專利名稱：：疫苗組合物及其使用方法本申請是1999年8月24日申請的美國臨時申請60/150514的繼續申請并且要求了該申請的優先權。上述確定申請的內容引入本申請作為參考。本申請自始至終，由作者和引用確定各種參考。這些公開物全文公開內容在本申請中引作參考以更完整描述本發明所屬領域背景。已知幾種方法普遍減少這些不利的影響，更特別地提高疫苗特別是在貯存過程中的穩定性。例如，在冷藏箱中低于0℃下貯存，像-70℃這樣低，是一種公知方法。即使在更低溫度，例如在液氮中，很多生物材料包括活細胞能成功地貯存很多年。但是，在例如在涉及自由放牧的牲畜的接種的那些情況下，這樣的方法不總是方便的。凍干或冷凍干燥是保存用作疫苗的活細胞和病毒的另一條已知途徑。在冷凍干燥期間，首先冷凍含有生物材料的溶液，然后通過升華蒸發水，通常在高真空和零度以下的溫度下。先前的方法使用過冷凍干燥或者其他技術來配制疫苗，但是關于穩定的最終劑量形式的制備和施用仍然存在其他難題。例如，美國專利4251509(Hanson和Abegunde)公開了一種要對干燥地區自由放牧的牲畜口服給藥的穩定顆粒病毒疫苗。但是公開的劑量形式不是冷凍干燥的而是通過將糊狀物濃縮并且擠出、干燥成片劑制備的。要求根據特定病毒篩選的抗氧化劑促進熱穩定性。這樣的制劑制備可能更復雜，并且特別是不太適合當在免疫之前期望溶解疫苗的那些情況。美國專利3458621和3608030(Tint)公開了冷凍干燥的病毒制劑制備用于腸道免疫口服給藥的片劑的用途。但是，制備的片劑是口服給藥的并且提供了腸溶包衣來延緩崩解。在體外試驗期間，它們沒有快速崩解并且發現只是在“25分鐘之內”崩解并且刺激腸液。此外，扣除腸溶包衣的作用測定在受刺激腸液中的崩解時間。另外，Tint進一步強調，通過壓制包衣和非壓制包衣片劑之間的比較表明，除非片劑是“壓制包衣的”，否則它們將損失它們的效價。Tint指出，非壓制包衣片劑“不僅不能在所有的抗體陰性個體體內激發抗體應答，而且此外，產生的效價的強度顯著變小”(參見第4欄，第40行)。R.P.SchererCorp.申請的PCT公開WO99/21579(Seager，等)公開了一種用作獸藥疫苗例如抗新城疫的“快速”分散的組合物，其是冷凍干燥的并且“松軟壓制”的。參照美國專利4371516(UK同族專利1548022)，所述劑量形式公開是“開放基質網狀物”，例如“固體泡沫”，與壓制形式或硬壓片相反。此外，該疫苗方向是口服并且定向滯留在粘膜組織。佐劑提供在其上吸收的足夠的滯留時間。公開的疫苗配方沒有提供用于后免疫的液體劑量制劑，也沒有提供容易形成穩定的可計量的作為液體劑量給藥的疫苗溶液的方式，也沒有提供穩定的壓制的或硬壓片凍干物來有利于其后施藥。美國專利5587180(Allen，Jr.等)描述了制備用于快速溶解片劑的顆粒載體基質的方法。該方法教導不用冷凍干燥而使用標準噴霧干燥技術。所述顆粒載體基質適合置于口腔中時的給藥。此外，沒有穩定疫苗配方提供為液體劑量形式的疫苗溶液。美國專利5336666(Neway等)公開了可以形成要以液體形式重新配制的片劑的冷凍干燥液體疫苗。但是，所述疫苗局限于特定細菌的極性糖肽并且不能提供完全或快速溶解。盡管根據本領域技術人員公知的凍干方法能夠進行生物材料的冷凍干燥來提供合適的疫苗制劑，但是在凍干最后活病毒的效價(titer)一般和其凍干之前溶液中的不一樣。一般情況下，在凍干之前不可能進行滴定(titration)，因為溶液在其被凍干之前不穩定。另外，在凍干期間效價將不可預知地變化。結果，只有通過冷凍干燥之后的滴定才證實以經驗為基礎的對初始效價的估計。作為所有上述的結果，幾乎不可能實現確定的精確的目標效價。如果用小瓶中已經含有的凍干物進行凍干，對一批材料的再操作一般是不可能的，并且在某些情況下，如果其沒有達到具體標準則全部這一批材料必須丟棄。美國專利5897852(Wilderbeek，等)試圖使用不同的帶有“溶球(lyosphere)”的“冷凍干燥體”制成凍干塊的效價不足來解決這樣的問題。但是，每一個溶球具有其自身的效價從而必然滴定多體來達到期望的效價。即使在最好的情況下，該方法也不能實現精確獲得的效價，因為由于利用混合抗體實現定向效價，其只能是估計值。此外，與產生塊或粉末的更直接的溶液冷凍干燥相比，溶球的生產相對更難。另外，經常需要特殊基質來防止溶球材料在干燥之后被粉化。一般情況下，該方法需要制備各自具有不同的效價，添加劑和佐劑分開的溶液。該方法沒有解決一批活病毒的效價很少是均勻的，并且小瓶和小瓶之間也存在差異，特別是凍干機中跨越冷卻板區的小瓶之間存在差異這樣的問題。因此，需要的對每一個小瓶的溶球數目的確定總是大約值。冷凍干燥對含有一種以上免疫原性成分的疫苗也是有用的。例如，EP290197A公開了一種冷凍干燥四價疫苗。該方法公開了將四種活病毒疫苗成分混合后冷凍干燥。現行用于制備疫苗制劑的冷凍干燥技術的缺點是該方法非常復雜，具有很多不定因素，使得眾所周知難以以可重復方式進行以獲得可接受的產物和劑量均勻性。這對于大量劑量在一個小瓶中冷凍干燥情況下的獸藥疫苗尤其存在問題。這種問題對于人疫苗不常見，但是在需要大量接種例如在軍事事態情況下或者流行性傳染病的情況下同樣可估計到。例如，注冊的用于家禽接種的典型的單一疫苗小瓶包含1000或2000劑量。在冷凍干燥之前，粗略估計一下材料的效價，但是最終效價只有在冷凍干燥之后才能確定，因為在冷凍干燥期間效價經常很不可預測地降低。此外，活病毒或細菌粗材料通常不能保持足以長時間的穩定以在冷凍干燥之前獲得精確效價結果。事實上，原本含有2000劑量以上的容器在冷凍干燥之后經常變為只含有1900劑量。在那種情況下，小瓶可能只標記為1000劑量小瓶，因為那一般是其它官方注冊劑量。對于這樣一種情況，將會浪費47％的材料并且相應地提高費用。混合疫苗使該問題更加嚴重，因為必須使用具有最低效價的該成分的劑量來表征整個這一批。作為另一個缺點，當要提供2000單一劑量的小瓶接著被標記為1000劑量小瓶并且用來接種1000個動物時，這樣給藥的動物沒有必要過量接觸。此外，當更有效地干燥這批疫苗中的一些時，在冷凍干燥之前肯定增加的劑量數不是令人滿意的改變。在那種情況下，只是結束了材料的浪費。對于解決疫苗劑量效價數在確定的上限和下限之間的注冊系統的注冊人最近的工作，這些問題將變得越來越重要。由于在生產和冷凍干燥過程中很多的變數，大規模生產基礎上將難以符合這些限定。正如所指出的，當需要混合疫苗時，該問題將更加明顯。先前冷凍干燥混合疫苗的另一個缺點是必須貯存大量的配制的混合物。因為一般在冷凍干燥之前將混合疫苗的各種成分混合而發生這種情況。因此，對于制備抗例如兩種疾病的全范圍單/多成分疫苗的制備，必須貯存三種不同的產物(1)包括抗-A疫苗的產物，(2)包括抗-B疫苗的產物，和(3)包括抗-A疫苗和抗-B疫苗的產物。