專利名稱：一種治療咽喉炎的藥物組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及動植物為原材料的藥物組合物及其制備方法。
二、技術背景咽喉炎表現為聲音嘶啞，中醫藥理論認為聲音出于喉嚨，喉嚨與肺相通，肺呼吸之氣貫喉嚨而出聲音，聲音之強弱，與肺的關系最為密切，肺屬金，若鐘，肺氣充實，則金鐘之鳴聲響亮，故有將聲音嘶啞的病因、病機歸納為“金實不鳴，金破不鳴”。現代醫學研究認為咽炎是咽粘膜及粘膜下組織和淋巴組織的炎癥，病因多為以溶血性鏈球菌為主的細菌感染和病毒感染，誘因多為全身抵抗力減弱、鄰近器官病變，而喉炎是喉粘膜的炎癥，常為上呼吸道感染的一部分，繼發于咽炎，病毒、細菌感染是疾病的主要原因，受涼、疲勞、煙酒過度、發音不當等因素為本病的誘因。
咽喉炎是比較常見的疾病，特別是對廣大教育工作者、聲樂工作者、駕駛員以及平素有肺胃蘊熱體質的人員，發病率有上升的趨勢，因而治療咽喉炎藥物需求量較大。目前市場上治療咽喉炎的中成藥品種較少，且起效較慢，療效不夠確切，故急需研制一些高效和速效的治療咽喉炎的藥物。
本發明的技術方案如下一種治療咽喉炎的藥物組合物，它包含下列成份及質量組分金銀花100～500份、菊花100～400份、胖大海50～200份，以及桔梗100～400份、麥冬100～400份、玄參100～400份三種藥材的水提取物。
上述的治療咽喉炎的藥物組合物，它還可以是包含桔梗、麥冬、玄參和質量組分的蟬蛻50～200份、或木蝴蝶50～200份、或甘草50～200份四種藥材的水提取物。
上述的治療咽喉炎的藥物組合物，它還可以是包含桔梗、麥冬、玄參、蟬蛻和質量組分的甘草50～200份，或者包含桔梗、麥冬、玄參、木蝴蝶和質量組分的甘草50～200份，或者包含桔梗、麥冬、玄參、蟬蛻和質量組分的木蝴蝶50～200份五種藥材的水提取物。
上述的治療咽喉炎的藥物組合物，它還可以是包含桔梗、麥冬、玄參、蟬蛻、甘草和質量組分的木蝴蝶50～200份六種藥材的水提取物。
蟬蛻其功用是散風熱、退目翳，宣肺透疹，主治外感。木蝴蝶也稱“千張紙”、“玉蝴蝶”，它有清肺利咽，疏肝和胃的功用，主治肺熱咳嗽、咽痛、音啞。甘草性平、味甘，它有緩中補虛，瀉火解毒，調和諸藥的功能，生用能治咽痛。因此加入這些藥物能提高本發明藥物組合物的療效。
一種制備上述的治療咽喉炎的藥物組合物的方法，它由下列步驟組成步驟一、在處方質量組分的桔梗、麥冬和玄參中加入藥材總質量4～12倍質量的水煎煮提取0.5～3小時，如此提取2～4次，合并水提取液，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.05～1.20(50℃)的清膏，步驟二、在步驟一所制得的清膏中加入乙醇，使乙醇含量達40～90％，攪勻，靜置12～36小時，過濾，濾液回收乙醇，并濃縮至相對密度為1.10～1.30(50℃)的稠膏，步驟三、取處方質量組分的金銀花、菊花、胖大海粉碎成細粉，步驟四、將步驟三所制得的細粉加入到步驟二所制得的稠膏中，混勻，制成顆粒，干燥，即得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。
上述藥物組合物的制備方法，可以在步驟一中加入處方質量組分的蟬蛻、或木蝴蝶、或甘草，一起加水提取，制成清膏，然后按上述方法的步驟二至步驟四，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。
上述藥物組合物的制備方法，可以在步驟一中加入處方質量組分的蟬蛻和木蝴蝶，或者蟬蛻和甘草，或者木蝴蝶和甘草，一起加水提取，制成清膏，然后按上述方法的步驟二至步驟四，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。
上述藥物組合物的制備方法，可以在步驟一中加入處方質量組分的蟬蛻、木蝴蝶和甘草，一起加水提取，制成清膏，然后按上述方法的步驟二至步驟四，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。
一種治療咽喉炎的藥物組合物袋泡劑，它是將本發明的藥物組合物顆粒，加矯味劑，混勻，裝入紙袋中，制成的本發明的治療咽喉炎的藥物組合物袋泡劑。
一種治療咽喉炎的藥物組合物膠囊或片劑，它是將本發明的藥物組合物顆粒與附加劑混合，裝入膠囊或壓制成片，制成的本發明的藥物組合物膠囊或片劑。
本發明的治療咽喉炎的藥物組合物對于有效成分難以溶出的桔梗、麥冬、玄參、甘草、蟬蛻以及木蝴蝶，采取先行用水提取制成稠膏，再與有效成分容易溶出的金銀花、菊花、胖大海的細粉混合，制成顆粒，因此本發明的藥物組合物服用時有效成分都能迅速提取溶解，達到速效、高效的目的。
本發明的治療咽喉炎的藥物組合物是由六味至九味天然中藥組成，能迅速緩解咽喉腫痛、干燥、灼熱等癥狀，療效確切。由于本發明的藥物組合物藥性平和，對平素肺胃蘊熱的易感人群，經常服用還能起到預防咽喉炎的作用。
具體實施例方式
實施例1 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取桔梗200克，麥冬400克、玄參350克，加水8400克煎煮提取1小時，取出藥渣，保留水提取液，藥渣再重復加水8400克提取2次，合并三次水提取液，過濾，濾液濃縮至相對密度50℃時為1.10的清膏，在清膏中加入95％乙醇，至乙醇含量達到60％，攪勻，靜置24小時，過濾，濾液蒸餾回收乙醇后繼續濃縮至相對密度50℃時為1.20的稠膏。
