專利名稱：組蛋白脫乙酰酶抑制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑和其制備方法。
背景技術：
真核染色質結構和基因表達通過組蛋白乙酰基轉移酶(HAT)的組蛋白乙酰化以及組蛋白脫乙酰酶(HDAC)的脫乙酰化調節。已知HDAC抑制劑會誘導癌細胞分化和死亡，并預期可用作抗腫瘤藥(Marks，P.A.，Richon，V.M.，和Rifkind，R.A.(2000).Histone deacetylase inhibitorsInducers ofdifferentiation or apoptosis of transformed cells.J.Natl.Cancer Inst.92，1210-1216；Yoshida，M.，Horinouchi，S.，和Beppu，T.(1995).Trichostatin Aand trapoxinnovel chemical probes for the role of histone acetylation inchromatin structure and function.Bioessays 17，423-430；Bernhard，D.，Lffler，M.，Hartmann，B.L.，Yoshida，M.，Kofler，R.，和Csordas，A.(1999).Interactionbetween dexamethasone and butyrate in apoptosis inductionnon-additive inthymocytes and synergistic in a T cell-derived leukemia cell line.Cell Death Diff.6，609-607)。
事實上，在美國已開始了對一些在動物試驗中有效作為抗腫瘤藥的HDAC抑制劑的臨床研究(Nakajima，H.，Kim，Y.B.，Terano，H.，Yoshida，M.，和Horinouchi，S.(1998).FR901228，a potent antitumor antibiotic，is anovel histone deacetylase inhibitor.Exp.Cell Res.241，126-133；Saito，A.，Yamashita，T.，Mariko，Y.，Nosaka，Y.，Tsuchiya，K.，Ando，T.，Suzuki，T.，Tsuruo，T.，和Nakanishi，O.(1999).A synthetic inhibitor of histonedeacetylase，MS-27-275，with marked in vivo antitumor activity against humantumors.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96，4592-4597)。
曲古抑菌素(Trichostatin)A(TSA)為眾所周知的特異性HDAC抑制劑(Yoshida，M.，Kijima，M.，Akita，M.，和Beppu，T.(1990).Potent and specificinhibition of mammalian histone deacetylase both in vivo and in vitro bytrichostatin A.J.Biol.Chem.265，17174-17179)。實際上，已知TSA會誘導分化為白血病細胞、神經元細胞、乳腺癌細胞等(Yoshida，M.，Nomura，S.，和Beppu，T.Effects of trichostatins on differentiation of murineerythroleukemia cells.Cancer Res.473688-3691，1987；Hoshikawa，Y.，Kijima，M.，Yoshida，M.，和Beppu，T.Expression of differentiation-relatedmarkers in teratocarcinoma cells via histone hyperacetylation by trichostatin A.Agric.Biol.Chem.551491-1495，1991；Minucci，S.，Horn，V.，Bhattacharyya，N.，Russanova，V.，Ogryzko，V.V.，Gabriele，L.，Howard，B.H.，和Ozato，K.A histone deacetylase inhibitor potentiates retinoid receptor action inembryonal carcinoma cells.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9411295-11300，1997；Inokoshi，J.，Katagiri，M.，Arima，S.，Tanaka，H.，Hayashi，M.，Kim，Y.B.，Furumai，R.，Yoshida，M.，Horinouchi，S.，和Omura，S.(1999).Neuronaldifferentiation of Neuro 2a cells by inhibitors of cell progression，trichostatin Aand butyrolactone I.Biochem.Biophys.Res.Commun.256，372-376；Wang，J.，Saunthararajah，Y.，Redner，R.L.，和Liu，J.M.Inhibitors ofhistone deacetylaserelieve ETO-mediated repression and induce differentiation of AML l-ETOleukemia cells.Cancer Res.592766-2769，1999；Munster，P.N.，Troso-Sandoval，T.，Rosen，N.，Rifkind，R.，Marks，P.A.，和Richon，V.M.The histone deacetylase inhibitor suberoylanilide hydroxamic acid inducesdifferentiation of human breast cancer cells.Cancer Res.618492-8497，2001；Ferrara，F.F.，Fazi，F.，Bianchini，A.，Padula，F.，Gelmetti，V.，Minucci，S.，Mancini，M.，Pelicci，P.G.，Lo Coco，F.，和Nervi，C.Histonedeacetylase-targeted treatment restores retinoic acid signaling and differentiationin acute myeloid leukemia.Cancer Res.612-7，2001；Gottlicher，M.，Minucci，S.，Zhu，P.，Kramer，O.H.，Schimpf，A.，Giavara，S.，Sleeman，J.P.，Lo Coco，F.，Nervi，C.，Pelicci，P.G.，和Heinzel，T.Valproic acid definesa novel class of HDAC inhibitors inducing differentiation of transformed cells.EMBO J.206969-6978，2001)。另外，已知當與通過不同于HDAC抑制劑的機理激活基因表達的藥物聯合使用時，TSA的分化誘導和細胞死亡誘導活性會協同增加。例如，通過聯合能激活作為核受體的視黃酸受體的視黃酸使用HDAC抑制劑會促進癌細胞分化，從而誘導與分化有關的基因表達(Minucci，S.，Horn，V.，Bhattacharyya，N.，Russanova，V.，Ogryzko，V.V.，Gabriele，L.，Howard，B.H.，和Ozato，K.A histone deacetylase inhibitorpotentiates retinoid receptor action in embryonal carcinoma cells.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9411295-11300，1997；Ferrara，F.F.，Fazi，F.，Bianchini，A.，Padula，F.，Gelmetti，V.，Minucci，S.，Mancini，M.，Pelicci，P.G.，Lo Coco，F.，和Nervi，C.Histone deacetylase-targeted treatment restores retinoicacid signaling and differentiation in acute myeloid leukemia.Cancer Res.612-7，2001；Coffey，D.C.，Kutko，M.C.，Glick，R.D.，Butler，L.M.，Heller，G.，Rifkind，R.A.，Marks，P.A.，Richon，V.M.，和La Quaglia，M.P.Thehistone deacetylase inhibitor，CBHA，inhibits growth of human neuroblastomaxenografts in vivo，alone and synergistically with all-trans retinoic acid.CancerRes.613591-3594，2001；Petti，M.C.，Fazi，F.，Gentile，M.，Diverio，D.，De Fabritiis，P.，De Propris，M.S.，Fiorini，R.，Spiriti，M.A.，Padula，F.，Pelicci，P.G.，Nervi，C.，和Lo Coco，F.Complete remission through blastcell differentiation in PLZF/RARalpha-positive acute promyelocytic leukemiainvitro and in vivo studies.Blood 1001065-1067，2002)。5-氮雜脫氧胞苷抑制DNA甲基化而減少了腫瘤抑制基因在大量癌細胞中的表達。與5-氮雜脫氧胞苷聯合使用的TSA促進了癌細胞凋亡和腫瘤抑制基因表達的恢復。(Nan，X.，Ng，H.H.，Johnson，C.A.，Laherty，C.D.，Turner，B.M.，Eisenman，R.N.，和Bird，A.Transcriptional repression by the methyl-CpG-binding proteinMeCP2 involves a histone deacetylase complex.Nature 393386-389，1998；Cameron，E.E.，Bachman，K.E.，Myohanen，S.，Herman，J.G.，和Baylin，S.B.Synergy of demethylation and histone deacetylase inhibition in there-expression of genes silenced in cancer.Nature Genet.21103-107，1999；Li，Q.L.，Ito，K.，Sakakura，C.，Fukamachi，H.，Inoue，K.，Chi，X.Z.，Lee，K.Y.，Nomura，S.，Lee，C.W.，Han，S.B.，Kim，H.M.，Kim，W.J.，Yamamoto，H.，Yamashita，N.，Yano，T.，Ikeda，T.，Itohara，S.，Inazawa，J.，Abe，T.，Hagiwara，A.，Yamagishi，H.，Ooe，A.，Kaneda，A.，Sugimura，T.，Ushijima，T.，Bae，S.C.，和Ito，Y.Causal relationship between the lossof RUNX3 expression and gastric cance r.Cell 109113-124，2002；Boivin，A.J.，Momparler，L.F.，Hurtubise，A.，and Momparler，R.L.Antineoplastic actionof 5-aza-2′-deoxycytidine and phenylbutyrate on human lung carcinoma cells.Anticancer Drugs 13869-874，2002；Primeau，M.，Gagnon，J.，和Momparler，R.L.Synergistic antineoplastic action of DNA methylation inhibitor5-AZA-2′-deoxycytidine and histone deacetylase inhibitor depsipeptide onhuman breast carcinoma cells.Int J Cancer 103177-184，2003)。
預期HDAC抑制劑不僅作為抗腫瘤藥，而且可作為癌預防劑。TSA、SAHA等顯著地抑制了動物模型中誘導的乳腺癌的發生。另外，使用丙戊酸進行的研究表明，HDAC抑制劑能抑制轉移(Gottlicher，M.，Minucci，S.，Zhu，P.，Kramer，O.H.，Schimpf，A.，Giavara，S.，Sleeman，J.P.，Lo Coco，F.，Nervi，C.，Pelicci，P.G.，和Heinzel，T.Valproic acid defines a novel classof HDAC inhibitors inducing differentiation of transformed cells.EMBO J.206969-6978，2001)。