在抗三種疾病的疫苗的情況下，必須制備并儲存七種不同的疫苗/混合物。對于四種疾病，這個數為十五種不同的疫苗/混合物。結果，經常需要提供和保持大量貯存接納能力。美國專利5397569和5871748(Whitfill等)公開了通過卵內施用由活疫苗病毒和與之結合的中和抗體組成的疫苗復合物在鳥類受試者體內產生抗新城疫病毒(NDV)的活性免疫性。Whitfill公開了病毒與中和抗體或者其片段的比例將決定免疫接種的成功。但是，對于有效用于抗NDV的這樣一種方法，必須將該比例的值保持在一個窄的范圍，這樣使得不殺死雞而成功免疫接種。此外，利用凍干的NDV(和使用其它病毒制劑一樣)效價的不可預測性表明像Whitfill這樣的方法不容易應用于NDV。因此，期望能夠保證制備這樣一種疫苗的NDV和抗體的更精確的效價。先前疫苗配方及其制備方法的另一個缺點在于實際冷凍干燥過程占據空間的性質。一般情況下，凍干疫苗首先需要將溶解的疫苗分散于玻璃小瓶中。然后將小瓶松松地蓋上橡皮塞并且置于冷凍干燥箱或冷凝器中的架子中的格中。難以將非常高劑量的溶解的疫苗材料濃縮成非常小的體積。作為結果，在多疫苗劑量的冷凍干燥中典型使用的小瓶總是含有相對大體積的液體。有效冷凍干燥要求要凍干的液體將大表面積暴露于真空。因此，由于只有冷凍小丸的上部與真空接觸，所以在相對大的具有寬的低部的玻璃瓶或小瓶中冷凍干燥疫苗。這些小瓶有時5厘米高，另外需要另外高2厘米用于橡皮塞。結果，冷凍干燥儀器中的產物材料和空間的比例十分不足以導致較低費用的有效生產過程。玻璃小瓶中含有的配制的冷凍干燥疫苗的常規組合物的另一個缺點是冷凍干燥期間橡皮塞可能阻礙水分子從小瓶至冷凝器的自由轉移。這可能增大小瓶中升華氣體的分壓，從而降低冷凍效率，并且增大了凍干材料萎陷的危險。玻璃也阻礙熱傳遞進一步影響凍干效率。通過在凍干中使用隔盤而不用玻璃瓶和塞子將提高效率。此外，冷凍干燥非常費時間。疫苗成分一般保持在僅低于凝固點來降低水的升華時間。但是，更長的干燥時間幾乎不可避免地導致效價的降低。具有塞子和鋁蓋的玻璃瓶通常被視為一個障礙。從生產的角度講，它們代表高于完成疫苗的成本的50％。在這種情況下，必須向小瓶注射稀釋劑，并且如果需要，提取并稀釋得到的溶液備用。這是不方便的，不總是適合現場情況，例如在養雞場中。對于在該過程中偶爾自行注射的這些情況中的操作也是不常見的。還有，這樣的疫苗包裝和制劑的另一個缺點是一些濃縮溶液會留在小瓶中，結果，通常接受的是過量的內含物有必須補償不均勻性和制備損失，以及貯存期間帶來的損失。還必須安全處置玻璃瓶使不可能導致健康和環境公害。作為結果，常規冷凍干燥疫苗配方的應用涉及復雜的制備技術，其成本高并且在野外難以實施。結果，這樣的常規疫苗配方不很適合在發展中國家接種，因為發展中國家經濟上和實地條件都不允許耗費大的事情，或者需要大量接種的情況，例如防御生物戰，或者其它潛在的突發事件或流行病。因此，所期望的是這樣一種疫苗配方，其避免使用用于給藥的玻璃瓶，提供較低費用和大體積包裝替代物。還期望的是這樣一種疫苗配方及其使用方法，其提供更高劑量精確性并且容易使用，同時保持穩定性，無菌性，溶解性和均勻性，對于單和多疫苗配方都是如此。有利于更精確，可重復生產和有效給藥的疫苗配方和改進的免疫方法能夠提供更好的實地效率，提高的安全性，成本效率，較少浪費，和改進的環境要求。本發明的另一個目的是提供凍干的活的或滅活疫苗，其是壓實的、壓緊的或壓片的密實、穩定固體，其在制備期間以及在商售疫苗足夠的保存期要求的期間內將保持其潛在的免疫能力。本發明的另一個目的是提供凍干的活的或滅活疫苗，其是壓實的、壓緊的或壓片的密實穩定固體，其有利于卵內(in-ovo)疫苗制劑的配制及其使用。本發明的另一個目的是提供凍干的活的或滅活疫苗，其是壓實的、壓緊的的或壓片的密實穩定固體，其有利于非小瓶容器中疫苗的包裝及其使用。本發明的另一個目的是提供可以配制的更適合接種的疫苗組合物和免疫方法及其使用。本發明的另一個目的是提供一種疫苗組合物和免疫方法，其減少了為抵消根據已知方法制備的包裝疫苗的效價中固有的不精確所需要的過量疫苗材料的需要。本發明的另一個目的是提供使可以施用的疫苗配方類型更靈活的疫苗組合物和免疫方法。本發明的另一個目的是提供有利于多劑量疫苗溶液的配制及其使用的疫苗組合物和免疫方法。本發明的另一個目的是提供有利于人群免疫的疫苗組合物和免疫方法。本發明的另一個目的是提供一種疫苗組合物和免疫方法，其適合用于低成本的不發達國家免疫接種，這些國家成本和場地條件不允許復雜制備和昂貴的使用。本發明的另一個目的是提供用于必須群體免疫接種的生物戰防御的疫苗組合物和免疫方法。本發明可以實現這些和其它目的，其涉及含有至少一種預先滴定過的凍干的抗原成分和助溶劑的穩定疫苗組合物，其中所述疫苗組合物是硬片劑形式。另外，本發明還提供使受試者免疫抵抗某種疾病的方法，其包括以下步驟用稀釋劑溶解疫苗組合物形成溶液，其中所述疫苗組合物含有至少一種凍干的抗原成分和助溶劑，其中所述疫苗組合物是硬片劑形式，其中所述疫苗組合物提供抵抗這種疾病的保護；給受試者施用使其獲得免疫抵抗該疾病的有效量的得到的溶液。參照下面的實施例根據下面的詳細描述，本發明其特別特征將變得更明顯。下面的描述將繼續討論本發明提出的問題和解決方案，它們涉及獸醫應用。但是，下面的描述不能理解為限制于此或者對人免疫接種不能用。本發明的詳細描述本發明提供含有至少一種凍干的抗原成分和一種助溶劑的穩定壓緊的疫苗組合物。在本發明的一個優選的實施方案中，所述疫苗組合物是硬片劑形式。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述組合物在水中完全而快速地溶解。在本發明的一個優選的實施方案中，所述組合物是無菌的。在本發明的一個優選的實施方案中，所述助溶劑是泡騰劑或者一對泡騰劑試劑(pairofagents)，崩解劑，表面活性劑或增溶劑。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述泡騰劑對包括一種鹽和一種酸。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述泡騰劑對中酸是檸檬酸，所述鹽是碳酸氫鹽。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述疫苗組合物含有粘合劑和潤滑劑。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述組合物在水中完全而快速地崩解。在本發明的另一個實施方案中，所述活性材料是在使用之前在低于冷凍溫度的干燥氮氣之下保存的預先滴定過的凍干物。