一種抗豬腹瀉的無抗飼料的制作方法
【專利摘要】本發明涉及由配合料加入復合菌液經固態發酵制成的無抗飼料，其中復合菌液由長柄木霉菌液1?3重量份、黑曲霉菌液1?3重量份和熱帶假絲酵母菌液1?3重量份混合制成。與普通豬用飼料相比，本發明的無抗飼料配伍合理，療效顯著，能夠顯著降低豬腹瀉率，實驗證明對改善豬腹瀉有特效；由于飼料中無西藥抗生素成分，因此本發明的飼料無毒副作用，無耐藥性，無污染。
【專利說明】
一種抗豬腹瀉的無抗飼料
技術領域
[0001] 本發明涉及飼料領域，具體涉及一種家畜無抗飼料及其應用。
【背景技術】
[0002] 20世紀中期以來，在飼料中添加抗生素對預防動物疾病、促進動物生長、提高飼料 報酬、提高畜禽產品產量等方面發揮了積極的作用。隨著抗生素作為飼料添加劑的廣泛應 用，其種種弊端也隨著被人們所認識，比如導致動物胃腸道正常菌群失調，產生耐藥性等。 抗生素的長期使用導致其在動物生產中的肉、蛋產品中大量殘留，這些殘留對人體具有毒 性，致畸性，致癌性，致突變性。不僅畜產品的質量降低，殘毒對環境造成破壞，對作為動物 產品消費者的人類的健康構成威脅，同時也構成了畜產品出口的貿易逆差，給畜產品的出 口創匯帶來了困難，在很大程度上影響著養殖業自身的經濟效益。尋找綠色環保型抗生素 替代物，減輕抗生素對畜禽生產帶來的負面影響成為各國畜牧業迫切需要解決的問題。
[0003] 益生菌制劑具有無毒副作用、無耐藥性、無殘留以及效果顯著、成本低等諸多優 點，能有效補充消化道內的有益微生物，殺滅有害微生物尤其是大腸桿菌等病原菌，改善消 化道菌群平衡，迅速提高機體抗病、代謝及飼料的吸收能力，從而起到防治消化道疾病和促 進生長的雙重效果。益生菌制劑以其獨特的作用方式，天然的組成成份，明顯的作用效果， 成為了理想的抗生素替代品。
[0004] 益生菌制劑是指在微生態平衡理論、微生態失調理論、微生態營養理論和微生態 防治理論指導下，經過嚴格選育和馴化，由生物工程和微生態工程制備的，能通過動物體胃 酸、膽汁酸、胰液等屏障而存活，最后在消化道定植并繁殖，調整宿主體內微生態失調，保持 微生態平衡，提高宿主健康水平或增進健康狀態的益生素及其代謝產物和生長刺激物質的 制品。
[0005] 可以作為益生菌制劑的微生物必須滿足以下幾條標準：（1)首先不能產生任何毒 素，即無毒、無害、安全無副作用；（2)對胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶及膽汁的消化作用表現出 一定的抵抗力，從而可在消化道內存活；（3)可以粘附于消化道粘膜，永久或暫時性地定植 于胃腸道；（4)有利于促進宿主體內菌群平衡或預防生態失調，對宿主健康有一定的促進作 用；（5)其產品按合理劑量飼喂時能具有臨床有效性；（6)產品制備及儲存期間能保持較高 的活性及較長的穩定性；（7)可以在多種宿主體內存活。最后這條標準可能最難達到，盡管 大多數物種有相對穩定的腸道內微生物群落，但每個物種又有自己獨特的細菌群落。而且， 一些因素，如壓力或者抗生素治療都可以改變腸道內微生物區系，引起占次主導優勢的種 群甚至病原菌成為主導優勢菌。因此，選擇菌株適應綜合考慮，盡可能選擇滿足更多以上條 件的菌株。