HDAC抑制劑不僅用作腫瘤抑制藥，而且例如用作治療和改善自身免疫性疾病、皮膚病、傳染病等(Darkin-Rattray等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93，13143-13147，1996)，以及提高基因治療中載體導入的效率(Dion等人，Virology 231，201-209，1997)，促進導入基因的表達(Chen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，5798-5803，1997)等的試劑。此外，認為HDAC抑制劑具有血管生成-抑制功能(Kim，M.S.，Kwon，H.J.，Lee，Y.M.，Baek，J.H.，Jang，J.E.，Lee，S.W.，Moon，E.J.，Kim，H.S.，Lee，S.K.，Chung，H.Y.，Kim，C.W.，和Kim，K.W.(2001).Histone deacetylases induceangiogenesis by negative regulation of tumor suppressor genes.Nature Med.7，437-443；Kwon，H.J.，Kim，M.S.，Kim，M.J.，Nakajima，H.，和Kim，K.W.(2002).Histone deacetylase inhibitor FK228 inhibits tumor angiogenesis.Int.J.Cancer 97，290-296)。
存在10種或更多的HDAC亞型，最近，識別出與癌密切相關的特定HDAC亞型。例如，發現在抑制癌發生中扮演極其重要角色的腫瘤抑制基因p53的乙酰化在p53自身的功能表達中非常重要(Ito，A.，Lai，C.H.，Zhao，X.，Saito，S.，Hamilton，M.H.，Appella，E.，和Yao，T.P.(2001).p300/CBP-mediated p53 acetylation is commonly induced by p53-activatingagents and inhibitedby MDM2.EMBO J.20，1331-1340)，并且在p53功能抑制中涉及到HDAC1和HDAC2(Juan，L.J.，Shia，W.J.，Chen，M.H.，Yang，W.M.，Seto，E.，Lin，Y.S.，和Wu，C.W.(2000).Histone DeacetylasesSpecifically Down-regulate p53-dependent Gene Activation.J.Biol.Chem.275，20436-20443)。還發現，前髓細胞白血病(APL)發作中涉及的蛋白質PML-RAR和PLZF-RAR和淋巴瘤發作中涉及的癌基因如Bcl-6通過核輔阻抑蛋白募集HDAC4等，并抑制正常分化所必需的基因的表達，從而導致癌發生(Dhordain P.，Albagli，O.，Lin，R.J.，Ansieau，S.，Quief，S.，Leutz，A.，Kerckaert，J.P.，Evans，R.M.，和Leprince，D.(1997).Corepressor SMRTbinds the BTB/POZ repressing domain of the LAZ3/BCL6 oncoprotein.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，10762-10767；Grignani，F.，De，M.S.，Nervi，C.，Tomassoni，L.，Gelmetti，V.，Cioce，M.，Fanelli，M.，Ruthardt，M.，Ferrara，F.F.，Zamir，I.，Seiser，C.，Grignani，F.，Lazar，M.A.，Minucci，S.，和Pelicci，P.G.(1998).Fusion proteins of the retinoic acid receptor-alpha recruithistone deacetylase in promyelocytic leukaemia.Nature 391，815-818；He，L.Z.，Guidez，F.，Tribioli，C.，Peruzzi，D.，Ruthardt，M.，Zelent，A.，和Pandolfi，P.P.(1998).Distinct interactions of PML-RARalpha and PLZF-RARalpha withco-repressors determine differential responses to RA in APL.Nature Genet.18，126-135；Lin，R.J.，Nagy，L.，Inoue，S.，Shao，W.，Miller，W.J.，和Evans，R.M.(1998).Role of the histone deacetylase complex in acute promyelocyticleukaemia.Nature 391，811-814)。另一方面，已知在正常組織的生長和分化中扮演非常重要角色的HDAC亞型存在于那些具有組織特異性表達的HDAC亞型中間(McKinsey，T.A.，Zhang，C.L.，Lu，J.，和Olson，E.N.(2000).Signal-dependent nuclear export of a histone deacetylase regulates muscledifferentiation.Nature 408，106-111；Verdel，A.，和Khochbin，S.(1999).Identification of a new family of higher eukaryotic histone deacetylases.Coordinate expression of differentiation-dependent chromatin modifiers.J.Biol.Chem.274，2440-2445)。為了避免抑制這些HDAC，發展亞型特異性抑制劑是必要的。
HDAC6為通過核-細胞質轉運在核和細胞質之間往復穿梭的酶，其一般位于細胞質中(Verdel，A.，Curtet，S.，Brocard，M.-P.，Rousseaux，S.，Lemercier，C.，Yoshida，M.，和Khochbin，S.(2000).Active maintenance ofmHDA2/mHDAC6 histone-deacetylase in the cytoplasm.Curr.Biol.10，747-749)。HDAC6在睪丸中高度表達，并被認為與正常組織的分化有關。另外，已知HDAC6與微管去乙酰化有聯系，并控制微管穩定性(Matsuyama，A.，Shimazu，T.，Sumida，Y.，Saito，A.，Yoshimatsu，Y.，Seigneurin-Berny，D.，Osada，H.，Komatsu，Y.，Nishino，N.，Khochbin，S.，Horinouchi，S.，和Yoshida，M.(2002).In vivo destabilization of dynamic microtubules byHDAC6-mediated deacetylation.EMBO J.21，6820-6831)。HDAC6還是能結合到微管上并影響細胞遷移性的脫乙酰酶(Hubbert，C.，Guardiola，A.，Shao，R.，Kawaguchi，Y.，Ito，A.，Nixon，A.，Yoshida，M.，Wang，X.-F.，和Yao，T.-P.(2002).HDAC6 is a microtubule-associated deacetylase.Nature 417，455-458)。因此，HDAC6抑制劑可為轉移抑制藥。TSA抑制每種HDAC亞型到大約相同的程度。但是，包括環四肽結構和環氧酮(epoxyketone)作為活性基團的trapoxins不能抑制HDAC6(Furumai，R.，Komatsu，Y.，Nishino，N.，Khochbin，S.，Yoshida，M.，和Horinouchi，S.Potent histone deacetylaseinhibitors built from trichostatin A and cyclic tetrapeptide antibiotics includingtrapoxin.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9887-92，2001)。根據有關酶三維結構的信息，認為trapoxins與HDAC6的粘合性弱，因為其環四肽部分的結構與酶活性中心的弱保守外表面相互作用。這表明，改變環四肽部分可能產生對各種HDAC有選擇性的抑制劑。
TSA因其異羥肟酸基團與HDAC活性口袋中的鋅配位而表現出抑制活性(Finnin，M.S.，Donigian，J.R.，Cohen，A.，Richon，V.M.，Rifkind，R.A.，Marks，P.A.，Breslow，R.，和Pavletich，N.P.Structures of a histonedeacetylase homologue bound to the TSA and SAHA inhibitors.Nature 401188-193，1999)。已知的包括異羥肟酸的HDAC抑制劑的例子為Oxamflatin(Kim，Y.B.，Lee，K.-H.，Sugita，K.，Yoshida，M.，和Horinouchi，S.Oxamflatinis a novel antitumor compound that inhibits mammalian histone deacetylase.Oncogene 182461-2470，1999)和CHAP(Furumai，R.，Komatsu，Y.，Nishino，N.，Khochbin，S.，Yoshida，M.，和Horinouchi，S.Potent histone deacetylaseinhibitors built from trichostatin A and cyclic tetrapeptide antibiotics includingtrapoxin.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9887-92，2001.，Komatsu，Y.，Tomizaki，K.-y.，Tsukamoto，M.，Kato，T.，Nishino，N.，Sato，S.，Yamori，T.，Tsuruo，T.，Furumai，R.，Yoshida，M.，Horinouchi，S.，和Hayashi，H.CyclicHydroxamic-acid-containing Peptide 31，a potent synthetic histone deacetylaseinhibitor with antitumor activity.Cancer Res.614459-4466，2001)。但是，由于TSA在血液中不穩定，并且具有強的異羥肟酸螯合作用，因此它能與其它必需的金屬離子螯合，所以包括異羥肟酸的HDAC抑制劑直到現在也未能實際用作抗腫瘤藥。同時，最近已表明FK228二硫鍵還原產生的硫醇基能作為與HDAC活性口袋中的鋅配位從而抑制了HDAC的活性基團。因此，FK228為一種前體藥物，在被細胞還原活性還原時激活(Furumai，R.，Matsuyama，A.，Kobashi，N.，Lee，K.-H.，Nishiyama，M.，Nakajima，H.，Tanaka，A.，Komatsu，Y.，Nishino，N.，Yoshida，M.，和Horinouchi，S.(2002).FK228(depsipeptide)as a natural prodrug that inhibits class I histonedeacetylases.Cancer Res.62，4916-4921)。
此外，已從自然環境中分離出包括環四肽結構和環氧酮作為活性基團的大量HDAC抑制劑。在這些發現的基礎上，認為環四肽結構在酶識別中是有用的(如上所述，Yoshida等人，1995)，但是，從不同的角度如穩定性看，已有的抑制劑沒有發展到令人滿意地滿足藥物產品的水平。因此，強烈期望已解決這些問題的藥劑生產。

發明內容
本發明旨在提供新型的包括環四肽結構的HDAC抑制劑，和生產它的方法。
考慮到上述目的，本發明的發明人合成了包括含有硫醇基和其二硫鍵的環四肽結構的化合物，然后分析了這些化合物的HDAC抑制活性。結果發現，包括二硫鍵的化合物在體外對酶未能表現出非常高的HDAC抑制活性。但是，當通過與還原劑二硫蘇糖醇共存轉化成硫醇時，它們表現出強烈的HDAC抑制活性。另一方面，觀察到二硫化物活性的細胞內水平同TSA和硫醇的一樣高。因此，表明二硫化物能用作HDAC抑制劑的前體藥物，其中在被吸收到細胞內后二硫鍵通過細胞內還原裂開，從而產生強烈的活性。另外，發現當硫醇基以這樣一種方式受到保護時，化合物在血清中更穩定，并且發現，通過使保護基團(-SX)與各種官能化合物結合，化合物能與除HDAC抑制劑外的具有所需活性的化合物結合。
本發明涉及HDAC抑制劑和生產它的方法，并具體地提供下面的[1]-[9][1]下式(1)代表的化合物 [其中R11、R21、R31和R41獨立地表示氫或甲基；R22、R23、R32、R33、R42和R43獨立地表示氫、具有1至6個碳原子的直鏈烷基、連接有非芳族環烷基或取代或未取代芳環的具有1至6個碳原子的直鏈烷基、非芳族環烷基或連接有非芳族環烷基或取代或未取代芳環的非芳族環烷基；R21和R22、R22和R23、R31和R32、R32和R33、R41和R42以及R42和R43對獨立地表示沒有連接的無環結構或通過以下連接的環狀結構具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基、包括具有1至6個碳的支鏈的具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基、或包括1至6個碳的環結構的具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基；X表示氫、與X左側所示相同的結構、在包括能通過二硫鍵與式(1)中硫原子連接的硫原子的任意結構中的取代或未取代的烷基或芳基、或通過分子內二硫鍵與鍵合到R22、R23、R32、R33、R42或R43末端且位于X左側的硫原子連接的硫原子]。
