專利名稱：一種治療肝膽結石的溶石性藥物及制備方法
技術領域：
本發明涉及一種治療肝膽結石的溶石性藥物，特別是涉及一種以中草藥為原料制備的中成藥。
背景技術：
隨著人們生活水平的提高，工作節奏的加快，肝膽結石以及肝膽結石引起的急慢性膽囊炎發病率一直呈上升趨勢。肝膽結石的溶石療法是目前國內外學者都在關注的重要課題，也是治療肝膽結石較為理想的方法。中藥溶石療法具有安全、有效、費用低等優點。但從目前上市的具有利膽溶石排石作用的藥品來看，如四川生產的“消溶膽石片”、上海的“膽寧片”、95年國家衛生部審評通過并已上市的中藥三類新藥金龍舒膽顆粒，其存在的缺點是，都有每次服用劑量大，藥味多，易致腹瀉，療程長等弊端。另外，由西德愛活大藥廠出品愛活膽通，為進口治療膽石癥膠囊，外形與本發明相似，每粒含油液0.2ml，含有效成分為100mg，中國進口許可證號880209 REG HK-22425，藥物批號1291ch B11742 EXP1295，其不足之處在于溶石效果不明顯，利膽起效慢，消炎效果不理想。

發明內容
針對現有技術的不足，本發明要解決的技術問題在于提供一種口服劑量小、療效高、療程短、副作用小的治療肝膽結石的溶石性藥物。
本發明另一要解決的技術問題是提出一種本發明的制備方法。
本發明要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的，本發明的技術解決方案基于祖國醫學對肝膽結石的發病機理的認識及治療原則，參考現代藥理研究成就，按中醫理論組方。中醫認為，膽為中正之官，寄附于肝。《脈經》日“肝之余氣，溢于膽，聚于膽，聚而成精汁”。精汁來源于肝，貯藏于膽，故又稱“膽為中精之府”。精汁的疏泄下行，注入腸中，有于食物的消化。這與現代醫學認為膽囊具有貯存、濃縮、排空膽汁的生理功能極其相似。
中醫認為，膽石病的病理是因為按中醫辨證求因分析，肝失調達，樞機不利，則膽腑泄藏失調，濕熱內生，日久結石。故在采用非手術療法，運用中醫藥治療此類疾病時，治當疏肝行氣、利膽溶石。疏肝行氣有助于轉利樞機，恢復泄藏功能；利膽溶石以消除病理產物，更有助于樞機轉利，泄藏復常；并可緩解上述病理機轉所造成的脅腹脹悶和疼痛等主癥。
本發明即遵循上述治法選藥組方，一種治療肝膽結石的溶石性藥物，其特點是它主要有效成份為薄荷油。
本發明要解決的技術問題還可以通過以下技術方案來進一步達到，它在主要有效成份薄荷油中混合配入香葵油，其薄荷油、香葵油的重量配比是2～6∶1。
本發明要解決的技術問題還可以通過以下技術方案來進一步達到，所述的治療肝膽結石的溶石性藥物，其薄荷油、香葵油的重量配比是4∶1。
本發明要解決的技術問題還可以通過以下技術方案來進一步達到，所說的藥劑是口服制劑。
本發明要解決的技術問題還可以通過以下技術方案來進一步達到，所說的口服制劑是軟膠囊。
本發明要解決的技術問題還可以通過以下技術方案來進一步達到，所說的口服制劑是口服液。
本發明所述軟膠囊的制備方法為將水、明膠、甘油按重量配比1∶1～1.1∶0.2～0.5的比例混合均勻后，加熱布展成軟膠囊囊皮，將混合均勻的薄荷油、香葵油與軟膠囊囊皮一起壓制成軟膠囊，在40～45攝氏度溫度下干燥4～10小時即得。
與現有技術相比，本發明藥物的優點是它主要有效成份為薄荷油，薄荷油的主要成分薄荷醇與薄荷酮具有抑制腸管運動和解痙作用。而且作為健胃效果之一的利膽作用也非常顯著(日本.生藥學雜志1985；39(1)93)。本發明正是利用其疏肝解郁，清熱利膽之功效，有助于恢復肝之條達，膽之樞利，泄藏復常，以促進膽汁的正常分泌，消除“精汁郁滯”的病理機轉，以治其病之本。本發明主要有效成份薄荷油中混合配入香葵油，以薄荷油為君，香葵油為佐，既有佐制之功，又有佐助之妙，共行疏肝行氣、利膽溶石的功效。故用于治療肝氣郁滯所致的上腹不適，脅痛，脘悶不舒，苔薄或黃膩，脈弦，以及用于膽石癥，膽道手術后綜合癥等。選擇軟膠囊作為本發明的最佳劑型，本發明有服用量小，有效部位在藥品中的含量高，制劑的穩定性好的特點。
薄荷油為薄荷的鮮莖葉經水蒸氣蒸餾，再冷凍，部分脫腦加工制得的揮發油。本品性味與薄荷相同，皆為辛、涼，其歸經、功能亦一致，薄荷歸肺、肝二經。薄荷油性味辛涼，雖有利于疏肝解郁、清熱利膽，但由于使用劑量較大，過于辛涼，則有涼胃、敗胃之弊，而致本來就有消化不良的病理環節有可能加重，同時要消除由于肝失疏泄，膽失通降所致的濕濁熱蘊，結石內生的病理產物和因此而導致的主癥脅腹脹悶、疼痛、甚至噯氣嘔惡、消化不良等諸癥，單靠薄荷油一味藥也顯勢單力薄。為此，本發明又配少量香葵油作為佐藥，《中藥大辭典》記載香葵油“味辛、氣香、性溫散，用于治風濕疝氣”。從其治疝氣，推其歸經可入肝、膽經。其必性溫，正好與薄荷油之性涼相互制約，使薄荷油不過于涼胃、敗胃。由于薄荷油的劑量大于香葵油的劑量，故本發明仍以性涼清熱為主。同時香葵油芳香而不嫌其猛烈，溫煦而不偏于熱燥，正利于避穢惡，除濕濁，與薄荷油配伍，有助于清熱化濕，以消除濕熱蘊結之病理產物。藥理實驗表明，兩藥相配，還具有顯著的溶石防石效果，這也有助于消除由于精汁郁滯而成結石內生的病理產物。香葵油與薄荷油之辛均有利于行氣活血之功，辛散能行，既有助于消除膽囊炎、膽石癥常見的脅腹脹悶，噯氣嘔惡的主癥；“氣為血之帥氣行則血行”，氣血的流通，又有助于因上述病癥日久，致閼血停滯，“痛則不通”所見的脅腹疼痛，發揮行氣止痛的效果，以緩解或消除主癥。以薄荷油為君，香葵油為佐，既有佐制之功，又有佐助之妙，二藥配伍，共行疏肝行氣、利膽溶石的功效。故用于治療肝氣郁滯所致的上腹不適，脅痛，脘悶不舒，苔薄或黃膩，脈弦，以及用于膽石癥，膽道手術后綜合癥等。在藥劑學方面，本發明主要研制人根據薄荷油、香葵油的疏肝行氣、利膽溶石功能，為使本發明達到服用量小，有效部位在藥品中的含量高，制劑的穩定性好，選擇了軟膠囊作為本發明的劑型。本發明是一種口服劑量小、療效高、療程短、副作用小的治療肝膽結石的溶石性藥物。