另取金銀花300克，菊花400克，胖大海120克，粉碎成細粉，將細粉和上述制得的稠膏混勻，制成顆粒，60℃以下干燥，即得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例2 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取桔梗400克，麥冬100克、玄參200克，加水5000克煎煮提取0.5小時，如此提取4次，按實施例1的步驟制成稠膏。
另取金銀花500克，菊花200克，胖大海50克粉碎成細粉，其它步驟同實施例1，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例3 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取蟬蛻200克、桔梗100克、麥冬300克、玄參300克，加水10000克煎煮提取，其它步驟同實施例1，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例4 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取木蝴蝶200克、桔梗300克、麥冬100克、玄參300克，加水12000克煎煮提取3小時，如此提取2次，其它步驟同實施例1，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例5 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取甘草200克、桔梗300克、麥冬200克、玄參100克，加水12000克煎煮提取，其它步驟同實施例1，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例6 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取蟬蛻50克、桔梗300克、麥冬300克、玄參300克，木蝴蝶200克，加水11000克煎煮提取，按實施例1的步驟制成稠膏。另取金銀花400克、菊花100克、胖大海200克粉碎成細粉，將細粉和上述稠膏混勻，其它步驟同實施例1，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例7 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取蟬蛻200克、桔梗150克、麥冬250克、玄參400克、甘草50克，加水9000克煎煮提取，按實施例1的步驟制成稠膏。另取金銀花100克、菊花350克、胖大海150克粉碎成細粉，將細粉和上述稠膏混勻，其它步驟同實施例1，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例8 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取木蝴蝶200克、桔梗300克、麥冬300克、玄參300克、甘草100克，加水13000克煎煮提取，按實施例1的步驟制成稠膏。另取金銀花400克、菊花350克、胖大海150克粉碎成細粉，將細粉和上述稠膏混勻，其它步驟同實施例1，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例9 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物的制備取蟬蛻200克、桔梗300克、麥冬250克、玄參250克、甘草150克、木蝴蝶50克，加水12000克煎煮提取，按實施例1的步驟制成稠膏。另取金銀花350克、菊花250克、胖大海150克粉碎成細粉，將細粉和上述稠膏混勻，其它步驟同實施例1，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。實施例10 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物袋泡劑取實施例1至9制得的任一種本發明的治療咽喉炎的藥物組合物1000克，加入2克甜葉菊素，再噴加3克薄荷油，混勻，裝入薄濾紙制成的紙袋，每袋4克，即得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物袋泡劑。成人每日泡飲2～4袋。實施例11 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物膠囊取實施例1至9制得的任一種本發明的治療咽喉炎的藥物組合物，與附加劑混勻，裝入膠囊，即制得本發明的藥物組合物膠囊。實施例12 本發明的治療咽喉炎的藥物組合物片劑取實施例1至9制得的任一種本發明的治療咽喉炎的藥物組合物，與輔料混勻，壓制成片劑，即制得本發明的藥物組合物片劑。
本發明的治療咽喉炎的藥物組合物袋泡劑(以下簡稱袋泡劑)的藥效試驗如下1試驗藥品本發明袋泡劑，按實施例1制備；清音片，天津同仁堂制藥廠，生產批號960939。藥品配制取袋泡劑加開水(以淹沒藥即可)，加蓋，浸泡1h，并適時振搖，然后倒出藥液過濾，得濾液1，另放。再加開水(藥物∶水為1∶40)加蓋浸泡1h，適當振搖，倒出藥液過濾得濾液2，再按濾液2方法得濾液3。合并濾液2、3，濃縮至適當濃度，冷卻，再加濾液1，混勻，即得實驗用藥液。2 試驗動物青紫蘭家兔、昆明種小鼠和Wister大鼠，均由安徽省醫學研究所動物中心提供，其中昆明種小鼠和Wister大鼠，動物號分別為皖醫實動準第01和03號。3 試驗條件室溫20～25℃，濕度50～60％。4 溶劑蒸餾水。5 動物分組及劑量5.1動物分組試驗動物共分為5組，即蒸餾水空白對照組(簡稱蒸餾水組)，清音片陽性對照組(簡稱清音片組)，袋泡劑小、中、大劑量組。