在本發明的另一個實施方案中，所述凍干成分至多占該組合物重量的80％。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述疫苗組合物特征在于與稀釋劑接觸后在不到80秒之內完全溶解。在本發明的另一個優選的實施方案中，在每200毫克組合物0.5毫升稀釋劑和每400毫克組合物100毫升稀釋劑之間的稀釋劑與組合物比例下發生所述疫苗組合物的完全溶解。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述疫苗組合物的穩定性特征在于在37℃下5天之后效價的減小不大于109.7EID50/毫升和109.2EID50/毫升之間的差異。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述疫苗組合物的穩定性特征在于在4℃下9個月之后效價的減小不大于109.7EID50/毫升和109.3EID50/毫升之間的差異。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述疫苗組合物的抗原成分是全病毒，全細菌或全微生物。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述疫苗組合物的抗原成分是活細菌或活病毒。在本發明的一個優選的實施方案中，所述疫苗組合物含有存在抗原成分的指示劑。在本發明的一個優選的實施方案中，所述指示劑是一種染料。本發明進一步提供了含有至少一種凍干的抗原成分和一種助溶劑的穩定疫苗組合物，其中所述疫苗組合物是硬片劑形式并且所述抗原成分包括脂多糖或蛋白質，不管它是天然存在的，重組的或修飾的。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述抗原成分是選自下面的活病毒新城疫病毒或細菌，新城疫病毒VH株，傳染性滑液囊疾病病毒，Gumboro病病毒，禽痘病毒，喉氣管炎病毒，傳染性支氣管炎家禽病毒，GumboroWinterfield病毒，傳染性支氣管炎(IB-H120)，綿羊天花病毒，牛瘟病毒，炭疽孢子，沙門氏菌屬，大腸埃希氏桿菌，或者上述一種或多種的混合物，不管它是天然存在的，重組的或修飾的。在本發明的另一個實施方案中，所述抗原成分是選自炭疽孢子、沙門氏菌屬、大腸埃希氏桿菌，或者上述一種或多種的混合物，不管它是天然存在的或重組的或修飾的。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述抗原成分是活病毒，并且該組合物進一步含有抗該病毒的中和抗體。本發明進一步提供使受試者免疫抵抗某種疾病的方法，包括以下步驟用稀釋劑溶解疫苗組合物形成一種溶液，其中所述疫苗組合物含有至少一種凍干的抗原成分和助溶劑，其中所述疫苗組合物是硬片劑形式，并且其中疫苗組合物提供抵抗該疾病的保護；和將得到的溶液以使受試者免疫抵抗該疾病的有效量施用給受試者。在本發明的一個優選的實施方案中，所述免疫方法的溶解步驟進一步特征在于疫苗組合物的完全溶解。在本發明的另一個優選的實施方案中，在每200毫克組合物0.5毫升稀釋劑和每400毫克組合物100毫升稀釋劑之間的稀釋劑與組合物比例下發生所述免疫方法的溶解步驟期間的完全溶解。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述免疫方法的溶解步驟進一步特征在于與稀釋劑接觸時在不到80秒之內完全溶解。在本發明的另一個實施方案中，所述施用步驟包括用溶液對受試者注射。在本發明的另一個實施方案中，所述施用步驟包括用所述溶液形成的氣溶膠對受試者噴霧。在本發明的另一個實施方案中，所述施用步驟包括以滴眼液形式將所述溶液施用給受試者。在本發明的另一個實施方案中，所述施用步驟包括通過口服攝入施用所述溶液。在本發明的一個優選的實施方案中，對鳥類動物受試者施用所述免疫方法，并且所述疾病選自新城疫，傳染性滑液囊病，禽痘，喉氣管炎，家禽傳染性支氣管炎。在本發明的另一個優選的實施方案中，給藥步驟包括在卵內對受試者施用溶液。本發明還提供了一種包裝(package)，其包含含有至少一種凍干的抗原成分和助溶劑的疫苗組合物，其中所述疫苗組合物是硬片劑形式或者進一步含有指示抗原成分存在的指示劑。在本發明的優選的實施方案中，所述包裝是泡罩包裝(blisterpack)。在本發明的另一個優選的實施方案中，所述包裝是無菌注射器。本發明還提供了含有密實疫苗組合物的無菌注射器，其中所述疫苗組合物含有至少一種凍干抗原成分和助溶劑。在本發明的一個實施方案中，所述無菌注射器的壓實疫苗組合物是壓緊組合物。在本發明的一個優選的實施方案中，所述無菌注射器的壓緊疫苗組合物是硬片劑形式。本發明進一步提供了使受試者免疫抵抗一種疾病的方法，其包括向含有壓實疫苗組合物的無菌注射器加入稀釋劑，其中所述疫苗組合物含有至少一種凍干的抗原成分和助溶劑，或者其中無菌注射器的壓實疫苗組合物進一步的特征是壓緊組合物，或者其中無菌注射器的壓緊疫苗組合物是片劑形式，使得在注射器中形成溶液，并且將得到的溶液施用給受試者。通過任何合適的方法可以施用溶解本發明的疫苗組合物得到的溶液。根據本發明的使受試者免疫抵抗某種疾病的方法可以利用施用疫苗組合物形成的液體溶液的多種方法。施用的例示的方法是肌內注射，皮下注射，靜脈內注射，腹膜內注射，滴眼液，通過飲用水，氣霧劑或鼻噴霧劑。當要處理的動物是鳥類時，所述鳥類動物可以是新孵化的(即大約孵化后一天)，青春期的或成年期的鳥類。本發明的疫苗可以用于卵內對鳥類施用，如Sharma的美國專利No.4458630所述。本發明的冷凍干燥(凍干的)預先滴定過的疫苗組合物理解為是由至少一種冷凍干燥的抗原預先滴定過的疫苗成分，賦形劑和任選的各種添加劑組成的制劑，其已經壓實或壓緊成密實形式。如這里使用的，“密實(dense)”指具有大于1.0g/cc密度的疫苗組合物。通常，疫苗組合物的密度將大于1.5g/cc。典型地，疫苗組合物的密度范圍是大約1.5g/cc至2.5g/cc。疫苗組合物可以是壓實，壓緊或硬片劑形式的。如這里使用的，“壓實的(compacted)”指具有大于1.0g/cc密度的疫苗組合物，但是以Strong-Cobb單位(SCU)測定并且在ERWEKA片劑硬度測試儀TBH20型上測定硬度時沒有可測的硬度。如這里使用的，“壓緊的(compressed)”指具有至少2.0SCU硬度的疫苗組合物，并且“硬片劑(hardtablet)”指片劑形式或者具有至少3.0SCU硬度的其它密實形式的疫苗組合物。可以在安裝的MANESTYF3沖壓機12mm平面傾斜或6mm標準凹面沖壓機上制備壓實的，壓緊的和硬片劑疫苗組合物。以最大4噸的壓力制備硬片劑形式的疫苗組合物。