本發明的利膽溶石軟膠囊為口服制劑，外形如魚肝油丸，綠黃色透明軟膠囊，帶濃郁的薄荷香味，外徑14×8mm的橢圓形軟膠囊，每粒裝油狀物(原液)0.4ml，本品臨床試用為成人日服3次，每次1粒，成人以60公斤體重計，人每日公斤體重用量約為0.02ml，一、試驗材料受試藥物本發明的利膽溶石軟膠囊為口服制劑，本試驗采用未裝膠囊的原液，為淺綠色油液，本發明的利膽溶石軟膠囊(以下簡稱“LDRS”)批號為970101，為了稀釋原液方便，將其加入1％吐溫-80進行乳化，藥物乳化后存冰箱備用，用時以0.5％的羧甲基纖維素作稀釋劑，稀釋至所需濃度，LDRS原液由連云港康緣制藥有限責任公司提供，實驗采用高、中、低三種劑量，分別是0.307ml/kg.d、0.154ml/kg.d、0.077ml/kg.d，相當于臨床公斤體重用量的3.85、7.7、15.4倍，以下各種試驗均以上述三種劑量進行。
陽性對照藥愛活膽通(為進口治療膽石癥膠囊，外形與LDRS相似，每粒含油液0.2ml，含有效成分為100mg，本品由西德愛活大藥廠出品，中國進口許可證號880209 REG HK-22425，藥物批號1291chB11742 EXP1295，藥物配制將其油液加入1％吐溫-80進行乳化后，以0.5％羧甲基纖維素液配成0.015ml/ml，豚鼠公斤體重用量為0.15ml/kg.d，是臨床公斤體重用量的15倍。
二、主要試藥成石飼料模型劑，為基礎飼料+高脂飼料。
基礎飼料由玉米粉50％、麥皮10％、碎米粉10％、魚粉6％、豆白粉17％、碳酸鈣1％、食鹽1％、酵母粉1％、麥粉或谷粉4％組成。由四川省中藥研究所提供。
高脂飼料由1％酪蛋白(北京海淀區微生物培養基制品廠生產)、1％纖維素(四川瀘州化工廠生產，批號970101)、0.02％膽酸(瑞士進口重慶化試商店購)、0.5％膽固醇(西德MERCK藥廠產品重慶化試商店購)、1.5％蔗糖、1％豬油(蔗糖、豬油購于當地市場)。
放射免疫藥盒中國原子能科學研究院生產，批號IMK-407，批準文號(94)衛藥準字R-13。
三、主要測試儀器半自動生化儀法國西克曼廠生產，型號S-500P型。
r免疫測定儀中國西安262廠生產。
光電子天平BP3100型，帶TOPO3型多功能自動打印機，稱量為600、1200、3200g，感量分別為0.01、0.02、0.05g，由德國賽多利斯電子公司生產。
光電子天平TP1000型稱量1000g，感量為0.1g，由湖南湘儀衡器廠生產，批號961183。
LD5-2A型離心機北京醫用離心機廠生產，批號970609。
GALEN-III型雙目生物顯微鏡1臺，上海江南顯微鏡廠生產，出口型產品，帶自動光源，放大倍數可達1600倍。
JN-A型精密扭力天平稱量為500mg，感量1mg，上海第二天平廠生產。
四、動物豚鼠實驗采用250～300g健康豚鼠，由華西醫科大學基礎醫學院實驗動物中心提供。
小鼠采用昆明種遠交系(封閉群30代以上)I級合格小鼠，合格證登記號川實動管質(95)第85號。
大鼠采用SD種遠交系(封閉群30代以上)I級合格大鼠，合格證登記號(95)川實動管質第92號。大、小鼠均由四川抗菌素工業研究所實驗動物中心提供。
日本大耳白兔體重2～2.5kg雌雄兼用，合格證號(95)一醫動字第24361040號，地方號川實動管質(95)第40號，由四川省中藥研究所提供。
五、實驗環境本實驗在四川省中醫藥管理局新藥藥理試驗基地內進行，試驗室溫度控制在18～28℃，相對濕度40～60％，熒光與日光照明結合，12小時明，12小時暗環境，裝有自動換氣裝置，實驗動物采用分籠飼養，每籠動物不超過5只，常規軟飼料(全價飼料)喂養，每天每只大鼠按20g(軟飼料)/100g.bw，小鼠6g(軟飼料)/10g.bw，并適當喂以青飼料。
六、數據處理計量資料采用x±SD表示，用T或T′(實驗與對照組間比，或藥前與藥后比)。
計數資料采用X2(2×2)檢驗，實驗與對照比較。
七、藥學試驗姿料1、LDRS對豚鼠膽紅素結石的防石作用取體重250～300g健康雌性雜色豚鼠61只，豚鼠購回經一周環境適應后按體重隨機均分為6組，其中5組為實驗組，實驗組第1組11只，為模型組(下簡稱成石組，本組每日每只喂致石飼料按20g/100gbw(bw為體重的縮寫)，以下各組致石飼料均按此喂給)；第2、3、4組各組11只，分別灌服LDRS原液0.077ml/kg.d、0.154ml/kg.d、0.307ml/kg.d和致石飼料，第5組11只口服愛活膽通0.15ml/kg.d和致石飼料。以上5組動物每日上午8～9時灌服給對照藥和受試藥，下午分別每只稱量喂給致石飼料，余下6只每天只喂基礎飼料。為確保實驗鼠給藥的準確性，實驗采取單格喂養籠，實驗豚鼠單個喂養，各組動物均于分組后，進行白天進食訓練，同時喂養時將食物與藥物反復拌勻，豚鼠食槽的進食口基本只能進嘴，然后從上至下的進食，喂飼時分兩次，第一次喂摻藥飼料(或致石飼料)，待摻藥飼料取盡后方喂基礎飼料。實驗組連續給藥及喂致石飼料90天，各組于末次給藥24小時后斷股靜脈取血(分離血清)，然后斷頭處死迅速剖開胸腹，用止血鉗阻斷膽總管，取膽囊用放大鏡仔細觀察記錄成石鼠數，計算成石率(成石鼠數/實驗鼠數)，結果如表1。血清分別用125I甘膽酸放射免疫試劑藥盒，按藥盒操作程序，用r免疫測定儀，測其甘膽酸含量，用咖啡因法，利用中國科學院生物研究所上海榮盛試劑廠膽色素分析藥盒，分別測定總膽紅素、結合膽紅素、計算游離膽紅素，結果如表1、表2。
