專利名稱：：制備植物水提取物的方法及由此獲得的提取物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及制備植物水提取物的方法及由此獲得的水提取物，其中的一些可應用于藥物，具體而言應用于對免疫抑制疾病的治療或在對病毒疾病的治療中。
背景技術：
：植物及通常的植物性的(vegetals)物質仍然是醫藥中應用的活性組合物和化合物的重要來源。新的植物、植物中存在的新化合物或甚至對存在于植物中的組合物的修飾對phitochemical工業具有潛在重要性。在不僅考慮要獲得的化合物的產量而且考慮可事實上獲得的化合物的化學特性時，在植物性物質和植物中提取成分的方法是非常重要的。在phitochemical工業中常用的方法是基于用水或蒸汽、用有機溶劑或用水和有機溶劑如水和乙醇的混合物對搗碎的植物或植物性的物質進行提取。包含浸解的步驟也為本領域所公知。最后，可通過常規的方法如傾析、離心或過濾來將水提取物與固相分離。也可實施額外的化學處理以修飾存在于植物中的化合物的結構。對于該主題的更多信息，參見Dr.PioFontQuer，“醫學植物。最新的Discorides(MedicinalPlants.TheupdatedDiscorides)”Ed.Labor，S.A.，12thEdition，1990。法國專利FR2733419描述了選自老鸛草屬(Geranium)、車前屬(Plantago)和金盞菊屬(Calendula)的至少3種不同植物的混合物的提取物的制備，通過將300-400g新鮮的漢葒魚腥草(Geraniumrobertanium)葉、10-50g干的長葉蒲公英(Plantagolanceolata)葉和10-50g干的金盞菊(Calendulaofficinalis)葉在3升水中于15-30℃浸泡3-15天而實現。根據FR2733419，因而獲得的組合物可用于對癌的治療中。然而，這3中提取物已顯示不令人滿意的活性，如在下面的實施例中反映的。歐洲專利EP0934746公開了從老鸛草屬、車前屬和金盞菊種制備植物水提取物，該提取物是將10-60g干的鼠掌老鸛草(Geraniumsibiricun)葉或者300-360克鮮鼠掌老鸛草葉、10-60g干的長葉蒲公英葉和10-60g干的金盞菊葉浸泡在300g水中而獲得。生產所述水提取物的方法包括先在水中浸軟搗碎的植物，然后將混合物抽濾，再進行過濾處理。根據ER0934746A，該抽提物可用于對癌的治療中。然而，其顯示不令人滿意的活性，如在下面的實施例中所反映的。因而，在本領域中需要制備另一種植物提取物的方法，其提取物可用作治療藥劑，且最終可提供得到新化合物的途徑。發明概述本發明提供制備植物性物質特別是植物的水提取物的方法，以及通過該方法獲得的組合物，其中有些可用于醫療，特別治療免疫抑制性疾病如癌、結核病、流行性感冒、普通感冒、變態反應、紅斑狼瘡、牛皮癬和AIDS，或治療病毒疾病如肝炎。因而本發明的一個方面涉及制備植物性物質特別是植物的水提取物的方法，該方法包括以下步驟a)凈化植物。b)搗碎植物。c)用激光輻射處理搗碎的植物。d)將在步驟c)中獲得的混合物懸浮于水中。e)浸解在步驟d)中獲得的懸浮液。f)分離結果所得的液體。本發明的第二個方面涉及由本方法獲得的組合物或水提取物(水解產物(hydrolate))。本發明進一步的方面涉及本組合物作為治療藥劑在治療免疫抑制疾病如癌、結核病、流行性感冒、普通感冒、變態反應、紅斑狼瘡、牛皮癬和AIDS中或治療病毒疾病如肝炎中的用途。本發明進一步的方面涉及包含通過本方法獲得的水提取物的藥物組合物。本發明的方法與那些在現有技術中所引用的方法的區別在于該搗碎的植物用激光輻射處理。如在下面的實施例中所證明的，用激光處理搗碎的植物導致提取物中新活性的存在或活性的意外的高度增加。因此，這樣獲得的提取物必然與那些通過不實施激光處理的方法獲得的有差別。發明詳述如上所述，本發明的第一個方面涉及制備植物性物質特別是植物的水提取物的方法，該方法包括步驟a)凈化植物。b)搗碎植物。c)用激光輻射處理搗碎的植物。d)將在步驟c)中獲得的混合物懸浮于水中。e)浸解在步驟d)中獲得的懸浮液。f)分離結果所得的液體。關于術語“植物”應理解為相同物種的一個或幾個單元，或不同物種的幾個單元，或植物的部分或多個部分如莖、葉、花等。凈化(步驟a)通過用水洗滌植物來實施。在該步驟中所用的水量不具決定性作用，而可以依賴于植物污染的狀態而有變化。盡管并不排除更高和更低的溫度，但水溫應該在10和40℃之間，優選在20和35℃之間，且最優選地為28℃。可采用洗滌通道(washingtunnel)來使該步驟便利。