如上所述在ERWEKA片劑硬度測試儀TBH20型上測定片劑硬度，發現硬度都大于3.0SCU。通常與治療物質相關的經典片劑被理解為是這樣的“片劑”。但是，可以理解其是指任何壓實的或壓緊的密實形式，包括藥學領域不經常使用的那些。例如，大“團塊(briquette)”也是適合的，最終應用要求大體積材料。要明白在稀釋劑中“完全”并且“快速”崩解或溶解的制劑是在純水中能夠這樣做的制劑，即使預期的應用不限于純水而是用一種溶液例如鹽水，或者在無水賦形劑的情況下。“完全溶解”理解為沒有不溶成分不溶解。“快速崩解或溶解”理解為當大體積水用于小體積壓緊的凍干的疫苗組合物例如100毫升水用于400毫克泡騰片劑時在大約幾分鐘之內或更短時間內完全崩解或溶解。稀釋劑體積相比減小情況下時間延長。因此，相同的片劑，10毫升體積水可能需要70秒，2毫升體積水可能需要80秒。上面指出的崩解或溶解時間是室溫不攪拌下置于測定量水中時溶解或崩解片劑所需時間。“穩定的”理解為本發明的組合物在其制備或商售疫苗貨架期所需時間將保持它們(潛在的)免疫能力。通過參照下面的實施例將證明，正如這里所描述的，本發明的疫苗組合物和免疫方法具有很多優點。如下通過對含有1000劑量疫苗成分的疫苗組合物制劑的說明來一般性舉例說明本發明的方法。在盤中凍干疫苗成分的溶液。將干燥的材料磨碎。測定冷凍干燥之后均勻混合樣品的效價，同時將凍干物保存在氮氣下-20℃密封結實的容器中。如果測得凍干材料的效價是每100毫克625劑量，則每個壓緊的疫苗制劑中160毫克重量的該材料足以精確達到要求的效價。然后將該材料與任選的和/或功能性添加劑混合，并且將該制劑壓緊或壓片。然后可以通過本領域技術人員公知的任何方法和/或這里描述的方法包裝壓緊的冷凍干燥的疫苗制劑。術語賦形劑是配制疫苗組合物中使用的稀釋劑或載體的總稱。賦形劑可以包括稀釋劑或填料，粘合劑或粘結劑，助溶劑，潤滑劑，隔離劑，glidant或流動性促進劑，染料，矯味劑，甜味劑和吸附劑。具體地說，片劑填料是兼衡大團片劑并且主要作為載體起作用的物質。典型的片劑填料包括但不限于硫酸鈣，磷酸鈣，碳酸鈣，淀粉，修飾的淀粉(羧甲基淀粉等)，微晶纖維素，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露糖醇和山梨糖醇。片劑填料含量占片劑重量的大約0％至90％。粘合劑作為使粉末保持為顆粒形式的“膠水”作用。粘合劑包括但不限于天然聚合物，例如淀粉或阿拉伯膠，黃耆膠和明膠或合成的聚合物例如PVP和甲基-，乙基-和羥丙基纖維素。粘合劑含量占組合物重量的大約0％至20％。助溶劑促進疫苗組合物的溶解。典型的例子包括但不限于泡騰劑，崩解劑，表面活性劑和增溶劑。崩解劑引起壓緊的片劑崩解。典型的例子包括但不限于淀粉，微晶纖維素，純羊毛淀粉，藻酸，淀粉甘醇酸鈉，瓜耳膠，交聯聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，離子交換樹脂和纖維素例如甲基-纖維素，croscarmellose鈉，羧甲基纖維素鈉和羥丙基甲基纖維素。助溶劑含量占組合物重量的大約1％至95％。潤滑劑減小壓緊和注入期間要壓緊的材料與模壁之間的摩擦。大多數潤滑劑是水不溶性的并且包括硬脂酸鹽(鎂鹽，鈣鹽和鈉鹽)，硬脂酸，滑石和蠟。水溶性潤滑劑包括PEG，苯甲酸鈉，油酸鈉，乙酸鈉，月桂基硫酸鈉和月桂基硫酸鎂。潤滑劑含量占組合物重量的大約0％至5％。加入著色劑有助于鑒定疫苗配方的類型，例如審美和功能目的的片劑形式，例如但是不限于本發明，以色列專利No.46189實施例A至D公開的染料。著色劑含量占配方的大約＜1％。本發明的疫苗組合物可以根據本領域技術人員公知的方法制成片劑，例如用H.A.Lieberman，L.Lachman，J.B.Schwartz編著的“藥物劑量形式，片劑”(PharmaceuticalDosageForms，Tablets)，第二版，vol.1，2，3中描述的方法。在優選的實施方案中，本發明的組合物是含有泡騰劑作為助溶劑制備的硬片劑，正如本領域技術人員明白的，泡騰劑必須含有一種堿性成分和一種酸性成分，例如泡騰劑對(effervescentpair)，這樣當溶解時發生合適的反應產生二氧化碳和碳酸。合適的泡騰成分包括堿性化合物的碳酸鹽族和無機或有機酸性化合物。堿性化合物的碳酸鹽族中，在本發明的組合物中使用的優選的泡騰劑是碳酸鈉，碳酸氫鈉，甘氨酸碳酸鹽，碳酸鉀，碳酸氫鉀，檸檬酸二氫鉀，和碳酸鈣。最優選的堿性物質是碳酸氫鈉。本發明的組合物中使用的優選的酸性成分是檸檬酸，己二酸，酒石酸，馬來酸，硼酸，苯甲酸，羥基苯甲酸，甲氧基苯甲酸，扁桃酸，丙二酸，乳酸，丙酮酸，戊二酸，天冬氨酸，鹽酸，草酸，水楊酸，琥珀酸和乙酸。最優選的酸性泡騰成分是檸檬酸。除了上述堿性和酸性泡騰片劑成分外，本發明的片劑組合物還可以含有其它常規使用的賦形劑。使用本領域公知的片劑制備方法獲得本發明的片劑組合物。總的來說，本發明使用的片劑制備方法可以總結如下篩選各成分，混合，并且在MANESTYF3片劑壓制機上直接壓制成要求的重量、大小和硬度的片劑。本發明的泡騰片劑組合物可以溶解于普通的水或簡單的鹽溶液中。抗原疫苗成分是特異性觸發抗從中衍生疫苗成分的一種或多種抗原的免疫應答的那些成分。這樣的成分可以源自一種病毒或微生物，包括重組體，例如抗原性脂多糖和抗原性蛋白質，或者例如兩種不同的抗原性蛋白質。它們也可以包括所述蛋白質或多糖的抗原部分。這些成分一般稱之為亞基成分。在某些情況下，疫苗成分包括全病毒或微生物包括重組體。所述疫苗成分例如可以是菌苗，或者活的減毒細菌或病毒，滅活細菌或病毒，死細菌或病毒包括重組體和另外修飾體。優選地，疫苗成分是活的(修飾的非毒性或部分毒性包括重組體)細菌或病毒。例子包括但不限于沙門氏菌，新城疫疾病病毒，傳染性滑液囊疾病(GUMBORO)病毒，傳染性支氣管炎病毒，假狂犬病病毒或炭疽孢子疫苗。組合疫苗是含有多種疫苗成分的疫苗。組合疫苗還可以含有從兩種或多種不同的病毒或微生物衍生的抗原性成分。更復雜的組合也是可能的。因此，上述一種類型的疫苗，以及其混合物稱之為組合疫苗。這些組合疫苗還可以含有任何已知的佐劑。“包裝”理解為用于貯存穩定壓緊的疫苗制劑的任何包裝。所述包裝可以是例如但不限于通常用于包裝和貯存片劑的玻璃或塑料(例如高密度聚乙烯)容器。向稀釋劑加入穩定壓緊的冷凍干燥疫苗制劑以使制劑均勻溶解足以使疫苗備好代用。包裝本發明壓緊的冷凍干燥疫苗制劑的另一種形式是泡罩包裝。泡罩包裝的一個例子是帶有一行行凹部的塑料板(盤)，其含有制劑并且優選在干燥氮氣下加蓋鋁箔熱密封。用于敏感產物的另一種泡罩包裝稱之為鋁/鋁泡罩，這兩種盤都是以鋁或層壓各種塑料的鋁為基礎。這將避免使用費用大并且占空間的玻璃瓶，一般用于最終使用者一般不使用的疫苗的包裝和貯存。