一種微生物飼料添加劑的制備方法及其產品和應用
【專利摘要】本發明提供了一種微生物飼料添加劑的制備方法,所述制備方法利用自主開發的啤酒酵母菌、干酪乳桿菌和沼澤紅假單胞菌復合同步發酵技術，生產工藝中每級發酵都含有主要代謝產物，使產品中有益活菌、活性酶等的含量達到最大化。本發明還提供了采用上述制備方法制得的一種用于減少大菱鲆養殖過程中藥劑使用的微生物飼料添加劑及其應用，所述微生物飼料添加劑含有豐富的微生物多糖、有益菌，并含有多種活性酶及小肽等活性代謝物質，在飼喂大菱鲆后，可形成動物機體良性生態環境，顯著提高了大菱鲆的抗病能力，有利于獲得健康綠色的大菱鲆產品。
【專利說明】
一種微生物飼料添加劑的制備方法及其產品和應用
技術領域
[0001 ]本發明涉及微生物發酵領域，尤其涉及一種微生物飼料添加劑的制備方法，該制備方法制得的產品，以及該產品在養殖大菱鲆中的應用。【背景技術】
[0002]大菱鲆是世界公認的優質比目魚之一，也稱為多寶魚，其膠質蛋白含量高，味道鮮美，營養豐富，具有很好的滋潤皮膚和美容的作用，且能補腎健腦，助陽提神;經常食用，可以滋補健身，提高人的抗病能力。中國的食用方法為清蒸、清燉，也是做生魚片的好材料，其魚頭、骨、皮、鰭也可以做湯。當今著名菜肴有:剁椒豆豉蒸多寶魚、清蒸多寶魚等。
[0003]我國現已是歐洲之外的大菱鲆最大生產國，約占世界總產量的25-30%，而且工廠化養殖規模仍在繼續擴大。隨著消費者對大菱鲆認識的加深和深海比目魚高營養價值品牌效益的傳播，我國將很快成為世界上鮮活大菱鲆的最大消費市場。由于我國的地價和勞力低廉，地下咸水資源豐富，養殖成本顯著低于歐美國家。然而，當今養殖病害日益嚴重，由于目前我國大菱鲆養殖場家的進苗質量參差不齊，部分設備簡陋，許多采用開發式流水養殖而影響大環境質量;更有甚者，部分場家直接投喂自己加工的冰鮮雜魚飼料，導致養殖衛生狀況較差，加之管理不科學，病害感染機會增多，疾病發生率和死亡率每年呈上升趨勢，造成了巨大損失。據不完全統計，國產魚苗的成活率僅為70-80%，而進口魚苗的養殖成活率可達90%以上。
[0004]由此可見，大菱鲆產品質量安全問題尤為突出，加上目前國內尚無專用配合飼料供應，許多養殖場采用了大量自制的配合飼料的營養成分，其衛生水平更加令人堪憂；而且，在大菱鲆的養殖過程中濫用抗生素，甚至使用違禁添加劑的養殖場大有人在。
[0005]由于大菱鲆本身抗病能力較差，不法養殖戶往往大量使用抗生素之類的違禁藥物，用以預防和治療魚病，導致大菱鲆藥物殘留超標。例如，一些養殖戶為防止大菱鲆吃撐了消化不良，就在養殖過程中非法添加一種名為“呋喃西林”的獸藥，魚類服用這種藥魚后最快需2年才能徹底排泄掉，而人類食用服藥的魚類后則會殘留在體內并在體內累積，極其難以代謝;如果長期食用含有呋喃西林的多寶魚可誘發各種疾病，甚至致癌或致畸胎。
[0006]上海市食品藥品監督管理局從批發市場、連鎖超市、賓館飯店采集了 30件冰鮮或鮮活大菱鲆，并對禁用漁藥、限量漁藥殘留、重金屬等指標進行了檢測。30件大菱鲆樣品全部被檢出硝基呋喃類代謝物，部分樣品還被檢出孔雀石綠、恩諾沙星、環丙沙星、氯霉素、紅霉素等多種禁用漁藥殘留。有專家指出，硝基呋喃類藥物、氯霉素、環丙沙星等在國際國內均屬于禁用漁藥;盡管不會產生急性、亞急性危害，但人體長期大量攝入硝基呋喃類化合物，則存在致癌的可能性。
[0007]此外，由于大菱鲆集約化養殖，飼養環境的改變，易引起疫病威脅、溫度、營養等應激現象，誘導其體內氧自由基的大量產生，致使體內自身存在的清除自由基酶系統(S0D、 CAT、GSH)發生失衡。氧自由基可使生物蛋白質聚合、核酸主鍵斷裂，引起細胞結構和功能的破壞，造成機體組織損害和器官退行性變化。在人工飼養的過程中，配合飼料廣泛應用，尤其是微量元素(Fe、Cu等)和抗生素等藥物的添加，在最大程度上滿足了大菱鲆的營養等各方面需要，但是同時也在大菱鲆體內誘發產生了大量的氧自由基。超量自由基會攻擊機體細胞膜富含的脂質和蛋白質，產生脂質過氧化反應，導致脂質過氧化物累積;超量自由基還攻擊生物膜及DNA鍵，破壞其機構，使其功能喪失;超量自由基還攻擊酶鄰近特定氨基酸殘基，使酶失活，并使機體抗氧化功能減弱，最終引起免疫力下降。因此，尤其是在各種應激條件下細胞嚴重受損更加嚴重，更加容易造成疾病傳播。