水的量和植物在洗滌通道中滯留時間不具決定性，且因此可依賴于植物的污染狀態而有變化。該洗滌步驟可實施幾次，在各步驟之間有干燥的步驟。該干燥步驟優選通過將植物放置在陽光下而實現。一旦植物已經徹底凈化，即通過常規方法如搗碎器或甚至人工地將它搗碎(步驟b)。盡管并不排除更高和更低的溫度，但將植物搗碎的溫度應該在10和40℃之間。下一步將搗碎的植物進行激光輻射處理(步驟c)。作為激光輻射的來源，優選采用紅線性激光器二極管(redlinearlaserdiode)，該二極管能諧波(harmonic)生成150～810nm范圍的波長的能力。激光輻射的波長更優選為200～400nm，且最優選為250nm。激光輻射的功率優選為1～60瓦特，更優選為10～30瓦特且最優選為20瓦特。斑點的直徑優選為1～6mm，更優選為2～5mm且最優選為4mm。將搗碎的植物進行激光輻射處理以使得全部或大多數混合物都被照射。這通過人工將激光發生器移動過搗碎的植物或者使搗碎的植物在傳送帶上通過一套幾個激光發生器而實現。優選使每千克搗碎的物質用激光輻射處理3～10分鐘的時間，更優選為5分鐘的時間。盡管并不排除更高和更低的溫度，但將搗碎的植物用激光輻射處理的溫度應該在10和40℃之間。下一步將激光處理過的物質懸浮于水中(步驟d)。在該步驟可采用任何商品礦質水。使每升水中存在50～300，優選為100～250克激光處理過的物質而進行懸浮。盡管并不排除更高和更低的溫度，但將搗碎的植物懸浮于水中的溫度應該在10和40℃之間。然后將懸浮液于2～10℃，優選為4～8℃的溫度放置5～20天的時間，優選為7～15天，以使得混合物發生浸解(步驟e)。最后，在離析步驟后，將液相同固相分離(步驟f)。可擠壓該固體以助于分離。該分離可通過單獨的傾析或優選傾析后過濾來實現。該過濾優選在壓力下實施。最優選，用5μm、1μm和0.22μm的濾器實施3次連續的壓濾。盡管并不排除更高和再低的溫度，但實施分離的溫度應該在10和40℃之間。本發明的方法可應用于任何類型的植物，不論是單子葉植物還是雙子葉植物。它可應用于不同植物的混合物。完整植物可采用本發明的方法，盡管優選葉和花。可應用本發明的方法的植物科的非限制性實例為菊科(Asteraceae)、薔薇科(Rosaceae)、十字花科(Crucifrae)、唇形科(Labiatae)、木賊科(Equisetaceae)、虎耳草科(Saxifraganceae)、菊科(Compositae)、五加科(Araliaceae)和傘形科(Umbeliferae)。可應用本方法的植物物種的非限制性實例為Menthasativa、茴芹(Pimpinellaanisum)、刺五加(Eleutherococcussenticosus)、Equinaceaangustifolia、聚合草(Symphytumofficinalis)和Equisetumarvensa。可應用本發明的方法的優選物種為金盞菊、歐洲龍牙草(Agrimoniaeupatoria)、寬葉獨行菜(Lepidiumlatifolium)和白花野芝麻(Lamiumalbum)。通過本發明的方法獲得的水提取物(水解產物(hydrolates)或組合物)組成了本發明的第二個方面。因而，由本方法在非限制性實例Menthasativa、茴芹、刺五加、Equinaceaangustifolia、聚合草和Equisetumarvensa中的應用而產生的組合物在本發明的范圍之內。具有特殊重要性的是通過將本發明的方法應用于金盞菊和應用于歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻的混合物所獲得的水提取物，這也在本發明的范圍之內。已發現一些根據本發明的方法獲得的水提取物可應用于醫療。這如上所述組成了本發明的第三個方面。通過將本發明的方法應用于金盞菊所獲得的水提取物和具體而言地通過將本發明的方法應用于該植物的花所獲得的水提取物顯示其作為免疫刺激物的活性。如在以下所示實施例所證明的，該活性之高出科意料。應相信本提取物發揮刺激淋巴細胞T、B和巨噬細胞的淋巴細胞轉化活性的作用，盡管并不一定是這種理論。通過將本發明的方法應用于金盞菊所獲得的提取物因而可應用于治療免疫抑制性疾病。這些疾病的非限制性的實例為癌，如肝癌、肺癌、腎癌、結腸癌、乳腺癌、前列腺癌或前列腺腺體癌；腦癌如星形細胞瘤和成膠質細胞瘤；宮頸癌和膀胱癌；結核病、流行性感冒、普通感冒、變態反應、紅斑狼瘡牛皮癬和AIDS。此外，通過將本發明的方法應用于植物歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻的混合物所獲得的水提取物和尤其是通過將本發明的方法應用于植物歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻的葉子的混合物所獲得的水提取物意外地顯示抗病毒活性。