從表1，連續灌服LDRS原液0.307ml/kg.d、0.154ml/kg.d、0.077ml/kg.d 90天，對致石飼料所致豚鼠膽色素結石的成石率有不同程度的抑制作用，其中0.307ml、0.154ml/kg.d兩個劑量對膽紅素的成石率分別為0.0％、27.3％，與成石組比較抑制率分別為90.9％、63.6％，與成石組的成石率比較，顯著低于成石組，P＜0.01或0.001，有非常顯著性差異，表明連續灌服LDRS，對致石飼料所致豚鼠膽紅素的結石形成有良好的防石效果。低劑量組的抑石率雖有45.4％，但因樣本較小，P＞0.05，無顯著性差異。
表1 連續ig不同劑量的LDRS原液90d對豚鼠成石率及膽囊重量的影響組別 動物數劑量 成石率 抑制率 膽囊干重(只)(ml/kg)[成石數(只)/實驗數(只)] (％)(mg.x±SD)愛活膽通11 0.150 8/11 18.226.60±6.3**LDRS大劑量 11 0.307 0/11**90.918.36±6.2***ΔΔLDRS中劑量 11 0.154 3/11**63.623.80±5.7***LDRS小劑量 11 0.077 5/11 4.4 22.80±4.8***成石組 11 0.5％CMC 10/11- 39.50±10.2止常對照組 6 - 0/6 20.70±1.90***ΔΔ與成石組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001(抑制率＝對照組成石率—實驗組成石率)與愛活膽通比ΔΔP＜0.01表2 LDRS、愛活膽通對成石豚鼠的血清甘膽酸、膽紅素含量的影響組別 鼠數劑量甘膽酸 血清膽紅素量(μmol/L.x±SD)(只) (ml/kg) (μg/dl.x±SD) T-BIL 直接-BIL游離-BIL愛活膽通 80.150 535.47±167.480±0.350.53±0.10*1.27±0.24LDRS低劑量 70.307 411.27±129.3*1.68±0.22**0.42±0.05**1.26±0.17LDRS中劑量 80.154 406.76±105.9**1.63±0.22**0.47±0.06**1.16±0.16**LDRS大劑量 10 0.77386.70±47.4***1.58±0.21**0.54±0.07**1.05±0.14***成石豚鼠 8 ig 0.5％ CMC 598.59±197.9 2.11±0.39 0.67±0.11 1.13±0.28正常豚鼠6 - 446.45±98.9*1.35±0.30***0.39±0.07 0.96±0.23**與成石組比*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表2是各組豚鼠血清甘膽酸與各種膽紅素測定結果表，從表2可見，連續口服不同劑量的LDRS膠囊90天，結果LDRS對成石豚鼠甘膽酸的抑制率分別為31.3％、32.0％、35.4％，與成石組比，均有顯著抑制作用，且對血清中的各種膽紅素亦有不同程度的抑制作用，表明LDRS對成石豚鼠因膽汁郁積引起的甘膽酸、膽紅素的升高有明顯對抗作用，這對于阻止膽紅素結石的形成有良好的作用。
2、本發明對正常小鼠血清甘膽酸、膽紅素的影響取體重28～32g健康雌性小鼠32只，按體重隨機均分為4組，每組8只，第1、2分別灌服LDRS原液0.154ml/kg.d、0.307ml/kg.d；第3組灌服愛活膽通0.15ml/kg.d；第4組為空白對照灌服等體積0.5％羧甲基纖維素(以下縮寫為CMC)。各組每日灌服給藥1次，連續灌服10天，于末次給藥后2小時，拔眼取血，以3000r/min離心15min，分離血清，血清分別用放免法、咖啡咽法測定甘膽酸、各種膽紅素，結果如表3。
表3 LDRS、愛活膽通對正常小鼠血清甘膽酸、膽紅素含影響組別 鼠數 劑量 甘膽酸 血清膽紅素量(μmol/L.x±SD)(只) (ml/kg)(μg/dl.x±SD) T-BIL 直接-BIL游離-BIL正常空白 8 ig0.5％CMC 511.83±81.31.24±0.33 0.36±0.09 0.83±0.21愛活膽通 8 0.150611.89±135.71.45±0.37 0.40±0.141.05±0.24*LDRS 8 0.154417.86±175.8Δ 0.89±0.21*ΔΔ 0.23±0.06**ΔΔ 0.66±0.16*ΔΔLDRS 8 0.307407.86±103.3*ΔΔ 0.833±0.18**ΔΔ 0.29±0.06Δ 0.54±0.12**ΔΔΔ與正常空白比*P＜0.05**P＜0.01與愛活膽通比ΔP＜0.05 ΔΔP＜0.01 ΔΔΔP＜0.001從表3可見，灌服LDRS原液0.154ml/kg.d、0.307ml/kg.d 10天，對正常小鼠的血清甘膽酸、總膽紅素、結合膽紅素(直接膽紅素)、游離膽紅素均有不同程度的抑制作用，其中大劑量組的血清甘膽酸、總膽紅素、游離膽紅素較對照組抑制顯著，P＜0.05或0.01，而愛活膽通此種作用不明顯。本結果與成石動物結果相似，提示LDRS有可能降低或減少膽汁淤滯所致的甘膽酸、總膽紅素、游離膽紅素升高，起到預防或阻止膽石形成的作用。