本發明使向例如一桶水中直接加入一泡罩包裝的一種或多種壓緊的冷凍干燥疫苗組合物，以在飲用水或氣溶膠噴霧系統中使用以保證成功免疫稱為可能。這通常在固定場所例如雞棚中完成。獸醫免疫接種也可以通過噴霧，肛門刷，穿刺，全身噴灑或作為滴眼液。用類似方法獲得的疫苗溶液或者可以用于胚胎的卵內免疫接種，如美國專利5397569和5871748所述。很清楚在本發明中可以使用能被用來盛壓緊的固體的任何裝置。稀釋劑可以只是水，或者另一方面其可以是緩沖液和佐劑的復雜混合物。這主要決定于在凍干之前向溶液中或者在壓緊之前向制劑中加入什么添加劑。已知的冷凍干燥方法在小瓶中得到含有一種或多種疫苗成分的壓塊。正如所指出的該方法占空間費時間。如果在盛有溶液的盤中冷凍干燥抗原性疫苗成分，則在該過程中使用冷凍干燥機中冷卻平板的整個表面。另外，如果發生塌陷或其它情況，如果在冷凍干燥過程中出現任何其它問題，能夠容易回收材料。這不是如果在凍干之前將材料預先添入玻璃瓶的情況。另外，因為在該方法的該部分不涉及占高度的小瓶，所以能夠將冷卻平板以高密度堆積。作為結果，干燥器的容量大大增加，只有冷凝器容量限制實際應用。作為必然結果，本發明使用小得多的冷凍干燥器以實現和當在大得多干燥器中使用小瓶時一樣的產出。因此，在一個實施方案中，將已經在盤中干燥然后粉碎成粉末、并且與無菌添加劑混合以助于成片劑、且最終溶解的無菌凍干抗原材料壓緊成疫苗組合物。然后在干燥氮氣下在高濕度和氣體屏障下用無菌泡罩條袋包裝來包裝無菌疫苗組合物。在一個優選的實施方案中，凍干材料是活減毒病毒。在另一個優選的實施方案中，將含有預先干燥的病毒成分的組合的混合物與有助于溶解的添加劑和任選的期望用于接種的那些佐劑一起壓制成單一制劑。如果要求組合疫苗，則本發明提供的優點更顯著。在壓制得到具有高精確劑量每一種成分的組合疫苗之前僅僅向制劑中加入各類型的抗原疫苗成分的足量的預先滴定過的凍干物就足夠了。同時，本發明提供貯存例如三種或四種成分疫苗的所有可能的變體需要的大貯存能力的問題的解決方法。代替組合疫苗冷凍干燥要求的冷凍干燥之前混合各種成分的是分別冷凍干燥各成分。這樣可以分別貯存各成分。當需要時，通過如本文所述將合適量的各期望的成分的凍干材料混合成一個制劑，然后如上所述將混合物壓緊并且包裝，容易獲得各種期望的組合物。這使得例如在四種成分復合疫苗的情況下，只儲存四個容器，每一個容器只盛有組成要求的任何單一或組合疫苗制劑的一種特定類型疫苗的凍干材料。先前的方法會要求15個不同的容器，每一個盛有預先組合的成分或混合物。在另一個優選的實施方案中，所述疫苗容器包括盛有固體形式例如無菌片劑的無菌泡罩條，所述無菌片劑從在泡騰劑對(例如碳酸氫鈉和檸檬酸)，無菌粘合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)和無菌潤滑劑(例如硬脂酰基富馬酸鈉，硬脂酸鎂)中與無菌助溶劑混合的一種或多種疫苗成分的凍干材料壓制而成的。然后可以利用這些單一成分或多成分制劑就地容易制備已知效價的精確疫苗溶液。上述是助溶劑，粘合劑和潤滑劑的例子，而不是要作為本發明的疫苗組合物的限制。在另一個實施方案中，免疫的疫苗組合物和方法包括含有從兩種或多種抗原成分衍生的成分的疫苗組合物。以來自多種抗原成分的成分為基礎的疫苗的優點在于一次施用這樣一種疫苗足以誘導抵抗多種疾病的保護作用。要理解對于每一種病毒或微生物，可以包括任何幾種不同的抗原疫苗成分。在另一個實施方案中，以形成卵內免疫例如活Marek疾病，NDV和Gumboro疫苗要求的復合物所需要的精確比例可以混合各種疫苗的抗原成分。因此多成分卵內疫苗制劑也是可能的。通過將用于各種疾病的冷凍干燥的抗原成分和要求的抗體與片劑助劑的混合物壓緊，本發明能夠實現這樣的混合物的劑量形式。然后就在卵內接種之前在規定條件下通過就地將該制劑溶解于要求的賦形劑中可以使用這樣一種制劑來實現期望的病毒免疫因子復合物。通常，疫苗容器能夠含有1至10000劑量或更多的疫苗。對于個體接種，對于人和獸醫使用兩種情況，單一劑量容器是常見的。人脊髓灰質炎病毒疫苗，人活的冷凍干燥的傷寒疫苗或犬細小病毒疫苗一般配制成單一劑量疫苗。應該理解，對于單一劑量疫苗，與多劑量疫苗所述的相同配制方法完全適用。對于新孵化小雞的大棚接種，實際上通常使用10000劑量疫苗容器用于大量接種抵抗傳染性支氣管炎病毒或NDV。對于大農場動物例如牛免疫接種抵抗例如傳染性牛喉氣管炎或副流感病毒，一般使用具有10劑量的疫苗容器。根據本發明制備的疫苗組合物的一個優點在于在冷凍干燥之后可以加入在冷凍干燥溶液中不互溶的助溶劑。這加速了施用過程。出人意料地發現使用預計對活減毒病毒制劑有害的檸檬酸作為崩解劑部分，對效價沒有顯著的不利影響。容器的濕度屏障的完整對配制該類型配方有顯著影響，并且應該采取確保在包裝中形成有效濕度屏障的步驟，這一點也是明顯的。特別是當使用泡罩條包裝和選擇的添加劑當濕潤時有不穩定潛力的情況下，如使用檸檬酸的情況。本發明還提供使受試者免疫抵抗某種疾病的方法，包括以下步驟用稀釋劑溶解疫苗組合物形成溶液，其中所述疫苗組合物含有至少一種凍干的抗原成分和助溶劑，其中所述疫苗組合物是硬片劑形式，并且其中所述疫苗組合物提供抵抗該疾病的保護作用；以使受試者免疫抵抗該疾病的有效量將該得到的溶液施用給受試者。或者，所述凍干物可以含有來自兩種或多種病毒或微生物的抗原疫苗成分。另外，本發明提供一種疫苗組合物，其中疫苗組合物和稀釋劑一起包含在包裝中。這樣的實施方案提供了一種免疫方法，其中可以在場所就地實施形成用于給藥的液體疫苗的溶解步驟。應該明白，含有壓緊的冷凍干燥的穩定疫苗組合物的疫苗包裝或包(pack)可以是任何有用的疫苗包裝。在一個簡單形式中，疫苗包包括含有疫苗成分的疫苗容器，其與說明書一起包裝在盒子中。在更復雜的疫苗包形式中，疫苗容器可以另外包括稀釋劑和注射器。在另一個實施方案中，在無菌條件下將壓緊的凍干的疫苗裝入密封注射器中，其中在該無菌注射器中發生疫苗的溶解。以這種方法，預先裝入的注射器的批量規格不取決于凍干器中注射器占據的空間。下面的實施例詳細說明本發明的疫苗組合物的制備和當用來使受試者免疫抵抗各種傳染病時的效力。也給出了對壓緊冷凍干燥的片劑形式的各種疫苗配方的效價分析的穩定性評價。給出實施例進一步詳細說明和解釋本發明但是不應該認作是限制。除非另有說明，實施例以及說明書和權利要求書中所有的份數和百分比是重量比。溫度是攝氏度。實施例11.1含有活減毒新城疫病毒VH株(下文稱之為NDV-VH)的片劑的制備用NDV接種能育的無特異性病原體(SPF)雞蛋，并且根據在雞蛋中繁殖NDV病毒的公知方法孵育。收集尿囊羊膜液(AAF)并且通過在4000g下離心20分鐘純化。完全根據已知的標準方法實施在小瓶中的凍干。