更具體地，該提取物尤其對甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎的病毒具有活性。如在下示實施例中所證明的，其活性極高。此外，該提取物也顯示對轉氨酶和膽紅素草代謝的高的調節活性，以及作為肝細胞再生的刺激物的活性。因此，通過將本發明的方法應用于植物歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻所獲得的提取物可應用于對病毒疾病的治療中。這些疾病的非限制性的實例為甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎。該提取物也可應用于與高水平轉氨酶和膽紅素相關的肝病理學的治療中。這些疾病的非限制性的實例為甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎；肝硬變和肝癌。根據本發明者所做的研究和實驗，應相信激光處理催化了某些植物化合物之間的反應和/或促進了某些植物化合物的提取，因而這些化合物在提取物中的存在導致上述意料不到的活性，盡管并不一定符合該理論。本發明的進一步的方面涉及包含由本發明的方法獲得的水提取物的藥物組合物。根據本發明的水提取物可如此或者以凍干形式制備藥物組合物。它可通過獨立地作為水提取物或凍干形式給藥，或者以藥物組合物的形式給藥。藥物組合為處方劑(formulation)的形式，其中(1)單獨含有根據本發明的提取物；(2)含有一或多種適當的粘合劑、載體和/或進一步的輔助材料；和(3)可進一步含有額外的治療活性物質。載體材料、粘合劑和/或輔助材料必須為藥學和藥理學可耐受的，這樣以來它們可與處方劑或制劑的其他成分聯合而不對治療的生物施加不利作用。該處方劑包括適合于口服或腸胃外(包括皮下、皮內、肌內和靜脈內)給藥的，即使最好的給藥途徑依賴于病人狀況。該處方劑可為單劑量的形式。該處方劑根據藥理學領域公知的方法制備。適于給藥的活性物質的適當量可作為特殊領域治療的函數而變化。通常，在單劑量處方劑中活性物質的濃度為總處方劑的5％～95％。由本申請提供的發明通過在下文給出的實施例來闡明。實施例1根據標準方法制備金盞菊花的水提取物(比較實施例)。將500g的金盞菊的花置于洗滌通道中并用水于28℃徹底洗滌。下一步用搗碎器將花搗碎。將結果所得的500g搗碎的物質再懸浮在約20℃的2升水中。然后將懸浮液于4℃放置12天。最后將液相和固相分離，首先通過傾析液體(擠壓固體以利于分離)，然后用5、1和0.22μm的濾器于20℃進行3次連續的壓濾。該方法得到約1.7升的赭色溶液(水提取物)。實施例2根據本發明的方法制備金盞菊花的水提取物。將500g的金盞菊的花置于洗滌通道中并用水于28℃徹底洗滌。下一步用搗碎器將花搗碎。將結果所得的500g搗碎的物質用紅線性激光器二極管來處理，該二極管能諧波生成250nm的波長、20瓦特的功率和4mm直徑的斑點。該處理通過人工地將激光發生器在2.5分鐘內移動過搗碎的物質而實現，使得全部或大部分混合物被照射。將激光處理的物質再于約20℃懸浮于2升水中。然后將懸浮液于4℃放置12天。最后將液相和固相分離，首先通過傾析液體(擠壓固體以利于分離)，然后用5、1和0.22μm的濾器于20℃進行3次連續的壓濾。該方法得到了約1.7升的赭色溶液(水提取物)。實施例3-14下列植物的水提取物根據實施例1和2的程序制備。用上述方法處理的植物部分在括弧中顯示。Equisetumarvensa(莖)、聚合草(葉)、Equinaceaangustifolia(葉和花)、刺五加(葉)、茴芹(葉和花)和Menthasativa(葉)。對在實施例1-14中獲得的水提取物進行了檢驗以通過定量淋巴細胞轉化活性(LTA)而確定其作為免疫刺激物的活性。關于淋巴細胞轉化活性其意思指淋巴細胞從休眠狀態轉化為活性狀態的事實，這是通過免疫機制抗擊疾病或者恢復可能由不同因素而消弱的免疫系統所必需的。這些檢驗是根據參考文獻Max，W.等人，天然產物雜志(JournalofNaturalProducts)，vol.54，no.6，pp.1531-1542(1991)，通過體外將提取物加入到從小鼠分離的淋巴細胞而進行。對代表DNA復制的胸腺嘧啶脫氧核苷的結合進行了監控。該結合指示了淋巴細胞數目增加和淋巴細胞活性增加兩者。該結果總結如表1。表1從在表1中顯示的結果，可以清楚看出根據本發明的方法制備的水提取物比根據標準方法即無激光處理的方法獲得的水提取物顯示在淋巴細胞轉化活性值中更高的增加。