3、體內溶石試驗取健康家兔32只，按體重分性別隨機分為4組，每組8只，分組后，耳緣iV30mg/kg戊巴比妥鈉麻醉各組動物。麻醉后腹部用剪毛剪去26面積大小的長毛，然后在剪毛處涂上硫化鋇脫毛劑[2]，敷涂脫毛2分鐘后，先用自來水洗凈脫毛劑后，再用生理鹽水清洗1次，露出脫毛后的光潔皮膚，再用碘酒、酒精消毒。脫毛后的光潔皮膚在無菌環境下剖腹切口，顯露膽囊，肉眼觀察肝膽外觀無異異常后，抽去是汁，于膽囊上部小心切口，植入膽色素結石1枚，并記錄每只家兔植入膽石的恒重，先縫合膽囊植入切口，然后縫合開腹切口。為了防止感染，術后2天每天每只家兔注射青霉素40萬單位，三天內死亡兔應重新補上。術后3天起各組分別按公斤體重用藥，劑量分別為LDRS0.2ml/kg、0.1mg/mg，第三組為愛活膽通0.15ml/kg，第四組為色拉油，每天將藥液注入膠囊內，將藥膠囊放入兔根部兔子會慢吞下肚。每天灌藥1次，連續給藥14天，末次給藥后4小時，股動脈放血處死動物，剖取膽囊中植入的膽色素結石，用濾紙吸去藥液和膽汁，盡量找盡結石，于60攝氏度恒溫至恒重后稱余石重，與對照組比較。表4 連續口服不同劑量的LDRS對家兔植入人體膽紅素結石影響組別動物數 劑量 溶石前石重溶石后余重解輕率(只) ml.(kg.d)-1 (mg.x±SD)(mg.x±SD)(％)LDRS 80.1 96.0±3.3 45.45±11.15 52.6LDRS 80.2 96.0±1.7238.01±11.76 60.4愛活通80.15 95.2±2.3279.83±10.91 22.82色拉油80.15 94.4±3.3586.80±24.24 7.9與色拉油組比***P＜0.001；表4可見，家兔植入人體膽紅素結石，連續口服不同劑量的LDRS14天，結果對植入結石有不同程度的溶解，表現為植入結石減輕，其減輕率分別為52.6％、60.4％，與對照組比，減輕非常顯著，P＜0.001；而愛活膽通亦有不同程度的減輕，減輕率為22.8％，與對照組比較，減輕不顯著，P＜0.05。表明LDRS對人體膽紅素結石有一定溶解作用4、LDRS對大鼠的利膽試驗取體重280～410g健康雄性大鼠70只，按體重均分為7組，分組情況如表5。分組后試驗前受試鼠禁食16h，用氨基甲酸乙酯(又名烏拉坦、烏來糖)1g/kg ip麻醉，麻醉后捆扎4肢，開腹找胃幽門部，以幽門部為標準，尋找總膽管，用小鑷子將覆蓋在表面的被膜剝離暴露膽總管，結扎下端，小心剪一小口，向膽總管近肝端插入外徑1mm左右的塑料管引流膽汁，待膽汁流量穩定后0.5h計1次膽汁收集量，共2次。于十二指腸按體重分組分別給藥或對照液2ml/100g.bw，測定藥后4h內各區間的膽汁排量系數，與對照組比較膽汁系數(膽汁分泌系數＝實際收集膽汁量/bw×100％)，結果見表5，

圖1。
表5 不同劑量的LDRS與陽性利膽藥對膽汁流量系數的比較劑量 給藥前后膽汁流量系數變化ml(膽汁)/100g.bw組別(ml/kg) 藥前1h 藥后1h (％) 藥后2h (％) 藥后3h (％) 藥后4h (％)空白對照 ig等量對照液 0.116±0.04 0.156±0.04 -0.149±0.07 0.110±0.09 0.113±0.06LDRS 0.0163 0.116±0.04 0.197±0.08 26.2 0.205±0.04*37.6 0.205±0.04**86.4 0.171±0.0851.3LDRS 0.0325 0.116±0.04 0.233±0.11*49.4 0.270±0.01***81.2 0.210±0.08*91.0 0.192±0.09*69.9LDRS 0.0650 0.116±0.04 0.235±0.09*51.0 0.300±0.04***101.3 0.250±0.09**127.0 0.199±0.08*76.1愛活膽通 0.1500.116±0.04 0.145±0.04 -7.1 0.144±0.04 -3.4 0.138±0.04 25.5 0.128±0.0413.3膽酸100mg(純品) 0.116±0.04 0.166±0.04 6.4 0.189±0.05 26.8 0.246±0.04***123.6 0.164±0.04*45.1去氫膽酸100mg(純品) 0.116±0.04 0.165±0.08 5.8 0.234±0.07*57.0 0.223±0.05**102.7 0.210±0.07**85.8與對照組比*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001從表5、圖1可見，LDRS原液0.0163ml、0.0325ml、0.0650ml/kg、愛活膽通0.15ml/kg、膽酸100mg/ml、去氫膽酸100ml/kg均從受試鼠的十二指腸給藥，結果給藥1h，各給藥組的膽汁分泌系數與對照比分別提高26.2％、49.4％、51.0％、-7.1％、6.4％、5.8％；藥后2h分別提高37.6％、81.2％、101.3％、-3.4％、26.8％、57.0％；3h分別提高86.4％、91.0％、127.3％、102.7％。直到藥后4h各試驗組仍較對照分別提高51.3％、69.9％、76.1％、13.3％、45.1％、85.8％，以上結果可見，LDRS膠囊對大鼠無論大、中、小三種劑量均有明顯的利膽作用，且量效關系明確，利膽作用時間可維持4h以上，而愛活膽通雖有一定利膽作用，但作用慢，藥后3h才見膽汁分泌量增加，表明愛活膽通利膽起效慢；膽酸、去氫膽酸2組利膽作用明確，但利膽起效時間亦不如LDRS，利膽顯效時間在2h后，其中去氫膽酸利膽時間維持較長，而膽酸的利膽作用時間慢而短，試驗結果比較表明LDRS具有較強的利膽作用。