[0006] 很多益生菌是從原有的腸道細菌中發現出來的，并被證實對一些胃腸道疾病具有 臨床功效。除了在臨床作用和成分不同外，益生菌他們作用的機制各不相同。由于益生菌制 劑能夠在數量或種類上補充腸道內所缺乏的正常微生物，可以調整或維持腸道內微生態平 衡，增強免疫功能，促進營養物質的消化吸收，從而達到無病防病，有病治病，提高詞料轉化 率和畜禽生產性能的作用。迄今關于飼料微生物添加劑的研究報道結果差異很大，在理論 上也有種種解釋。通過對益生菌制劑在畜牧業上的研究所積累的經驗，現將益生菌制劑的 作用機制概括如下：
[0007] 1、維持腸道微生態平衡:在動物胃腸道存在大量的微生物菌群，并保持相對平衡 穩定狀態。其中有些菌群對動物的生長發育和抵抗疾病具有重要意義。正常情況下，動物腸 道內優勢種群為厭氧菌，占99 %以上，其中包括乳酸桿菌、雙歧桿菌、消化桿菌和優桿菌等， 而需氧菌及兼性厭氧菌僅占1%。這些菌群一旦失去了平衡，則使動物的消化道技能發生紊 亂，生產性能下降，病原性微生物會大量繁殖導致動物發病，此時使用益生菌制劑能有效的 補充有益菌的數量，抑制致病菌群的生長繁殖，調整恢復腸道的菌群平衡。動物機體維持腸 道微生態平衡的機制有以下兩個方面：（1)定植抗力:動物胃腸道的原籍種群能抑制其他外 來微生物在腸道中定植，這就是定植抗力，也叫競爭排斥。（2)產生抑菌物質:例如乳桿菌能 產生細菌素、類細菌素和其它具有抑菌作用的代謝物。細菌素是細菌代謝過程中合成并分 泌到環境中的一類對親緣關系較近的菌種有抑制作用的蛋白類抑菌物質。大多數已知的細 菌素只對相同革蘭氏染色的細菌有抑菌作用，但隨著研究深入，發現許多細菌素作用范圍 很廣。
[0008] 2、生物奪氧：益生菌中的有益需氧菌在動物腸道內生長繁殖過程中，消耗環境內 的氧氣，可降低局部氧分子的濃度，利于正常菌群專性厭氧菌的定植和生長繁殖使腸道微 生態平衡恢復正常，達到防治疾病目的。研究結果顯示下痢仔豬連續3天口服蠟樣芽孢桿菌 后，腸內厭氧菌中雙歧桿菌、乳酸桿菌顯著增加，而大腸桿菌、沙門氏菌顯著減少。豬飼喂地 衣芽孢桿菌后，腸道菌群中厭氧菌增多，而需氧菌及兼性厭氧菌特別是大腸桿菌顯著減少。
[0009] 3、生物拮抗作用：益生菌制劑中的有益菌在體內對病原微生物有拮抗作用，即定 植抗力。這種定植抗力是因為體內微生物與致病菌競爭腸道上皮的吸附位點而產生的。如 果這些吸附位點被較多的有益微生物所占據，病原微生物就會被排斥，而隨糞便排出體外。 研究報道指出用芽孢桿菌飼喂雛雞后發現其對雛雞腸內大腸桿菌和沙門氏菌有極顯著拮 抗作用。在體外試管培養試驗中，乳桿菌微生態制劑對致病性雞白痢沙門氏菌具有很強的 生物拮抗。
[0010] 4、増強機體的免疫功能：某些益生菌制劑是良好的免疫激活劑，因為其本身就是 非特異性免疫調節因子，能刺激機體免疫系統產生干擾素，提高免疫球蛋白的濃度和巨噬 細胞的活性，使動物的體液免疫和細胞免疫水平提高，益生菌制劑對動物免疫力的提高主 要表現在以下幾個方面：（1)增強巨噬細胞的活性有研究結果顯示乳酸菌能顯著增強巨噬 細胞活性。乳酪乳桿菌能提高巨噬細胞對李斯特菌的吞噬活性;另有研究表明，酵母提取物 可加強多種巨噬細胞的反應；（2)對免疫器官、抗體產生水平、細胞因子產生的影響；（3)對 特異性免疫應答的激活和增強作用。