此外，實在令人驚訝的是根據本發明的方法獲得的金盞菊提取物顯示在淋巴細胞轉化活性中極高的增加。實施例15根據標準方法制備植物歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻的葉水提取物(比較的實施例)。將250g歐洲龍牙草的葉、250g寬葉獨行菜的葉和250g白花野芝麻的葉置于洗滌通道中并用水于28℃徹底洗滌。然后用搗碎器將葉搗碎。將結果所得的750g搗碎的物質再懸浮于約20℃的3升水中。然后將懸浮液于4℃放置12天。最后將液相和固相分離，首先通過傾析液體(擠壓固體以利于分離)，然后用5、1和0.22μm的濾器于20℃進行3次連續的壓濾。該方法得到了約2.7升的深綠色溶液(水提取物)。實施例16根據本發明的方法制備植物歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻的葉水提取物。將250g歐洲龍牙草的葉、250g寬葉獨行菜的葉和250g白花野芝麻的葉置于洗滌通道中并用水于28℃徹底洗滌。再用搗碎器將葉搗碎。將結果所得的750g搗碎的物質用紅線性激光器二極管來處理，該二極管能諧波生成250nm波長、20瓦特功率和4mm直徑的斑點。該處理通過人工地將激光發生器在4分鐘內移動過搗碎的物質而實現，使得全部或大多數混合物被照射了。將激光處理過的物質再于約20℃懸浮于3升水中。然后將懸浮液于4℃放置12天。最后將液相和固相分離，首先通過傾析液體(擠壓固體以利于分離)，然后通過用5、1和0.22μm的濾器于20℃進行3次連續的壓濾。該方法得到了約2.7升的暗綠色溶液(水提取物)。將在實施例15和16中獲得的水提取物應用于28個不同肝疾病的患者的臨床檢驗，該28人因肝疾病而顯示高的轉氨酶(GOT、GPT、GGT)、膽紅素的值和高的病毒負荷量。在3個月的治療后，那些施用從實施例15中獲得的提取物治療的病人顯示轉氨酶的微小降低和病毒負荷量無變化。然而，那些施用從實施例16中獲得的提取物治療的病人在2個月的治療后令人驚訝地顯示癥狀的恢復、正常值的轉氨酶和膽紅素，以及病毒負荷量重要的降低，即使是在有丙型肝炎病毒株1-B和突變病毒的情況下。權利要求1.制備植物水提取物的方法，該方法包括以下步驟a)凈化植物。b)搗碎植物。c)用激光輻射處理搗碎的植物。d)將在步驟c)中獲得的混合物懸浮于水中。e)浸解在步驟d)中獲得的懸浮液。f)分離結果所得的液體。2.根據權利要求1的方法，其中該方法應用于相同物種的一個植物單元或幾個植物單元，或應用于不同物種的幾個植物單元。3.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中該方法應用于植物的一個部分或多個部分如莖、葉或花。4.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中用水凈化，優選在洗滌通道中實施。5.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中人工或用搗碎器實施搗碎。6.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中用紅線性激光器二極管(redlinearlaserdiode)實施激光輻射處理，該二極管能諧波(harmonic)生成150～810nm波長、1～60瓦特功率和直徑為1～6mm的斑點。7.根據權利要求6的方法，其中波長范圍為200～400nm，優選為250nm，功率20瓦特且斑點直徑為4mm。8.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中使每千克搗碎的物質用激光輻射處理3～10分鐘的時間，優選為5分鐘的時間。9.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中使得在每升水中存在50～300，優選為100～250克激光處理過的物質而得到懸浮液。10.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中將懸浮液于2～10℃，優選為4～8℃的溫度放置5～20天的時間，優選為7～15天，以使得浸解發生。11.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中將液相同固相分離通過實施傾析并隨后用5、1和0.22μm的濾器進行3次連續的壓濾而實現。12.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中該方法應用于單子葉或雙子葉植物。13.