包括[1]的化合物作為活性成分的組蛋白脫乙酰酶抑制劑。
包括[1]的化合物作為活性成分的細胞調亡誘導劑。
包括[1]的化合物作為活性成分的分化誘導劑。
包括[1]的化合物作為活性成分的血管生成抑制劑。
包括[1]的化合物作為活性成分的抗轉移藥。
治療或預防由組蛋白脫乙酰酶1或4引起的疾病的藥劑，該藥劑包括[1]的化合物作為活性成分。
如[7]所述的藥劑，其中由組蛋白脫乙酰酶1或4引起的疾病為癌、自身免疫性疾病、皮膚病或傳染病。
一種生產[1]的化合物的方法，該方法包括以下步驟在成肽鍵合劑存在下使式(2)代表的化合物與式(3)代表的化合物反應得到式(4)代表的化合物 (其中n同式(1)中的定義；Hal表示選自氯原子、溴原子或碘原子的鹵原子、或可用作自由基的烯丙基或烷基磺酰氧基(sulfoxy)；P2表示氨基的保護基團)； (其中R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42和R43同式(1)中的定義；P2表示羧基的保護基團)； (其中n、R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43、P1、P2和Hal同上面定義)；對式(4)代表的化合物進行催化氫化、酸處理或水解以除去P1和P2；和然后在成肽鍵合劑存在下進行環化得到式(5)代表的化合物；
(其中n、R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43、P1、P2和Hal同上面定義)；或在成肽鍵合劑存在下使式(6)代表的化合物與式(7)代表的化合物反應得到式(8)代表的化合物 (其中R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43和P1同上面定義)； (其中n、R11、P2和Hal同上面定義)； (其中n、R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43、P1、P2和Hal同上面定義)；對式(8)代表的化合物進行催化氫化、酸處理、氟陰離子處理或水解以除去P1和P2；和然后在成肽鍵合劑存在下進行環化得到式(5)代表的化合物；二種方法接下來都用下述步驟處理
使式(5)代表的化合物與包含硫原子的試劑反應得到式(9)代表的化合物； (其中n、R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42和R43同上面定義；P3表示硫氫基的保護基團)；和然后用氧化劑和氨或其它胺處理式(9)代表的化合物。
下文中，將結合附圖詳細地描述實施本發明的方式。
可用上述式(1)定義本發明的化合物。這種化合物可用作HDAC抑制劑。
在上述式(1)中，R11、R21、R31和R41可各自獨立地為氫或甲基。R22、R23、R32、R33、R42和R43可各自獨立地為氫、具有1至6個碳原子的直鏈烷基、或非芳族環烷基，其中具有1至6個碳原子的直鏈烷基和非芳族環烷基可連接有非芳族環烷基或取代或未取代芳環。R21和R22、R22和R23、R31和R32、R32和R33、R41和R42以及R42和R43對可各自獨立地在沒有連接的無環結構中，或通過具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基、包括具有1至6個碳的支鏈的具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基或包括1至6個碳的環結構的具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基來連接。由于環四肽結構部分被認為是作為封住HDAC口袋(pocket)的封端，因此這種封端結構可任意地選自上述具有1至6個碳原子的直鏈烷基、芳族環烷基和能取代它們的芳基。
此外，氫可作為式(1)中的X與表現出HDAC抑制活性的相鄰硫原子直接形成硫醇基。但是，如果使用氫作為X形成的硫醇基暴露，則得到的化合物在體內變得不穩定。因此，如果X為氫，則本發明的化合物優選與穩定輸送它們到所需部位的方式如藥物輸送系統結合。為了提高包含HDAC抑制活性的硫醇基的穩定性，優選X為能在體內代謝并在活體內無害的取代基。這類取代基優選為包括能與鄰接X的硫原子形成二硫鍵的硫原子的基團，并可為自身表現出一些療效的基團，還可為能簡單作為保護基團的基團。這類包括硫原子的取代基可為與X左側所示相同的結構；烷基或芳基，在任一結構中包括能通過二硫鍵與上述式(1)中硫原子連接的硫原子；或通過分子內二硫鍵與鍵合到上述R22、R23、R32、R33、R42或R43末端且位于X左側的硫原子連接的硫原子。在這種情況下，如果取代基具有同X左側結構相同的結構，就形成二聚體結構，則二硫鍵會被體內代謝斷開并分離成包括二個分子活性的HDAC抑制劑。此外，任何包括硫原子的烷基或芳基還可具有取代基，或可為能表現出與HDAC抑制劑作用相同或不同的結構。
本發明的SS-雜合X原子基團的例子為烷基硫醇如甲硫醇、芐硫醇和環己硫醇，和芳硫醇如苯硫酚和巰基吡啶，以及在天然生理學活性物質如5-氮雜脫氧胞苷和視黃酸結構中一部分原子基團被硫醇基取代的烷基硫醇和烯丙基硫醇。優選的例子為甲硫醇、乙硫醇、巰基乙醇、半胱胺、半胱氨酸、苯硫酚、2-巰基吡啶、4-巰基吡啶、5′-巰基-5-氮雜脫氧胞苷、3′-巰基-5-氮雜脫氧胞苷和硫代松香油(thioretinol)。
另外，在本發明中，對式(1)中的環n沒有限制，只要它具有HDAC抑制活性即可，例如，n優選為4-7，更優選為5。從環四肽結構到硫原子的包括n個碳原子的碳鏈，被假定進入活性HDAC口袋，并通過使碳鏈末端的活性硫醇基與HDAC孔穴中的鋅分子接觸來抑制HDAC。
本發明化合物的典型例子如

圖1至3所示，但不限于這些化合物。
下文中，將描述生產本發明的化合物的方法。如下面所示，可由2-氨基-n-鹵代鏈烷酸生產這種實施方式的化合物。由于R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43和n按照上面說明書定義，因此省略了它們的說明。
本發明化合物的生產方法的第一種實施方式為使用式(2)的化合物作為原料的方法，其中保護基團P1連接到2-氨基-n-鹵代鏈烷酸的氨基上。具體地說，在成肽鍵合劑存在下使下面式(2)定義的化合物與下面式(3)定義的化合物反應得到下面式(4)定義的化合物
在上述式中，Hal可為選自氯原子、溴原子或碘原子中任意一個的鹵原子、或還可為離去基團的烯丙基或烷基磺酰氧基。P2為氨基的保護基團。
然后，對上述式(4)定義的化合物進行催化氫化、酸處理或水解以除去P1和P2，然后在成肽鍵合劑存在下進行環化，得到式(5)定義的化合物； 然后，使式(5)定義的化合物與包含硫原子的試劑反應得到式(9)定義的化合物；
然后用氧化劑和氨或其它胺處理式(9)定義的化合物得到包括二硫鍵的(二聚體或雜合型)前體藥物化合物。在式(9)中，P3表示硫氫基的保護基團。可利用還原劑或能消解二硫鍵的酶進行處理以分離活性硫醇型化合物。
本發明的生產方法的第二種實施方式為使用下面式(7)定義的化合物作為原料的生產方法，其中保護基團P2連接到2-氨基-n-鹵代鏈烷酸的羧基上。具體地說，在成肽鍵合劑存在下使式(6)定義的化合物與式(7)定義的化合物反應得到下面式(8)定義的化合物 然后，對式(8)定義的化合物進行催化氫化、酸處理、氟陰離子處理或水解以除去P1和P2，然后在成肽鍵合劑存在下進行環化，得到式(5)定義的化合物。然后，使式(5)定義的化合物與包含硫原子的試劑反應得到式(9)定義的化合物； 然后用氧化劑和氨或其它胺處理式(9)定義的化合物得到包括二硫鍵的(二聚體或雜合型)前體藥物化合物。對于上述第一種實施方式，可通過用還原劑或能消解二硫鍵的酶處理來分離活性硫醇型化合物。
已知HDAC抑制化合物會誘導癌細胞、白血病細胞和神經細胞分化，誘導細胞凋亡和抑制癌細胞轉移(Yoshida，M.，Nomura，S.，和Beppu，T.Effects of trichostatins on differentiation of murine erythroleukemia cells.Cancer Res.473688-3691，1987；Hoshikawa，Y.，Kiiima，M.，Yoshida，M.，和Beppu，T.Expression of differentiation-related markers interatocarcinoma cells via histone hyperacetylation by trichostatin A.Agric.Biol.Chem.551491-1495，1991；Minucci，S.，Horn，V.，Bhattacharyya，N.，Russanova，V.，Ogryzko，V.V.，Gabriele，L.，Howard，B.H.，和Ozato，K.A histone deacetylase inhibitor potentiates retinoid receptor action inembryonal carcinoma cells.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9411295-11300，1997；Inokoshi，J.，Katagiri，M.，Arima，S.，Tanaka，H.，Hayashi，M.，Kim，Y.B.，Furumai，R.，Yoshida，M.，Horinouchi，S.，和Omura，S.(1999).Neuronaldifferentiation of Neuro 2a cells by inhibitors of cell progression，trichostatin Aand butyrolactone I.Biochem.Biophys.Res.Commun.256，372-376；Wang，J.，Saunthararajah，Y.，Redner，R.L.，和Liu，J.M.Inhibitors ofhistone deacetylaserelieve ETO-mediated repression and induce differentiation of AML1-ETOleukemia cells.Cancer Res.592766-2769，1999；Munster，P.N.，Troso-Sandoval，T.，Rosen，N.，Rifkind，R.，Marks，P.A.，和Richon，V.M.The histone deacetylase inhibitor suberoylanilide hydroxamic acid inducesdifferentiation ofhuman breast cancer cells.Cancer Res.618492-8497，2001；Ferrara，F.F.，Fazi，F.，Bianchini，A.，Padula，F.，Gelmetti，V.，Minucci，S.，Mancini，M.，Pelicci，P.G.，Lo Coco，F.，和Nervi，C.Histonedeacetylase-targeted treatment restores retinoic acid signaling and differentiationin acute myeloid leukemia.Cancer Res.612-7，2001；Gottlicher，M.，Minucci，S.，Zhu，P.，Kramer，O.H.，Schimpf，A.，Giavara，S.，Sleeman，J.P.，Lo Coco，F.，Nervi，C.，Pelicci，P.G.，和Heinzel，T.Valproic acid definesa novel class of HDAC inhibitors inducing differentiation of transformed cells.EMBO J.206969-6978，2001)。因此，本發明的化合物可用作細胞凋亡誘導劑、分化誘導劑和癌轉移抑制劑。
另外，預期抑制HDAC的化合物能抑制血管生成(Kim，M.S.，Kwon，H.J.，Lee，Y.M.，Baek，J.H.，Jang，J.E.，Lee，S.W.，Moon，E.J.，Kim，H.S.，Lee，S.K.，Chung，H.Y.，Kim，C.W.，和Kim，K.W.(2001).Histonedeacetylases induce angiogenesis by negative regulation of tumor suppressorgenes.Nature Med.7，437-443；Kwon，H.J.，Kim，M.S.，Kim，M.J.，Nakajima，H.，and Kim，K.W.(2002).Histone deacetylase inhibitor FK228 inhibits tumorangiogenesis.Int.J.Cancer 97，290-296)。因此，本發明的化合物還可用作血管生成抑制劑。
在各種HDAC中，本發明的化合物對HDAC1和HDAC4表現出特異的強烈抑制活性。因此，本發明的化合物可用作治療或預防由HDAC1和HDAC4引起的疾病的藥劑。這類疾病的例子除癌癥外包括自身免疫性疾病、皮膚病和與HDAC1和HDAC4有關的傳染病。另外，本發明的化合物不僅可應用于治療或預防上述疾病的藥劑，而且應用于基因治療佐劑或能提高載體導入效率、促進導入基因表達的促進劑等。
本發明的化合物還可與視黃酸和DNA甲基化抑制劑聯合使用。本發明還提供了這種伴隨藥。
當將本發明的化合物制成制劑時，可根據需要使用填充劑、增充劑、粘合劑、增濕劑、崩解劑、表面活性劑、稀釋劑如潤滑劑和賦形劑。另外，可向藥物制劑中加入著色劑、防腐劑、芳香劑、調味劑、甜味劑和其它藥物。可根據治療或預防用途選擇每種藥物制劑的劑型。劑型可為例如片劑、丸劑、散劑、溶液、混懸劑、乳劑、顆粒劑、膠囊、注射劑和栓劑。