為了解LDRS對膽汁成分的影響，我們對以上各組試驗中收集的膽汁，進行了膽汁膽紅素的測定。其方法采用氧化酶法，結果如表6。表6 單次ig膽酸、膽通、去氧膽酸、LDRS不同劑量對大鼠膽汁中各組膽紅素的影響組別 對照組 膽酸 愛活膽通去氫膽酸 LDRS大劑量LDRS中劑量LDRS小劑量劑量ml/kgig等量CMC0.1(g) 0.15(g) 0.1(g) 0.615 0.307 0.1540 T-BIL 92.3±37.1 92.6±33.4 91.8±32.7 92.2±31.9 93.0±33.492.7±32.792.0±30.9(h)直接BIL 50.7±27.7 51.8±25.6 52.0±24.7 50.9±23.3 50.9±28.751.5±24.851.0±27.8游離BIL 41.6±24.8 40.8±23.6 39.8±22.8 41.3±22.9 42.2±23.841.2±22.641.0±21.91 T-BIL 93.2±57.1 94.1±37.9 104.1±50.0 73.1±14.1 55.0±23.269.7±20.282.4±27.2(h)直接BIL 51.8±32.3 67.3±25.4 81.7±35.9 57.8±12.8 38.1±15.751.1±20.455.6±20.5游離BIL 41.4±22.3 26.7±20.1 20.9±17.7*15.4±4.9**19.4±14.2*18.6±14.9*26.7±12.5*2 T-BIL 98.8±37.2 77.7±38.9 81.9±27.0 54.3±23.9**41.0±20.0**68.8±16.1*77.8±25.6(h)直接BIL 56.7±19.2 60.8±31.9 69.3±27.4 43.4±15.5 25.1±13.1**47.1±10.954.1±15.6游離BIL 42.6±22.6 16.9±12.8**12.6±5.110.9±11.2**15.9±113**23.5±11.9*23.7±16.83 T-BIL 138.9±91.6 82.5±29.0 74.3±32.7 48.1±14.8*46.7±20.6*69.0±29.5*74.6±47.2(h)直接BIL 62.5±34.3 55.3±18.2 59.0±18.2 39.9±10.2 23.9±9.6**48.4±19.041.8±21.8游離BIL 76.3±61.0 27.2±13.9*17.3±12.9 8.16±31**19.0±11.9*20.6±17.4*32.8±26.34 T-BIL 171.6±124 81.3±29.8*78.5±31.8 59.3±19.7*45.2±19.7*82.5±46.091.7±56.8(h)直接BIL 79.0±42.4 53.0±31.6 57.7±14.9 45.7±16.426.7±7.6**53.9±25.749.7±24.3游離BIL 92.6±87.4 28.3±10.6*20.8±22.3 13.6±5.69*18.8±8.34*28.6±21.1*42.0±23.3與對照組比*P＜0.05**P＜0.01(n＝8，BIL單位mmol/L.x±SD)從表6可見膽酸、去氫膽酸及LDRS各劑量組，對膽汁中的總膽紅素、結合膽紅素、游離膽紅素均有不同程度的抑制作用，其中LDRS大劑量、去氫膽酸藥后1h至4h的膽汁中總膽紅素、結合膽紅素、游離膽紅素抑制明顯，與對照組比P＜0.05，P＜0.01，有顯著性差異。13.7LDRS對豚鼠平滑肌收縮的影響5、對Ach致豚鼠膽囊平滑肌收縮的影響取禁食24h 300g以上豚鼠9只，用木棒擊昏后放血，剖腹顯露膽囊，用縫針在膽囊底部和頸部各穿一細線，結扎后切斷膽囊總管，小心將膽囊取出，放于盛有4℃Krebs液培養皿中，用眼科剪將膽囊縱剖為2，得到2個膽囊肌條標本，各長約10mm，寬約3mm，將膽囊肌條置于恒溫37℃的Krebs液麥氏浴槽中(20ml)，一端固定于浴槽底部的鉤上，上端連于換能器上，調好供氧氣泡細小均勻，換能器連接于二道生理記錄儀前置放大器，每次加測試溶液后觀察3min以上，待達到最大效應后，及時用灌流液沖洗浴槽3次休息15min，待收縮曲線成平穩后，再進行另一項實驗，每次實驗時，可加0.1μg/ml的乙酰膽堿0.2～0.4ml，以觀察膽囊肌條是否有收縮作用反應(本試驗應注意處是制備膽囊肌條時動作迅速，小心輕巧，勿撕傷肌條，Krebs液應以雙蒸水配制)，加入乙酰膽堿后記錄膽囊肌條的收縮曲線，從收縮曲線可見曲線振幅加大，待曲線達峰平衡后，加入不同濃度的LDRS液，結果當藥液加入后，可見膽囊肌條的振幅下降，統計各階段的振幅高度，統計方法為給藥前以膽囊肌條振幅上、下限點各平行橫座標劃一直線，量兩平行線高度為正常振幅值(以藥前平行線的下線作為基線)，待曲線平衡后，加入不同濃度的Ach液，可見膽囊肌條振幅上升，以振幅最高平行基線劃直線量兩平行線高度為Ach的振幅度，待曲線走穩后加入不同濃度的LDRS原液，待曲線走穩后，過振幅最低點平行基線劃線，量基線至最低線高度，結果如表7。