5.2劑量清音片組3g生藥/kg(1.6g片重/kg)，按公斤體重計算相當于臨床成人日用量的20倍，袋泡劑組小1.32g生藥/kg、中2.64g生藥/kg、大5.28g生藥/kg，按公斤體重計算，相當于臨床成人日用量的5、10和20倍。6 試驗方法與結果6.1抗病毒試驗6.1.1體外抗病毒作用6.1.1.1對流感病毒的抵制作用6.1.1.1.1病毒及來源流行性感冒病毒A3/漢防/359195(H3N2)，引自國家流感中心。6.1.1.1.2藥物袋泡劑浸泡濃縮液(3.5g生藥/mL)，清音片浸泡液(5.4g生藥/mL)直接過濾除菌，病毒唑注射液(江蘇連水制藥廠生產，批號9703245，0.1g/mL)，實驗時三種藥物均用RPMI 1640稀釋，pH約為7.2。6.1.1.1.3細胞狗腎傳代細胞(MDCK)，引自國家流感中心。6.1.1.1.4試驗方法參照中華人民共和國衛生部藥政局《新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編》(93年版)進行。6.1.1.1.5試驗過程在病毒毒力和藥物毒性測定的基礎上，在MDCK細胞96孔培養板中，加入10病毒半數感染量(TCID50)病毒液(病毒液作1∶100稀釋，在35℃，5％CO2吸附2h)，吸去病毒液，加入最大無毒濃度藥液2倍系列稀釋液7個濃度，每一稀釋度3孔，35℃，5％CO2培養3天，觀察細胞病變(CPE)，測定藥物對CPE的抑制。同時設病毒對照(不加藥液)，細胞對照(不加病毒)、藥物對照(細胞不加病毒，加不同濃度藥液)，結果見表1。
表1袋泡劑對流感病毒CPE抑制測定CPE抑制孔比例藥物稀釋度對照袋泡劑 清音片 病毒唑1∶512 3/33/3 3/3(-)1∶1024 3/33/3 3/3(-)1∶2048 3/30/3 3/3(-)1∶4096 3/30/3 3/3(-)1∶8192 0/30/3 3/3(-)注1、病毒對照(+)，細胞對照(-)2、(+)表示細胞出現CPE；(-)表示未見CPE6.1.1.1.6試驗結果由表1可得袋泡劑對流感病毒抑菌濃度為1∶8192，清音片為1∶2048。50％抑制病毒濃度(IC50)前者為1∶6144，后者為1∶3072。
6.1.1.2對腺病毒的抑制作用6.1.1.2.1病毒及來源腺病毒(7型)，中國藥品生物制品檢定所惠贈。
6.1.1.2.2藥物同上。
6.1.1.2.3細胞為人宮頸癌上皮細胞(HeLa)由安徽省醫學研究所病毒室保存。
6.1.1.2.4實驗方法同上。
6.1.1.2.5試驗過程在病毒毒力測定基礎上，于HeLa單層細胞96孔板中加入100病毒半數感染量(TCID50)病毒液(病毒液作1∶1000稀釋)，37℃、5％CO2吸附1h，棄去病毒液，分別加入袋泡劑及清音片8個濃度(1∶64～1∶8192)，每稀釋度3孔，同時設病毒對照藥物及正常細胞對照，置37℃、5％CO2培養箱中培養3d，觀察細胞病變(CPE)，測定藥物對CPE的抑制，以不出現CPE的最低藥物濃度為該藥抗病毒有效濃度，結果見表2。
表2 袋泡劑對腺病毒CPE抑制測定CPE抑制孔比例藥物稀釋濃度袋泡劑 清音片1∶64 3/3 3/31∶1283/3 3/31∶2563/3 0/31∶5123/3 0/31∶1024 3/3 0/31∶2048 3/3 0/31∶4096 0/3 0/31∶8192 0/3 0/3注病毒對照為(+)；藥物對照為(-)，細胞對照為(-)6.1.1.2.6試驗結果由表2試驗可見，袋泡劑有效抗腺病毒(7型)濃度為1∶2048，清音片為1∶128。袋泡劑50％抑制病毒濃度(IC50)為1∶3072，后者為1∶192。
6.1.2體內抗病毒作用6.1.2.1病毒來源流感病毒肺適應株(FM1)，血凝效價E＝1∶1280，由安徽省醫學研究所病毒室提供。
6.1.2.2方法與結果6.1.2.2.1預試驗取昆明種小鼠40只，體重18～22g，雌雄各半，雌性未孕。將小鼠隨機分為4組，每組10只，其中雌雄各5只。乙醚淺麻醉狀態下，以25、50、75和100μL/只的劑量，分別自鼻腔給各組小鼠滴入上述病毒。自感染病毒日起，逐日觀察并記錄動物死亡數，連續14天。結果發現各劑量組小鼠的死亡率分別為10％、70％、100％和100％。初步確定流感病毒肺適應株(FM1)的最小致死量為75μL/只，推測最大安全劑量約為12.5μL/只。
6.1.2.2.2流感病毒肺適應株(FM1)LD50的測定取昆明種小鼠60只，規格及要求同上。將小鼠隨機分為6組，每組10只，設公比為1.43(1∶0.7)，乙醚淺麻醉狀態下，按表3中劑量，分別自鼻腔給各組小鼠滴入上述病毒。自感染病毒日起，逐日觀察并記錄動物發病癥狀和死亡數，連續觀察14天。結果見表3，按Bliss法計算LD50。
表3 流感病毒肺適應株(FM1)LD50的測定劑量 動物數 死亡數 死亡率死 亡 分 布LD50及95％組別對數劑量 可信限(μL/只)(只) (只)(％) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14(d) (μL/只)1 74.8 1.873910 10 100 / / / 1 2 5 / 1 1 / / / / / 31.622 52.3 1.718510 8 80/ / / 1 1 2 1 2 1 / / / / /3 36.6 1.563810 6 60/ / / / / 1 2 1 1 1 / / / / 23.404 25.6 1.408210 4 40/ / / / / / 1 2 / 1 / / / / |5 17.9 1.252810 1 10/ / / / / / / / / 1 / / / / 39.846 12.5 1.096910 0 0 / / / / / / / / / / / / / /6.1.2.2.3 袋泡劑對流感病毒感染所致病毒性肺炎小鼠的保護作用6.1.2.2.3.1 對流感病毒感染后小鼠死亡率及生存時間的影響取昆明種小鼠72只，規格及要求同上。