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中的植物屬于下面的科菊科(Asteraceae)、薔薇科、十字花科、唇形科、木賊科、虎耳草科、菊科(Compositae)、五加科和傘形科。14.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中的植物選自下面的物種Menthasativa、茴芹、刺五加、Equinaceaangustifolia、聚合草、Equisetumarvensa、金盞菊、歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻。15.根據前述權利要求中任意一項的方法，其中的植物是金盞菊。16.根據權利要求15的方法，其中該方法應用于金盞菊的花。17.根據權利要求1-14的方法，其中該方法應用于歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻的混合物。18.根據權利要求17的方法，其中該方法應用于歐洲龍牙草、寬葉獨行菜和白花野芝麻的葉。19.根據在權利要求1-14中定義的方法中任意一項可獲得的水提取物。20.根據權利要求19的凍干的水提取物。21.根據在權利要求15和16中定義的方法中任意一項可獲得的水提取物。22.根據權利要求21的凍干的水提取物。23.根據在權利要求17和18中定義的方法中任意一項可獲得的水提取物。24.根據權利要求23的凍干的水提取物。25.根據權利要求19-24的水提取物或凍干的水提取物，其用作治療藥劑。26.根據權利要求21-22的水提取物或凍干的水提取物，其用于對免疫抑制疾病的治療。27.根據權利要求21-22的水提取物或凍干的水提取物，其用于對癌、結核病、流行性感冒、普通感冒、變態反應、紅斑狼瘡、牛皮癬和AIDS的治療。28.根據權利要求21-22的水提取物或凍干的水提取物，其用于肝癌、肺癌、腎癌、結腸癌、乳腺癌、前列腺癌或前列腺腺體癌；腦癌如星形細胞瘤和成膠質細胞瘤；宮頸癌和膀胱癌的治療。29.根據權利要求23、24的水提取物或凍干的水提取物，其用于對病毒疾病的治療。30.根據權利要求23、24的水提取物或凍干的水提取物，其用作肝細胞再生的刺激物。31.根據權利要求23、24的水提取物，其用于治療與高水平的轉氨酶和膽紅素相關的病理狀態。32.根據權利要求23、24的水提取物，其用于治療甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎；肝硬化和肝癌。33.根據權利要求19-24的水提取物或凍干的水提取物用于制造藥物的用途。34.根據權利要求21-24的水提取物或凍干的水提取物用于制造治療免疫抑制疾病的藥物的用途。35.根據權利要求34的用途，用于制造治療癌、結核病、流行性感冒、普通感冒、變態反應、紅斑狼瘡、牛皮癬和AIDS的藥物。36.根據權利要求35的用途，用于制造治療肝癌、肺癌、腎癌、結腸癌、乳腺癌、前列腺癌或前列腺腺體癌；腦癌如星形細胞瘤和成膠質細胞瘤；宮頸癌和膀胱癌的藥物。37.根據權利要求23-24的水提取物或凍干的水提取物的用途，用于制造治療病毒疾病的藥物。38.根據權利要求37的用途，用于治療甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎。39.根據權利要求23-24的水提取物或凍干的水提取物的用途，用于制造治療與高水平的轉氨酶和膽紅素相關的病理狀況的藥物。40.根據權利要求39的用途，用于治療肝硬化和肝癌。41.根據權利要求23-24的水提取物或凍干的水提取物的用途，用于制造刺激肝細胞再生的藥物。42.包含根據權利要求19-24的水提取物的藥物制劑。43.根據權利要求42的藥物制劑，其進一步包括藥學可接受的載體。44.權利要求41和42的藥物制劑，其進一步包括至少一種其他的藥學活性化合物。全文摘要本發明提供了一種生產植物性(vegetable)特別是植物水提取物的方法，該方法包含步驟a)凈化植物，b)搗碎植物，c)用激光輻射處理搗碎的植物，d)將在步驟c)中獲得的混合物懸浮于水中，e)浸解在步驟d)中獲得的懸浮液，和f)分離結果所得的液體。本發明也提供了由本方法獲得的組合物，其中的一些可應用于醫療，具體而應用于治療免疫抑制疾病如癌、結核病、流行性感冒、普通感冒和AIDS，或者病毒疾病如肝炎。文檔編號A61P37/00GK1479624SQ00820095公開日2004年3月3日申請日期2000年11月27日優先權日2000年11月27日發明者J·M·弗里阿斯潘納,JM弗里阿斯潘納申請人:博桑得集團咨詢公司