表7 LDRS對Ach所致膽囊肌條振幅的影響組別 劑量 肌條數 振幅變化率(濃度) (條)(mm.x±SD) (％)正常值 基礎營養液 13 6.5±2.2***100.0Ach 10-4ml 13 35.2±6.84 541.5LDRS 10-2ml 13 13.4±6.90***206.2正常值基礎營養液 85.0±3.2***100.0Ach 10-4ml 832.73±6.90 654.6LDRS 10-2ml 816.30±7.30**326.0與Ach比**P＜0.01***P＜0.001從表7可見，不同濃度的LDRS10-2、10-3加入后，可使Ach-4的振幅高度分別下降61.9％、50.2％，表明LDRS對Ach所致離體膽囊肌條振幅加大，有顯著的抑制，與Ach組的振幅高度比P＜0.01，P＜0.001，表現出良好的解痙作用。
6、LDRS對正常豚鼠膽囊肌條收縮的影響取膽囊肌條若干段，在營養液測定中首先測定膽囊肌條的正常振幅值后，分別在營養液中加入不同濃度的LDRS，仍以藥前藥后膽囊肌條的振幅度作為觀察指標，結果見表10。
從表8可以看出，不同濃度的LDRS對正常膽囊均有不同程度的抑制作用，以10-2濃度LDRS加入于營養液中立即引起膽囊肌條的振幅減小，多數減至一條線，作用非常明顯，測定振幅高度，其振幅度下降71.2％，與藥前值比P＜0.001，其對正常膽囊肌條的抑制非常顯著，10-3濃度亦有35.9％的抑制率，但由于試驗條數不多差異無統計學意義。
表8 LDRS對正常豚鼠膽囊肌條收縮的影響組別劑量 肌條數振幅高 抑制率(濃度)(條)(mm.x±SD) (％)正常振幅 營養液 88.5±3.8 -LDRS 10-2ml 82.45±2.0***71.2正常膽囊肌 營養液 57.81±3.5 -LDRS 10-3ml 55.01±2.5 35.9與正常振幅比***P＜0.001
7、LDRS對豚鼠離體腸肌收縮的影響取禁食24h雄性豚鼠3只，用木棒擊昏后，開腹剖取回腸3～4cm長若干小段，去除附著腸外的脂肪和膜，放在充氧(含5％CO2)保溫37℃的保溫液中，洗凈其內容物，制成1.5cm的腸段，將腸段兩端各連一線，一端掛在L型支持桿上放入浴槽中，另一端與拉力傳感器相連，加予應力1.0g，通過二道生理記錄儀(成都儀器廠LMS-2B型)，記錄腸管的收縮運動曲線后，依次向營養液中加入下列藥物，1∶10000乙醋膽堿(Ach)0.05ml，1∶1000的組胺，1∶1000的氯化鋇(BaCl2)，此時腸肌立即痙攣，腸肌振幅明顯加大，待記錄曲線振幅高峰時，加入受試藥物LDRS，結果如圖5。從圖5可見，LDRS對正常腸肌的收縮有明顯的抑制作用，并能解除Ach、BaCl2、HT所致的痙攣，表明對豚鼠腸肌有松弛作用。
8、LDRS的抗炎試驗(1)對二甲苯致小鼠耳廓炎癥的影響取體重25～28g健康雄性小鼠60只，按體重隨機分為6組，每組10只，分組后，各組均于致炎前0.5h分別灌服，第1組0.5％CMC0.1ml/10gbw；第2組愛活膽通0.15ml/kg；第3組消炎痛30ml/kg；第4、5、6組分別為LDRS0.077ml、0.154ml、0.307ml/kg.d，各組藥后0.5h均用100％二甲苯液0.05ml滴小鼠左耳正反兩面耳廓致炎，致炎后0.5h沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑6mm的打孔器打下左耳致炎部位與右耳非致炎相同部位的耳片，用精密扭力天平稱取耳片重量，計算左右耳片重量差，結果如表9。
表9 LDRS、消炎痛、愛活膽通對二甲苯致小鼠耳廓重量的影響組別 藥物劑量鼠數左右耳片重量差抑制率(ml/kg)(只) (mg/100g.x±SD)(％)0.5％CMC101015.33±3.3 -愛活膽通0.15 1012.30±4.3 14.5消炎痛 30(mg)103.98±2.574.0LDRS 0.077 108.50±4.1**44.5LDRS 0.154 105.60±3.8***63.4LDRS 0.307 104.90±2.3***68.0與0.5％CMC比**P＜0.01***P＜0.001從表9結果表明，LDRS、愛活膽通均能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，但抑制強度不如消炎痛，與對照組比抑制是非常顯著的，P＜0.01，P＜0.001，且有明顯的量效關系。
(2)LDRS對大鼠瓊脂肉芽腫的影響取體重150～250g健康雄性大鼠50只，按體重隨機分為5組，每組10只，在無菌條件下操作，于每只大鼠肩背部中線皮下注射2％瓊脂溶液1ml，注入瓊脂后，將大鼠分籠飼養，第1組每日灌服0.5％羧甲基纖維素1ml/100gbw；第2組每日灌服醋酸潑尼松30mg/kg；第3、4、5組分別灌服LDRS 0.077ml、0.154ml、0.307ml/kg.d，連續灌服10天，末次灌服給藥后2h，用戍巴比妥40mg/kg ip麻醉后，剖取瓊脂肉芽腫，用精密扭力天平稱濕重，以肉芽系數(a)表示(肉芽系數＝肉芽重/體重×100％)，結果如表10。