[0011] 5、合成消化酶，促進營養物質的消化吸收:益生菌制劑中的有益微生物可產生水 解酶、消化酶等，有利于降解飼料中的蛋白質、脂肪等復雜的碳水化合物，提高飼料轉化率。 米曲霉、黑曲霉等曲霉菌能產生纖維素酶，有利于動物對纖維素的消化、吸收和利用。黑曲 霉還能產生淀粉酶、蛋白酶、果膠酶。某些酵母菌有富集微量元素的作用，使之由無機態形 式變成動物易消化吸收的有機態形式。用芽孢桿菌和乳酸桿菌等產酸型益生菌飼喂動物 后，動物小腸粘膜皺褶增多，續毛加長，粘膜腺窩加深，小腸吸收面積增大，從而提高增重率 和飼料的利用率。枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌除具有較強的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活 性外，同時還具有降解植物飼料中某些復雜碳水化合物的酶，如果膠酶、葡聚糖酶、纖維素 酶等，其中很多酶是哺乳動物和禽類本身不能產生的酶類。
[0012] 6、改善腸道內環境，減少氨、胺等有害物質的產生:氨、胺、吲哚、硫化氫等物質對 動物腸道粘膜細胞有明顯的毒害作用。乳酸菌等在腸道生長繁殖能產生有機酸、細菌素等 抑制物質，可抑制腸內大腸桿菌等腐敗細菌的生長，降低脲酶的活性，進而減少蛋白質向 氨、胺等有害物質的轉化，使腸內氨的濃度降低，并減少向外界排泄，改善了畜禽的生活環 境。
[0013] 國際上正式將益生菌制劑分為益生素、益生元及合生元。益生素即狹義的益生菌 制劑，是指對宿主無害，能起到改善宿主腸道菌群生態平衡作用的活菌制劑及其代謝產物。 目前應用于人體的益生菌有乳酸菌、雙歧桿菌、腸球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢 桿菌、蠟樣芽孢桿菌、丁酸梭菌和酵母等。益生元是指不能被宿主消化吸收卻又能夠選擇性 地促進宿主腸道內原有的一種或幾種有益菌生長繁殖的物質，通過提高有益菌的數量，抑 制有害細菌生長，從而達到調整腸道菌群，達到腸道微生態平衡，促進機體健康的目的。比 如雙歧因子，寡糖類物質或稱低聚糖等。還有我國的某些中草藥，如人參、黨參、黃芪等或茶 葉提取物亦能起到益生元的作用。合生元是指制劑中包含有益生素和益生元兩部分的制 劑。此類制品理論上是兼具以上二者的成分和特性的合劑，但此定義極少被采納。
[0014] 國內外將益生菌大體上可以分成三類，第一類為一般厭氧即耐氧的乳桿菌屬，如 嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌等;第二類為嚴格厭氧的雙歧桿菌屬，如長雙歧桿菌、短雙歧桿菌 等;第三類為兼性厭氧球菌，如糞腸球菌、乳腸球菌等。此外，還有一些酵母菌與酶亦可歸入 益生菌的范疇。常用于飼料中的益生菌包括乳酸菌、芽孢桿菌和酵母菌等。
[0015] 乳酸菌是對一群能利用可發酵碳水化合物產生大量乳酸的革蘭氏陽性細菌的通 稱。乳酸菌被定義為:細胞為桿狀或球狀，革蘭氏染色陽性，不產生過氧化氧酶，消耗葡萄糖 且50%以上產生乳酸，不形成內孢子，無運動性，或僅少數有運動性。其在動物體內通過生 物拮抗、降低pH值，阻止和抑制致病菌的侵入和定植、降解氨、B引噪、奠臭素等有害物質，維 持腸道中正常的生態平衡，增強體液免疫和細胞免疫。乳酸菌可用于哺乳和斷乳期動物的 飼料中。自然界中乳酸菌分布廣泛，不僅存在與人和動物的腸道及其他器官內，同時還存在 與食品、飼料、土壤、植物根際、河水湖泊中。乳酸菌在工業、農業、食品和醫療保健等與人類 密切相關的領域中都有很高的應用價值，可用于益生菌制劑、乳酸、青貯接種劑、乳酸發酵 食品（如發酵乳制品、發酵蔬菜、發酵肉制品等）、細菌素、化妝品保濕劑等的生產。目前應用 的乳酸菌主要是來源于乳酸桿菌屬、乳酸鏈球菌屬和雙歧桿菌屬的近30種的微生物。我國 農業部允許用作飼料添加劑的乳酸菌有:干酪乳桿菌、植物乳桿菌、糞鏈球菌、屎鏈球菌、乳 酸片球菌、嗜酸乳桿菌、乳鏈球菌等7種。