將小鼠隨機分為6組，分別為正常對照組、病毒組、病毒+袋泡劑小、中、大劑量組和病毒+清音片組，每組小鼠12只。袋泡劑小、中、大組劑量含生藥量為1.32、2.64和5.28/Kg，分別相當于臨床成人(60kg)用量的5、10和20倍；清音片含生藥量為3.60g/kg，相當于臨床成人用量的20倍。各給藥組于病毒感染前一天起灌胃給藥，0.25mL/10g體重，每日一次；正常對照組及病毒組等容積灌胃給予生理鹽水，連續給藥7天。此外，于給藥第2日，除正常組外，乙醚淺麻醉狀態下，以相當于2倍LD50量的病毒液60μL自小鼠鼻腔滴入。正常對照組滴入等量生理鹽水溶液。自感染病毒日起，逐日觀察并記錄動物發病癥狀和死亡數，連續觀察14天，結果見表4。
表4 袋泡劑對流感病毒感染小鼠死亡率及生存時間的影響(x±s)組別 劑量(g/kg)死亡率(％)保護率(％)生存時間(天)正常組等容量 0 / 14.00±0.00病毒組等容量 100ΔΔ / 6.00±1.48ΔΔ袋泡劑1.32 83.3* 16.7 8.75±2.96*袋泡劑2.64 58.3** 47.7 9.67±3.92**袋泡劑5.28 50.0** 50.0 11.00±3.44**清音片3.60 66.7** 33.3 9.33±3.89*與正常組相比ΔΔP＜0.01與病毒組相比*P＜0.05，**P＜0.01
表4結果顯示病毒組小鼠于病毒感染后一周內全部死亡，給予不同劑量的袋泡劑后，小鼠的死亡率顯著減少，中、大劑量組作用極為顯著；此外，袋泡劑對病毒感染后小鼠的存活時間明顯延長，與病毒組相比，統計學意義顯著。清音片對小鼠死亡率也具有顯著降低作用，并可延長小鼠的存活時間，作用與中劑量的袋泡劑基本一致。
6.1.2.2.3.2對流感病毒感染后小鼠肺指數及病變程度的影響實驗期間逐只稱取記錄死亡小鼠的體重和肺重量，實驗結束時，處死剩余小鼠，稱取體重和肺臟重量。并且，肉眼大體觀察肺臟改變情況，計算肺臟病變程度。肺臟無病變者，記0分；肺臟病變在1/4以下者，記1分；病變面積占全肺的1/4者，記2分；病變面積占全肺的1/2者，記3分；病變面積占全肺的3/4者，記4分；病變面積幾乎占肺的全部者，記5分；因病死亡而解剖小鼠的肺病變，記6分。各組小鼠的肺臟病變積分值及肺臟指數見表5。
表5袋泡劑對流感病毒感染小鼠肺指數及病變程序的影響(x±s)組別 劑量(g/kg)肺指數 改善率病變積分值正常組等容量 0.92±0.15 //病毒組等容量 4.36±0.35ΔΔ / 6.00±0.00ΔΔ袋泡劑1.323.55±1.07**18.6％5.08±2.15袋泡劑2.642.94±1.25**32.6％4.42±2.39**袋泡劑5.282.47±1.31**43.3％3.17±2.98**清音片3.603.36±1.04**22.9％4.92±2.07*與正常組相比ΔΔP＜0.01與病毒組相比*P＜0.05，**P＜0.01表5結果顯示與正常組相比，病毒組小鼠的肺指數明顯增加，統計學意義顯著。給予不同劑量的袋泡劑后，小鼠的肺指數明顯降低，中、大劑量組特別顯著；此外，與病毒組相比，袋泡劑組小鼠的肺病變平均積分值也有明顯減少，中、大劑量組作用有顯著意義。清音片對病毒感染小鼠的肺指數和肺病變平均積分值也顯著降低，作用接近于袋泡劑中劑量組。
6.2抗菌試驗6.2.1體外抗菌試驗6.2.1.1細菌來源由安徽中醫學院第二附院細菌室經臨床分離鑒定。
6.2.1.2培養基采用MH(Mueller-Hinton)培養基。
6.2.1.3 MIC測定采用試管法，菌液濃度為107CFU/mL，37℃培養24h，肉眼觀察無細菌生長的最低藥物濃度為該菌的MIC，結果見表6。
表6袋泡劑體外抑菌試驗菌種 抑菌濃度(g/mL)菌株數袋泡劑清音片107CFU/mL MIC50MIC90MIC范圍 MIC50MIC90MIC范圍金黃色葡萄球菌 5 0.03125 0.04688 0.01563-0.0625 0.03125 0.0625 0.03125-0.0625甲鏈5 0.250.3750.25-0.5 0.250.3750.25-0.5乙鏈5 0.125 0.25 0.125-0.25 0.250.25 0.125-0.25肺炎球菌5 0.5 0.5 0.25-0.5 0.250.5 0.25-0.5大腸桿菌5 1 10.5-11 1.5 0.125-2肺炎克雷伯菌5 0.125 0.1875 0.125-0.25 0.250.25 0.125-0.25由表6可見，袋泡劑體外有明顯抑菌作用，其中對金黃色葡萄球菌作用最強，MIC50為0.03125，對大腸桿菌最弱MIC50為1。
6.2.2體內抗菌試驗6.2.2.1對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用6.2.2.1.1試驗菌株配制 所用試驗菌株金黃色葡萄球菌由安徽中醫學院第二附院細菌室提供，用5％無菌干酵母液稀釋至所需濃度。
6.2.2.1.2試驗方法及結果經預試驗得出小鼠100％死亡的最小致死菌量(100％MLD)為4×107CFU/mL，再以MLD的感染菌量給小鼠ip 0.5mL/只，感染小鼠。于感染后立即和4h按表7、8中劑量ig給藥，正常飼養，連續觀察7d，并記錄各組動物死亡數。根據表7、8中數據用Bliss法計算半數有效量(ED50)和95％可信限，結果見表7、8。