加入到片劑和膠囊中的添加劑的例子包括粘合劑如明膠、玉米淀粉、黃蓍膠和阿拉伯膠；賦形劑如結晶纖維素；溶脹劑如玉米淀粉、明膠和藻酸；潤滑劑如硬脂酸鎂；甜味劑如蔗糖、乳糖和糖精；和芳香劑如薄荷、白株樹油(gaultheria adenothrix oil)和櫻桃。在單元劑型為膠囊時，除了上述材料，可加入液體載體如油或脂肪。
對于注射用水溶液，包括鹽水、葡萄糖和其它佐劑的例如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露醇或氯化鈉的等張溶液也可根據需要與適當的溶解助劑如醇(具體地說乙醇)、多元醇如丙二醇和聚乙二醇或非離子表面活性劑如聚山梨酯80TM和HCO-50聯合使用。
油質溶液的例子為芝麻油和大豆油，根據需要可與溶解助劑如苯甲酸芐酯和芐醇聯合使用。另外，與緩沖液如磷酸鹽緩沖液或醋酸鈉緩沖液、撫慰劑如鹽酸普魯卡因、穩定劑如芐醇和苯酚或抗氧化劑混合也是可接受的。配制的注射劑通常裝入到合適的安瓿中。
可為患者口服或腸胃外給藥制劑。腸胃外劑型的例子包括注射以及經鼻、經肺和經皮給藥。可利用注射劑型如靜脈注射、肌內注射、腹膜內注射和皮下注射進行全身或局部給藥。另外，還可利用本領域中那些技術人員已知的方法進行鼻內、經支氣管、肌內、皮下或口服給藥。
對于腸胃外給藥，本發明化合物的單位劑量取決于需要給藥的患者、靶器官、癥狀和給藥方式。例如，以約0.01-30mg/天，優選約0.1-20mg/天，更優選約0.1-10mg/天的劑量對成人(60kg體重)靜脈內給藥注射劑。當為其它種類動物給藥時，劑量可按每60kg體重，或每單位軀體表面積進行換算。
對于口服給藥，本發明化合物的單位劑量取決于需要給藥的患者、靶器官、癥狀和給藥方式，并對成人(60kg體重)優選例如約100μg-20mg/天。
附圖簡述圖1示出了至活性硫醇基具有5碳鏈的SCOP的LDLD或LDLL異構體的結構列表。
圖2示出了至活性硫醇基具有4至7碳鏈的SCOP的結構。注意這里SCOP 152(C5)同圖1。
圖3示出了同型二聚體型SCOP的結構。SCOP數目為單體數目的二倍。
圖4示出了雜合物型SCOP的結構，通過鍵合各種化合物到SCOP 152得到。
圖5示出了天然Cyl-1和Cyl-2的立體構象。
圖6示出了使用抗乙酰化賴氨酸抗體通過Western印跡分析測量細胞內組蛋白乙酰化水平的圖片。
圖7示出了SCOP 152、SCOP 304和SCOP 402在血清中的穩定性評價結果。
圖8示出了SCOP 152、SCOP 304和SCOP 402在細胞水平上穩定性評價結果的圖片。
實施本發明的最佳方式下文中，圖1和2顯示了合成這些實施例所示化合物的整個工藝流程。下面詳細描述用H-L-Ab7-OH作為原料的每個合成步驟。在下文中，2-氨基-7-溴庚酸縮寫為“Ab7”，2-氨基-7-乙酰基巰基庚酸(acetyltioheptanoic acid)為“Am7(Ac)”；2-氨基-7-巰基庚酸為“Am7”；2-氨基-7-巰基庚酸的硫化物為“Am7(-)”；2-氨基-8.9-二巰基(S9-2′-硝基-N，N′-二甲基苯甲酰胺)為“Am7(E11)”；2-氨基-8，9-二巰基-11-羥基十一烷酸為“Am7(SMEt)”；2-氨基-8.9-二巰基(S9-2′-吡啶基)壬酸為“Am7(S2Py)”；2-氨基-8.9-二巰基(S9-4′-吡啶基)壬酸為“Am7(S4Py)”；2-氨基-8，9-二巰基癸酸為“Am7(SMe)”。另外，合成化合物含硫的環肽縮寫為“SCOP”。
Boc-L-Ab7-OH的合成將H-L-Ab7-OH(7.3g，32.4mmol)溶解到水∶二氧雜環己烷＝1∶1的溶液(30ml，v/v)中。在冰上冷卻同時，向混合物中加入(Boc)2O(7.68g，35.6mmol)和三乙胺(6.72ml，48.6mmol)，然后攪拌5小時。在蒸發掉反應溶液后，用醚洗滌殘余物。用檸檬酸酸化水相，并用乙酸乙酯反相萃取。用MgSO4干燥萃取物，然后通過蒸發除去乙酸乙酯。真空干燥后，得到油狀的題示化合物(10.4g，32.4mmol，100％產率)。
Boc-L-Ab7-NHMe的合成在冰上冷卻同時，向含有Boc-L-Ab7-OH(326mg，1.0mmol)、鹽酸一甲胺(81mg，1.2mmol)和HoBt·H2O(184mg，1.2mmol)的3ml DMF中加入三乙胺(0.17ml，1.2mmol)和DCC(247mg，1.2mmol)。攪拌15小時后，通過蒸發除去DMF。將殘余物溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。然后用MgSO4干燥并濃縮。通過快速硅膠色譜法(3.6×15cm，氯仿)純化得到的油狀物質，并通過加入醚/石油醚(1∶10)固化得到題示化合物的白色粉末(250mg，0.74mmol，74％產率)。TLCRf＝0.58(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-L-Am7(Ac)-NHMe的合成向含有Boc-Ab7-NHMe(125mg，0.37mmol)的DMF(2ml)中加入硫代醋酸鉀(64mg，0.56mmol)，并反應3小時。通過蒸發除去DMF后，將殘余物溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物，濃縮，并通過加入醚/石油醚(1∶10)固化得到題示化合物的白色粉末(120mg，0.36mmol，97％產率)。TLCRf＝0.57(CHCl3/MeOH=9/1)。
Boc-L-Am7(-)-NHMe SS-二聚體的合成向含有Boc-Am7(Ac)-NHMe(60mg，0.18mmol)的DMF(0.5ml)中加入氨的甲醇溶液(20當量)，并攪拌24小時。濃縮反應溶液后，通過快速硅膠色譜法(1.5×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的SS-二聚體得到題示化合物的白色粉末(43mg，0.11mmol，61％產率)。HPLC保留時間8.5分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，579.3293[M+H]，C26H51O6N4S2(579.3250)。
Boc-L-Am7(S4Py)-NHMe的合成向含有Boc-Am7(Ac)-NHMe(60mg，0.18mmol)的DMF(0.5ml)中加入4，4′-二硫代二吡啶(79mg，0.36mmol)和氨的甲醇溶液(20當量)，并攪拌5小時。濃縮反應溶液后，通過快速硅膠色譜法(1.5×30cm，氯仿)純化得到的油狀產物并凍干得到題示化合物(43mg，0.11mmol，61％產率)。HPLC保留時間5.6分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，400.1766[M+H]，C18H29O3N3S2(400.1729)。
Boc-L-Ab7-OBzl的合成將Boc-L-Ab7-OH(4.05g，12.5mmol)溶解到DCM(20ml)中。在冰上冷卻同時，向混合物中加入芐醇(1.55ml，15.0mmol)、4-二甲基氨基吡啶(153mg，1.25mmol)和DCC(3.09g，15.0mmol)，然后攪拌8小時。在蒸發掉反應溶液后，將殘余物溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。然后用MgSO4干燥，濃縮，并通過快速硅膠色譜法(5×20cm，20％乙酸乙酯/己烷)純化得到的油狀物質得到油狀的題示化合物(4.29g，10.4mmol，83％產率)。TLCRf＝0.49(乙酸乙酯/己烷＝1/4)。
Boc-L-Ile-L-Pro-OBzl的合成在冰上冷卻同時，使Boc-L-Pro-OH(1.08g，5.0mmol)和芐基溴(0.893ml，75mmol)在三乙胺(10.5ml，75mmol)存在下在DMF(10ml)中反應，得到Boc-L-Pro-Obzl油狀產物。使該產物在冰冷下與2N HCl/二氧雜環己烷(5當量)反應3小時得到H-L-Pro-OBzl·HCl。
在冰上冷卻同時，向含有Boc-L-Ile-OH·1/2 H2O(1.39g，6.0mmol)、H-D-Pro-OBzl·HCl(956mg，4.0mmol)和HOBt·H2O(613mg，4.0mmol)的DMF(10ml)中加入DCC(1.24g，6.0mmol)和三乙胺(0.70ml，4.0mmol)。攪拌8小時后，通過蒸發除去DMF，將殘余物溶解到乙酸乙酯中，然后依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥后，濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的油狀物質得到油狀的題示化合物(1.63g，3.38mmol，85％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-OBzl的合成將Boc-L-Ile-L-Pro-OBzl(1.63g，3.38mmol)溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。反應完成后，通過蒸發除去TFA，并真空干燥殘余物得到H-L-Ile-L-Pro-OBzl·TFA。將化合物溶解到DMF(8ml)中，然后加入Boc-D-Tyr(Me)-OH(1.50g，5.07mmol)。再加入HBTU(1.92g，5.07mmol)、HOBt·H2O(518mg，3.38mmol)和三乙胺(2.37ml，16.9mmol)，并在冰冷下攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀的題示化合物(1.44g，2.42mmol，72％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-L-Ab7-Obzl的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-OBzl(1.44g，2.42mmol)溶解到甲醇(12ml)中，并在5％Pd-C(150mg)存在下進行催化氫化。5小時后，濾出催化劑Pd-C，并通過蒸發除去反應溶液得到Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-OH·TFA。
將Boc-L-Ab7-OBzl(1.29g，3.12mmol)溶解到TFA(10ml)中并放在冰上靜置30分鐘。反應完成后，通過蒸發除去TFA，并真空干燥殘余物得到H-L-Ab7-OH·TFA。將化合物溶解到DMF(16ml)，然后加入Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-OH(1.21g，2.40mmol)。再加入HBTU(1.18g，3.12mmol)，HOBt·H2O(368mg，2.40mmol)和三乙胺(1.34ml，9.6mmol)，并在冰冷下攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，2％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀的題示化合物(1.20g，1.47mmol，61％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
H-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-L-Ab7-OH·TFA的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-L-Ab7-OBzl(1.20g，1.47mmol)溶解到甲醇(7.5ml)中，并在催化劑Pd-C(130mg)存在下進行催化氫化。5小時后，濾出催化劑Pd-C，并通過蒸發除去反應溶液得到Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-L-Ab7-OH。將化合物溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。通過蒸發除去反應溶液后，向殘余物中加入醚/石油醚(1∶10)以固化。然后真空干燥得到題示化合物(770mg，1.02mmol，69％產率)。
環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-)的合成將H-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-L-Ab7-OH·TFA(770mg，1.02mmol)、HATU(388mg，1.53mmol)和DIEA(0.71ml)分成5份等分試樣。每30分鐘向每份等分試樣中加入DMF(1000ml)，進行環化反應。2小時后，通過蒸發除去溶劑。將殘余物溶解到乙酸乙酯中，依次用10％檸檬酸水溶液、4％NaHCO3和飽和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥。通過蒸發除去乙酸乙酯后，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，2％甲醇/氯仿)純化殘留的油狀物質得到泡沫狀物質130mg(21％)。HPLC保留時間8.20分鐘；FAB-MS(二硫代二乙醇)，593[M+H]，(593.2)。
環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-)的合成向含有環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-)(25mg，0.042mmol)的DMF(0.5ml)中加入硫代醋酸鉀(9.59mg，0.084mmol)并反應3小時。通過蒸發除去DMF。將殘余物溶解到乙酸乙酯中，然后依次用10％檸檬酸水溶液、4％NaHCO3和飽和鹽水洗滌。分離純化環化反應后類似產生的硫酯得到19mg(76％)油狀產物。HPLC保留時間8.20分鐘；FAB-MS(二硫代二乙醇)，589[M+H]，(589.3)。