表10 LDRS、醋酸潑尼松對棉球肉芽腫重量的影響組別 實驗鼠數 藥物劑量 平均肉芽系數抑制率(ml/kg) (α.x±SD) (％)0.5％CMC1010 0.65±0.47 -醋酸潑尼松 1030(mg) 0.20±0.08**69.2**LDRS100.0770.44±0.19 32.3LDRS100.1540.32±0.17*50.7*LDRS100.3070.23±0.05**64.6*與0.5％CMC比*P＜0.05**P＜0.01從表10結果可見，連續灌服不同劑量的LDRS原液0.077ml、0.154ml、0.307ml/kg.d 10天，結果對大鼠棉球肉芽系數的抑制率分別為32.3％、50.7％、64.6％，表明灌服LDRS對大鼠瓊脂肉芽腫有不同程度的抑制作用，其中中、大劑量對棉球肉芽腫的抑制與對照比P＜0.05，P＜0.01，有顯著的抑制效果。大劑量組與潑尼松組比P＞0.05，未見顯著差異。提示本品對慢性炎癥有良好的抗炎作用。
(3)LDRS對大鼠足腫脹的抗炎試驗取體重160～180g健康♂大鼠51只，按體重隨機均分為6組，各組均于試驗前先測正常足蹊部周長，測后分別灌服，第1組灌服0.5％CMC 10ml/kg；第2組灌服醋酸潑尼松30mg/kg；第3組灌服愛活膽通溶液0.15ml/kg；第4、5、6組灌服LDRS(大、中、小)三種劑量，灌服后15min足背皮下注射1％濃度的角叉菜膠液0.05ml致炎，分別于給藥后2、4、8、16、20h測足跖裸關節周長，記錄每次測量結果。實驗結果如表11。
表11 不同劑量的LDRS、愛活膽通、醋酸潑尼松對角叉菜所致大鼠足腫脹的影響組別實驗鼠數劑量 裸關節周長(cm.x±SD)(只) (ml/kg)藥前0h藥后2h 藥后4h 藥后8h 藥后16h 藥后20h0.5％CMC 91.10±0.081.93±0.892.78±0.25 3.54±0.23 2.55±0.19 2.31±0.182.11±0.19愛活膽通 80.15 2.01±0.192.70±0.19 2.90±0.16***2.70±0.15 2.40±0.122.00±0.12酯酸潑尼松 830(mg)1.98±0.192.34±0.17***2.10±0.15***1.90±0.19***2.10±0.211 2.00±0.09LDRS(小) 90.077 1.96±0.192.70±0.19 2.60±0.21***2.30±0.96**2.20±0.112.09±0.11LDRS(中) 80.154 1.97±0.152.65±0.16 2.05±0.45***2.11±0.12***2.10±0.10*2.06±0.09LDRS(大) 90.307 1.99±0.162.55±0.17*2.15±0.09***2.16±0.16***2.10±0.16*2.00±0.12與0.5％CMC比*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001從表11可見，LDRS 0.077ml、0.154ml、0.307ml(原液)/kg.d，醋酸潑尼松30mg/kg，均對角叉菜膠所致腳腫脹有良好的抑制作用，與0.5％CMC相比藥后2～4h均有顯著的抑制作用，LDRS大劑量與醋酸潑尼松比P＞0.05，無顯著性差異，表明本品具有良好的抗PG型炎癥作用。
(4)LDRS對小鼠毛細血管通透性的影響取體重18～22g健康小鼠50只，按體重隨機均分為5組，每組10只，雌雄各5只，第1組灌服0.5％CMC10ml/10g，第2組灌服醋酸潑尼松30mg/kg，第3、4、5組分別灌服LDRS(大、中、小)三個劑量，各組藥物濃度不同，但灌服體積均為10ml/kg.d，各組每天灌服1次，連續7天，于末次灌服后1h，由尾iv 1％伊文思蘭10ml/kg，立即ip 0.6％冰醋酸0.05ml，20min后斷頭處死小鼠，用5ml NS沖洗腹腔，收集沖洗液，用濾紙過濾，濾液以3000r/min離心5min，于590nm處比色，測其光密度，結果如表12。
表12 LDRS、醋酸潑尼松對冰乙酸所致小鼠毛細血管通透性的影響組別 藥物劑量 鼠數光密度 抑制率(ml/kg) (只)(OD.x±SD) (％)0.5％CMC10 10 0.513±0.077 -醋酸潑尼松 30(mg) 10 0.173±0.055***66.3LDRS小劑量 0.077 10 0.340±0.040*33.7LDRS中劑量 0.154 10 0.235±0.062**54.2LDRS大劑量 0.307 10 0.197±0.054***63.5與0.5％CMC比*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001從表12可見LDRS三種劑量均能降低冰乙酸所致小鼠毛細血管通透性的增加，其降低率分別為33.7％、54.2％、63.5％，與0.5％CMC比P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001，有顯著的量效關系。其中中、大劑量組的降低率與潑尼松比P＞0.05，無顯著性差異。