[0016] 芽孢桿菌是用于益生素的腸道的過路菌，不能定植于腸道中。它好氧，無害，能產 生芽孢耐酸堿，耐高溫和擠壓，在腸道酸性環境中具有高度的穩定性，促進有益菌的生長， 拮抗腸道內有害菌，增強機體免疫力，提高抗病能力；能分泌較強活性的蛋白酶及淀粉酶， 可明顯提高動物生長速度促進飼料營養物質的消化。目前報道較多的菌種有枯草芽孢桿 菌、地衣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌及東洋芽孢桿菌等有益菌種類。
[0017]用于益生菌制劑的酵母菌一種是活性酵母制劑，一種是酵母培養物。酵母細胞富 含蛋白質、核酸、維生素和多種酶，具有增強動物免疫力，改善飼料適口性，促進動物對飼料 的消化吸收能力等功能，并可提高動物對磷的利用率;其培養物營養豐富，富含B族維生素、 礦物質、消化酶、促生長因子和較齊全的氨基酸。酵母及其培養物的應用年代已久，現已廣 泛應用于各種動物的養殖中，目前農業部允許用于益生素的酵母菌有釀酒酵母、啤酒酵母 等。
[0018] 目前，將長柄木霉、黑曲霉和熱帶假絲酵母復配作為豬無抗飼料添加劑的應用尚 未見報道。

【發明內容】

[0019] 本發明所要解決的技術問題是提供一種能有效改善豬腹瀉，且無毒副作用，無污 染，無耐藥性的豬用無抗飼料。
[0020] 本發明解決上述問題所采用的技術方案是，提供一種抗豬腹瀉的無抗飼料，由配 合料加入復合菌液經固態發酵制成，其中復合菌液由長柄木霉菌液1-3重量份、黑曲霉菌液 1-3重量份和熱帶假絲酵母菌液1-3重量份混合制成。
[0021] 優選的，所述復合菌液由長柄木霉菌液1重量份、黑曲霉菌液3重量份和熱帶假絲 酵母菌液1重量份復配制成。
[0022] 更優選的，單位重量份的所述三種菌液中活菌數相同。
[0023]優選的，所述配合料包括豆柏、玉米蛋白粉、菜籽柏、花生柏、磷酸氫鈣和食鹽等。
[0024]更優選的，所述配合料還包括賴氨酸、蛋氨酸和蘇氨酸等。
[0025]更優選的，所述配合料還包括維生素 A、維生素 C、維生素 E和維生素 B12等。
[0026]最優選的，所述配合料由豆柏40重量份、玉米蛋白粉20重量份、菜籽柏20重量份、 花生柏6重量份、磷酸氫鈣6重量份、食鹽3重量份、賴氨酸1重量份、蛋氨酸1重量份、蘇氨酸1 重量份、維生素 A 0.5重量份、維生素 C 0.5重量份、維生素 E 0.5重量份和維生素 Bi2 0.5重 量份混合均勻制成。
[0027]優選的，所述配合料與復合菌液的重量比為(90-95): (10-5)。
[0028]更優選的，所述配合料與復合菌液的重量比為95:5。
[0029]本發明具有積極有益的效果：
[0030] 令人驚奇的是，經過反復多次試驗，本發明意外發現將長柄木霉菌液、黑曲霉菌液 和熱帶假絲酵母菌液復配后經固態發酵獲得的無抗飼料對于防治豬腹瀉具有增效的效果， 配合其他活性成分使用效果更佳。
[0031] 與普通豬用飼料相比，本發明的無抗飼料配伍合理，療效顯著，能夠顯著降低豬腹 瀉率，實驗證明對改善豬腹瀉有特效；由于飼料中無西藥抗生素成分，因此本發明的飼料無 毒副作用，無耐藥性，無污染。