以下面方式制備片劑向13.2克粉碎的凍干物加入60克碳酸氫鈉42克無水檸檬酸4.2克聚乙烯吡咯烷酮K-300.3克硬脂酸鎂然后將這些成分混合并且壓緊出每片400毫克重量的片劑。這樣制備的每一片得到的片劑含有44毫克凍干物。1.2片劑分析評價隨機取樣的片劑的SPF雞蛋中的效價，并且與小瓶中的凍干物的調節量相比較。*雞蛋感染劑量50單位當將一片加入100毫升水中，在不到一分鐘之內完全溶解，即肉眼觀察不到固體痕跡。當將一片加入10毫升水中，在70秒內完全溶解。當將一片加入2毫升水中，在80秒之后完全溶解。在1毫升水中，盡管實現了完全溶解，但是沒有發現完全溶解中涉及該片劑的泡騰性質，這用了大約4分鐘。1.3包裝和穩定性將片劑包裝在聚氯乙烯(PVC)泡罩條中并且在37℃下測定穩定性，發現5，7和9天期間內相對穩定。4℃下貯存9個月之后片劑的效價和顏色沒有產生可感知的變化。對計算相同量的活性材料的每片或小瓶以EID50單位給出效價。1.4片劑NDV-VH對雞的效能測定HI＝血凝抑制單位。A將一片NDV-VH溶解于20毫升無菌蒸餾水中并且使用0.02毫升通過滴入眼內對18只雞的每一只接種。B類似地，用溶解于40毫升無菌蒸餾水的片劑VH疫苗對另一組雞接種。C將一小瓶NDV-VH溶解于無菌蒸餾水中給出和A一樣的相同病毒濃度。D沒有接種的對照。接種后3星期對雞取血，通過血凝抑制(HI)測試測定抗體效價，并且在KimronVeterinaryInstitute(TheIstaeliVeterinaryServices)通過肌內注射105.3EID50/雞用親內臟強NDV攻擊所有的組。試驗結果表明所有的試驗疫苗制劑都對雞提供了好的保護作用。實施例22.1含有NDV-VH的片劑的制備用NDV接種能育的SPF雞蛋并且根據在雞蛋中繁殖NDV病毒的公知方法孵育。收集AAF并且通過在4000g下離心20分鐘純化。完全根據公知的標準方法進行凍干。在盤中凍干NDV-VH。在低濕度下將干燥的粉末封裝在無菌雙層聚丙烯袋中并且保存在-20℃下。制備含有漸增含量的干燥粉末的泡騰片劑。根據實施例1描述的方法制備片劑。2.2片劑分析通過對SPF雞蛋的滴定作用獲得片劑的NDV-VH效價(EID50)。獲得了活性材料濃度和病毒效價之間令人滿意的線性關系。當將一片加入100毫升水時，在不到一分鐘內完全溶解，即肉眼觀察不到固體痕跡。2.3包裝和穩定性將片劑裝在注射器中并且包裝在鋁箔小藥囊中。通過將稀釋液吸注到注射器中制備可注射溶液，接著片劑完全溶解。得到的可注射溶液直接用于個體接種，或者在一個更大容器中進一步稀釋之后多次接種。然后使用自動注射器。實施例33.1用于卵內接種的含有包含抗新城疫病毒(NDA)抗體的NDV-VH的片劑的制備用NDV接種能育的SPF雞蛋并且根據在雞蛋中繁殖NDV病毒的公知方法孵育。收集AAF并且在4000g下離心20分鐘。完全根據已知的標準方法實施凍干，并且滴定凍干材料。測定NDV和NDA的期望的量。以下面方式制備片劑向7.0克粉碎的凍干物加入0.36克凍干的對NDV(NDA)超免疫雞血清13克碳酸氫鈉9.1克無水檸檬酸0.9克聚乙烯吡咯烷酮K-300.07克硬脂酸鎂然后將這些成分混合并且壓緊出每片500毫克重量的片劑。這樣制備的每一片片劑含有115毫克凍干的病毒制劑。3.2片劑分析當將一片加入100毫升水時，在2.5分鐘內完全溶解，即肉眼觀察不到固體痕跡。3.3包裝將片劑包裝在PVC泡罩條中。3.4含有NDA的片劑NDV-VH卵內效能測定用NDV-VH+NDA對購得的適合烤制的小雞卵內接種。孵出之后2和4星期對卵內接種的雞進行攻擊。在孵育的第18天用卵內注射器(EmbrexU.S.A.)在一個商用農場對胚胎注射。將一片溶解于200毫升Marek疫苗稀釋液中并且對每一個雞蛋注射0.05毫升。接種的和沒有接種的雞圈在隔離籠中以避免NDV病毒非特異性污染。在第2和4周對雞取血通過HI測定檢測抗體，在KimronVeterinaryInstitute(TheIstaeliVeterinaryServices)通過肌內注射105.3EID50/雞用親內臟強NDV攻擊兩組。結果表明在孵化之后第4周對雞提供好的保護作用。實施例44.1含有活減毒GumboroDisease病毒(下文稱之為“MB”)的片劑的制備用GumboroDisease病毒(MB)接種SPF雞蛋，并且根據在雞蛋中繁殖病毒的公知方法孵育。收集胚胎和尿囊絨膜并且通過勻漿作用提取病毒。完全根據已知的標準方法進行凍干。以下面方式制備片劑向10.0克粉碎的凍干物加入22.4克碳酸氫鈉15.7克無水檸檬酸1.7克聚乙烯吡咯烷酮K-300.1克硬脂酸鎂然后將這些成分混合并且壓緊出每片350毫克重量的片劑。這樣制備的每一片含有70毫克凍干物。4.2片劑的分析對隨機取樣的片劑的效價評價為105.6EID50/片。(102.5EID50被認為是接種劑量)。當將一片加入100毫升水時，在不到1分鐘之內完全溶解，即肉眼觀察不到固體痕跡。泡騰片劑和小瓶中的病毒效價*調節到相同量的免疫材料。4.3包裝和穩定性將片劑包裝在PVC泡罩條中并且在37℃下測定穩定性。實施例55.1含有禽痘活疫苗病毒的泡騰片劑的制備用禽痘病毒接種SPF雞蛋，并且根據在雞蛋中繁殖病毒的公知方法孵育。收集胚胎和尿囊絨膜并且通過勻漿作用提取病毒。完全根據公知方法進行凍干。基本上根據實施例1所述制備700毫克片劑。每片含有140毫克凍干物。5.2片劑分析評價每一片在SPF雞蛋中的效價，并且發現為106.25EID50/片。當將一片加入100毫升水時，在2分鐘之內完全溶解，即肉眼觀察不到固體痕跡。實施例66.1含有喉氣管炎(家禽)活病毒的泡騰片劑的制備用喉氣管炎疫苗病毒接種SPF雞蛋，并且根據在雞蛋中繁殖病毒的公知方法孵育。收集胚胎和尿囊絨膜并且通過勻漿作用提取病毒。完全根據公知方法進行凍干。基本上根據實施例1所述制備700毫克片劑。每片含有140毫克凍干物。評價每一片在SPF雞蛋中的效價，并且發現為105.53EID50/片。實施例77.1含有傳染性支氣管炎家禽活病毒的泡騰片劑的制備用傳染性支氣管炎家禽病毒接種SPF雞蛋，并且根據在雞蛋中繁殖病毒的公知方法孵育。收集胚胎和尿囊絨膜，并且通過勻漿作用提取病毒。完全根據公知方法進行凍干。基本上根據實施例1所述制備700毫克片劑。每片含有140毫克凍干物。7.2片劑分析評價每一片在SPF雞蛋中的效價，并且發現為106.15EID50/片。實施例88.1含有GumboroWinterfield(家禽)活病毒的泡騰片劑的制備用GumboroWinterfield(家禽)病病毒接種SPF雞蛋，并且根據在雞蛋中繁殖病毒的公知方法孵育。收集胚胎和尿囊絨膜并且通過勻漿作用提取病毒。完全根據公知方法進行凍干。