表7 袋泡劑對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用組 劑量 對數 動物數 存活數 存活率死亡分布 ED50及95％可信別 (g/kg) 劑量 (n)(n)(％)1 2 3 4 5 6 7(d) 限(g/kg)15.000 0.699010 9 90 / 1 / / / / / 3.36524.000 0.602110 7 70 / 2 1 / / / / (2.96633.200 0.505110 4 40 2 2 1 1 / / / |42.560 0.408210 3 30 3 / 4 / / / / |52.048 0.331910 0 0 4 2 2 2 / / /3.818)蒸餾水等容量 - 10 0 0 8 1 1 / / / /表8 清音片對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用組 劑量對數動物數 存活數 存活率死亡分布ED50及95％可信別 (g/kg) 劑量 (n) (n) (％)1 2 3 4 5 6 7(d) 限(g/kg)14.690.67121010 100 / / / / / / / 3.00223.750.5740108 80 1 1 / / / / / (2.68933.000.4771105 50 2 2 1 / / / /|42.400.3802102 20 3 2 2 1 / / /|51.920.2833100 0 5 2 2 1 / / / 3.351)蒸餾水等容量 -100 0 8 2 / / / / /6.2.2.2對肺炎克雷伯菌感染小鼠的保護作用6.2.2.2.1試驗菌株配制 同上。
6.2.2.2.2試驗方法及結果經預試驗得出引起小鼠100％死亡的最小致死菌量(100％MLD)為1.5×107CFU/mL，再以MLD給小鼠ip 0.5mL/只，感染小鼠。于感染后立即和4h ig給藥，連續觀察7d，并記錄各組動物死亡數。根據表9、10中數據用Bliss法計算半數有效量(ED50)和95％可信限，結果見表9、10。
表9 袋泡劑對肺炎克雷伯菌感染小鼠的保護作用組 劑量 對數動物數 存活數存活率死亡分布 ED50及95％可信別 (g/kg) 劑量 (n)(n)(％)1 2 3 4 5 6 7(d)限(g/kg)18.000 0.903110 10100 / / / / / / / 4.18926.400 0.806210 990 1 / / / / / / (3.70835.120 0.708410 770 1 2 / / / / / |44.096 0.612310 660 2 1 1 / / / / |53.277 0.515410 220 5 2 / 1 / / / |62.621 0.418510 005 1 3 1 / / / 4.733)蒸餾水等容量 -10 0010/ / / / / /表10 清音片對肺炎克雷伯菌感染小鼠的保護作用組 劑量對數 動物數 存活數 存活率死亡分布ED50及95％可信別 (g/kg) 劑量 (n)(n)(％) 1 2 3 4 5 6 7(d) 限(g/kg)13.750.57401010 100 / / / / / / /2.19523.000.4771108 801 1 / / / / /(1.93832.400.3802106 603 1 / / / / / |41.920.2833104 403 1 2 / / / / |51.540.1875101 104 2 2 1 / / / |61.230.0899100 0 4 5 / 1 / / /2.486)蒸餾水等容量 -100 0 10 / / / / / /由上述試驗結果可見袋泡劑對金葡菌和肺炎克雷伯菌感染小鼠有明顯保護作用。6.3袋泡劑抗炎作用6.3.1對醋酸致血管通透性抑制作用取小鼠50只，隨機均分成5組，按表11中劑量給藥，連續7d，末次給藥后40min，尾靜脈注射0.5％伊文思藍0.1mL/10g體重，并立即ip 0.8％HAc 0.1mL/10g體重，30min后處死小鼠，向腹腔注射5mL生理鹽水，再注入1mL空氣，輕輕按摩腹部，打開腹腔，收集約5mL溶液，離心。在721分光光度計590nm處測吸收值(OD)，結果見表11。
表11 袋泡劑對醋酸致血管通透性抑制作用(x±s)組別 動物(n) 劑量(g/kg)OD值 抑制率(％)蒸餾水組 10 等容量0.472±0.076 -清音片組 10 3.00 0.325±0.046**31.14袋泡劑組(小)10 1.32 0.295±0.079**37.50袋泡劑組(中)10 2.64 0.233±0.048**50.64袋泡劑組(大)10 5.28 0.257±0.041**45.55與蒸餾水組比*P＜0.05，**P＜0.01，以下相同。
由表11可見，袋泡劑明顯抑制由HAc所致血管通透性增加，與蒸餾水組比，有非常顯著性差異，與清音片組比，無明顯差異。6.3.2對二甲苯致耳腫脹的抑制作用取體重18～22g小鼠50只，雌雄各半，分組同上，連續給藥7d，末次給藥后45min，在每只小鼠右耳涂二甲苯0.05mL。1h后頸椎脫臼處死小鼠，剪下耳片用0.8cm打孔器在小鼠兩耳相同部位各取一耳片，于扭力天平稱重，以兩耳片重量差作為腫脹度，結果見表12。
表12 袋泡劑對二甲苯所致小鼠耳腫脹的抑制作用(x±s)組別 動物(n)劑量(g/kg) 耳腫脹度(mg)蒸餾水組10等容量 9.88±1.23清音片組103.006.52±1.17**袋泡劑組(小) 101.327.27±1.25**袋泡劑組(中) 102.646.38±1.13**袋泡劑組(大) 105.285.89±1.00**由表12可見，袋泡劑明顯抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹，與蒸餾水組比，有非常顯著性差異；與清音片組比，無明顯差異。
