜已經顯示，這些阻斷的單克隆抗體結合開始的兩個Ig-類似區域或結合與人CD22的開始的兩個Ig-類似區域相關的表位(美國專利號，5,484,892和Tedder等人，免疫學年評，15481-504(1997))。抗體的重和輕鏈可變區序列也公開在本申請中。
本發明部分地基于具有在治療B細胞惡性腫瘤中HB22-7、HB22-23、HB22-33、HB22-5、HB22-13和HB22-196的全部特征的阻斷性抗CD22抗體的意想不到的優良特性，基于B細胞類型的非霍金奇氏淋巴瘤(NHL)的異種移植的模型中得到的結果。本發明進一步基于在治療自身免疫疾病中的具有HB22-7、HB22-23、HB22-33、HB22-5、HB22-13和HB22-196的全部特征的阻斷性抗CD22抗體的使用。
可以通過本領域中已知的任何標準的方法如，例如通過雜交瘤方法(Koehler和Milstein，自然256495-497(1975)；和Goding，單克隆抗體原理和實踐，59-103(學術出版社，1986))，或通過例如在美國專利號4,816,567和Wood等人，自然314446-9(1985)中公開的重組技術來生產抗CD22單克隆抗體。
現在也可能生產在沒有內源免疫球蛋白產生時在免疫后能生產人抗體的所有組成成分的轉基因動物(例如，小鼠)。例如，有人描述在嵌合的和胚系突變的小鼠中純合的抗體重鏈結合區(JH)基因的刪除導致內源抗體產生的完全抑制。在這樣的胚系突變小鼠中轉移人的胚系免疫球蛋白基因的排列將導致在抗原攻擊后產生人抗體。參見，例如Jakobovits等人，美國國家科學院院刊，90，2551-255(1993)；Jakobovits等人，自然，362，255-258(1993)。
Mendez等人(自然遺傳學，15146-156(1997))已經進一步改進了技術并產生了命名為“異種小鼠II”的轉基因小鼠系，它在當用抗原攻擊時，產生高親和力的完整的人抗體。這是通過將百萬堿基的人重鏈和輕鏈座位胚系整合進小鼠，并且在如上所述的內源JH區段中有缺失而實現的。II型異種小鼠含有1,020kb的人重鏈座位，含有大約66個VH基因，完整的DH和JH區域和三個不同的恒定區域(μ，δ和χ)，并且也含有800kb的人κ座位，其中含有32Vκ基因，Jκ區段和Cκ基因。在這些小鼠中產生的抗體各個方面近似于那些在人中觀察到的抗體，包括基因再重排、組裝和全部組成成分。由于在防止小鼠座位的再重排的內源JH區段中的缺失，人抗體優選地在內源抗體上進行表達。
選擇性地，噬菌體呈現技術(McCafferty等人，自然，348，552-553(1990))可以用于從來自未經免疫的供體的免疫球蛋白可變區(V)基因的全部組成部分，在體外生產人抗體和抗體片段。根據這一技術，將抗體V區基因在框架內克隆進絲狀噬菌體的大的或小的外殼蛋白基因，如M13或fd，并且在噬菌體顆粒表面上作為功能抗體片段呈現。因為絲狀顆粒含有噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，根據抗體的功能特性的篩選也導致了編碼具有那些特性的抗體的基因的篩選。所以，噬菌體模擬了B細胞的一些特性。噬菌體呈現可以各種方式進行；對于它們的綜述可以參見例如，Johnson，Kevin S.和Chiswell，David J.，結構生物學的現代評論，3.564-571(1993)。V基因區段的幾個來源可以用于噬菌體呈現。Clackson等人，自然，352，624-628(1991)從源自免疫小鼠的脾的V基因的小的隨機組合的文庫分離出抗惡唑酮抗體的各種排列。根據Marks等人，分子生物學雜志，222，581-597(1991)，或Griffith等人，EMBO J.12，725-734(1993)所述的技術可以構建來自未免疫的人供體的V基因的全部組成成分并且可以基本上分離各種抗原(包括自身抗原)的不同排列的抗體。在天然的免疫應答中，抗體基因高速積累了突變(體細胞高變)。一些導入的變化將能帶來更高的親和力，優選地對呈現高親和力的表面免疫球蛋白的B細胞進行復制，并且在隨后的抗原攻擊過程中分化。這一天然的過程可以通過利用已知為“鏈穿梭”的技術進行模擬(Marks等人，生物技術，10，779-783)。
在這一方法中，通過噬菌體呈現得到的“初級”人抗體的親和力可以通過用從未免疫的供體得到的V區基因的天然發生的變異體(全部組成成分)按順序替代重鏈和輕鏈V區域基因來提高。這一技術允許生產nM范圍的親和力的抗體和抗體片段的生產。Waterhouse等人，核酸研究，21，2265-2266(1993)已經敘描了制造非常大的噬菌體抗體全部組成成分的策略。
對于涉及單克隆抗體的其他信息，也參見例如Goding，J.W.，單克隆抗體原理和實踐，第3版，學術出版社，倫敦，圣地亞哥，1996；Liddell和Weeks抗體技術一個全面綜述，生物科學出版社，牛津，英國，1995；Breitling和Dubel重組的抗體，John Wiley & Sons，紐約，1999；和噬菌體呈現實驗室手冊，Barbas等人編輯，冷泉港實驗室，冷泉港，2001。
已經開發了各種技術用于生產抗體片段。傳統上，這些片段是通過完整的抗體的蛋白質分解消化來得到的(參見例如，Morimoto等人，J.Biochem.Biophys.Methods，24107-117(1992)和Brennan等人，科學22981(1985))。但是，這些片段現在可以直接由重組宿主細胞來生產。例如，Fab’-SH片段可以直接從大腸桿菌來回收并進行化學偶聯以形成F(ab’)2片段(Carter等人，生物技術10163-167(1992))。在另一個實施方案中，利用亮氨酸拉鏈GCN4形成F(ab’)2以便促進F(ab’)2分子的組裝。根據另一個方法，可以直接從重組的宿主細胞培養物中分離Fv、Fab或F(ab’)2片段。生產抗體片段的其他技術對于本領域技術人員是顯而易見的。
由兩個共價結合的抗體組成的異種結合抗體也在本發明的范圍內。這樣的抗體已經例如被提議將免疫系統細胞打靶到不想要的細胞(美國專利號，4,676,980)，并用于治療HIV感染(PCT申請公開號，WO91/00360和WO92/200373)。異種結合抗體可以利用公知的，商業上已有的交聯劑以任何合適的交聯的方法來制成。
本發明的抗體，不管是嚙齒動物、人或人化的抗體也可以具有其他的抗原特異性，以形成雙特異性抗體。第二結合特異性可以指引，例如抗其他的B細胞抗原，如CD19、CD20、CD52和其他B細胞上表達的CD抗原，特別是與靶B細胞惡性腫瘤結合的抗原。例如，已知CD20在90％以上的非霍金奇氏淋巴瘤中表達。抗CD20抗體(Rituxan，IDEC藥學)在臨床使用中是用于非霍金奇氏淋巴瘤的治療中的。CAMOATH-1H(抗CD52w)是被開發治療B細胞惡性腫瘤的另一種抗體。具有與CD20或CD52抗原的結合特異性的雙特異抗體特異性地包括在本文的范圍內的。本發明的雙特異性抗體可以結合的另一個B細胞抗原是HLA-DR10(Lym-1)，一個已知的非霍金奇氏淋巴瘤的標記。可以生產雙特異性抗體增強腫瘤的定位以及恢復和/或增強腫瘤特異免疫應答。其他抗原的靶的例子包括CD3、CD28和Fc受體(CD16、CD64和CD89)。雙特異性抗體可以預期具有增強的細胞毒性，并且作為結果提高緩解的速度和存活。
基本結合相同表位如HB22-7、HB22-23、HB22-33、HB22-5、HB22-13和/或HB22-196的抗體可以通過表位圖譜來鑒定。確定兩個不同的抗體是否認識相同的表位的最簡單的方法是競爭性結合試驗。該方法確定是否抗體能夠相互阻斷與抗原的結合，并且為兩個構象性和線性表位而起作用。競爭性結合試驗可以大量不同的方式，利用標記抗原或標記抗體來進行。在該試驗的大多數普通的版本中，將抗原固定在96孔板上。然后，利用放射活性的或酶標記測定未標記抗體阻斷標記抗體與抗原的結合的能力。對于其他詳細細節，參見例如Wagner等人，免疫學雜志，1302308-2315(1983)；Wagner等人，免疫學方法雜志，68269-274(1984)；Kuroki等人，癌癥研究，504872-4879(1990)；Kuroki等人，免疫學研究，21523-538(1992)；Kuroki等人，雜交瘤，11391-407(1992)，和抗體利用實驗室手冊，Harlow和David Lane編輯，冷泉港實驗室出版，冷泉港，紐約，1999，386-389。
或者，或此外，可以利用基于抗原的片段化的技術并檢測以抗體得到的片段的反應性進行表位圖譜定位，抗體隨機地或通過特異的遺傳構建體結合該抗原。片段化也可以在核酸水平上進行，例如通過PCR技術，接著進行轉錄并在存在放射性氨基酸時在體外翻譯成蛋白質。對于另外的細節參見例如，Harlow和Lane，出處同上，390-392。
根據表位圖譜的另一個方法，合成了一系列交迭的肽，各對應于蛋白質抗原的一個小的線性區段，并且排列在固相上。然后，用測試抗體探測肽系列，利用酶標記的二次抗體來檢測結合的抗體(Harlow和Lane，出處同上，393-396)。
本領域已知的表位定位的其他方法是從隨機合成的或噬菌體呈現的肽文庫篩選抗體。噬菌體呈現文庫是通過將編碼的肽寡聚核苷酸的復合混合物克隆進fl-型ssDNA噬菌體的小外殼蛋白基因的氨基末端來構建的。這樣的噬菌體呈現文庫是商業現有的，例如從新英格蘭生物實驗室得到。擴增該文庫作為原種，然后，將足以代表各個獨立的克隆的多個拷貝的等分試樣與目的抗體混合。通過稱為“生物淘選”的方法回收抗體結合噬菌體，除去未結合的噬菌體。洗脫結合的噬菌體并用于感染細菌，擴增篩選的原種。將最后篩選的原種的個別噬菌斑進行培養，并且例如通過ELISA檢測其特異性的抗體反應性，將插入位點周圍的DNA測序。分析編碼抗體結合的肽的序列確定了抗體的特異性。其他細節參見例如，Smith和Scott，酶學方法，217228-257(1993)，和Harlow和Lane，出處同上，397-398。
可以進一步修飾非人(嚙齒動物)抗體使它們更適于人的臨床應用。用拼接入人恒定區基因區段的具有所需的特異性的小鼠可變區基因片段生產嵌合抗體(參見例如，美國專利號4,816,567)。
當在人的治療中利用抗體時，為了避免抗原性的問題也可以人源化非人(嚙齒動物)抗體。通常，人化抗體具有在從非人來源中導入的一個或多個氨基酸殘基。這些非人氨基酸殘基經常稱為“輸出”殘基，通常取自“輸出”可變區。通過用人抗體的相應的序列取代嚙齒動物編碼區或編碼區序列，采用Winter和其同事的方法，可以基本地進行人源化(Jones等人，自然，321522-525(1986)；Riechmann等人，自然，332323-327(1988)；Verhoeyen等人，科學，2391534-1536(1988))。盡管抗體人源化有比較直接的特性，在人框架(FR)中簡單移植嚙齒動物CDR并不總能再構成原初的嚙齒動物單克隆抗體的結合親和力和特異性。人源化抗體的特性可以通過適當的設計來改進，包括例如，將來自嚙齒動物抗體的殘基取代進人框架(回復突變)。這樣的回復突變的位置可以通過序列和結構分析，或通過可變區的三維模型的分析來確定。此外，噬菌體呈現文庫可以用于在抗體序列內的選定位置改變氨基酸。人源化抗體的特性也會受到人框架的選擇的影響。早期的實驗使用充分鑒定的人單克隆抗體的有限的亞系不考慮與嚙齒動物單克隆抗體(所謂的固定的框架途徑)的序列同一性。相對近期地，一些工作組使用與嚙齒動物可變區具有高度氨基酸序列同一性的可變區(同源性匹配或最匹配的方法)。根據另一個方法，利用了一致的或胚系的序列，或從幾個不同的人單克隆抗體篩選每個輕或重鏈可變區內的框架序列的片段。
可以通過在抗CD22 DNA中導入適當的核苷酸變化，或例如通過肽合成制備上面討論的或其他現有的技術制備抗體的氨基酸變體。氨基酸變化也可以改變人源化或變異的抗CD22抗體的翻譯后過程，如改變糖基化位點數目或位置。