基本上根據實施例1所述制備700毫克片劑。每片含有140毫克凍干物。8.2片劑分析評價每一片在SPF雞蛋中的效價，并且發現為106.28EID50/片。實施例99.1含有傳染性支氣管炎(IB-HI20)+NDV-VH(家禽)活病毒的泡騰片劑的制備用IB-HI20或用NDV-VH疾病病毒接種SPF雞蛋，并且根據在雞蛋中繁殖病毒的公知方法孵育。收集AAF并且以4000克離心20分鐘。完全根據公知方法進行凍干。基本上根據實施例1所述制備700毫克片劑。每片含有140毫克凍干物。9.2片劑分析當將一片加入100毫升水時，在2分鐘之內完全溶解，即肉眼觀察不到固體痕跡。評價每一片在SPF雞蛋中的效價，并且發現對于IB-HI20和NDV-VH(家禽)的效價分別為105.80和109.60EID50/片。實施例1010.1含有綿羊天花活病毒的泡騰片劑的制備在塑料轉管中培養的非洲綠猴腎細胞株系中進行病毒繁殖。完全根據公知方法進行凍干。基本上根據實施例1所述制備700毫克片劑。每片含有140毫克凍干物。10.2片劑分析評價每一片的效價為105.85TCID50/片。滴定非洲綠猴腎細胞中的綿羊天花疫苗病毒。實施例1111.1含有牛瘟活疫苗病毒(家畜)的泡騰片劑的制備在塑料轉管中培養的非洲綠猴腎細胞株系中進行病毒繁殖。完全根據公知方法進行凍干。基本上根據實施例1所述制備700毫克片劑。每片含有140毫克凍干物。11.2片劑分析評價每一片的效價為104.1TCID50/片。滴定非洲綠猴腎細胞中的牛瘟疫苗病毒。11.3疫苗組合物的顏色代碼以色列專利No.46189公開了用不同染料染色的家禽顏色代碼標識病毒疫苗，其在活組織中是安全的并且對病毒的生存能力沒有有害影響。利用截然不同染料對不同的疫苗分別標識顏色代碼。合適的染料是例如莧菜紅染料，酒石黃，靛藍胭脂紅藍或者產生不同色彩的任何這些染料的混合物。對各種不同類型疫苗染色或者對不同的相反顏色的疫苗標識顏色代碼的方法對克服農場主犯的這樣的錯誤是有用的，所述錯誤是農場主想用不只一種的不同類型疫苗對他們的家禽家畜接種，從而使得他們沒有想保護的禽畜群也抵抗他們實際上要免疫的疾病。這樣的錯誤通常太晚才發現，并且在各種情況下除了嚴重的經濟損失和對農場主的損失之外，還對疫苗提出投訴。盡管它們本身可能是安全的，但是當與一種病毒疫苗組合時，化學染料具有一些問題和危險性。家禽的免疫接種涉及使用活病毒疫苗，其中或病毒的培養物包含在終產品中，并且因為活病毒非常弱，可能容易變質，涉及很多技術問題。不同的著色物質和染料已知是有化學活性的，即它們可能化學氧化或還原。活病毒對環境變化例如pH條件，溫度，放射性，不同的金屬離子非常敏感，另外可能受它們接觸的化學物質影響。這樣的染料物質例如亞甲藍或品紅或苯胺染料對病毒可能是毒性的，并且它們注入雞或火雞可能會有問題。因此需要選擇這樣的染料，使其對活組織使用安全并且對它們接觸的病毒的生存能力無害。已經選擇出四種顏色色光來鑒定當今家禽業使用的最常見而且重要的四種疫苗，即紅色鑒定輕型毒株或者在以色列也稱之為Komarov“小雞”株的新城疫疫苗；黃色鑒定Komarov-Haifa或“小母雞”株的新城疫疫苗；藍色鑒定喉氣管炎疫苗；綠色鑒定禽痘疫苗。如在以色列專利No.46189中公開的，嘗試了這些染料的不同濃度，并且在將其分散于最后的容器之前和在其被干燥(凍干)之前直接與濕疫苗混合。進行幾輪試驗來確定這些染料對疫苗無害。將不同批的染色疫苗置于冷卻貯存條件下，并且另外反復滴定來確認病毒濃度。和染色疫苗的每一項試驗平行進行沒有加入染料死亡疫苗的冷卻對照試驗。也直接對活禽測試了染色疫苗來看一看它們可能具有什么作用。用這些實驗中使用的所有四種類型的疫苗和四種染料反復試驗表明對病毒滴定結果沒有有害的影響。對活禽的注射試驗，以及通過其它途徑施用病毒疫苗，例如通過飲用水；通過透皮貼的方法(禽痘)；和通過排膿口刷方法(對于喉氣管炎疫苗)，證明了該染料對禽沒有有害影響，并且當肌內注射時，其被從組織再吸收并且在36小時之內完全消失。以色列專利No.46189公開了對幾種禽畜野外測試的疫苗，用這些染色的疫苗對出生第一天和到市場出售年齡的禽畜接種。這些禽被成功出售，并且沒有無論何種染色問題的證據。與從中截取的下面的實施例中的描述相關容易理解以色列專利No.46189公開的本發明的進一步描述，選擇這些實施例只是為了詳細說明的目的，只是為了使本領域技術人員使用疫苗的顏色代碼配方，而不是限制本發明。實施例A為了與Vineland新城疫“小雞”疫苗組合，通過制備濃縮-染料-溶液，制備莧菜紅染料。該濃縮物含有145克溶解于4升蒸餾水的干燥粉末染料。在制備后不久將濃縮的染料溶液在20帕斯卡下熱壓處理20分鐘并且密封保存于玻璃瓶中，置于暗處。以1.33％向最終Vineland新城疫小雞疫苗加入染料-濃縮溶液。與沒有染色的對照物相比用染色疫苗滴定的結果發現如下凍干后2星期滴定沒有染料109.0EID50/ml有染料109.3EID50/ml加速滴定沒有染料109.1EID50/ml有染料109.3EID50/ml凍干后30天滴定沒有染料109.16EID50/ml有染料109.3EID50/ml凍干后3個月滴定沒有染料108.86EID50/ml有染料109.3EID50/ml凍干后6個月滴定只有有染料的樣品109.16EID50/ml實施例B為了與Vineland新城疫“小母雞”毒株疫苗(中等毒力Haifa-Komarov株)組合，通過制備濃縮-染料-溶液，制備酒石黃染料。該濃縮物含有200克溶解于3升蒸餾水的干燥粉末染料。在制備后不久將濃縮的染料溶液在20帕斯卡下熱壓處理20分鐘，并且密封保存于玻璃瓶中，置于暗處。以3％向最終Vineland新城疫小母雞疫苗加入染料-濃縮溶液。與沒有染色的對照物相比，用染色疫苗滴定的結果發現如下規則疫苗滴定的結果每毫升109.4EID50有染料的滴定樣品的結果108.837℃孵育7天后滴定沒有染料108.3EID50/ml有染料108.8EID50/ml凍干后39天滴定沒有染料108.66EID50/ml有染料108.9EID50/ml凍干后93天滴定沒有染料108.66EID50/ml有染料108.66EID50/ml凍干后7個半月滴定沒有染料108.53EID50/ml有染料108.76EID50/ml實施例C為了與Vineland-注射喉氣管炎疫苗組合，通過制備濃縮-染料-溶液，制備靛藍胭脂紅藍染料。該濃縮物含有200克溶解于3升蒸餾水的干燥粉末染料。在制備后不久將濃縮的染料溶液在20帕斯卡下熱壓處理20分鐘，并且密封保存于玻璃瓶中，置于暗處。以3％向最終Vineland注射喉氣管炎疫苗加入染料-濃縮溶液。