環(-L-Am7(-)-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-)(SS-二聚體SCOP296)的合成將環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-)(19mg，0.0322mmol)溶解到熱DMF(2ml)中，并與氨的甲醇溶液(10當量)反應以除去乙酰基。通過蒸發除去溶劑后，將殘余物溶解到DMF(2ml)中，并向溶液中加入1MI2(乙醇)(0.04ml)用于氧化。通過Sephadex LH-20(DMF)柱純化產生的SS-二聚體，然后與水混合得到白色粉末。產量為7.4mg(42％)。HPLC保留時間14.1分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，1091.5648[M+H]，C56H83O10N8S2(1091.5674)。
Boc-L-Ile-DL-Pip-OBzl的合成在三乙胺(2.1ml，15mmol)存在下使Boc-DL-Pip-OH(2.29g，10mmol)和芐基溴(1.79ml，15mmol)在DMF(20ml)中反應得到Boc-DL-Pip-Obzl油狀產物。使該產物與2N HCl/-二氧雜環己烷(5當量)反應3小時得到H-DL-Pip-OBzl·HCl。
在冰上冷卻同時，向含有Boc-L-Ile-OH·1/2 H2O(2.47g，10.7mmol)、H-D-Pro-OBzl·HCl(2.28g，8.9mmol)和HOBt·H2O(1.36mg，8.9mmol)的DMF(20ml)中加入DCC(2.20g，10.7mmol)和三乙胺(1.25ml，8.9mmol)。攪拌8小時后，通過蒸發除去DMF，將殘余物溶解到乙酸乙酯中，然后依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥并濃縮后，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的油狀物質得到油狀的題示非對映體混合物(3.33g，7.70mmol，87％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-DL-Pip-OBzl的合成將Boc-L-Ile-DL-Pip-OBzl(3.33g，7.70mmol)溶解到TFA(10ml)中并放在冰上靜置30分鐘。反應完成后，通過蒸發除去TFA，并真空干燥殘余物得到H-L-Ile-DL-Pip-OBzl·TFA。將化合物溶解到DMF(16ml)中，然后加入Boc-D-Tyr(Me)-OH(3.41g，11.6mmol)。再加入HBTU(4.38g，11.6mmol)、HOBt·H2O(1.18g，7.70mmol)和三乙胺(7.01ml，50.1mmol)并在冰冷下攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀的題示非對映體混合物(3.46g，5.67mmol，74％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-DL-Pip-L-Ab7-Obzl的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-DL-Pip-OBzl(3.46g，7.37mmol)溶解到甲醇(30ml)中，并在5％Pd-C(230mg)存在下進行催化氫化。8小時后，濾出催化劑Pd-C并蒸發反應溶液得到Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-DL-Pip-OH。
將Boc-L-Ab7-OBzl(3.05g，3.12mmol)溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。反應完成后，通過蒸發除去TFA，并真空干燥殘余物得到H-L-Ab7-OBzl·TFA。將化合物溶解到DMF(16ml)中，然后加入Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-DL-Pip-OH(2.80g，5.39mmol)。再加入HBTU(2.66g，7.01mmol)、HOBt·H2O(825mg，5.39mmol)和三乙胺(3.02ml，21.6mmol)并在冰冷下攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，2％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀的題示非對映體混合物(4.07g，4.91mmol，91％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
H-D-Tyr(Me)-L-Ile-DL-Pip-L-Ab7-OH·TFA的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pro-DL-Pip-OBzl(4.07g，4.91mmol)溶解到甲醇(10ml)中，并在催化劑Pd-C(300mg)存在下進行催化氫化。8小時后，濾出催化劑Pd-C，并通過蒸發除去反應溶液得到Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-DL-Pip-OH。將這種化合物溶解到TFA(10ml)中并放在冰上靜置30分鐘。在通過蒸發濃縮反應溶液后，向殘余物中加入醚/石油醚(1∶10)用于固化。然后真空干燥得到題示非對映體混合物(2.60g，3.51mmol，72％產率)。
環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pip-)和環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pip-)的合成將直鏈四肽H-D-Tyr(Me)-L-Ile-DL-Pip-L-Ab7-OH(1.28g，2.0mmol)、HATU(1.14g，3.0mmol)和DIEA(1.0ml)分成5份等分試樣。每30分鐘向每份等分試樣中加入DMF(1000ml)，進行環化反應。2小時后，濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥并濃縮后，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，2％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pip-)(372mg，61％；HPLC保留時間8.94分鐘；FAB-MS(二硫代二乙醇)，607[M+H]，(607.2))和泡沫狀環(-L-Am7(-)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pip-)(238mg，39％；HPLC保留時間10.5分鐘；FAB-MS(二硫代二乙醇)，607[M+H]，(607.2))。
環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pip-)的合成向含有環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pip-)(130mg，0.21mmol)的DMF(1ml)中加入硫代醋酸鉀(69mg，0.315mmol)并反應3小時。通過蒸發濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，然后依次用10％檸檬酸水溶液和飽和鹽水洗滌。分離純化環化反應后類似產生的硫酯得到109mg(86％)油狀產物。HPLC保留時間8.94分鐘；FAB-MS(二硫代二乙醇)，603[M+H]，(603.3)。
環(-L-Am7(-)-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pip-)(SS-二聚體SCOP298)的合成使含有環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-L-Pip-)(114mg，0.198mmol)的甲醇溶液(0.5ml)與氨的甲醇溶液(10當量)反應以除去乙酰基。通過蒸發除去溶劑后，將殘余物溶解到DMF(2ml)中，并向溶液中加入1MI2(乙醇)(0.25ml)用于氧化。通過Sephadex LH-20(DMF)柱純化產生的SS-二聚體，然后與水混合得到白色粉末。產量為82mg(78％)。HPLC保留時間11.6分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，1063.5391[M+H]，C54H79O10N8S2(1063.5361)。
環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pip-)的合成向含有環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pip-)(240mg，0.40mmol)的DMF(0.5ml)中加入硫代醋酸鉀(69mg，0.60mmol)，并進行反應3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥并濃縮后，以與環化反應后相同的方式分離并純化得到的硫酯得到油狀物質(160mg)(66％)。HPLC保留時間10.5分鐘；FAB-MS(二硫代二乙醇)，603[M+H]，(603.3)。
環(-L-Am7(-)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pip-)(SS-二聚體SCOP300)的合成使含有環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pip-)(160mg，0.27mmol)的DMF(10ml)與氨的甲醇溶液(10eq.)反應以除去乙酰基。在通過蒸發除去溶劑后，將殘余物溶解到DMF(2ml)中，并向溶液中加入1MI2(乙醇)(0.31ml)用于氧化。通過Sephadex LH-20(DMF)柱純化產生的SS-二聚體，然后與水混合得到白色粉末。產量為54mg(36％)。HPLC保留時間13.4分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，1119.5939[M+H]，C58H87O10N8S2(1119.5986)。
Boc-L-Ile-D-Pro-OBzl的合成在冰上冷卻的同時，使Boc-D-Pro-OH(17.2g，80mmol)和芐基溴(14.3ml，120mmol)在三乙胺(16.8ml，120mmol)存在下在DMF(160ml)中反應得到Boc-D-Pro-OBzl油狀產物。使該產物與2N HCl/二氧雜環己烷(5當量)反應3小時得到H-D-Pro-OBzl·HCl。
在冰上冷卻的同時，向含有Boc-L-Ile-OH·1/2 H2O(24.0g，100mmol)、H-D-Pro-OBzl·HCl(19.3g，80mmol)和HOBt·H2O(15.3g，100mmol)的DMF(200ml)中加入DCC(8.3g，30mmol)和三乙胺(3.5ml，25mmol)。攪拌8小時后，通過蒸發除去DMF，將殘余物溶解到乙酸乙酯中，然后依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥并濃縮后，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的油狀物質得到油狀題示化合物(21.5g，51mmol，72％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl的合成將Boc-L-Ile-D-Pro-OBzl(21.5g，51.4mmol)溶解到TFA(50ml)中并放在冰上靜置1小時。反應完成后，通過蒸發除去TFA，并真空干燥殘余物得到H-L-Ile-D-Pro-OBzl·TFA。將該化合物溶解到DMF(100ml)中，然后加入Boc-D-Tyr(Me)-OH(16.7g，56.5mmol)。再加入HBTU(29.4g，77mmol)、HOBt·H2O(7.87g，51mmol)和三乙胺(25.2ml，180mmol)并在冰冷下攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀題示化合物(22.0g，37mmol，72％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-L-Ab6-OTmse的合成在4-二甲基氨基-吡啶(24.4mg，0.2mmol)存在下在DCM(6ml)中攪拌Boc-L-Ab6-OH(620mg，2.0mmol)和三甲基甲硅烷基乙醇(0.572ml，4.0mmol)6小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，10％乙酸乙酯/己烷)純化得到的油狀物質得到油狀題示化合物(820mg，1.62mmol，81％產率)。TLCRf＝0.97(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-L-Ab6-OTmse的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl(1.01g，1.70mmol)溶解到甲醇(20ml)中，并在5％Pd-C(150mg)存在下進行催化氫化。8小時后，濾出催化劑Pd-C并蒸發反應溶液得到Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH。