【具體實施方式】
[0032] 下面結合實施例對本發明作更進一步的說明，但本發明的實施方式不限于此。下 述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0033]實施例1、長柄木霉菌液的制備
[0034] 將長柄木霉(菌株號ACCC30150)接種至PDA液體培養基中，37°C恒溫培養48h，得到 長柄木霉菌液。
[0035]所述PDA液體培養基為:馬鈴薯200克，葡萄糖20克，無菌水1000毫升。
[0036]實施例2、黑曲霉菌液的制備
[0037] 將黑曲霉菌（菌株號CICC40613)接種至Czapek's瓊脂培養基上，28°C培養72h，再 接種到Czapek ' s液體培養基中，28 °C恒溫培養72h，得到黑曲霉菌液。
[0038]所述Czapek ' s瓊脂培養基為：蔗糖3 %、硝酸鈉0.3 %、七水合硫酸鎂0.05 %、氯化 鉀0.05 %、四水合硫酸亞鐵0.001 %、磷酸氫二鉀0.1 %、瓊脂1.5 %，pH值6.0-6.5。不加瓊脂 即為Czapek ' s液體培養基。
[0039] 實施例3、熱帶假絲酵母菌液的制備
[0040] 將熱帶假絲酵母(菌株號ACCC20005)接種到麥芽汁瓊脂培養基上，28°C培養72h， 再接種到麥芽汁液體培養基中，28°C恒溫培養72h，得到熱帶假絲酵母菌液。
[0041] 所述麥芽汁瓊脂培養基為:麥芽汁為5-6波美度，pH值為6.5,加入2g/100ml瓊脂即 得。不加瓊脂即為麥芽汁液體培養基。
[0042]實施例4、配合料的制備
[0043]取豆柏40重量份、玉米蛋白粉20重量份、菜籽柏20重量份、花生柏6重量份、磷酸氫 鈣6重量份、食鹽3重量份、賴氨酸1重量份、蛋氨酸1重量份、蘇氨酸1重量份、維生素 A 0.5重 量份、維生素 C 0.5重量份、維生素 E 0.5重量份和維生素 B12 0.5重量份混合均勻即得配合 料。
[0044] 實施例5、無抗飼料的制備(A1-A6)
[0045] 將實施例1制備得到的長柄木霉菌液低溫濃縮至菌液中活菌數約為108個/g，按照 5%的接種量加入到實施例4制備得到的配合料中，在35°C條件下固態發酵7d，即得對照無 抗飼料A1。
[0046] 將實施例2制備得到的黑曲霉菌液低溫濃縮至菌液中活菌數約為108個/g，按照 5%的接種量加入到實施例4制備得到的配合料中，在35°C條件下固態發酵7d，即得對照無 抗飼料A2。
[0047]將實施例3制備得到的熱帶假絲酵母菌液低溫濃縮至菌液中活菌數約為108個/g， 按照5%的接種量加入到實施例4制備得到的配合料中，在35°C條件下固態發酵7d，即得對 照無抗飼料A3。
[0048] 將實施例1-3制備得到的長柄木霉菌液、黑曲霉菌液和熱帶假絲酵母菌液低溫濃 縮至三種菌液中活菌數均約為1〇8個/g，再以1:1:3的重量比混合制成復合菌液，按照5%的 接種量加入到實施例4制備得到的配合料中，在35°C條件下固態發酵7d，即得本發明無抗飼 料A4 〇
[0049] 將實施例1-3制備得到的長柄木霉菌液、黑曲霉菌液和熱帶假絲酵母菌液低溫濃 縮至三種菌液中活菌數均約為1〇8個/g，再以3:1:1的重量比混合制成復合菌液，按照5 %的 接種量加入到實施例4制備得到的配合料中，在35°C條件下固態發酵7d，即得本發明無抗飼 料A5。