在恒定區的保守的位置上糖基化抗體(Jefferis and Lund，化學免疫學，65111-128(1997)；Wright and Morrison TibTECH1526-32(1997))。免疫球蛋白的寡糖側鏈影響蛋白質的功能(Boyd等人，分子免疫學，321311-1318(1996)；Wittwe and Howard，生物化學，294175-4180(1990))，并且糖蛋白的各部分之間的分子間相互作用可以影響糖蛋白的構型和存在的三維表面(Jefferis and Lund，出處同上，Wyss and Wagner，現代生物技術評論，7409-416(1996))。寡糖也可以作用于將給定的糖蛋白質根據特異的識別結構打靶到一些分子上。例如，已經有報道，在無乳化IgG中，寡糖部位出自CH2內空間并且末端N乙酰糖基胺殘基變成可以結合甘露糖結合蛋白質(Malhotra等人，自然方法，1237-243(1995))。通過糖肽酶從CHO細胞中產生的CAMPATH-1H(識別人淋巴細胞的CDw52的抗原的重組人源化小鼠單克隆IgG1抗體)除去寡糖導致了在互補介導的溶解(CMCL)中的完全降低(Boyd等人，分子免疫學，321311-1318(1996)，而利用神經酰胺酶對唾液酸殘基的去除則不會導致CMCL的降低。也有報道抗體的糖基化能影響抗體依賴的細胞毒性(ADCC)。特別是，據報道具有β(1，4)-N-乙酰糖基氨基轉移酶III(GnTIII)，一種催化剖面GlcNAc的形成的糖基轉移酶的四環素調節的表達的CHO細胞能提高ADCC活性(Umana等人，成熟的生物技術，17176-180(1999))。
通過修飾下面劃線的核苷酸序列中的糖基化位點可以制備抗體的糖基化變體。另外，抗體的糖基化也可以在不改變下面劃線的核苷酸序列的情況下得以改變。糖基化是大大依賴于用于表達抗體的宿主細胞的。因為用于表達重組的糖蛋白，例如抗體作為潛在的治療劑的細胞類型很少是天然細胞，可以期望在抗體的糖基化模式譜中的顯著的變異(參見例如，Hse等人，生物化學雜志，2729062-9070(1997))。除了宿主細胞的選擇，在重組抗體的生產過程中影響糖基化的因子包括生長方式、培養基的組成、培養物的密度、氧合作用、pH、純化方案等等。有人建議用各種方法來改變在特定的宿主生物中實現的糖基化模式，包括導入或過度表達參與寡糖生產的一些酶(美國專利號，5,047,335，5,510,261和5,278,299)。可以例如利用內糖苷酶H(EndoH)酶學地將糖基化，或糖基化的一些類型從糖蛋白上去除。另外，可以將重組宿主細胞遺傳工程化，例如在一些類型的聚多糖的加工中制成有缺陷的。這些以及類似的技術是本領域公知的。
本發明的抗體也可以通過抗體指示的酶藥物前體治療(ADEPT)來使用。ADEPT是一種利用單克隆抗體靶擊腫瘤抗原的特異性將催化酶靶擊到癌細胞表面的技術。本文中，酶是在將抗癌癥藥物的藥物前體形式(例如，肽基化學治療劑，參見WO81/01145)激活成它們的完全的活性形式的位置上。參見例如，WO88/07378和美國專利號，4,975,278。
用于本發明的方法中的酶包括但不限于用于將含有磷酸鹽的藥物前體轉化成游離的藥物的堿性磷酸酶；用于將含有硫酸鹽的藥物前體轉變成游離的藥物的芳基磺胺酶；用于將非毒性的5-氟胞嘧啶轉變成抗癌藥物5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脫氨酶；蛋白酶如沙雷菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、羧肽酶和組織蛋白酶(如組織蛋白酶B和L)，可用于將含有肽的藥物前體轉變成游離的藥物；D-丙氨酰羧肽酶，用于轉變含有D氨基酸取代物的藥物前體；碳水化合物裂解酶如β半乳糖苷酶和用于將糖基化的藥物前體轉變成游離的藥物的神經酰氨酶；用于將β內酰胺派生的藥物轉變成游離的藥物的β內酰胺酶；和用于將在它們的帶有苯氧基乙酰基或苯基乙酰基的基團的胺氮派生的藥物轉變成游離的藥物的青霉素酰胺酶，如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。或者，具有酶活性的抗體，在本領域中也已知為“抗體酶”，可以用于將本發明的藥物前體轉變成游離的活性藥物(參見例如，Massey，自然，328457-458(1987))。抗體-抗體酶共軛物可以如本文所述制備成將抗體酶遞送到腫瘤細胞群體中。
本文中的抗體的免疫共軛物也特異地包括在本發明中。免疫共軛物包括與細胞毒性劑共軛結合的抗體，如化學治療劑、毒素或放射性同位素。
特別地，本文中的抗CD22的抗體的效率可以通過與細胞毒性放射性同位素綴合，使得特異地將放射性治療打靶至靶位點(放射性免疫治療)來提高。適合的放射性同位素包括例如，I131和Y90，兩者都可以用于臨床實踐中。其他適合的放射性同位素包括但不限于In111、Cu67、I131、As211、Bi212、Bi213和Re116。
用于免疫共軛物的生成中的化學治療劑包括例如，亞德利亞霉素、阿霉素、表柔比星、5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷(“Ara-C”)、環磷酸酰胺、三胺硫磷、白消安、細胞毒素、紫杉烷，例如，紫杉醇(Taxol，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，NJ)和doxetaxel(安素泰、Rhone-Poulenc Rorer，Antony，Rnace)、toxotere，氨甲喋呤、順式鉑銨、苯丙氨酸氮芥、長春花堿、博來霉素、足葉乙苷、異環磷酰胺、絲裂霉素C、米托蒽醌、長春花新堿、長春瑞賓、卡鉑、表鬼白毒噻吩糖苷、道諾霉素、洋紅霉素、氨基喋呤、更生霉素、絲裂霉素、埃斯波霉素(參見美國專利號，4,675,187)、5-FU、6-硫代鳥嘌呤、6-巰基嘌呤、放線菌素、VP-16、瘤可寧、苯丙氨酸氮芥和其他相關的氮芥。
本文中用于免疫共軛物中的毒素包括例如，白喉A鏈、外毒素A鏈、蓖麻蛋白A鏈、伊諾霉素和tricothecenes。特別地包括在內的是抗體-美登木素生物堿和抗體-加利車霉素共軛物。含有美登木素生物堿的免疫共軛物被在例如美國專利號5,208,020，5,416,020和歐洲專利號EP 0425 235中公開了。還參見例如，Liu等人，美國國家科學院院刊，938618-8623(1996)。例如，在美國專利號5,712,374，5,714,586；5,739,116；5,767,285；5,770,701；5,770,710；5,773,001；和5,877,296中公開了抗體-加利霉素共軛物。
利用各種雙功能蛋白質偶聯劑如N-琥珀酰胺基-3-(2-吡啶二硫代基)丙酸鹽(SPDP)、亞氨基硫代烷(IT)、咪唑酯的雙功能衍生物(如二甲基adipimidate HCl)、活性酯(如二琥珀酰基辛二酸)、醛(如戊二醛)、雙疊氮化合物(如雙(p-疊氮苯甲酰)己烷二胺)、雙重鹽衍生物(如雙-(p-重鹽苯甲酰)-乙二胺)、二異氰(如tolyene 2，6-二異氰酸)和雙活性氟化合物(如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。例如，蓖麻蛋白免疫毒素可以如Vitetta等人，科學，2381098(1987)中所述進行制備。碳-14標記的1-異硫代氰酸苯基-3-甲基二乙基三氨基戊乙酸(MX-DTPA)是示范性的螯合劑，用于與抗體的放射性核苷酸綴合，參見例如，WO94/11026。
抗CD22抗體的共價修飾也包括在本發明的范圍內。如果可行，它們可以通過化學合成或通過抗體的酶學的或化學的裂解來制成。通過將抗體的靶向的氨基酸殘基與有機的衍生劑反應，在分子中導入抗體的其他類型的共價修飾，所述衍生劑能夠與篩選的側鏈或N-或C-末端殘基反應。抗體的共價修飾的優選的類型包括將抗體與各種非蛋白質多聚體例如，聚乙二醇、聚丙二醇、或聚氧烷中的一種以本領域已知的方法連接。
2.藥物的配方和治療方法B細胞型非霍金奇氏淋巴瘤是用于包括惡性(腫瘤性的)B細胞淋巴瘤引起的一大組淋巴瘤(超過29個類型)的術語，代表一大亞系的已知類型的淋巴瘤。已知B細胞在它們依賴于復雜的細胞內信號過程的生命周期中經歷了許多變化，在B細胞的生命周期的不同時期可以存在明顯的不同類型的B細胞惡性腫瘤。在干細胞時期，一般可以形成急性淋巴細胞白血病(ALL)或原淋巴細胞淋巴瘤/白血病。前體B細胞可以發展成前體B原淋巴細胞淋巴瘤/白血病。未成熟的B細胞的典型的惡性腫瘤包括小的非裂解的細胞淋巴瘤和可能的Burkitt/非Burkitt淋巴瘤。在抗原接觸之前B細胞通常發展成慢性淋巴細胞白血病(CLL)，或小的淋巴細胞淋巴瘤，而在抗原接觸后通常觀察到濾泡狀淋巴瘤，大細胞淋巴瘤和免疫母細胞性淋巴瘤。同時存在分類系統可以通過將快速和慢速的淋巴瘤區分的生長速度來鑒定B細胞淋巴瘤。例如，Burkitt/非Burkitt淋巴瘤和LCL淋巴瘤屬于快速生長的組，而慢速生長的組包括濾泡中心細胞淋巴瘤(FCCL)，濾泡大細胞淋巴瘤，和濾泡小裂解細胞淋巴瘤。
通過發育的時期也可以鑒定非霍金奇氏淋巴瘤。時期I只在一個淋巴結區域，或只在淋巴結外面的一個區域或一個器官中發現癌癥。時期II(1)在隔膜(幫助呼吸的肺下的薄肌肉)的同側的兩個或多個淋巴結區域中發現癌癥，或(2)在淋巴結外的僅一個區域或器官或其周圍的淋巴結中發現癌癥，或(3)在薄層的同側上的其他淋巴結區域也可以有癌癥。時期III在薄層的兩側的淋巴結區域中發現癌癥。癌癥也可以已經傳播到靠近淋巴結區域和/或靠近脾的區域或器官。時期IV(1)癌癥已經擴散到淋巴系統外面的一個器官或許多器官；癌癥細胞可能或不可能在靠近這些器官的淋巴結中發現，或(2)癌癥已經擴散到淋巴結外的僅一個器官，但淋巴結遠離涉及的器官。
B細胞惡性腫瘤包括非霍金奇氏淋巴瘤的當前的治療意見依賴于惡性腫瘤的類型和時期。典型的治療方案包括輻射治療，也稱外部光束治療、化學治療、免疫治療以及這些方法的組合。一個有希望的途徑是放射免疫治療(RIT)。在外部光束治療時，有限的身體區域受到輻射。在化學治療下，治療是系統的，經常不利地影響正常的細胞，引起嚴重的毒性副作用。靶向RIT是一種方法，其中B細胞特異抗體將毒性物質遞送到腫瘤位點。在患有B細胞NHL的患者中RIT的治療潛力已經利用不同的靶，包括CD20、CD19、CD22和HLA-DR10(Lym-1)顯示了。更近地，聯合用藥療法(CMT)已經成為治療固體腫瘤的日益常見的方法，包括通過藥物進行癌癥細胞的輻射敏感性，以及化學治療的直接的細胞毒性效果。治療NHL的最常見的化學治療方案是環磷酰胺-羥基阿霉素-長春堿(長春花新堿)-強的松(CHOP)結合治療。一個對惡性的，但為早期的NHL的隨機研究顯示，用CHOP加場輻射的結果比單獨CHOP的治療優越。盡管有希望，但有關外部光束的輻射的治療的缺點是外部光束的輻射僅僅可以高劑量遞送到身體的有限的區域，而NHL是廣泛分布的。因此，已經證明CMT對于局部早期惡性腫瘤在臨床上是有用的。
另一條現有的方法是聯合用藥放射性免疫療法(CMRIT)，它與對NHL的系統輻射(例如，90Y-DOTA-肽-Lym-1)的特異傳遞結合，該NHL具有另一個化學治療劑的系統輻射敏感效應。因為在CMRIT中，輻射是連續遞送的，含氧量低的癌癥細胞可以再氧化，或通過在治療過程中的細胞循環的輻射敏感G2/M期，使治愈更容易。另外，CMRIT首先通過Lym-1特異地靶擊NHL，其次通過時間測定提供特異性。這使得輻射敏感劑只在RIT靶擊的位點潛在地協同作用，所以使效率最大化使毒性最小。幾個前面的異種移植研究已經證明，當在RIT 24-48小時后施用輻射合成儀(Taxol)，協同作用提高了。
盡管CMRIT目前被視為最先進的治療NHL的治療方法，但當在已經廣泛接受的Raji和Ramos淋巴瘤異種移植模型中進行測試時，本發明的抗體單獨也已經證明能在腫瘤體積減少、治愈速度和完全的生存方面提供優越的結果。
自身免疫疾病是導致抵抗自身的隨后的免疫應答的自我耐受中的中斷引起的，包括產生自身抗體和在受影響的組織中儲存免疫球蛋白。自身抗體形成促進補體和Fc受體介導的組織炎癥和破壞的免疫復合物。因為B細胞是自身抗體來源，他們提供了合適的靶，用于治療這些類型的免疫介導的疾病。B細胞也可以提供抗原并和調節效應器T細胞的發育。這些疾病的病理性的機制是復雜的，并且經常包括體液的和細胞的免疫機制。
大部分自身免疫疾病來自與正常身體組織反應的抗體的生產或被其加劇。在抗原刺激和激活之后的B細胞產生了抗體。所以，阻斷CD22功能可以抑制抗體的產生，包括自身反應抗體。80種自身免疫疾病已經得到鑒定。自身免疫疾病，他們的病原學和治療在國立衛生研究院的自身免疫疾病協調委員會出版的自身免疫疾病研究計劃中已經廣泛討論了。根據本發明可以治療的自身免疫疾病包括但不限于免疫復合性疾病如腎小球腎炎，Goodspature綜合癥，壞死性脈管炎，淋巴腺炎，動脈外膜炎結節和系統性紅斑狼瘡。其他示例性的自身免疫疾病包括但不限于類風濕關節炎、牛皮癬關節炎、系統性紅斑狼瘡、牛皮癬、潰瘍性結節炎、系統性硬化、皮肌炎/多肌炎、抗磷脂抗體綜合癥、硬皮病、perphigus vulgaris、ANCA相關的脈管炎(例如，韋格納氏肉芽腫病、極微性多脈管炎)、urveitis，Sjgren氏綜合癥、克羅恩氏疾病、瑞特氏綜合癥、關節強硬性脊椎炎、萊姆關節炎、吉蘭-巴雷綜合癥、橋本甲狀腺炎和心肌病。其他與抗體生產相關的疾病包括但不限于，多發性硬化癥、異位性皮膚炎、血小板減少性紫斑、粒細胞缺乏癥、自我免疫溶血性貧血、抗外源抗原的免疫反應如在懷孕過程中的胎盤A-B-O血液組、重癥肌無力、I型糖尿病、格雷夫斯氏疾病和變應性應答。本發明的方法可以用于治療有關B細胞或抗體的任何其他疾病或癥狀，例如移植排斥。