9、小結分別灌服本發明的膠囊0.077毫升、0.154毫升、0.307毫升(原液)/公斤體重，分別為臨床公斤體重劑量的3.85、7.7、15.4倍，連續灌服90天，可使豚鼠膽紅素結石的成石率由91％分別降至45.4％、27.3％、0.0％。對成石豚鼠和正常小鼠的血清甘膽酸、總膽紅素和游離膽紅素有明顯抑制，表現出良好的防石作用；不同濃度的本品均對人體三種結石有不同程度的溶石效果，其中以混合型結石、膽紅素結石的溶石速度快，溶解較好；不同濃度的LDRS對家兔體內膽紅素結石具有顯著溶石作用，灌服不同劑量的本品均能顯著提高大鼠膽汁分泌系數，具有較強的利膽效果，且能降低膽汁中總膽紅素及游離膽紅素含量。不同濃度的本品能提高金葡菌感染致死小鼠的存活率。對豚鼠離體腸管或膽囊肌條收縮有明顯的抑制，并能解除乙酰膽堿、組織氨、氯化鋇所致平滑肌的痙攣，提示本品具有松馳平滑肌和解痙作用。對二甲苯、角叉菜膠所致動物的急性炎癥、瓊脂肉芽增生性慢性炎癥，均有不同程度的抗炎效果。對藥物性發熱有一定的降溫和解熱作用。不同劑量的本品連續灌服7天，結果對二甲苯所致小鼠毛細血管通透性的增加有顯著的抑制作用。1次灌服不同劑量的本品對甲醛致大鼠舔足、醋酸致小鼠扭體反應均有顯著的抑制作用，表現出良好的鎮痛效果。
綜上所述，本發明對豚鼠膽紅素結石有明顯有防石作用，對人體三種結石有不同程度的溶石效果，且有消炎、鎮痛、抑菌抗感染、利膽、松馳平滑肌、抑制毛細血管通透性增加等作用，是一個較好的抗膽結石癥新藥，它具有用量小，作用快，量效關系明顯等優點。
本發明臨床預試結果經四川省中醫藥研究院附屬醫院應用本發明治療膽石患者33例取得滿意療效，患者主要臨床癥狀體征均得到明顯改善(P＜0.05或0.01)。經B超顯示，28例可測量性結石患者，其結石的平均直徑由治療前的1.48±0.98厘米降低至治療后的0.76±0.83厘米(P＜0.01)。5例泥沙樣結石患者，治療后2例結石消失，1例結石數量明顯減少，1例無明顯變化。33例患者經治療后，臨床痊愈6例，顯效12例，有效12例，無效3例。其痊愈顯效率為54.55％，總有效率90.91％。
具體實施例方式
實施例一，將薄荷油中加入原液1％重量的吐溫-80進行乳化，乳化后以0.5％的羧甲基纖維素作稀釋劑，稀釋至濃度為0.04毫升/毫升，制成治療肝膽結石的溶石性口服液。
實施例二，將薄荷油中加入原液2％重量的吐溫-80進行乳化，乳化后以0.5％的羧甲基纖維素作稀釋劑，稀釋至濃度為0.06毫升/毫升，制成治療肝膽結石的溶石性口服液。
實施例三，將水、明膠、甘油按重量配比1∶1∶0.2的比例混合均勻后，加熱布展成軟膠囊囊皮，將薄荷油與軟膠囊囊皮一起壓制成軟膠囊，在40攝氏度溫度下干燥10小時即得。
實施例四，按4∶1的比例稱取原料薄荷油 320毫升 香葵油 80毫升將水、明膠、甘油按重量配比1∶1.1∶0.5的比例混合均勻后，加熱布展成軟膠囊囊皮，將混合均勻的薄荷油、香葵油與軟膠囊囊皮一起壓制成軟膠囊，在45攝氏度溫度下干燥8小時即得治療肝膽結石的溶石性藥物軟膠囊1000粒。
實施例五，按6∶1的比例稱取原料薄荷油 360毫升 香葵油 60毫升將水、明膠、甘油按重量配比1∶1.05∶0.3的比例混合均勻后，加熱布展成軟膠囊囊皮，將混合均勻的薄荷油、香葵油與軟膠囊囊皮一起壓制成軟膠囊，在42攝氏度溫度下干燥4小時即得治療肝膽結石的溶石性藥物軟膠囊1000粒。
實施例六，將原料薄荷油與香葵油按2∶1的配比混合均勻，將其加入3％吐溫-80進行乳化，藥物乳化后以0.5％的羧甲基纖維素作稀釋劑，稀釋至濃度為0.08毫升/毫升，制成治療肝膽結石的溶石性藥物口服液。
實施例七，將薄荷油制成治療肝膽結石的溶石性藥物滴丸。
權利要求
1.一種治療肝膽結石的溶石性藥物，其特征在于其主要有效成份為薄荷油。
2.據權利要求1所述的治療肝膽結石的溶石性藥物，其特征在于在其主要有效成份薄荷油中混合配入香葵油，其薄荷油、香葵油的重量配比是2～6∶1。
3.據權利要求2所述的治療肝膽結石的溶石性藥物，其薄荷油、香葵油的重量配比是4∶1。
4.根據權利要求1或2所述的治療治療肝膽結石的溶石性藥物，其特征在于所說的藥劑是口服制劑。
5.根據權利要求4所述的治療治療肝膽結石的溶石性藥物，其特征在于所說的口服制劑為軟膠囊。
6.根據權利要求4所述的治療治療肝膽結石的溶石性藥物，其特征在于所說的口服制劑為口服液。
7.權利要求4所述的治療治療肝膽結石的溶石性藥物的制備方法，其特征在于將水、明膠、甘油按重量配比1∶1～1.1∶0.2～0.5的比例混合均勻后，加熱布展成軟膠囊囊皮，將混合均勻的薄荷油、香葵油與軟膠囊囊皮一起壓制成軟膠囊，在40～45攝氏度溫度下干燥4～10小時即得。
全文摘要
一種治療肝膽結石的溶石性藥物,它主要有效成份為薄荷油,其主要有效成份薄荷油中混合配入香葵油,其薄荷油、香葵油的重量配比是2～6∶1。本發明以薄荷油為君,香葵油為佐,既有佐制之功,又有佐助之妙,共行疏肝行氣、利膽溶石的功效。故用于治療肝氣郁滯所致的上腹不適,脅痛,脘悶不舒,苔薄或黃膩,脈弦,以及用于膽石癥,膽道手術后綜合癥等。選擇軟膠囊作為本發明的最佳劑型,本發明有服用量小,有效部位在藥品中的含量高,制劑的穩定性好的特點。
文檔編號A61P21/00GK1358530SQ01134090
公開日2002年7月17日 申請日期2001年10月29日 優先權日2001年10月29日
發明者肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 李明慧, 廖正根 申請人:江蘇康緣藥業股份有限公司