與沒有染色的對照物相比用染色疫苗滴定的結果發現如下凍干后3星期滴定沒有染料106.3EID50/ml有染料106.16EID50/ml加速滴定沒有染料105.0EID50/ml有染料104.8EID50/ml凍干后30天滴定沒有染料106.0EID50/ml有染料105.8EID50/ml凍干后3個月滴定沒有染料105.66EID50/ml有染料105.5EID50/ml凍干后7個月滴定沒有染料105.5EID50/ml有染料105.6EID50/ml(染色和沒有染色樣品的滴度多少是不尋常的滴定，并且加速滴定這批加速1log滴以上指示該批可能的高濕潤內含物)。實施例D通過將靛藍胭脂紅與酒石黃混合獲得綠色色光代碼“P”(對于痘)并且用于與Vineland禽痘疫苗組合。將100克粉末染料混合物溶解于3升蒸餾水。應用與實施例2和3相同的程序，并且以3％向最終禽痘疫苗加入該溶液。與沒有染色的對照物相比，用染色疫苗滴定的結果發現如下凍干后7天滴定沒有染色的對照物105.5EID50/ml有染料的疫苗105.5EID50/ml3個月后沒有染色的對照物105.4EID50/ml有染料的疫苗105.5EID50/ml6個月后沒有染色的對照物105.35EID50/ml有染料的疫苗105.4EID50/ml制備后9個月沒有染色的對照物103.1EID50/ml有染料的疫苗105.3EID50/ml上面描述只是為了教導本領域技術人員怎樣實施本發明，而不是要詳述所有的明顯的其修飾和改變，對于技術人員來說通過閱讀本說明書，這些其修飾和改變變得顯而易見。不管怎樣，所有這些明顯的修飾和改變包括在下面權利要求書定義的本發明的范圍內。權利要求1.一種含有至少一種凍干的抗原成分和助溶劑的穩定壓緊疫苗組合物。2.權利要求1的疫苗組合物，其中所述壓緊疫苗組合物是硬片劑的形式。3.權利要求1的疫苗組合物，其中所述組合物完全且快速地溶解于水中。4.權利要求1的疫苗組合物，其中所述組合物是無菌的。5.權利要求1的疫苗組合物，其中所述助溶劑是泡騰劑或者一對泡騰劑、崩解劑、表面活性劑或增溶劑。6.權利要求5的疫苗組合物，其中所述助溶劑包括一對泡騰劑。7.權利要求6的疫苗組合物，其中所述泡騰劑對包括一種鹽和一種酸。8.權利要求7的疫苗組合物，其中所述酸是檸檬酸，所述鹽是碳酸氫鹽。9.權利要求1的疫苗組合物，其中所述凍干成分至多占該組合物重量的80％。10.權利要求1的疫苗組合物，其中所述組合物特征在于與稀釋劑接觸后在不到80秒之內完全溶解。11.權利要求10的疫苗組合物，其中在每200毫克組合物0.5毫升稀釋劑和每400毫克組合物100毫升稀釋劑之間的稀釋劑與組合物的比例下發生所述完全溶解。12.權利要求1的疫苗組合物，其中所述組合物的穩定性特征在于在37℃下5天之后效價的減小不大于109.7EID50/毫升和109.2EID50/毫升之間的差異。13.權利要求1的疫苗組合物，其中所述組合物的穩定性特征在于在4℃下9個月之后效價的減小不大于109.7EID50/毫升和109.3EID50/毫升之間的差異。14.權利要求1的疫苗組合物，進一步含有粘合劑和潤滑劑。15.權利要求1的疫苗組合物，其中所述組合物在水中完全且快速地崩解。16.權利要求1的疫苗組合物，其中活性材料是在使用之前在低于冷凍溫度的干燥氮氣之下保存的預先滴定過的凍干物。17.權利要求1的疫苗組合物，其中所述抗原成分是全病毒或全微生物。18.權利要求1的疫苗組合物，其中所述抗原成分是活細菌或活病毒。19.權利要求18的疫苗組合物，進一步含有存在抗原成分的指示劑。20.權利要求19的疫苗組合物，其中所述指示劑是一種染料。21.權利要求1的疫苗組合物，其中所述抗原成分包括脂多糖或蛋白質。22.權利要求18的疫苗組合物，其中所述抗原成分是選自下面的活病毒新城疫病毒，新城疫病毒VH株，傳染性滑液囊疾病病毒，禽痘病毒，喉氣管炎病毒，傳染性支氣管炎家禽病毒，GumboroWinterfield病毒，傳染性支氣管炎(IB-H120)，綿羊天花病毒，牛瘟病毒，或者上述一種或多種的混合物，不管它們是天然存在的，重組的或修飾的。23.權利要求18的疫苗組合物，其中所述抗原成分是選自炭疽孢子，沙門氏菌屬，大腸埃希氏桿菌，或者上述一種或多種的混合物，不管它們是天然存在的或重組的或修飾的。24.權利要求18的疫苗組合物，其中所述抗原成分是活病毒，并且該組合物進一步含有抗該病毒的中和抗體。25.一種使受試者對某種疾病免疫的方法，包括以下步驟(a)將提供對抗這種疾病有保護作用的權利要求1的疫苗組合物溶解于稀釋劑中，形成溶液；和(b)給受試者施用使其免疫抵抗該疾病的有效量的得到的溶液。26.權利要求25的方法，其中溶解步驟進一步特征在于疫苗組合物的完全溶解。27.權利要求26的方法，其中在每200毫克組合物0.5毫升稀釋劑和每400毫克組合物100毫升稀釋劑之間的稀釋劑與組合物比例下發生所述完全溶解。28.權利要求26的方法，其中與稀釋劑接觸后在不到80秒之內完全溶解。29.權利要求25的方法，其中所述施用步驟包括用所述溶液對受試者注射。30.權利要求25的方法，其中所述施用步驟包括用所述溶液形成的氣溶膠對受試者噴霧。31.權利要求25的方法，其中所述施用步驟包括以滴眼液形式將所述溶液施用給受試者。32.權利要求25的方法，其中所述施用步驟包括通過口服攝入提供所述溶液。33.權利要求25的方法，其中所述受試者是鳥類動物，并且所述疾病選自新城疫，傳染性滑液囊病，禽痘，喉氣管炎，家禽傳染性支氣管炎，GumboroWinterfield，和傳染性支氣管炎(IB-H120)。34.權利要求33的方法，其中在卵內對受試者施用所述溶液。35.含有根據權利要求1或19的疫苗組合物的包裝。36.權利要求35的包裝，其中所述包裝是泡罩包裝。37.權利要求35的包裝，其中所述包裝是無菌注射器。38.一種含有壓實疫苗組合物的無菌注射器，其中所述疫苗組合物包括至少一種凍干抗原成分和助溶劑。39.權利要求38的注射器，其中所述壓實疫苗組合物是壓緊的組合物。40.權利要求39的注射器，其中所述壓緊的疫苗組合物是硬片劑形式。41.一種使受試者免疫抵抗一種疾病的方法，其包括向38、39或40的注射器中加入稀釋劑，在注射器中形成疫苗溶液，并且將得到的疫苗溶液施用給受試者。全文摘要本發明涉及穩定壓實的壓緊或硬片劑疫苗組合物,其含有至少一種冷凍干燥的抗原成分和助溶劑。本發明還提供了有利于受試者免疫抵抗某種疾病的方法,包括首先用稀釋劑溶解在包裝中的該壓實的壓緊或硬片劑疫苗組合物形成疫苗溶液,并且以免疫有效量施用該得到的疫苗溶液步驟。文檔編號A61P31/04GK1379663SQ00814447公開日2002年11月13日申請日期2000年8月21日優先權日1999年8月24日發明者吉拉德·加利里,諾貝特·弗里德曼申請人:特瓦制藥工業有限公司