本文的抗CD22抗體一般以對所有藥物化學師公知的藥物配方的形式給藥。參見例如，Remington的藥物科學(第15版，Mack出版公司，Easton，Pa(1975))，特別是87章，Blaug，Seymour。這些配方包括例如粉末、糊、油膏、凝膠、蠟、油、脂、無水吸收堿、水中油或油中水乳劑、乳化聚乙(各種分子量的聚乙二醇)、半固體凝膠和含有聚乙二醇的半固體混合物。一般的配藥形式是無菌的，等滲的，適于通過靜脈內(i.v)途徑給藥的基于水的溶液。本發明的抗體在藥物配方中的濃度可以在從小于約0.1％，通常或至少約2％到多至約20％到50％或更多的重量比例的范圍內廣泛變化，并且將主要通過液體體積、黏度等，根據選擇的給藥的特定方式來進行選擇。
本發明的組分也可以通過脂質體給藥。脂質體包括乳劑、泡沫、膠態分子團、不溶的單層、液體結晶、磷脂分散劑、薄層等等。在這些制劑中，待遞送的本發明的組合物是作為脂質體的一部分，單獨或結合一個結合了需要的靶的分子如抗體或和其他治療性的或免疫原性的組合物結合而整合入的。用于本發明的脂質體是從形成標準的載體的脂類形成的，通常包括中性的和帶負電的磷脂和甾類如膽固醇。脂的選擇通常是考慮例如血液中的脂質體大小，脂質體的酸的不穩定性和穩定性來指導的。各種制備脂質體的方法是現有的，如Szoka等人，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9467(1980)，美國專利號4,235,871，4,501,728，4,837,028和5,019,369中所述。
本發明的抗體可以單獨或結合其他治療方案來給藥。例如，在B細胞惡性腫瘤的情況中，這樣的方案或治療方法包括化學治療、放射性免疫治療(RIT)、化學治療和外部光束輻射(聯合用藥療法，CMT)，聯合用藥療法放射性免疫治療(CMRIT)，或細胞因子單獨或結合在一起等等。所以，本發明的抗CD22抗體可以結合CHOP(環磷酰胺-羥基阿霉素-長春堿(長春花新堿)-強的松龍)，治療非霍金奇氏淋巴瘤的最常見的化學治療方案。另外，本文的抗CD22抗體可以結合其他抗體來給藥，包括抗CD19、抗CD20和其他抗CD22抗體，如LymphoCideTM(Immunomedics，Inc.)或LymphoCide Y-90。參見例如，Stein等人，Drugs of the future 18997-1004(1993)；Behr等人，臨床癌癥研究53304s-33314s，1999(卷)；Juweid等人，癌癥研究，555899s-5907s，1995；Behr等人，腫瘤靶擊332-40(1998)和美國專利號6,183,744，6,187,287和6,254,868。
本發明的治療也可以與自身的免疫紊亂的其他療法結合使用。在特定的實施方案中，用本發明的抗體以及抗CD20抗體(例如，Rituxan，IDEC藥學)和/或抗炎癥藥物(例如，皮質類固醇)對受試者進行治療。
在特定的實施方案中，根據本發明治療的患者將在它們的惡性腫瘤B細胞上表達CD22。CD22抗原的存在可以通過標準技術來確認，如免疫組織化學、FACS、用標記的(例如，放射性標記)抗CD22抗體的結合試驗。
本發明的抗體組合物可以利用給藥的常規方式來給藥，包括但不限于靜脈內、動脈內、腹膜內、口服、淋巴內、肌肉內、真皮內、皮下和鼻內給藥。在特定的實施方案中，給藥的途徑是通過大劑量地或連續地灌注一個時期，如連續地或大劑量地灌注，1星期一次或兩次。在其他的特定的實施方案中，給藥的途徑是通過皮下注射。劑量依賴于被靶擊的B細胞惡性腫瘤或自我免疫疾病的特性、形式和階段、患者的性別、年齡、癥狀、過去的治療歷史、所用的其他療法以及本領域技術人員通常考慮的其他因素。例如，非霍金奇氏淋巴瘤患者或有自身免疫疾病的患者可以接受大約50到大約1500mg/m2/星期，具體地是大約100到大約1000mg/m2/星期，更具體地是從大約150到大約500mg/m2/星期的如本文所述抗CD22抗體。
通過本領域已知的標準技術可以檢測患者以追蹤B細胞惡性腫瘤或特定的自身免疫疾病的臨床適應癥。例如，在B細胞惡性腫瘤的情況中，腫瘤退化(例如，在固體腫瘤的情況中的腫瘤大小)，利用抗CD22抗體的循環的B細胞或活檢組織的表現型是可以檢測的。
當關于人的治療對本發明進行討論后，可以理解本發明的抗體也發現可以用于獸醫學中。例如，貓的惡性淋巴瘤經常發現在家養的貓中，并顯示與人的非霍金奇氏淋巴瘤相似的特征(Bertone等人，Am.J.Epidemiol.156268-73(2002))。類似地，已知狗也形成了各種淋巴瘤。因此，本文的抗體可以用于治療貓和狗的惡性淋巴瘤。自身免疫疾病的動物模型也是本領域公知的。給藥的劑量和途徑依賴于待治療的動物種類，并且它們的測定是本領域普通獸醫公知的。
本發明的另外的細節在下面的非限制性的實施例中提供。
實施例除非特別說明，根據制造商的說明使用這些實施例中提到的商業上現有的試劑。除了如下面的實施例中公開的生產之外，生產單克隆抗體HB22-7的雜交瘤(ATCC登記號HB11349)可以從美國典型培養物保藏中心，洛克菲勒，馬里蘭處得到。
實施例1
抗CD22單克隆抗體的生產根據Engel等人，免疫學雜志，154710(1993)和美國專利號，5,484,892中的方法生產單克隆抗體(mAbs)HB22-7(IgG2b)、HB22-23(IgG2a)、HB22-33(IgM)、HB22-5(IgG2a)、HB22-13(IgG2a)、HB22-22(IgA)和HB22-196。還參見Tuscano等人，血液941382-1392(1999)。但是，也可以利用其他方法。簡要地說，HB22 mAbs是通過雜交瘤技術，利用以全長CD22 cDNA作為免疫原穩定轉染的小鼠原B細胞系300.19來生產的。更具體地說，通過將NS-1骨髓瘤細胞與來自用小鼠原B細胞系免疫3次的Balb/c小鼠的脾細胞融合產生33個與CD22反應的mAbs，用全長的CD22 cDNA穩定轉染所述原B細胞。生產與用CD22 cDNA轉染的小鼠L細胞反應但不與未經轉染的L細胞反應的mAb的雜交瘤，將其克隆兩次并且用于生產上清液或腹水。利用小鼠單克隆抗體同型試劑盒(Amersham，Arlington Heights，III)確定mAb的同型。利用Affi-Gel蛋白質A MAPS II試劑盒純化IgGmAb(Bio-Rad，Richmond，Calif)。通過相對于蒸餾水的擴展透析來沉淀腹水的含有優球蛋白組分的HB22-33mAb(IgM)，并且通過SDS-PAGE分析顯示是基本純凈的mAb.如美國專利號5,484,892的表II所公開的，mAbsHB22-7、HB22-22、HB22-23和HB22-33完全阻斷了(80-100％)Daudi、Raji和Jurkat細胞與CD22轉染的COS細胞的結合。MAbsHB22-5、HB22-13、HB22-24和HB22-28部分地阻斷黏連(20-80％)。
利用鑒定CD22上的5個不同的表位(表位A、B、C、D和E)(Schwartz-Albiez等人，“CD22抗原的碳水化合物成分可以通過糖基化途徑的抑制劑來調節”，圖3中在白細胞IV型中用圖描述了Workshop mAb的結合特異性，見白細胞分化抗原，Knapp等人，編輯，牛津大學出版社，Oxford，65(1989))的“車間”CD22阻斷的mAb和一組mAb進行的mAb的交叉抑制的研究，鑒定了介導配體結合的CD22上的區域。已經發現本文的三個單克隆抗體HB22-7、HB22-22和HB22-23非常接近地結合或結合CD22上的相同表位。這些和其他阻斷性抗體的表位圖譜的結果公開在Tedder等人，Annu.Rev.Immunol.15481-504(1997)中。不象被提供用于治療的其他抗CD22抗體，本發明的阻斷性抗體結合hCD22氨基酸序列的開始兩個Ig類似區域內的表位。
實施例2Raji和Ramos淋巴瘤異種移植實驗這一實施例描述了來自我們的獨立的Raji和Ramos淋巴瘤異種移植試驗的結果。裸小鼠異種移植是臨床前評估的重要的工具。利用淋巴瘤細胞系Raji和Ramos的含有人非霍金奇氏淋巴瘤(NHL)異種移植體的裸小鼠已經證明了對于評估治療NHL的效率的用途。(Buchsbaum等人，癌癥研究，52(23)6476-6481(1992)和Flavell等人，癌癥研究574824-4829(1997))。
材料和方法試劑。作為稀釋的HCl中的氯化物購買無載體90Y(太平洋西北國家實驗室，Richland，WA)和111In(Nordion，Kanata，Ontario，Canada)。Lym-1(Techniclone公司，Tustjn，CA)是用人Burkitt淋巴瘤細胞核免疫的小鼠中產生的IgG2amAb.Lym-1識別惡性腫瘤B細胞上的細胞表面31-35kD的抗原，并且與超過80％的人B細胞NHL反應。根據需要大于95％的純單體IgG的說明書通過聚丙烯酰胺凝膠電泳來評估Lym-1的純度。90Y-DOTA-肽-Lym-1如前所述進行制備(O’Donnell等人，Cancer.Biother.Radiopharm.13251-361(1998)。通過HPLC、TLC和纖維素乙酸電泳的評估顯示90Y-DOTA-肽-Lym-1制備到98％的放射化學純度，聚集含量小于5％。
如前所述，利用蛋白質A瓊脂糖快速柱(Pharmacia)制備抗CD22mAb，HB22-7。通過HPLC和流式細胞計數器確定HB22-7純度，發現純度大于95％。通過基于流式細胞計數器的細胞凋亡誘導的分析(Apo-Tag，Pharmacia)確定生理特性，并發現它與前面公開的結果一致(Tuscano等人，出處同上)。利用ActiClean ETOX柱(Sterogene)實現內毒素的除去，最后內毒素水平確定為小于0.15個內毒素單位(EU)/mg mAb(Bio Whitaker)。Lym-1和HB22-7mAbs符合用于小鼠、病毒、支原體、真菌，和細菌污染以及內毒素、致熱原的MAP(小鼠抗體生產)的指標，以及動物中的DNA含量和常用的安全測試。
細胞系和Scatchard分析。Raji和Ramos Burkitt淋巴瘤細胞系購自美國典型培養物保藏中心(ATCC，Gathersberg，MD)。如前所述，兩個細胞系通過利用HB22-7 mAb的流式細胞計數方法對表達CD22進行染色(Tuscano等人，出處同上)。這些細胞系是以0.5×106個細胞/ml在用10％的胎牛血清補充的RPMI1640中維持的。如前所述進行應用Raji和Ramos細胞的Scatchard分析(Scatchard，G.，Ann.of NY AcadSci.51660(1947))。簡要地說，將HB22-7用125I通過氯胺T方法進行標記(特異的活性是1.1μCi/ug)。利用系列稀釋的未標記的HB22-7進行競爭性結合試驗。
小鼠研究。將7-9周齡的雌性無胸腺的BALB/c nu/nu小鼠(HarlanSprague-Dawley)，根據加利福尼亞大學，Davis動物保護綱領，在正常的飲食加利眠寧和在無致病原的條件下喂養。每個籠子圈養5個小鼠。在對數生長期收集Raji或Ramos細胞；在每個小鼠的兩側皮下注射2.5-5.0×106個細胞。在移植后的3星期啟動研究，此時腫瘤為28到328mm3。這些組包括未處理的，單獨的125uCi的RIT，單獨的1.4mg的HB22-7，或RIT和HB22-7的結合，在RIT之前，同時或之后24小時給藥HB22-7。為了使周圍輻射最小，墊草在用90Y-DOTA-肽-Lym-1處理后1星期，每天更換，以后每星期更換兩次。
殺腫瘤效果。如半橢圓的公式所述計算腫瘤體積(DeNardo等人，臨床癌癥研究，371-79(1997))。在治療前一天確定最初的腫瘤體積。對每組在測量的每天計算平均腫瘤體積；已經完全退化的腫瘤認為體積是零。將腫瘤應答分類如下C，治愈(腫瘤消失并在84天的研究結束時不再生長)；CR，完全退化(腫瘤消失至少7天，但后來又再生長)；PR，部分退化(至少7天內腫瘤體積下降50％或更多，然后再生長)。