將Boc-L-Ab6-OTmse(1.51g，3.0mmol)溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。反應完成后，蒸發反應溶液并真空干燥殘余物得到H-L-Am6-OTmse·TFA。將該產物溶解到DMF(3.5ml)。在冰冷下，將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH(819mg，1.62mmol)、HATU(776mg，2.0mmol)和三乙胺(0.24ml，1.7mmol)分成4份等分試樣，并加入到上述DMF溶液中，然后攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用無水MgSO4干燥得到的產物并濃縮得到泡沫狀物質，然后通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到題示化合物(888mg，1.09mmol，64％產率)。TLCRf＝(CHCl3/MeOH＝9/1)。
Boc-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl(1.19g，2.0mmol)溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。反應完成后，通過蒸發除去TFA，并真空干燥殘余物得到H-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl·TFA。將該化合物溶解到DMF(4.0ml)中，然后加入Boc-L-Ab7-OH(652mg，2.0mmol)。再加入HBTU(1.14g，3.0mmol)、HOBt·H2O(306mg，2.0mmol)和三乙胺(1.4ml，10mmol)并在冰冷下攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，然后通過快速硅膠色譜法(4×30cm，2％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀題示化合物(1.51g，1.89mmol，94％產率)。HPLC保留時間9.15分鐘。
Boc-L-Ab8-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl(1.19g，2.0mmol)溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。反應完成后，通過蒸發除去TFA，并真空干燥殘余物得到H-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl·TFA。將該化合物溶解到DMF(4.0ml)中，然后加入Boc-L-Ab8-OH(676mg，2.0mmol)。再加入HBTU(1.14g，3.0mmol)、HOBt·H2O(306mg，2.0mmol)和三乙胺(1.4ml，10mmol)并在冰冷下攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，2％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀題示化合物(1.44g，1.76mmol，88％產率)。HPLC保留時間10.9分鐘。
Boc-L-Ab9-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl(1.19g，2.0mmol)溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。反應完成后，通過蒸發除去TFA，并真空干燥殘余物得到H-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl·TFA。將該化合物溶解到DMF(4.0ml)中，然后加入Boc-L-Ab9-OH(775mg，2.2mmol)。再加入HBTU(1.14g，3.0mmol)、HOBt·H2O(306mg，2.0mmol)和三乙胺(1.4ml，10mmol)并在冰冷下攪拌3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，2％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫狀題示化合物(1.31g，1.58mmol，79％產率)。HPLC保留時間11.7分鐘。
H-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-L-Ab6-OH·TFA的合成將Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-L-Ab6-OTmse(888mg，1.11mmol)溶解到乙醇(10ml)中。在冰冷下，將1N NaOH水溶液(1.32ml，1.33mmol)分成3份等分試樣加入到溶液中，并放在冰上靜置3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥后，濃縮產物得到Boc-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-L-Ab6-OH。將該化合物溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。蒸發反應溶液，并真空干燥殘余物得到油狀題示化合物(778mg，1.07mmol，96％產率)。
H-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH·TFA的合成將Boc-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl(1.51g，1.89mmol)溶解到甲醇(5ml)中，并在5％Pd-C(150mg)存在下進行催化氫化。5小時后，濾出催化劑Pd-C并蒸發反應溶液得到Boc-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH。將得到的化合物溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。蒸發反應溶液后，真空干燥殘余物得到油狀題示化合物(1.15mg，1.84mmol，97％產率)。
H-L-Ab8-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH·TFA的合成將Boc-L-Ab8-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl(1.44g，1.76mmol)溶解到甲醇(5ml)中，并在5％Pd-C(150mg)存在下進行催化氫化。5小時后，濾出催化劑Pd-C并蒸發反應溶液得到Boc-L-Ab8-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH。將得到的化合物溶解到TFA(5ml)中并放在冰上靜置30分鐘。蒸發反應溶液后，真空干燥殘余物得到油狀題示化合物(1.15mg，1.84mmol，97％產率)。
H-L-Ab9-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH·TFA的合成將Boc-L-Ab9-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OBzl(1.31g，1.58mmol)溶解到甲醇(2ml)中，并在5％Pd-C(150mg)存在下進行催化氫化。12小時后，濾出催化劑Pd-C并蒸發反應溶液得到Boc-L-Ab9-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH。將該化合物溶解到TFA(5ml)并放在冰上靜置30分鐘。蒸發反應溶液后，向殘余物中加入醚/石油醚(1∶10)用于固化。然后真空干燥得到題示化合物(905mg，1.42mmol，90％產率)。
環(-L-Ab6-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)的合成將H-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-L-Ab6-OH·TFA(778mg，1.07mmol)、HATU(616mg，1.62mmol)和DIEA(0.75ml)分成5份等分試樣并每隔30分鐘加入到DMF(110ml)中以進行環化反應。2小時后，通過蒸發除去溶劑。將殘余物溶解到乙酸乙酯中，依次用10％檸檬酸、4％NaHCO3和鹽水洗滌。用MgSO4干燥產物并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到無色油狀化合物(146mg)(23％)。HPLC保留時間9.06分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，579.21 97[M+H]，C27H41O5N479Br(579.2182)。
這次，含有通過取代Ab6側鏈終端Br用HOAt取代的加合物的環四肽，環(-L-A(OAt)6-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(167mg)(27％)，以泡沫形式得到。HPLC保留時間8.16分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，635.3312[M+H]，C32H43O6N8(635.3306)。
環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)的合成將H-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH·TFA(1.15g，1.84mmol)、HATU(1.05g，2.76mmol)和DIEA(1.28ml)分成5份等分試樣并每隔30分鐘加入到DMF(180ml)中以進行環化反應。按照與上述相同的方式純化產物，得到泡沫(700mg)(64％)。HPLC保留時間9.90分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，593.2300[M+H]，C28H42O5N479Br(593.2339)。
環(-L-Ab8-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)的合成將H-L-Ab8-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH·TFA(512mg，0.80mmol)、HATU(455mg，1.20mmol)和DIEA(0.56ml)分成5份等分試樣并每隔30分鐘加入到DMF(80ml)中以進行環化反應。2小時后，濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。然后用MgSO4干燥并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫(267mg)(55％)。HPLC保留時間9.95分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，607.2501[M+H]，C29H44O5N479Br(607.2495)。
環(-L-Ab9-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)的合成將H-L-Ab9-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-OH·TFA(905mg，1.41mmol)、HATU(833mg，2.12mmol)和DIEA(0.64ml)分成5份等分試樣并每隔30分鐘加入到DMF(150ml)中以進行環化反應。2小時后，濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。然后用MgSO4干燥并濃縮，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到的泡沫狀物質得到泡沫(533mg)(61％)。HPLC保留時間10.9分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，621.2625[M+H]，C30H46O5N479Br(621.2652)。
環(-L-Am6(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)的合成向含有環(-L-Ab6-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(146mg，0.252mmol)的DMF(0.5ml)中加入硫代醋酸鉀(57.6mg，0.504mmol)，并進行反應3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，依次用10％檸檬酸水溶液和飽和鹽水洗滌。在用MgSO4干燥并濃縮后，按照環化反應后相同的方式分離并純化得到的硫酯得到油狀物質(114mg)(79％)。HPLC保留時間9.06分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，575.2879[M+H]，C29H43O6N4S(575.2903)。