[0008]因此，為了防止大菱鲆養殖過程中濫用違禁藥物，避免上述亂象嚴重影響到消費者的食用安全和我國對外貿易的實施，為此而建立養殖過程的質量安全保障體系迫在眉睫。進一步地，研發并提供一種微生物飼料添加劑，以提高大菱鲆機體抗應激能力和非特異性免疫力，是當今養殖領域研發人員的研究重點之一。
【發明內容】
[0009]為了能夠克服上述現有技術中存在的問題，本發明的第一方面，提供了一種微生物飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟:
[0010](1)從啤酒酵母菌、干酪乳桿菌、沼澤紅假單胞菌菌種中分離出各自的單菌株；
[0011](2)對啤酒酵母菌單菌株、干酪乳桿菌單菌株、沼澤紅假單胞菌單菌株分別進行增殖培養，再混合配制得到復合微生物菌群原液;其中，得到的所述復合微生物菌群原液包含啤酒酵母菌30-50wt%，干酪乳桿菌10-30wt%，沼澤紅假單胞菌20-40wt% ;
[0012](3)取所述復合微生物菌群原液接種于發酵培養基與水的混合物中，于30°C的培養溫度下在PH5.5的條件下厭氧發酵7天，制得復合菌種液；其中，所述復合微生物菌群原液:所述發酵培養基:所述水的比例為10_30wt%:60-80wt%:10-15wt% ;
[0013](4)將所述復合菌種液在無菌條件下接種到發酵培養基中，進行發酵36-42小時， 接著將發酵液高速離心，得到高濃度的菌液；[〇〇14](5)將所述高濃度的菌液置入低溫干燥箱內進行干燥，得到水分含量小于12wt%的粗廣品；
[0015](6)將所述粗產品放入粉碎機內進行粉碎，過篩后再次粉碎，最終制得所述微生物飼料添加劑。
[0016]其中，啤酒酵母菌、干酪乳桿菌和沼澤紅假單胞菌是從中國農業微生物菌種保藏管理中心購買的。[〇〇17]優選地，在上述制備方法的步驟(2)中對啤酒酵母菌單菌株進行的增殖培養為:將分離出的啤酒酵母菌單菌株接種于含有l〇wt %糖蜜，2.5wt %硫酸銨，0.25wt %磷酸二氫鉀的初始PH5.5的培養基中進行增殖培養。
[0018]優選地，在上述制備方法的步驟(2)中對沼澤紅假單胞菌單菌株進行的增殖培養為:將分離出的沼澤紅假單胞菌單菌株接種于含有〇.5wt %葡萄糖，0.2wt %乙酸鈉， 0 ? 2wt %NH4C1，0 ? 15wt %酵母膏的初始pH7-8 ? 5的培養基中，在25-35°C進行耗氧黑暗培養。 [〇〇19]優選地，在上述制備方法的步驟(2)中對干酪乳桿菌單菌株進行的增殖培養為:將分離出的干酪乳桿菌單菌株接種于含有2.5wt %豆柏，lwt %葡萄糖，lwt %酵母浸膏， 0.05wt %七水硫酸鎂，0.02wt %磷酸二氫鉀的初始pH5.0的培養基中進行增殖培養。
[0020]進一步優選地，上述制備方法的步驟(4)為:將所述復合菌種液在無菌條件下于35-40°C接種到發酵培養基中，進行發酵36-42小時；其中，發酵過程中的攪拌轉速為200r/ min-240r/min，通氣量為1:1;接著將發酵液在3000-5000r/min的轉速下高速離心，得到高濃度的菌液。[〇〇21]更進一步優選地，上述制備方法中，所述發酵培養基包括:豆餅粉、玉米粉、玉米淀粉、尿素、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、硫酸鎂、米糠粉、麥麩中的至少五種。[〇〇22] 最優選地，上述制備方法中，所述發酵培養基包括:5_15wt %豆餅粉，10_20wt %玉米粉，O-lOwt %玉米淀粉，0-lwt %尿素，0-lwt %硫酸銨，0 ? 05-0 ? lwt %磷酸二氫鉀，0 ? 1-0 ? 5wt %磷酸氫二鈉，〇-〇 ? 4wt %硫酸鎂，40-84 ? 85wt %米糠粉以及0-12wt %麥麩。[〇〇23]更進一步優選地，上述制備方法的步驟(5)為:將所述高濃度的菌液置入30_45°C 的低溫干燥箱內干燥6-10h，得到水分含量小于12wt%的粗產品。