統計分析。利用Kruskall Wails等級和檢驗以無反應、部分退化、完全退化和治愈的順序評估治療組中之間在應答中的差異。利用Kruskall Walis檢驗同時評估了存活時間。在3個時間點比較腫瘤體積1個月(26-29天)、2個月(54-57天)和在研究結束時(84天)。如果由于與腫瘤相關的原因殺死動物，最后的體積繼續升高，并且用于后來的時間點的分析中。利用變化的分析測試治療組中的差異。P值是雙尾的，代表各義上的p值。通過只在被發現統計學上為顯著差異的組的亞系內測試，提供多重比較的保護。
結果Scatchard分析利用Scatchard分析評估HB22-7的結合親和力以及Ramos和Raji細胞上CD22受體的數目。測試細胞的最大結合百分率(Bmax)、解離常數(Ka)和每個細胞結合的抗體的數目。表1中顯示的結果是兩個實驗的平均值。
表1
Scatchard分析(表1)顯示在每個細胞的HB22-7抗體結合的數目和Bmax中有將近2.5倍的增加，在Raji細胞對Ramos細胞的Ka中有2倍的增加。
全身的放射自顯影為了評估HB22-7特異性的腫瘤靶向，進行了用111In-21T-BAD-抗-CD22(HB22-7)注射患腫瘤的裸小鼠的全身的放射自顯影。在注射后58小時殺死小鼠，做成切片并且進行放射自顯影(圖2)，如在前所述(DeNardo等人，癌癥371-79(1997))。放射自顯影顯示在Raji腫瘤小鼠中強烈的腫瘤定位和在Ramos腫瘤小鼠中的中等的定位。這一靶向研究是與Scatchard分析一致的，顯示與Raji比較每個Ramos細胞結合了較少的HB22-7。但是，Ramos腫瘤的快速生長，和類似的中心性壞死也可以歸因于對Ramos的明顯低級的靶擊。
RIT和CMRIT的效果在RIT之前24小時、同時或之后24小時(圖3)進行起始的試驗，起始的試驗(081500)使用單獨或結合HB22-7(1.4mg)的125uCi的90Y-DOTA-肽-Lym-1。在這一試驗中，每組有5個小鼠，例外的組是用RIT單獨處理的，有9個小鼠和5個未處理的對照(在表2中小鼠數目制成了表格)。
表2
正如從用90Y-21T-BAD-Lym-1的相似的Raji異種移植的研究所預測的，單獨的RIT導致到21天時最大的平均腫瘤體積的減少，然后腫瘤體積增加。用90Y-21T-BAD-Lym-1(RIT)和HB22-7(CMRIT)處理異種移植體顯示更大的更持續的平均腫瘤體積的減少，這種減少當在24小時后與RIT同時給藥HB22-7時最大。令人吃驚的是，單獨給藥HB22-7導致2-3星期的平均腫瘤體積的穩定，然后有一個逐步的持續的腫瘤體積的減少。
進行幾個其他的重復實驗，得到高度可再生的結果(表2)。匯編來自所有試驗的數據，當用圖比較時，顯示結果與起始的研究高度一致(圖4)。當在RIT的同時和之后24小時給藥HB22-7時，在約21天時最初的腫瘤體積的減少又一次達到最大。在用HB22-7單獨處理的小鼠中，在處理后2星期腫瘤生長開始穩定，接著逐步持續地腫瘤體積減少，在所有隨后的實驗中這種生長的穩定也得以重復。利用變化的分析，當在30天時檢測所有的處理組，差異是高度顯著性的(p＜0.001)。而當在60天時，在所有的處理組中體積減少的分析沒有顯示顯著性的差異(p＝0.39)，在84天時的差異再次是顯著性的(p＝0.003)。圖中觀察到的結果顯示，在RIT/CMRIT組中的體積的減少的差異是高度可重復的，并且與HB單獨處理和未處理的對照不同，但是在所有評估的時間點(30，60和84天)只有RIT處理組(包括CMRIT)中體積的減少的比較沒有發現明顯的差異(p≥0.5)。另外的CMRIT實驗是在RIT48和72小時后HB22-7給藥進行。當與其中在RIT同時和24小時后給予HB22-7的實驗比較時，在給藥RIT和HB22-7之間延長的間歇沒有導致腫瘤體積減少的提高，(數據未顯示)。
應答和治愈的速率是與對腫瘤體積的處理效果一致的(圖5)。用90Y-DOTA-肽-Lym-1單獨處理產生48％的PR、13％的CR和13％的治愈速度。在CMRIT組中，當HB22-7和RIT同時給藥產生45％PR、15％CR和25％的治愈時，整個應答速度最大。但是，在CMRIT組中，當在RIT后24小時給藥HB22-7時，治愈速度是最大的(39％)，這是與未處理的(29％)、RIT單獨的(13％)，24小時前的(10％)和同時的(25％)處理組中觀察到的治愈速度比較得到的。當利用Kruskal Walis試驗在所有的處理組中檢測應答的程度時(治愈比CR更好，比PR更好)，差異在統計學上是顯著性的(p＝0.01)。相對未處理的對照的個別的比較都是統計學上顯著性的(p＜0.05)，例外的RIT單獨(p＝0.06)和HB22-7是給藥于RIT(p＝0.16)之前24小時的。當只有積極的處理組(RIT單獨，CMRIT和HB22-7)的比較并非顯著性差異(p＝0.18)，用HB22-7同時和在24小時后處理的CMRIT組具有最好的觀察到的應答的圖譜。有趣的是用HB22-7單獨處理的組具有最高的治愈速度(47％)，這一速度在與未處理的對照比較時為顯著性的提高(p＜0.05)。
腫瘤體積退化和治愈速度轉化成存活的相似方式。在84天研究時期結束時，38％和42％的未處理和RIT單獨的組分別存活(圖6)。在CMRIT處理組中，當在RIT同時和以后24小時給藥HB22-7時，存活分別提高到67％和50％。利用Kruskal Walis的存活分析對于比較所有的組是顯著性的(p＜0.05)。與應答速率分析相似，在RIT組中的存活的比較沒有發現顯著性的差異(p＝0.41)，但是，當HB22-7在RIT同時或以后24小時給藥時，一致觀察到這些組中有最好的存活。
在用HB22-7單獨處理的組中觀察到最好的整體存活，76％，當與未處理的對照比較時有顯著性的差異(p＝0.02)。
毒性分別通過血液計數和小鼠重量評估血液學的和非血液學的毒性(圖7a-c)。在RIT處理組中的WBC和血小板的最低點分別在14-20和10-14天。WBC和血小板恢復分別大約在處理后的28和21天。WBC和血小板的最低點與利用150uCi的90Y-21T-BAD-Lym-1的前面的研究中的觀察結果一致。RIT的血液學毒性沒有被HB22-7的協同給藥改變。在HB22-7單獨處理的小鼠中沒有檢測到血液學毒性。在所有處理組中的單核細胞計數的分析顯示HB22-7對RIT介導的單核細胞的最低點沒有影響(數據未顯示)。通過小鼠體重的改變評估非血液學毒性，并且發現在所有的處理組中是相當的(圖8)。在任何處理組中沒有因為毒性的死亡。
90Y-DOTA-肽-Lym-1藥物動力學用或不用HB22-7的Raji-腫瘤的小鼠中血液和整個身體90Y-DOTA-肽-Lym-1的清除是相似的(圖9)。血液生物學T1/2α對于RIT是1.4小時，對于之前24小時、同時和之后24小時的各組分別是2.2、2.4和2.0小時。血液生物學T1/2β對于RIT單獨的組是127小時，對于之前24小時、同時和之后24小時的各組分別是133、87和103小時。全身的T1/2對于RIT單獨的組是246小時，對于之前24小時、同時和之后24小時的各組分別是207、207和196小時。在RIT中加入HB22-7不改變90Y-DOTA-肽-Lym-1的藥物動力學。
討論設計Raji異種移植研究以確定當與RIT結合時抗CD22mAb(HB22-7)是否將產生其他的或協同的效果，以便增強細胞凋亡和/或低劑量速率輻射誘導的DNA損傷。當其用于評估單獨利用90Y-DOTA-肽-Lym-1RIT的RIT的毒性和效率時，已經證明Raji異種移植裸小鼠模型是有用的(O’Donnell等人，癌癥生物治療和放射藥物動力學，13351-361(1998))。在這一臨床前的模型中的應答轉化成人臨床實驗中的明顯的效率(O’Donnell等人，抗癌研究.203647-55(2000)；O’Donnell等人，核酸醫學雜志，40216(1999)(摘要))。
在這一實施例中所述的研究中，在90Y-DOTA-肽-Lym-1(125uCi)中加入抗CD22 mAb HB22-7增強了RIT的效率，而沒有任何毒性的改變。以前的用150和200uCi的90Y-21T-BAD-Lym-1的Raji異種移植的研究產生的應答和治愈率，是可以與在本研究中觀察到的那些比較的(O’Donnel等人，(1998)，出處同上)。根據這些以前利用2IT-BAD聯結子的研究，選擇125uCi劑量的90Y-DOTA-肽-Lym-1。當利用2IT-BAD的以前的研究證明利用200uCi劑量有最大的效率時，選擇125uCi是基于這樣的假說，即HB22-7將與RIT是協同的或增益性的，較低的劑量將可以更好地評估這些效率。這一實施例的研究利用了新的銜接物(DOTA-肽)，該銜接物過去未曾在淋巴瘤異種移植模型中檢測到。設計DOTA肽銜接物用于增強未結合的放射藥物的肝降解，從而導致更令人滿意的生物分布。盡管腫瘤特異吸收在本研究中沒有詳細評估，用125uCi的90Y-DOTA-肽-Lym-1單獨觀察到的毒性情況是可接受的，無治療相關的致死率并具有可預測的白細胞和血小板最低點。
根據體外研究選擇HB22-7，這些研究證明了原細胞程序死亡和信號效應(Tuscano等人，血液，941382-1392(1999))。使用的HB22-7的治療劑量是根據經驗的，但是，它是根據在體外顯示對誘導細胞凋亡有效的量，并且將此推及到小鼠模型中。另外，當配制HB22-7的劑量時考慮到用于人臨床試驗的Rituximab劑量的等同物(當在人相對于小鼠中調整體表面積差異時)。根據這是唯一現有的顯示淋巴瘤治療效果的裸mAb的事實使用Rituximab的劑量的近似值，假定Rituximab的最佳劑量目前尚不明確。
設計研究來評估單獨的HB22-7、RIT和HB22-7的結合以及三個不同順序的結合的效果。單獨用90Y-DOTA-肽-Lym-1觀察到的腫瘤體積的減少是與用90Y-21T-BAD-Lym-1的與應答的時間、數量級和持久度有關的前面的研究一致的(O’Donnel等人，1998，出處同上)。單獨的RIT導致了在治療后14天腫瘤體積約有50％的減少。當在最大的體積減少的大約的時間點(21-30天)時評估時，給RIT添加HB22-7明顯地以順序特異的方式增強了應答的程度。好像當在RIT同時或之后24小時給藥時，加入HB22-7是最有效的。明顯的體積減少的模式是高度可再復的。獨立的重復試驗顯示相似的腫瘤體積減少的模式和程度。腫瘤體積的進一步減少轉變成優良的應答速度和存活率。單獨的RIT產生13％的CR和13％的治愈，當與RIT同時給藥時，加入HB22-7提高治愈速度25％，當在RIT之后24小時給藥HB22-7時，提高治愈速度39％。
這是第一次，將第二種單克隆抗體與RIT結合，并且顯示了利用具有已經充分確定的生理特性的單克隆抗體或其他試劑的潛力，所述特性為可以提高效率而不增強毒性。
令人驚奇地，當與所有其他處理組比較時，用單獨的HB22-7處理小鼠產生顯著的腫瘤體積的減少，以及優良的治愈和存活率。幾個獨立的試驗再次產生了與延遲的最初的腫瘤體積的穩定性高度一致的結果，然后，腫瘤體積的減少約在處理后14天開始。這轉變成在任何處理組中觀察到的最佳的治愈和整體存活率。
總之，當單獨給藥時，與其他處理方案包括CMRIT相比，本發明的抗體已經被證明能提供在腫瘤體積的減少、治愈速率和整體存活方面的上好的結果，所述CMRIT目前被視為最先進的治療NHL的治療方法。
實施例3抗CD22抗體的序列分析VH和輕鏈基因的利用利用Rneasy Mini試劑盒(Qiagen Chatsworth，CA)，從1-10×105雜交瘤細胞中提取細胞質RNA.利用寡聚dT引物和Surperscript試劑盒(Gibco BRL，Gaithersburg，MD)由細胞質RNA合成cDNA第一鏈。利用1ul的cDNA作為VH基因的PCR擴增的模板。在100ul的體積的反應混合物中進行PCR擴增，反應混合物由10mM Tris-HCl(pH8.3)、50mM KCl、1.5mM MgCl2、200uM dNTP(Perkin Elmer，Foster城，CA)、50pmol各個引物和5U的Taq聚合酶(ISC生物表達，Kaysville，UT)組成。擴增進行30個循環(94℃1分鐘，58℃一分鐘，72℃一分鐘；熱循環儀，Perkin Elmex)。VH基因是利用混雜的有意義的5’VH引物(Ms VHE5‘GGG AAT TCG AGG TGC AGC TGC AGGAGT CTG G3’；SEQ ID NO2)如前所述(Kantor等人，免疫學雜志1581175-86(1996))，和與Cμ編碼區互補的反義引物(引物Cμ-in5’-GAG GGG GAC ATT TGG GAA GGA CTG3’；SEQ ID NO3)，或Cγ區(引物Cγ15’GAG TTC CAG GTC ACT GTC ACT GGC 3’；SEQ IDNO4)來擴增的。