環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)的合成向含有環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(133mg，0.226mmol)的DMF(0.5ml)中加入硫代醋酸鉀(52mg，0.452mmol)，并進行反應3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，依次用10％檸檬酸水溶液和飽和鹽水洗滌。在用MgSO4干燥并濃縮后，分離并純化得到的硫酯得到油狀物質(118mg)(89％)。HPLC保留時間9.90分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，589.3605[M+H]，C30H45O6N4S(589.3060)。
環(-L-Am8(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)的合成向含有環(-L-Ab8-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(267mg，0.439mmol)的DMF(1ml)中加入硫代醋酸鉀(100mg，0.878mmol)，并進行反應3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，依次用10％檸檬酸水溶液和飽和鹽水洗滌。在用MgSO4干燥并濃縮后，分離并純化得到的硫酯得到油狀物質(222mg)(84％)。HPLC保留時間9.95分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，603.3244[M+H]，C31H47O6N4S(575.2903)。
環(-L-Am9(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)的合成向含有環(-L-Ab9-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(250mg，0.402mmol)的DMF(0.5ml)中加入硫代醋酸鉀(91.4mg，0.804mmol)，并進行反應3小時。濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，依次用10％檸檬酸水溶液和飽和鹽水洗滌。在用MgSO4干燥并濃縮后，分離并純化得到的硫酯得到油狀物質(190mg)(77％)。HPLC保留時間10.9分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，617.3364[M+H]，C32H49O6N4S(617.3373)。
環(-L-Am6(-)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)SS-二聚體(SCOP302)的合成使含有環(-L-Am6(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(114mg，0.198mmol)的甲醇(0.5ml)與氨的甲醇溶液(10當量)反應以除去乙酰基。通過蒸發除去溶劑后，將殘余物溶解到DMF(2ml)中，向其中加入1MI2(乙醇)(0.2ml)用于氧化。通過Sephadex LH-20(DMF)柱純化產生的SS-二聚體，然后與水混合得到白色粉末。產量為82mg(78％)。HPLC保留時間11.6分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，1063.5391[M+H]，C54H79O10N8S2(1063.5361)。
環(-L-Am7(-)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)SS-二聚體(SCOP304)的合成使含有環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(118mg，0.201mmol)的甲醇(0.5ml)與氨的甲醇溶液反應以除去化合物中的乙酰基。通過加入1MI2(乙醇)氧化化合物的末端硫氫基(sulfohydryl)。純化后，得到白色粉末狀SS-二聚體。98mg(89％)產量。HPLC保留時間12.3分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，1091.5684[M+H]，C56H83O10N8S2(1091.5674)。
環(-L-Am8(-)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)SS-二聚體(SCOP306)的合成使含有環(-L-Am8(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(222mg，0.368mmol)的甲醇(0.5ml)與氨的甲醇溶液反應以除去化合物中的乙酰基。通過加入1MI2(乙醇)氧化化合物的末端硫氫基(sulfohydryl)。純化后，得到白色粉末狀SS-二聚體。167mg(81％)產量。HPLC保留時間13.0分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，1119.5961[M+H]，C58H86O10N8S2(1119.5987)。
環(-L-Am9(-)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)SS-二聚體(SCOP308)的合成使含有環(-L-Am9(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(95mg，0.154mmol)的甲醇(0.5ml)與氨的甲醇溶液反應以除去化合物中的乙酰基。通過加入1MI2(乙醇)氧化化合物的末端硫氫基。純化后，得到白色粉末狀SS-二聚體。84mg(98％)產量。HPLC保留時間14.2分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，1147.6307[M+H]，C60H91O10N8S2(1147.6300)。
環(-L-Am7(SMEt)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(SS雜合物SCOP 404)的合成使含有環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(270mg，0.45mmol)的DMF(0.5ml)與氨的甲醇溶液(10當量)反應以除去化合物中的乙酰基。在通過蒸發除去氨后，向殘余物中加入2-巰基乙醇(10當量)然后加入1MI2(乙醇)0.2ml，進行氧化。通過Sephadex LH-20(DMF)柱純化得到的SS-雜合物(hybrid)并凍干得到白色粉末狀題示化合物。產量為30mg(11％)。HPLC保留時間8.9分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，622.2877[M]，C30H46O6N4S2(622.2859)。
環(-L-Am7(S2Py)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(SS雜合物SCOP 401)的合成使含有環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(40mg，0.07mmol)的DMF(1ml)與2，2′-二硫代吡啶(31mg，0.14mmol)和氨的甲醇溶液混合(10當量)并攪拌8小時。濃縮反應溶液后，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化粉末產物得到題示化合物。產量為15mg(38％)。HPLC保留時間9.6分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，656.2952[M+H]，C33H45O5N5S2(656.2940)。
環(-L-Am7(S4Py)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(SS雜合物SCOP 402)的合成使含有環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(100mg，0.17mmol)的DMF(1ml)與4，4′-二硫代吡啶(75mg，0.34mmol)和氨的甲醇溶液(20當量)混合并攪拌8小時。濃縮反應溶液后，通過快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化粉末產物得到題示化合物。產量為13mg(13％)。HPLC保留時間6.5分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，656.2934[M+H]，C33H45O5N5S2(656.2940)。
環(-L-Am7(SEll)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(SS雜合物SCOP 403)的合成使含有5，5′-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(515mg，1.4mmol)的DMF(2.8mL)與二甲胺(343mg，3.0mmol)、DCC(867mg，3.0mmol)和HOBt·H2O(214mg，1.4mmol)混合，然后在冰上冷卻同時攪拌8小時。反應完成后，濃縮反應溶液，溶解到乙酸乙酯中，并依次用10％檸檬酸水溶液、4％碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用MgSO4干燥后，通過蒸發除去乙酸乙酯。真空干燥殘余物并使用快速硅膠色譜法(4×30cm，1％甲醇/氯仿)純化得到5，5′-二硫代雙(2-硝基苯甲酸二甲基酰胺)。
使含有環(-L-Am7(Ac)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(130mg，0.22mmol)的DMF(2ml)與5，5′-二硫代雙(2-硝基苯甲酸二甲基酰胺)(198mg，0.44mmol)和氨的甲醇溶液(10當量)混合，然后攪拌6小時。濃縮反應溶液，溶解到少量DMF中，并通過HPLC(柱YMC-Pack ODS-A 10×250mm)純化得到題示化合物。產率為13mg(9.3％)。HPLC保留時間9.5分鐘；HRMS(FAB，二硫代二乙醇)，771.3201[M+H]，C37H50O8N6S2(771.3210)。
環(-L-Am7(SMe)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(SCOP 405)的合成使含有環(-L-Ab7-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)(118mg，0.2mmol)的DMF(1ml)與4-甲氧基芐基硫醇(0.056ml，0.4mmol)和三乙胺(0.07ml，0.5mmol)混合并在室溫下反應2小時。用乙酸乙酯萃取產生的環(-L-Am7(Mb)-D-Tyr(Me)-L-Ile-D-Pro-)，純化，然后與四氟硼酸二甲基(甲硫基)锍(0.9mmol，176mg)在甲醇(18ml)中和室溫下反應2小時。濃縮反應溶液，溶解到氯仿中，并通過硅膠色譜法(2×25cm，2％甲醇/氯仿)純化得到目標產物。產量為69mg(65％)。TLC Rf0.90(CHCl3/MeOH＝19/1)。HPLC保留時間12.28分鐘；HR-FAB+MS593.2777(計算值592.2753，組成C29H44O5N4S2，基質2，2′-二硫代二乙醇)。
HDAC抑制活性的測量在這個實施例中，測量了SCOP的HDAC抑制活性。圖1至圖4顯示了已測量活性的含硫環肽(SCOP)的結構列表。基于以如圖5所示的天然HDAC抑制劑Cyl-1和Cyl-2(Furumai等人，(2001)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，98，87-92)，考察了至環四肽結構活性基團的碳鏈的構象和數目。
天然Cyl-1和Cyl-2的立體構象為LDLL，但也考察具有LDLD構象的那些化合物。在下面的實驗結果中，為了斷開二硫鍵，DTT與X＝H共存。
為了測量HDAC抑制活性，按下面所述制備HDAC溶液。將1×107個293T細胞鋪板到100-mm平皿上，24小時后，使用LipofectAmine 2000試劑(Life Technologies，Inc.Gaithersburg，MD)轉然表達人HDAC1和HDAC4或小鼠HDAC6的載體(1μg)。使用上述pcDNA3-HD1作為表達人HDAC1的載體(Yang，W.M.，Yao，Y.L.，Sun，J.M.，Davie，J.R.& Seto，E.(1997)J.Biol.Chem.272，28001-28007)。使用pcDNA3.1(+)-HD4作為表達人HDAC4的載體(Fischle，W.，Emiliani，S.，Hendzel，M.J.，Nagase，T.，Nomura，N.，Voelter，W.&Verdin，E.(1999)J.Biol.Chem.274，11713-11720)。使用pcDNA-mHDA2/HDAC6作為表達小鼠HDAC6的載體(Verdel，A.&Khochbin，S.(1999)J.Biol.Chem.274，2440-2445)。在OPTI-MEM中導入載體5小時。然后用Dulbecco改性Eagle培養液(DMEM)替換培養液，并孵育19小時。用PBS洗滌細胞，懸浮到裂解緩沖液(50mM Tris-HCl(pH7.5)，120mM NaCl，5mM EDTA和0.5％Nonidet P-40)中，并用超聲波處理。通過離心收集上清液，并用Protein A/G plus瓊脂糖珠(Santa CruzBiotechnologies，Inc.)除去非特異性蛋白。向表達HDAC1或HDAC4的細胞上清液中加入抗FLAG M2抗體(Sigma-Aldrich，Inc.)。向表達HDAC6的細胞上清液中加入抗HA抗體(克隆3F10，Roche Molecular Biochemicals)。各自混合物中的反應在4℃下進行1小時。將得到的反應混合物獨立地與瓊脂糖珠混合并繼續在4℃下反應1小時。用裂解緩沖液洗滌瓊脂糖珠3次，然后用HD緩沖液(20mM Tris-HCl(pH 8.0)，150mM NaCl，10％甘油和完全蛋白酶抑制劑混合液(Boehringer Mannheim，Germany))洗滌1次。通過用FLAG肽(40μg)(Sigma-Aldrich，Inc.)或HA肽(100μg)在HD緩沖液(200μl)中在4℃下孵育1小時回收已結合到瓊脂糖珠的稱為“HDAC反應溶液”的蛋白質溶液。使用HDAC反應溶液按下面所示測定HDAC抑制活性。