6.3.3對蛋清致大鼠足腫脹的抑制作用取體重180～200g雄性大鼠50只，隨機均分成蒸餾水組，清音片組和袋泡劑大、中、小劑量組，按表13中劑量給藥，1mL/100g體重，連續7d。用容量法測右后足容積，然后于末次給藥后40min，每鼠右后足趾腱膜下注入0.1mL 100％蛋清致炎，分別于注入蛋清后0.5、1、1.5、2、3、4h測量足容積，結果見表13。
由表13可見，袋泡劑明顯抑制蛋清致大鼠足腫脹，與蒸餾水組比，有顯著性差異，與清音片組比，無明顯差異。
6.3.4對棉球植入法所致肉芽增生的抑制作用取體重180～200g雄性大鼠50只，隨機均分成5組(同上)，在乙醚麻醉無菌條件下，將已稱重的棉球，經高壓滅菌，每個棉球加入氨芐青霉素1mg 0.1mL，150℃烘箱烤干后，植入大鼠兩側腹股溝皮下，當動物清醒后，按表14中劑量ig給藥，1mL/100g體重，連續7d。最后一次給藥后40min處死大鼠，剝離并取出肉芽組織，于90℃烘箱內干燥4h后稱重，并減去原棉球重量，即為肉芽凈重，結果見表14。
表14 袋泡劑對大鼠棉球致肉芽增生的抑制作用(x±s)組別 動物(n) 劑量(g/kg)肉芽重(mg)抑制率(％)蒸餾水組 10 等容量 136.20±42.27 -清音片組 10 3.60 36.42±23.28**73.26袋泡劑組(小)10 1.32 67.07±38.10**50.76袋泡劑組(中)10 2.64 42.04±16.10**69.13袋泡劑組(大)10 5.28 15.61±12.87**88.54
表13袋泡劑對蛋清致大鼠足腫脹的抑制作用(x±s)鼠數 劑量 腫脹度(ml)組別(n) (g/kg)0.5 1 1.523*4(h)蒸餾水組10等容量 1.110±0.0741.130±0.111 1.085±0.0971.025±0.1600.895±0.1230.775±0.116清音片組103 0.685±0.144**0.695±0.109**0.605±0.155**0.525±0.138**0.475±0.129**0.415±0.108**袋泡劑組(小)101.320.835±0.138**0.665±0.226**0.685±0.197**0.565±0.245**0.505±0.161**0.465±0.167**袋泡劑組(中)102.640.685±0.129**0.675±0.139**0.635±0.183**0.465±0.186**0.405±0.112**0.365±0.120**袋泡劑組(大)105.280.660±0.081**0.640±0.0.081**0.560±0.141**0.420±0.351**0.360±0.094**0.260±0.150**
表15袋泡劑對家兔體溫的影響(n＝10，x±s)藥后體溫(℃)正常體溫組別(℃)0 0.51 1.5 2 3 4 5 6(h)蒸餾水組38.78±0.38 39.63±0.24 40.05±0.81 40.29±0.6540.58±0.97 40.26±0.9839.99±0.8239.67±0.7439.33±0.3439.17±0.41清音片組38.70±0.35 39.73±0.68 39.34±0.38*39.06±0.39**38.87±0.44**38.91±0.38**38.79±0.38**38.79±0.35**38.73±0.41**38.75±0.34**袋泡劑組(小)38.70±0.37 39.54±0.30 39.40±0.19*39.06±0.47**38.99±0.47**38.80±0.56**38.83±0.52**38.66±0.48**38.71±0.45**38.60±0.44**袋泡劑組(中)38.78±0.34 39.69±0.50 39.38±0.30*39.12±0.36**38.94±0.45**38.77±0.50**38.71±0.44**38.73±0.37**38.78±0.44**38.65±0.43**袋泡劑組(大)38.75±0.35 39.65±0.28 39.12±0.32*38.99±0.40**38.84±0.44**38.77±0.43**38.74±0.37**38.69±0.34**38.71±0.25**38.65±0.28**
由表14可見，袋泡劑明顯抑制棉球所致肉芽增生，與蒸餾水組比，有非常明顯性差異，與清音片組比大劑量組有明顯差異，且與劑量有關，劑量越大，作用越強。6.4袋泡劑的解熱作用6.4.1對百、白、破類毒素致家兔體溫升高的抑制作用選體溫在38～39℃的家兔50只，體重1.5～2Kg，雌雄兼用，分組同上。測量正常體溫后，經兔耳緣靜脈注射百、白、破類毒素混懸劑(衛生部上海生物制品研究所生產，批號970611.6)1mL/Kg，當體溫升高超過0.5℃后，按劑量分別ig給藥2mL/Kg，并分別于給藥后0.5、1、1.5、2、3、4、5和6h測體溫1次，結果見表15。
由表15可見，袋泡劑明顯抑制百、白、破類毒素所致家兔體溫升高，與蒸餾水組比，有非常顯著性差異；與清音片組比，無明顯差異。6.4.2對大鼠體溫的影響取體重160-200g大鼠50只，雌雄兼用，隨機均分成5組，測正常體溫后，各組大鼠背部皮下注射2、4-二硝基酚30mg/Kg，0.1mL/100g體重，當體溫升高超過0.5℃以上后，按劑量ig給藥，分別于給藥后0.5、1、1.5、2、3、4、5和6h測量體溫，結果見表16。