利用有意義的Vκ引物[5’ATG GGC(AT)TC AAG ATG GAG TCACA(GT)(AT)(CT)(CT)C(AT)G G3’；SEQ ID NO5]和一個Cλ反義引物(5’ACT GGA TGG TGG GAA GAT G3’；SEQ ID NO6)擴增輕鏈CDNA.
利用不同的有意義的Vκ引物(5’ATG AAG TTG CCT GTT AGGCTG TTG GTG CTG 3’；SEQ ID NO7)擴增HB22-23輕鏈序列。
利用QIAquick凝膠純化試劑盒(Qiagen)從瓊脂糖凝膠中純化擴增的PCR產物，并且在擴增后利用Perkin Elmer Dye末端測序系統，以Ampli Taq DNA聚合酶和最初的PCR擴增的相同引物利用ABI 377PRISM DNA序列儀在兩個方向直接測序用于。將所有的VH和輕鏈區域在有意義和反義DNA鏈上都進行完全測序。
抗CD22單克隆抗體HB22-5、HB22-7、HB22-13、HB22-23和HB22-196的VH和Vκ氨基酸序列的比對如圖10和17所示。圖11-16顯示來自雜交瘤HB22-5(SEQ ID NOS8和9)，HB22-7(SEQ ID NOS10和11)；HB22-13(SEQ ID NOS12和13)；HB22-23(SEQ ID NOS14和15)；HB22-33(SEQ ID NOS16和17)；和HB-22-196(SEQ ID NOS18和19)的抗CD22 Abs的重鏈VH-D-JH的接合的核苷酸和氨基酸序列。圖18-33顯示來自雜交瘤HB22-5(SEQ ID NOS20和21)；HB22-7(SEQID NOS22和23)；HB22-13(SEQ ID NOS24-25)，HB22-23(SEQ IDNO26-27)；HB22-33(SEQ ID NOS28-29)；和HB22-196(SEQ IDNOS30和31)的抗CD22Abs的κ輕鏈V-J恒定區接合的核苷酸和推斷的氨基酸序列。
序列表<110>Duke UniversityTedder，Thomas F.
<120>自身免疫疾病的藥劑和治療方法<130>5405.306WO<140>PCT/US03/05549<141>2003-02-21<150>US60/420,472<151>2002-10-21<150>US60/359,419<151>2002-02-21<160>31<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>847<212>PRT<213>人<400>1Met His Leu Leu Gly Pro Trp Leu Leu Leu Leu Val Leu Glu Tyr Leu1 5 10 15Ala Phe Ser Asp Ser Ser Lys Trp Val Phe Glu His Pro Glu Thr Leu20 25 30Tyr Ala Trp Glu Gly Ala Cys Val Trp Ile Pro Cys Thr Tyr Arg Ala35 40 45Leu Asp Gly Asp Leu Glu Ser Phe Ile Leu Phe His Asn Pro Glu Tyr50 55 60
Asn Lys Asn Thr Ser Lys Phe Asp Gly Thr Arg Leu Tyr Glu Ser Thr65 70 75 80Lys Asp Gly Lys Val Pro Ser Glu Gln Lys Arg Val Gln Phe Leu Gly85 90 95Asp Lys Asn Lys Asn Cys Thr Leu Ser Ile His Pro Val His Leu Asn100 105 110Asp Ser Gly Gln Leu Gly Leu Arg Met Glu Ser Lys Thr Glu Lys Trp115 120 125Met Glu Arg Ile His Leu Asn Val Ser Glu Arg Pro Phe Pro Pro His130 135 140Ile Gln Leu Pro Pro Glu Ile Gln Glu Ser Gln Glu Val Thr Leu Thr145 150 155 160Cys Leu Leu Asn Phe Ser Cys Tyr Gly Tyr Pro Ile Gln Leu Gln Trp165 170 175Leu Leu Glu Gly Val Pro Met Arg Gln Ala Ala Val Thr Ser Thr Ser180 185 190Leu Thr Ile Lys Ser Val Phe Thr Arg Ser Glu Leu Lys Phe Ser Pro195 200 205Gln Trp Ser His His Gly Lys Ile Val Thr Cys Gln Leu Gln Asp Ala210 215 220Asp Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Thr Val Gln Leu Asn Val Lys His225 230 235 240
Thr Pro Lys Leu Glu Ile Lys Val Thr Pro Ser Asp Ala Ile Val Arg245 250 255Glu Gly Asp Ser Val Thr Met Thr Cys Glu Val Ser Ser Ser Asn Pro260 265 270Glu Tyr Thr Thr Val Ser Trp Leu Lys Asp Gly Thr Ser Leu Lys Lys275 280 285Gln Asn Thr Phe Thr Leu Asn Leu Arg Glu Val Thr Lys Asp Gln Ser290 295 300Gly Lys Tyr Cys Cys Gln Val Ser Asn Asp Val Gly Pro Gly Arg Ser305 310 315 320Glu Glu Val Phe Leu Gln Val Gln Tyr Ala Pro Glu Pro Ser Thr Val325 330 335Gln Ile Leu His Ser Pro Ala Val Glu Gly Ser Gln Val Glu Phe Leu340 345 350Cys Met Ser Leu Ala Asn Pro Leu Pro Thr Asn Tyr Thr Trp Tyr His355 360 365Asn Gly Lys Glu Met Gln Gly Arg Thr Glu Glu Lys Val His Ile Pro370 375 380Lys Ile Leu Pro Trp His Ala Gly Thr Tyr Ser Cys Val Ala Glu Asn385 390 395 400Ile Leu Gly Thr Gly Gln Arg Gly Pro Gly Ala Glu Leu Asp Val Gln405 410 415
Tyr Pro Pro Lys Lys Val Thr Thr Val Ile Gln Asn Pro Met Pro Ile420 425 430Arg Glu Gly Asp Thr Val Thr Leu Ser Cys Asn Tyr Asn Ser Ser Asn435 440 445Pro Ser Val Thr Arg Tyr Glu Trp Lys Pro His Gly Ala Trp Glu Glu450 455 460Pro Ser Leu Gly Val Leu Lys Ile Gln Asn Val Gly Trp Asp Asn Thr465 470 475 480Thr Ile Ala Cys Ala Arg Cys Asn Ser Trp Cys Ser Trp Ala Ser Pro485 490 495Val Ala Leu Asn Val Gln Tyr Ala Pro Arg Asp Val Arg Val Arg Lys500 505 510Ile Lys Pro Leu Ser Glu Ile His Ser Gly Asn Ser Val Ser Leu Gln515 520 525Cys Asp Phe Ser Ser Ser His Pro Lys Glu Val Gln Phe Phe Trp Glu530 535 540Lys Asn Gly Arg Leu Leu Gly Lys Glu Ser Gln Leu Asn Phe Asp Ser545 550 555 560Ile Ser Pro Glu Asp Ala Gly Ser Tyr Ser Cys Trp Val Asn Asn Ser565 570 575Ile Gly Gln Thr Ala Ser Lys Ala Trp Thr Leu Glu Val Leu Tyr Ala580 585 590
Pro Arg Arg Leu Arg Val Ser Met Ser Pro Gly Asp Gln Val Met Glu595 600 605Gly Lys Ser Ala Thr Leu Thr Cys Glu Ser Asp Ala Asn Pro Pro Val610 615 620Ser His Tyr Thr Trp Phe Asp Trp Ash Asn Gln Ser Leu Pro His His625 630 635 640Ser Gln Lys Leu Arg Leu Glu Pro Val Lys Val Gln His Ser Gly Ala645 650 655Tyr Trp Cys Gln Gly Thr Asn Ser Val Gly Lys Gly Arg Ser Pro Leu660 665 670Ser Thr Leu Thr Val Tyr Tyr Ser Pro Glu Thr Ile Gly Arg Arg Val675 680 685Ala Val Gly Leu Gly Ser Cys Leu Ala Ile Leu Ile Leu Ala Ile Cys690 695 700Gly Leu Lys Leu Gln Arg Arg Trp Lys Arg Thr Gln Ser Gln Gln Gly705 710 715 720Leu Gln Glu Asn Ser Ser Gly Gln Ser Phe Phe Val Arg Asn Lys Lys725 730 735Val Arg Arg Ala Pro Leu Ser Glu Gly Pro His Ser Leu Gly Cys Tyr740 745 750Asn Pro Met Met Glu Asp Gly Ile Ser Tyr Thr Thr Leu Arg Phe Pro755 760 765
Glu Met Asn Ile Pro Arg Thr Gly Asp Ala Glu Ser Ser Glu Met Gln770 775 780Arg Pro Pro Arg Thr Cys Asp Asp Thr Val Thr Tyr Ser Ala Leu His785 790 795 800Lys Arg Gln Val Gly Asp Tyr Glu Asn Val Ile Pro Asp Phe Pro Glu805 810 815Asp Glu Gly Ile His Tyr Ser Glu Leu Ile Gln Phe Gly Val Gly Glu820 825 830Arg Pro Gln Ala Gln Glu Asn Val Asp Tyr Val Ile Leu Lys His835 840 845<210>2<211>31<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>2gggaattcga ggtgcagctg caggagtctg g31<210>3<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>3gagggggaca tttgggaagg actg24