按如下評測體外HDAC抑制活性將試驗化合物溶解到DMSO中并調整到10mM。使用其作為抑制劑儲備溶液。作為陽性對照，將通常所說的HDAC抑制劑曲古抑菌素A(TSA)溶解到DMSO中得到10mM儲備溶液。通過在試驗化合物或對照TSA存在下分別在37℃下孵育上述HDAC溶液和用[3H]標記的乙酰化組蛋白底物溶液15分鐘(100μl反應體積)進行測量。通過加入10μl HCl停止這些反應。用乙酸乙酯萃取通過酶反應切除的[3H]乙酸，并進行放射性劑量測量。作為陰性對照，在不向反應系統中加入抑制劑的情況下進行同樣步驟。在陰性對照中，抑制活性表達為HDAC活性的50％抑制濃度(“IC50(nM)”)(表1至4)。
如下面所示，使用p21啟動子誘導活性作為指標測量體內HDAC抑制活性。用于實驗的MFLL-9細胞穩定地保留了人類野生型p21啟動子和螢光素酶的融合基因(Dr.B.Vogelstaein)。使用不含酚紅并包括10％FBS的DMEM培養液，在蒸汽飽和的培育箱中和37℃下用5％二氧化碳進行培養。將MFLL-9細胞以85000個細胞/孔的密度鋪板在96孔微量滴定板上，每孔中有99μl上述培養液。然后將它們培養6小時。向每孔中加入1μl試驗化合物溶液，然后再培養18小時。使用TSA作為具有p21啟動子誘導活性的陽性對照化合物，其中誘導活性由HDAC抑制活性引起。
使用Luc Lite(Packard BioScience Company)測量用于細胞內螢光素酶表達的酶反應的產物產生的發光強度。使用不加試驗化合物的組作為陰性對照組。使用這組的測量值作為標準。相對于上述標準值為1來表示加入試驗化合物每種濃度的活性。使用相應于TSA最大活性值50％的濃度(“EC50(nM)”)比較試驗化合物的活性強度(表1至4)。
表1X＝H(與DTT共存)

就表1中所示的體外抑制活性和體內P21啟動子活性而言，發現LDLD異構體比處于天然構象的LDLL異構體具有更高的活性。另外，對于直到活性硫醇基的碳鏈數目，顯示C5是最優選的。
表2X＝包括左構象的化合物(同型二聚體)

對于X＝H的情況和同型二聚體，顯示LDLD異構體比處于天然構象的LDLL異構體具有更高的活性，并且C5為至活性硫醇基的碳鏈的最優選數目。
表3X＝低分子量化合物(雜合物)

“NT”是指未進行試驗。
即使SCOP152和低分子量化合物的雜合體也顯示具有抑制活性。
表4陽性對照(TSA)

根據上述結果，LDLD異構體比處于天然構象的LDLL異構體具有更高的活性。另外，發現C5為至活性硫醇基碳鏈的最優選數目。此外，由于HDAC6抑制活性明顯低，所以化合物被證實具有酶亞型選擇性抑制活性。在酶水平上，目前的化合物當為與DTT共存的硫醇(X＝H)時顯示出高HDAC抑制活性。但是，在細胞水平上，甚至那些X＝左側結構或X＝低分子量化合物的化合物也顯示出高活性。這表明硫醇基被暴露并因此通過使用細胞內還原力還原混合到細胞中的二硫化物而被活化。
下文中，由于DTT可能具有某些影響，因此在不含DTT的條件下使用純化SCOP152進行實驗。
表5

“NT”是指未進行試驗。
與存在DTT時相比，EC50值增加。DTT的存在被認為降低了培養基的pH，從而導致單體穩定性的變化。或者，也可能DTT被用作保護基團。在不含DTT的條件下使用純化SCOP152進行下面的實驗。
體內HDAC抑制活性的測量按如下方法測量組蛋白乙酰化水平(i)使試驗化合物與HeLa細胞反應；和(ii)使用抗乙酰化賴氨酸抗體通過Western印跡確認組蛋白乙酰化水平。具體地說，在蒸汽飽和的培育箱中在5％二氧化碳存在和37℃下在包括10％FBS的DMEM培養液中培養人子宮癌細胞(HeLa)。以15000細胞/ml的濃度將2ml細胞放到6孔板上，并培養18小時。向每個培養物中加入試驗化合物溶液，并接著再培養6小時。用PBS洗滌細胞，懸浮到裂解緩沖液(50mM Tris-HCl(pH 7.5)，120mM NaCl，5mM EDTA，0.5％ Nonidet P-40)中，然后用超聲波處理。通過離心收集上清液，與SDS緩沖液混合，并在100℃下放置5分鐘。在15％SDS凝膠上對得到的樣品進行電泳處理，并轉移到薄膜上。用第一抗體“AKL5C1”(Japan Energy)和第二抗體“抗鼠”(LIFESCIENCE)對其處理，然后用ECL(amersham pharmacia biotech)探測乙酰化帶(圖6)。圖6中所示化合物的濃度單位為“nM”。
如圖6所示，抑制趨勢顯示同P21啟動子誘導活性的結果(EC50)相同。C5為至活性硫醇基的碳鏈的最優選數目。
細胞毒性試驗使用正常人肺細胞(TIG-3)和人子宮癌細胞(HeLa)試驗SCOP細胞毒性。在蒸汽飽和的培育儀中在5％二氧化碳存在和37℃下在包括10％FBS的DMEM培養液中培養這些TIG-3和HeLa細胞。以100μl/孔上述培養液將TIG-3和HeLa細胞放到96孔微量滴定板上，密度分別為30000細胞/孔和10000細胞/孔。然后培養18小時。向每個孔中加入用培養液稀釋的試驗化合物溶液，并繼續培養48小時。
將每個孔中30μl的上清液轉移到另一個96孔微量滴定板(A)，丟棄剩余的上清液。向每個孔中加入100μl 0.5％Triton-X/PBS以裂解細胞，然后轉移30μl到另一個96孔微量滴定板(B)的各個孔中。向這些96孔微量滴定板A和B的每個孔中加入30μl LDH-細胞毒性試驗(Wako)底物溶液，引起顯色反應。一旦顯色反應充分地進行，通過加入60μl淬滅溶液使反應停止。使用微量培養板讀出器(Softmax)測量光密度560nm處的色彩強度。計算[A/(A+B)]作為不含乳酸脫氫酶(LDH)的比例。當不含乳酸脫氫酶的比例為50％時，抑制活性為LD50。癌細胞選擇性細胞損害的活性值越高(正常細胞的LD50/癌細胞的LD50)，誘導的癌細胞選擇性凋亡越多。
表6LD50(nM)癌細胞選擇性抑制劑HeLaTIG-3 細胞毒性TSA 41.41580 38.2SCOP 152 370 6780 18.3SCOP 304 151 3471 23.0SCOP 402 117013300 11.4SCOP 405 179 7900 44.1SCOP 304/DTT 47.11190 25.2SCOP 402/DTT 161 4460 27.8如表6所示，本發明的化合物被證實具有與TSA同樣有效的強癌細胞選擇性細胞毒性。
穩定性評價通過下面所示的方法評價SCOP152、SCOP304和SCOP402在血清中的穩定性將1μl的10mM SCOP152、SCOP304和SCOP402加入到99μl FCS中，并在37℃下孵育。每一小時內，向每一混合物中加入用于飽和的足量NaCl和1ml乙酸乙酯。萃取后，從800μl乙酸乙酯相中蒸去乙酸乙酯，然后向殘余物中加入100μl DMSO。再用DMSO將得到的溶液稀釋10倍，并用于測量p21啟動子誘導活性。取孵育時間0時的活性為100％，并比較活性(圖7)。
如圖7所示，SCOP304和SCOP402能比SCOP152更長地在血清中穩定地保持活性。這種穩定性被認為是由于硫醇基的保護而被提高的。
接著，基于組蛋白乙酰化水平考察體內穩定性。用每種化合物處理HeLa細胞，然后使用抗乙酰化賴氨酸抗體通過Western印跡法分析組蛋白乙酰化水平(圖8)。具體地說，在蒸汽飽和的培育器中在5％二氧化碳存在和37℃下在包括10％FBS的DMEM培養液中培養人子宮癌細胞(HeLa)。以15000細胞/ml的密度將2ml細胞接種6孔板上，并培養18小時。加入200nM包括TSA、SCOP152和SCOP304的試驗化合物溶液和1μM試驗化合物SCOP402溶液，并繼續培養適當的時間。用PBS洗滌細胞，懸浮到裂解緩沖液(50mM Tris-HCl(pH 7.5)，120mM NaCl，5mM EDTA和0.5％NonidetP-40)中，然后用超聲波處理。通過離心收集每一上清液，與SDS緩沖液混合，并在100℃下處理5分鐘。在15％SDS凝膠上對得到的樣品進行電泳處理，并轉移到薄膜上。用第一抗體“AKL5C1”(Japan Energy)和第二抗體“抗鼠”(LIFE SCIENCE)處理后，進行ECL(amersham pharmacia biotech)處理并檢測乙酰化帶。
本發明的化合物對HDAC1和HDAC4表現出強烈的抑制活性，但對HDAC6幾乎沒有任何抑制活性。HDAC6在睪丸等中高度表達，并預測與正常組織分化有關。但是，未發現HDAC6與癌發生有關。因此，抑制HDAC6可能會導致副作用。由于本發明的化合物具有極弱的HDAC6抑制活性和TSA不具有的亞型選擇性，因此它們能用作新型的抑制劑。此外，可容易地改變本發明化合物的四肽骨架結構，意味著還能賦予更多的選擇性。
工業適用性如上所述，本發明的化合物對HDAC1和HDAC4表現出強烈的選擇性抑制活性。因此，本發明的化合物可用作治療或預防與HDAC尤其是HDAC1和HDAC4相關疾病的藥劑。通過使用2-氨基-n-鹵代鏈烷酸作為原料實現生產本發明化合物的方法，能容易地合成各種類型的化合物。因此，預期本發明生產方法的應用將對具有更高選擇性的HDAC抑制劑的發展作出貢獻。
權利要求
1.下式(1)代表的化合物 [其中R11、R21、R31和R41獨立地表示氫或甲基；R22、R23、R32、R33、R42和R43獨立地表示氫、具有1至6個碳原子的直鏈烷基、連接有非芳族環烷基或取代或未取代芳環的具有1至6個碳原子的直鏈烷基、非芳族環烷基或連接有非芳族環烷基或取代或未取代芳環的非芳族環烷基；R21和R22、R22和R23、R31和R32、R32和R33、R41和R42以及R42和R43對獨立地表示沒有連接的無環結構或通過以下連接的環狀結構具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基、包括具有1至6個碳的支鏈的具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基、或包括1至6個碳的環結構的具有1至5碳主鏈的直鏈亞烷基；X表示氫、與X左側所示相同的結構、在包括能通過二硫鍵與式(1)中硫原子連接的硫原子的任意結構中的取代或未取代的烷基或芳基、或通過分子內二硫鍵與鍵合到R22、R23、R32、R33、R42或R43末端且位于X左側的硫原子連接的硫原子]。
2.包括權利要求1的化合物作為活性成分的組蛋白脫乙酰酶抑制劑。
3.包括權利要求1的化合物作為活性成分的細胞調亡誘導劑。
4.包括權利要求1的化合物作為活性成分的分化誘導劑。
5.包括權利要求1的化合物作為活性成分的血管生成抑制劑。
6.包括權利要求1的化合物作為活性成分的抗轉移藥。
7.治療或預防由組蛋白脫乙酰酶1或4引起的疾病的藥劑，該藥劑包括權利要求1的化合物作為活性成分。
8.如權利要求7所述的藥劑，其中由組蛋白脫乙酰酶1或4引起的疾病為癌、自身免疫性疾病、皮膚病或傳染病。
9.一種生產權利要求1的化合物的方法，該方法包括以下步驟在成肽鍵合劑存在下使式(2)代表的化合物與式(3)代表的化合物反應得到式(4)代表的化合物 (其中n同式(1)中的定義；Hal表示選自氯原子、溴原子或碘原子的鹵原子、或可用作自由基的烯丙基或烷基磺酰氧基；P2表示氨基的保護基團)； (其中R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42和R43同式(1)中的定義；P2表示羧基的保護基團)； (其中n、R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43、P1、P2和Hal同上面定義)；對式(4)代表的化合物進行催化氫化、酸處理或水解以除去P1和P2；和然后在成肽鍵合劑存在下進行環化得到式(5)代表的化合物； (其中n、R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43、P1、P2和Hal同上面定義)；或在成肽鍵合劑存在下使式(6)代表的化合物與式(7)代表的化合物反應得到式(8)代表的化合物 (其中R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43和P1同上面定義)； (其中n、R11、P2和Hal同上面定義)； (其中n、R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42、R43、P1、P2和Hal同上面定義)；對式(8)代表的化合物進行催化氫化、酸處理、氟陰離子處理或水解以除去P1和P2；和然后在成肽鍵合劑存在下進行環化得到式(5)代表的化合物；二種方法接下來都用下述步驟處理使式(5)代表的化合物與包含硫原子的試劑反應得到式(9)代表的化合物； (其中n、R11、R21、R22、R23、R31、R32、R33、R41、R42和R43同上面定義；P3表示硫氫基的保護基團)；和然后用氧化劑和氨或其它胺處理式(9)代表的化合物。
全文摘要
通式(1)代表的化合物對HDAC1和HDAC4具有強選擇性抑制活性。因此，本發明的化合物能用作治療或預防由HDAC1和HDAC4引起的疾病的藥物。
文檔編號A61P43/00GK1646558SQ0380887
公開日2005年7月27日 申請日期2003年2月20日 優先權日2002年2月20日
發明者吉田稔, 西野憲和, 堀之內末治 申請人:吉田稔, 西野憲和, 堀之內末治