由表16可見，袋泡劑明顯抑制2，4-二硝基酚致大鼠體溫升高，大劑量組從0.5小時后作用明顯，而其他組3h后作用明顯，與蒸餾水組比，有非常顯著性差別。6.5袋泡劑鎮痛作用6.5.1 熱板法取經過篩選(二次痛閾均不超過30s者)體重18～22g雌性小鼠50只，隨機均分成5組(同上)，將恒溫水浴鍋水溫調至55±0.5℃，玻璃燒杯底部接觸水面，加熱后作為熱刺激板。用秒表記錄小鼠自投入燒杯內至出現舔后足的時間(s)作為該鼠痛閾值。按劑量分別ig給藥0.25mL/10g體重。分別于給藥后0.5、1、1.5、2、2.5、3、4h測一次痛閾值，超過60s，即停止測試，按60s計，結果見表17、18。
表18袋泡劑對熱板法的痛閾提高百分率痛閾提高百分率(％)組 別0.5 1 1.5 2 2.5 34(h)蒸餾水組 -- - - - - -清音片組 69.9481.68 94.89 126.71 134.57 141.55 95.86袋泡劑組(小) 26.6145.65 48.98 64.99 70.6654.6278.07袋泡劑組(中) 44.8577.56 103.58 99.33 96.9079.3560.18袋泡劑組(大) 70.7887.71 102.25 122.06 147.36 151.85 143.03
表16袋泡劑對2，4-二硝基酚致熱大鼠的解熱作用(x±s)藥后體溫(℃)組別正常體溫(℃)0 0.5 1 1.5 2 3 4 5 6(h)蒸餾水組38.01±0.59 38.69±0.61 38.83±0.58 38.84±0.4538.73±0.4138.65±0.7138.56±0.5238.46±0.65 38.39±0.61 38.20±0.58清音片組38.04±0.57 38.88±0.41 38.60±0.49 38.50±0.5138.38±0.4938.24±0.4838.07±0.44*38.01±0.54 37.95±0.48 38.04±0.54袋泡劑組(小)38.07±0.48 38.85±0.43 38.73±0.59 38.39±0.6538.23±0.7438.15±0.5837.92±0.56*37.88±0.52 38.01±0.52 37.88±0.51袋泡劑組(中)38.04±0.64 38.80±0.62 38.57±0.64 38.38±0.7138.26±0.7438.15±0.6838.01±0.64*37.96±0.69 37.96±0.69 37.92±0.64袋泡劑組(大)38.02±0.53 38.70±0.56 38.44±0.62*38.15±0.72*37.87±0.79**37.75±0.69**37.80±0.73**37.67±0.63*37.76±0.71*37.85±0.63
表17袋泡劑對熱板法的鎮痛作用(n＝10，x±s)痛閾值 (S)組別0 0.5 1 1.522.5 34(h)蒸餾水組 18.53±3.34 19.30±3.5719.43±4.9219.80±3.4819.54±2.54 19.70±2.42 20.58±4.1721.75±3.44清音片組 19.18±4.28 32.51±6.17**35.30±6.27**36.16±8.24**44.30±10.94**46.21±10.63**49.71±9.76**42.60±11.06**袋泡劑組(小) 21.37±7.68 24.22±5.79**28.30±5.08**29.17±3.51**32.64±4.87**33.62±5.52**31.82±5.03**38.73±5.18**袋泡劑組(中) 18.97±4.01 27.71±5.17**34.50±3.43**39.86±8.06**38.95±8.28**38.79±6.04**36.91±9.70**34.84±9.42**袋泡劑組(大) 19.66±4.48 32.67±7.23**36.36±9.03**39.60±8.67**43.39±9.16**48.73±9.06**51.83±7.53**52.86±9.23**
由表17、18可知，袋泡劑對熱致痛有明顯抑制作用，與蒸餾水組比有顯著性差異，且劑量越大作用越強。6.5.2扭體法取體重18～22g小鼠50只，雌雄兼用，隨機均分成5組(同上)，分別按表19中劑量灌胃給藥，連續5d，末次給藥后40min，各組小鼠ip 0.7％醋酸溶液0.1mL/10g體重，分別記錄注射醋酸后10min和20min內各組小鼠扭體次數，以及疼痛抑制百分率，結果見表19。
表19 袋泡劑對扭體法的鎮痛作用(x±s)組別 動物 劑量扭體數(次) 抑制率(10％)(n) (g/kg) 10min 20min 10min20min蒸餾水組 10等容量19.50±5.93 42.80±8.78 - -清音片組 103.00 12.90±2.60** 26.00±5.03** 33.85 39.25袋泡劑組(小) 101.32 16.80±3.9132.60±7.55* 13.85 23.83袋泡劑組(中) 102.64 13.30±6.06* 26.70±4.92** 31.79 37.62袋泡劑組(大) 105.28 6.00±2.91** 14.40±4.58** 69.23 66.36由表19可見，袋泡劑明顯抑制由醋酸所致疼痛，小鼠扭體次數明顯減少，與蒸餾水組比，有非常顯著性差異。6.5.3甩尾法取體重18～22g小鼠50只，雌雄兼用，隨機均分成5組。分別將小鼠的尾部(從尾尖到末端5cm處)，浸入48℃恒溫水浴鍋熱水中，觀察和記錄小鼠尾從放入水中到甩尾潛伏期，然后按表中劑量ig給藥0.25mL/10g體重，連續5d，末次給藥后40min，再按上方法進行，結果見表20。