[0050] 將實施例1-3制備得到的長柄木霉菌液、黑曲霉菌液和熱帶假絲酵母菌液低溫濃 縮至三種菌液中活菌數均約為1〇8個/g，再以1: 3:1的重量比混合制成復合菌液，按照5%的 接種量加入到實施例4制備得到的配合料中，在35°C條件下固態發酵7d，即得本發明無抗飼 料A6。
[0051 ]試驗例1、本發明無抗飼料在防治豬腹瀉中的應用
[0052]為驗證本發明的應用效果，本發明的飼料添加劑在健康、體重相近的豬仔中進行 試驗。將豬分為實驗組(A1-A6)和對照組，每組各為50只。其中，實驗組的日糧為實施例5制 備得到的無抗飼料A1-A6,對照組的日糧為實施例4制備的相同重量的配合料，各組豬每日 投喂3次，試驗期內自由采食，同時提供充足的飲水，其他各項日常管理措施按照養殖場的 常規管理進行，定期進行免疫和驅蟲，30天后檢測糞便中的大腸桿菌數量，同時統計試驗期 內實驗組和對照組中豬的發病情況，計算各組的豬腹瀉率(見表1)。
[0053] 表 1
[0054]
[0055]由試驗例1的對比實驗可以看出，本發明的無抗飼料能顯著降低仔豬體內大腸桿 菌數量，減少仔豬感染疾病的機會，降低仔豬發病率和腹瀉率。在試驗過程中還發現飼喂本 發明無抗飼料的仔豬精神狀態明顯好于對照組，食欲旺盛，皮毛光滑色澤好。此外，在菌液 總量保持不變的情況下，由長柄木霉菌液、黑曲霉菌液和熱帶假絲酵母菌液復配制成的復 合菌液制得的無抗飼料的抗豬腹瀉效果明顯優于單一菌液，其中長柄木霉菌液、黑曲霉菌 液和熱帶假絲酵母菌液以1:3:1的重量比混合后制成的無抗飼料防治仔豬腹瀉的效果最為 突出，將仔豬腹瀉率降低至2%，產生了難以預期的優異效果。
【主權項】
1. 一種抗豬腹瀉的無抗飼料，由配合料加入復合菌液經固態發酵制成，其特征在于，其 中復合菌液由長柄木霉菌液1-3重量份、黑曲霉菌液1-3重量份和熱帶假絲酵母菌液1-3重 量份混合制成。2. 根據權利要求1所述的無抗飼料，其特征在于，所述復合菌液由長柄木霉菌液1重量 份、黑曲霉菌液3重量份和熱帶假絲酵母菌液1重量份復配制成。3. 根據權利要求1所述的無抗飼料，其特征在于，所述配合料包括豆柏、玉米蛋白粉、菜 籽柏、花生柏、磷酸氫鈣和食鹽等。4. 根據權利要求3所述的無抗飼料，其特征在于，所述配合料還包括賴氨酸、蛋氨酸和 蘇氨酸等。5. 根據權利要求3所述的無抗飼料，其特征在于，所述配合料還包括維生素 A、維生素 C、 維生素 E和維生素 Bi2等。6. 根據權利要求1所述的無抗飼料，其特征在于，所述配合料由豆柏40重量份、玉米蛋 白粉20重量份、菜籽柏20重量份、花生柏6重量份、磷酸氫|丐6重量份、食鹽3重量份、賴氨酸1 重量份、蛋氨酸1重量份、蘇氨酸1重量份、維生素 A0.5重量份、維生素 C 0.5重量份、維生素 E 0.5重量份和維生素也2 0.5重量份混合均勻制成。7. 根據權利要求1所述的無抗飼料，其特征在于，所述配合料與復合菌液的重量比為 (90-95):(10-5)。8. 根據權利要求7所述的無抗飼料，其特征在于，所述配合料與復合菌液的重量比為 95: 5〇
【文檔編號】A23K10/37GK106036082SQ201610352043
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月24日
【發明人】潘宏濤, 盧亞萍
【申請人】浙江伊杰斯生物科技有限公司