<210>4<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>4gagttccagg tcactgtcac tggc24<210>5<211>31<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<220>
<221>misc_特征<222>(7)..(7)<223>n為A或T<220>
<221>misc_特征<222>(24)..(24)<223>n為G或T<220>
<221>misc_特征<222>(25)..(25)<223>n為A或T<220>
<221>misc_特征<222>(26)..(26)<223>n為C或T<220>
<221>misc_特征<222>(27)..(27)<223>n為C或T<220>
<221>misc_特征<222>(29)..(29)<223>n為A或T<400>5atgggcntca agatggagtc acannnncng g31<210>6<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>6actggatggt gggaagatg 19<210>7<211>30<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>7atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg 30<210>8<211>357<212>DNA<213>人<400>8gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact gactacacca tgaactgggt gaagcagagc120catggaaaga accttgagtg gattggactt cttcatcctt tcaatggtgg tactagctac180aaccagaagt tcaagggcaa ggccacatta tctgtagaca agtcatccag cacagccttc240atggagctcc tcagtctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagagggaca300ggtcggaact atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357<210>9<211>119<212>PRT<213>人<400>9Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala1 5 10 15Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr20 25 30Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Leu Leu His Pro Phe Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe50 55 60Lys Gly Lys Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe65 70 75 80Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys85 90 95Ala Arg Gly Thr Gly Arg Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110Thr Ser Val Thr Val Ser Ser115<210>10<211>351<212>DNA<213>人<400>10gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60acatgcaccg tctcagggtt ctcattaagc gactatggtg taaactgggt tcgccagatt120ccaggaaagg gtctggagtg gctgggaata atatggggtg atggaaggac agactataat180tcagctctca aatccagact gaacatcagc aaggacaact ccaagagcca agttttcttg240aaaatgaaca gtctgaaagc tgatgacaca gccaggtact actgtgccag agcccccggt300aatagggcta tggagtactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351<210>11<211>117<212>PRT<213>人<400>11Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln1 5 10 15Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr20 25 30Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ile Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Arg Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys50 55 60Ser Arg Leu Asn Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu65 70 75 80Lys Met Asn Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg Ala Pro Gly Asn Arg Ala Met Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser100 105 110Val Thr Val Ser Ser115<210>12<211>363<212>DNA<213>人<400>12gaggtgcagc tgcaggagtc tggaggaggc ttggtacagc ctgggggttc tctgagactc 60tcctgtgcaa cttctgggtt caccttcatt gattactaca tgaactgggt ccgccagcct120ccaggaaagg cacttgagtg gttgggtttt attaaaaaca aatttaatgg ttacacaaca180gaatacaata catctgtgaa gggtcggttc accatctcca gagataattc ccaaagcatc240ctctatcttc aaatgaacac cctgagagct gaggacagtg ccacttatta ctgtgcaaga300gggctgggac gtagctatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc360tca 363<210>13<211>121
<212>PRT<213>人<400>13Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ile Asp Tyr20 25 30Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu35 40 45Gly Phe Ile Lys Asn Lys Phe Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Thr50 55 60Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile65 70 75 80Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr85 90 95Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Gly Arg Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly100 105 110Gln Gly Thr Set Val Thr Val Ser Ser115 120<210>14<211>357<212>DNA<213>人<400>14gaggtgcagc tgcaggagtc tggaggaggg cttggtgcaa cctggagatc catgaaactc60
tcctgtgttg cctctggatt cactttcagt tactactgga tgaactgggt ccgccagtct120ccagagaagg ggcttgagtg gattgctgaa attagattga aatctaataa ttatgcaaca180cattatgcgg agtctgtgaa agggaggttc accatctcaa gagatgattc caaaagtagt240gtctacctgc aaatgaacaa cttaagagct gaagacactg gcatttatta ctgtaccagg300tatgatggtt cctcccggga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca 357<210>15<211>119<212>PRT<213>人<400>15Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gly Ala Thr Trp Arg1 5 10 15Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr20 25 30Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu50 55 60Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser65 70 75 80Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr85 90 95Tyr Cys Thr Arg Tyr Asp Gly Ser Ser Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser115<210>16<211>354<212>DNA<213>人<400>16gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctggc ctcgtgaaac cttctcagtc tctgtctctc 60acctgctctg tcactggcta ctccatcacc agtggttatt actggaactg gatccggcag120ccaggaaaca aactggaatg gatgggctac attaggtacg acggtagcaa taactaccca180tctctcaaaa atcgaatctc catcactcgt gacacatcta agaaccagtt tttcaagttg240ctgaagttga attctgtgac tactgaggac acagctacat attactgtgc aagagggggg300attacggttg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 354<210>17<211>118<212>PRT<213>人<400>17Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln1 5 10 15Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly20 25 30Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp35 40 45
Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu50 55 60Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe65 70 75 80Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Gly Gly Ile Thr Val Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr100 105 110Ser Val Thr Val Ser Ser115<210>18<211>366<212>DNA<213>人<220>
<221>misc_特征<222>(173)..(173)<223>n為I<400>18gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctgac ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60tcctgtaagg cttctggtta ctcattcatt ggctattaca tgcactggct gaagcagagc 120catggaaaga gccttgagtg gattggagct gttaatccta acactgctgg tcntacctac 180aaccagaggt tcaaggacaa ggccatatta actgtagaca agtcatccaa cacagcctat 240atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgttc aagagtggac 300tatgatgact acgggtactg gttcttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 360
tcctca 366<210>19<211>122<212>PRT<213>人<400>19Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala1 5 10 15Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Gly Tyr20 25 30Tyr Met His Trp Leu Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Arg Val Asn Pro Asn Thr Ala Gly Leu Thr Tyr His Gly Lys Ser50 55 60Leu Glu Trp Ile Gly Arg Val Asn Pro Asn Thr Ala Gly Leu Thr Tyr65 70 75 80Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ser Arg Val Asp Tyr Asp Asp Tyr Gly Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp100 105 110Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser115 120<210>20
<211>410<212>DNA<213>人<400>20aagatggagt cacagaccca ggtcttcgta tttctactgc tctgtgtgtc tggtgctcat 60gggagtattg tgatgaccca gactcccaaa ttcctgcttg tatcaacagg agacagggtt120accattacct gcaaggccag tcagactgtg actaatgatt tagcttggta ccaacagaag180ccagggcagt ctcctaaact gctgatatac tatgcatcca atcgctacac tggagtccct240gatcgcttca ctggcagtgg atatgggacg gacttcactt tcaccatcaa cactgtgcag300gctgaagacc tggcagttta tttctgtcag caggattata gctctcctct cacgttcggt360gctgggacca agctggaact gaaacgggct gatgctgcac caactgtatc 410<210>21<211>135<212>PRT<213>人<400>21Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Phe Val Phe Leu Leu Leu Cys Val Ser1 5 10 15Gly Ala His Gly Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu20 25 30Val Ser Thr Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Thr35 40 45Val Thr Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro50 55 60Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80Arg Phe Thr Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Asn85 90 95Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr100 105 110Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg115 120 125Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135<210>22<211>410<212>DNA<213>人<400>22aagatggagt cacagaccca ggtcttcgta tttctactgc tctgtgtgtc tggtgctcat 60gggagtattg tgatgaccca gactcccaaa ttcctgcttg tatcagcagg agacaggatt120accttaacct gcaaggccag tcagagtgtg actaatgatg tagcttggta ccaacagaag180ccagggcagt ctcctaaact gctgatatac tatgcatcca atcgctacac tggagtccct240gatcgcttca ctggcagtgg atatgggacg gatttcactt tcaccatcag cactgtgcag300gctgaagacc tggcagttta tttctgtcag caggattata ggtctccgtg gacgttcggt360ggaggcacca agctggaaat caaacgggct gatgctgcac caactgtatc 410<210>23<211>135<212>PRT<213>人
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85 90 95Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr100 105 110Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg115 120 125Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135<210>26<211>410<212>DNA<213>人<400>26aagatggagt cacagaccca ggtcttcgta tttctactgc tctgtgtgtc tggtgctcat 60gggagtattg tgatgaccca gactcccaaa ttcctgcttg tatcagcagg agacagggtc120accataagct gcaaggccag tcagagtgtg agtaatgatg tagcttggta ccaacagaag180ccagggcagt ctcctaaact gctgatatac tatgcatcca agcgctatac tggagtccct240gatcgcctca ctggcagtgg atatgggacg gatttcactt tcaccatcag cactgtgcag300gctgaagacc tggcagttta tttctgtcag caggatcata gctatccgtg gacgttcggt360ggaggcacca agctggagat caaacgggct gatgctgcac caactgtatc 410<210>27<211>135<212>PRT<213>人<400>27Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Phe Val Phe Leu Leu Leu Cys Val Ser
1 5 10 15Gly Ala His Gly Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu20 25 30Val Ser Ala Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser35 40 45Val Ser Asn Asp Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro50 55 60Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Lys Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp65 70 75 80Arg Leu Thr Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser85 90 95Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp His100 105 110Ser Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg115 120 125Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135<210>28<211>419<212>DNA<213>人<400>28atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60gttgtgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc120
tcttgcagat ctagtcagag ccttgtacac agtaatggaa acacctattt acattggtac180ctgcagaagc caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct240ggggtcccag ataggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc300agagtggagg ctgaggatct gggagtttat ttctgctctc aaagtacaca tgttccgtac360acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatc 419<210>29<211>139<212>PRT<213>人<400>29Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala1 5 10 15Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val20 25 30Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu35 40 45Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro50 55 60Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser65 70 75 80Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr85 90 95Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys
100 105 110Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu115 120 125Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135<210>30<211>410<212>DNA<213>人<400>30aagatggagt cacagaccca ggtcttcata tccatactgc tctggttata tggagctgat 60gggaacattg taatgaccca atctcccaaa tccatgtcca tgtcagtagg agagagggtc120accttgacct gcaaggccag tgagaatgtg gttacttatg tttcctggta tcaacagaaa180ccagagcagt ctcctaaact gctgatatac ggggcatcca accggtacac tggggtcccc240gatcgcttca caggcagtgg atctgcaaca gatttcactc tgaccatcag cagtgtgcag300gctgaagacc ttgcagatta tcactgtgga cagggttaca gctatccgta cacgttcgga360ggggggacca agctggaaat aaaacgggct gatgctgcac caactgtatc 410<210>31<211>135<212>PRT<213>人<400>31Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Ile Leu Leu Trp Leu Tyr1 5 10 15Gly Ala Asp Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser
20 25 30Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asn35 40 45Val Val Thr Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Gln Ser Pro50 55 60Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp65 70 75 80Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser85 90 95Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Gly Tyr100 105 110Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg115 120 125Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 13512權利要求
1.一種治療被診斷為自身免疫疾病的人患者的方法，包括(1)對所述的人患者給藥有效量的阻斷性抗CD22單克隆抗體，其中所述的抗體包含含有與SEQ ID NO9(HB22-5 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQID NO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97；或SEQ ID NO13(HB22-13VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98；或SEQ ID NO19(HB22-196 VH序列)的氨基酸1到100的序列至少具有大約95％的序列同一性的VH序列的重鏈；和(2)檢測所述的自身免疫疾病對所述治療的應答。
2.權利要求1所述的方法，其中所述的抗體包含含有與SEQ IDNO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97；或SEQ ID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98的序列至少具有大約95％的序列同一性的VH序列的重鏈。
3.權利要求2所述的方法，其中所述的抗體包含選自SEQ IDNO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97，SEQ ID NO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100；和SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98的VH序列。
4.一種治療被診斷為自身免疫疾病的人患者的方法，包括(1)對所述的人患者給藥有效量的阻斷性抗CD22單克隆抗體，其中所述的抗體包含含有與SEQ ID NO21(HBA22-5 Vκ序列)；或SEQ IDNO23(HB22-7 Vκ序列)；或SEQ ID NO25(HB22-13 Vκ序列)；或SEQID NO27(HB22-23 Vκ序列)；或SEQ ID NO29(HB22-33 Vκ序列)；或SEQ ID NO31(HB22-196 Vκ序列)的氨基酸序列至少具有大約95％的序列同一性的Vκ序列的輕鏈；和(2)檢測所述的自身免疫疾病對所述的治療的應答。
5.權利要求4所述的方法，其中所述的抗體包含含有與SEQ IDNO23(HB22-7 Vκ序列)；或SEQ ID NO27(HB22-23 Vκ序列)；或SEQID NO29(HB22-33 Vκ序列)的氨基酸序列至少具有大約95％的序列同一性的Vκ序列的輕鏈。
6.權利要求5所述的方法，其中所述的抗體包含選自SEQ IDNO23(HB22-7 Vκ序列)；SEQ ID NO27(HB22-23 Vκ序列)；和SEQ IDNO29(HB22-33 Vκ序列)的氨基酸序列的Vκ序列。
7.權利要求1所述的方法，其中所述的抗體包含選自SEQ IDNO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97和SEQ ID NO23(HB22-7 Vκ序列)的氨基酸序列；SEQ ID NO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100和SEQ ID NO27(HB22-23 VH序列)；和SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98和SEQ ID NO29(HB22-33 Vκ序列)的氨基酸序列的VH和Vκ序列。
8.權利要求1所述的方法，其中所述的治療沒有伴隨任何其他自身免疫疾病的治療。
9.權利要求1所述的方法，其中所述的抗體是完整的抗體的一個片斷。
10.權利要求9所述的方法，其中所述的抗體選自Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片斷、雙體、線性抗體、單鏈抗體分子和由抗體片斷形成的多重特異性抗體。
11.權利要求1所述的方法，其中所述的抗體包含抗原特異性，并且能有效地結合CD22分子的兩個開始的Ig類似區域，或結合在SEQID NO1的天然的人CD22(hCD22)的開始的兩個Ig類似區域內的一個表位，并進一步具有一種另外的抗原特異性。
12.權利要求10所述的方法，其中所述的抗體是雙特異性抗體。
13.權利要求12所述的方法，其中所述的抗體另外結合了CD22的另一個表位。
14.權利要求1所述的方法，其中所述的抗體是嵌合的。
15.權利要求1所述的方法，其中所述的抗體是人源化的。
16.權利要求1所述的方法，其中所述的抗體是人的。
17.權利要求1所述的方法，其中所述的抗體是在靜脈內給藥的。
18.權利要求17所述的方法，其中所述的抗體是每周通過靜脈內輸注給藥的。
19.權利要求1所述的方法，其中所述的人患者另外給藥一種抗CD20抗體。
20.權利要求7所述的方法，其中所述的抗體是嵌合的。
21.權利要求7所述的方法，其中所述的抗體是人源化的。
22.權利要求7所述的方法，其中所述的抗體是人的。
23.權利要求4所述的方法，其中所述的治療沒有伴隨任何其他自身免疫疾病的治療。
24.權利要求4所述的方法，其中所述的抗體是完整抗體的片斷。
25.權利要求24所述的方法，其中所述的抗體選自Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片斷、雙體、線性抗體、單鏈抗體分子和由抗體片斷形成的多特異性抗體。
26.權利要求4所述的方法，其中所述的抗體包括抗原特異性并能有效地結合CD22分子的開始的兩個Ig類似區域，或結合SEQ ID NO1的天然人CD22(hCD22)的開始兩個Ig類似區域內的表位，并且進一步具有一種另外的抗原特異性。
27.權利要求25所述的方法，其中所述的抗體是雙特異性抗體。
28.權利要求27所述的方法，其中所述的抗體另外結合了CD22的另一個表位。
29.權利要求4所述的方法，其中所述的抗體是嵌合的。
30.權利要求4所述的方法，其中所述的抗體是人源化的。
31.權利要求4所述的方法，其中所述的抗體是人的。
32.權利要求4所述的方法，其中所述的抗體是經靜脈內給藥的。
33.權利要求32所述的方法，其中所述的抗體是每周靜脈內輸注給藥的。
34.權利要求4所述的方法，其中所述的人患者另外給藥一種抗CD20抗體。
35.一種包含編碼具有與SEQ ID NO9(HB22-5 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97；或SEQID NO13(HB22-13 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ IDNO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98；或SEQ ID NO19(HB22-196 VH序列)的氨基酸1到100的序列至少有大約95％的序列同一性的VH序列的抗體重鏈可變區的核酸的分離的核酸分子。
36.一種包含編碼具有與SEQ ID NOA21(HB22-5 Vκ序列)；或SEQ ID NO23(HB22-7 Vκ序列)；或SEQ ID NO25(HB22-13 Vκ序列)；或SEQ ID NO27(HB22-23 Vκ序列)；或SEQ ID NO29(HB22-33 Vκ序列)；或SEQ ID NO31(HB22-196 Vκ序列)的氨基酸序列至少具有大約95％的序列同一性的Vκ序列的抗體輕鏈可變區的核酸的分離的核酸分子。
37.一種包含編碼選自SEQ ID NO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97；SEQ ID NO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100；和SEQ IDNO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98的VH序列的核酸的分離的核酸分子。
38.一種包含編碼選自SEQ ID NO23(HB22-7 Vκ序列)；SEQ IDNO27(HB22-23 Vκ序列)；和SEQ ID NO29(HB22-33 Vκ序列)的氨基酸序列的Vκ序列的核酸的分離的核酸分子。
全文摘要
本發明涉及利用具有獨特生理特性的抗CD－22單克隆抗體的治療方法。具體地說，本發明涉及通過給藥有效量的特異地結合開始的兩個Ig－類似區域或在天然的人CD22(hCD22)內的開始的兩個Ig－類似區域內的表位的阻斷性抗CD22的單克隆抗體來治療B細胞惡性腫瘤和自身免疫疾病的方法。
文檔編號A61B5/055GK1646161SQ03808973
公開日2005年7月27日 申請日期2003年2月21日 優先權日2002年2月21日
發明者T·F·特德 申請人:杜克大學