表20袋泡劑對甩尾法的鎮痛作用(n＝10，X±s)組 劑量 痛閾反應潛伏期(S)別(g/kg) 藥 藥后前1 2 3 4(h)蒸餾水組 等容量 7.22±1.38 7.23±1.987.02±1.76 7.94±1.87 6.56±2.04清音片組 3.006.76±1.89 7.23±2.109.54±2.64*8.48±3.38 6.57±1.88袋泡劑組(小) 1.327.17±1.54 7.14±2.319.52±3.24 10.11±3.205.62±1.64袋泡劑組(中) 2.647.33±1.49 7.30±2.389.76±2.83*11.92±5.546.70±1.62袋泡劑組(大) 5.287.43±1.84 8.05±3.149.43±2.39*10.56±3.355.79±2.21
由表20可見，連續用藥5d后，小鼠對熱刺激引起的疼痛有一定抑制作用，尤其是藥后2h，與蒸餾水組比，有顯著性差異。
小結由實驗結果可見，本發明的袋泡劑體外能抑制流感病毒As和腺病毒(7型)的生長繁殖，顯著降低流感病毒適應株(FM1)所致小鼠病毒性肺炎死亡率，減少肺指數并抑制肺臟病變程度，體外明顯抑制肺炎球菌、金黃色葡萄球菌、甲鏈、乙鏈、大腸桿菌和肺炎克雷伯菌生長，體內對金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌感染的小鼠有明顯的保護作用；對抗醋酸致血管通透性增加、二甲苯致小鼠耳腫脹、蛋清致大鼠足腫脹和棉球致肉芽增生；降低百、白、破類毒素和2，4-二硝基酚致家兔和大鼠的體溫升高；還能抑制熱和醋酸所產生的疼痛，說明本發明的藥物組合物有良好的清熱解毒、利咽開音之功效。
權利要求
1.一種治療咽喉炎的藥物組合物，其特征是它包含下列成份及質量組分金銀花100～500份、菊花100～400份、胖大海50～200份，以及桔梗100～400份、麥冬100～400份、玄參100～400份三種藥材的水提取物。
2.根據權利要求1所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征是它包含桔梗、麥冬、玄參和質量組分的蟬蛻50～200份、或木蝴蝶50～200份、或甘草50～200份四種藥材的水提取物。
3.根據權利要求2所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征是它包含桔梗、麥冬、玄參、蟬蛻和質量組分的甘草50～200份，或者包括含桔梗、麥冬、玄參、木蝴蝶和質量組分的甘草50～200份，或者包括含桔梗、麥冬、玄參、蟬蛻和質量組分的木蝴蝶50～200份五種藥材的水提取物。
4.根據權利要求3所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征是它包含桔梗、麥冬、玄參、蟬蛻、甘草和質量組分的木蝴蝶50～200份六種藥材的水提取物。
5.一種制備權利要求1所述的治療咽喉炎的藥物組合物的方法，其特征是它由下列步驟組成步驟一、在處方質量組分的桔梗、麥冬和玄參中加入藥材總質量4～12倍質量的水煎煮提取0.5～3小時，如此提取2～4次，合并水提取液，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.05～1.20(50℃)的清膏，步驟二、在步驟一所制得的清膏中加入乙醇，使乙醇含量達40～90％，攪勻，靜置12～36小時，過濾，濾液回收乙醇，并濃縮至相對密度為1.10～1.30(50℃)的稠膏，步驟三、取處方質量組分的金銀花、菊花、胖大海粉碎成細粉，步驟四、將步驟三所制得的細粉加入到步驟二所制得的稠膏中，混勻，制成顆粒，干燥，即得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。
6.一種制備權利要求2所述藥物組合物的方法，其特征是在權利要求5所述方法的步驟一中加入處方質量組分的蟬蛻、或木蝴蝶、或甘草，一起加水提取，制成清膏，然后按權利要求5所述方法的步驟二至步驟四，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。
7.一種制備權利要求3所述藥物組合物的方法，其特征是在權利要求5所述方法的步驟一中加入處方質量組分的蟬蛻和甘草，或者木蝴蝶和甘草，或者蟬蛻和木蝴蝶，一起加水提取，制成清膏，然后按權利要求5所述方法的步驟二至步驟四，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。
8.一種制備權利要求4所述藥物組合物的方法，其特征是在權利要求5所述方法的步驟一中加入處方質量組分的蟬蛻、木蝴蝶和甘草，一起加水提取，制成清膏，然后按權利要求5所述方法的步驟二至步驟四，制得本發明的治療咽喉炎的藥物組合物。
9.一種治療咽喉炎的藥物組合物的袋泡劑，其特征是將本發明的藥物組合物顆粒，加矯味劑，混勻，裝入紙袋中，制成的本發明治療咽喉炎的藥物組合物袋泡劑。
10.一種治療咽喉炎的藥物組合物膠囊或片劑，其特征是將本發明的藥物組合物顆粒與附加劑混合，裝入膠囊或壓制成片，制成的本發明藥物組合物的膠囊或片劑。
全文摘要
一種治療咽喉炎的藥物組合物，它包含下列成份及質量組分金銀花100～500份、菊花100～400份、胖大海50～200份以及桔梗100～400份、麥冬100～400份、玄參100～400份三種藥材的水提取物。本發明的治療咽喉炎的藥物組合物能迅速緩解咽喉腫痛、干燥、灼熱等癥狀，療效快捷確切，對平素肺胃蘊熱的易感人群，經常服用還能起到預防咽喉炎的作用。
文檔編號A61P11/04GK1456344SQ0313167
公開日2003年11月19日 申請日期2003年6月3日 優先權日2003年6月3日
發明者王興旺, 徐向陽, 孫曄, 張蕙, 張慶曉, 萬輝, 田麗娟, 陳鐘, 陳希, 張 杰, 倪潔, 張春來, 夏云 申請人:金陵藥業股份有限公司技術中心