[0024]本發明的第二方面，提供了一種用于減少大菱鲆養殖過程中藥劑使用的微生物飼料添加劑，所述微生物飼料添加劑根據本發明第一方面所述的制備方法制得，并且所述微生物飼料添加劑所含活菌數為50億/g。
[0025]本發明的第三方面，提供了根據本發明第二方面所述的微生物飼料添加劑在養殖大菱鲆中的應用。
[0026]本發明利用微生物技術以增強大菱鲆的自身免疫力，并提供了一種能夠提高大菱鲆機體抗應激能力和非特異性免疫力的微生物飼料添加劑;本發明所述的制備方法利用自主開發的復合同步發酵技術，生產工藝中每級發酵都含有主要代謝產物，使產品中有益活菌、活性酶等的含量達到最大化。所述微生物飼料添加劑中含有豐富的微生物多糖、有益菌，并含有多種活性酶及小肽等活性代謝物質，在飼喂大菱鲆后，可形成動物機體良性生態環境，顯著提高了大菱鲆的抗病能力，有利于獲得健康綠色的大菱鲆產品。【具體實施方式】[〇〇27]下面結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明并不限于以下實施方式。[〇〇28] 實施例1
[0029](1)從啤酒酵母菌、干酪乳桿菌、沼澤紅假單胞菌菌種中分離出各自的單菌株；
[0030](2)將分離出的啤酒酵母菌單菌株接種于含有10wt %糖蜜，2.5wt %硫酸銨， 0.25wt%磷酸二氫鉀的初始pH5.5的培養基中進行增殖培養;將分離出的沼澤紅假單胞菌單菌株接種于含有0.5wt%葡萄糖，0.2wt%乙酸鈉，0.2wt%NH4Cl，0.15wt%酵母膏的初始 PH8的培養基中，在25°C進行耗氧黑暗培養；將分離出的干酪乳桿菌單菌株接種于含有 2 ? 5wt %豆柏，lwt %葡萄糖，lwt %酵母浸膏，0 ? 05wt %七水硫酸鎂，0 ? 02wt %磷酸二氫鉀的初始pH5.0的培養基中進行增殖培養；
[0031]接著，將以上分別增殖培養的微生物混合配制得到復合微生物菌群原液;其中，得到的所述復合微生物菌群原液包含啤酒酵母菌30wt%，干酪乳桿菌10wt%，沼澤紅假單胞菌20wt% ;[〇〇32](3)取所述復合微生物菌群原液接種于發酵培養基與水的混合物中，于30°C的培養溫度下在PH5.5的條件下厭氧發酵7天，制得復合菌種液；其中，所述復合微生物菌群原液:所述發酵培養基:所述水的比例為20wt%:60wt%: 10wt% ;
[0033](4)將所述復合菌種液在無菌條件下于35°C接種到發酵培養基中，進行發酵42小時；其中，發酵過程中的攪拌轉速為200r/min，通氣量為1:1;接著將發酵液在5000r/min的轉速下高速離心，得到高濃度的菌液；[〇〇34] 其中，所述發酵培養基包括:5wt %豆餅粉，10wt %玉米粉，7 ? 2wt %玉米淀粉， 0 ? 75wt %尿素，0 ? 5wt %硫酸銨，0 ? 05wt %磷酸二氫鉀，0 ? lwt %磷酸氫二鈉，0 ? lwt %硫酸鎂，70.3wt%米糠粉以及6wt%麥麩；
[0035](5)將所述高濃度的菌液置入40°C的低溫干燥箱內干燥8h，得到水分含量小于 12wt%的粗產品；
[0036](6)將所述粗產品放入粉碎機內進行粉碎，過篩后再次粉碎，最終制得所述微生物飼料添加劑，其所含活菌數為50億/g。[〇〇37] 實施例2
[0038](1)從啤酒酵母菌、干酪乳桿菌、沼澤紅假單胞菌菌種中分離出各自的單菌株；
[0039](2)將分離出的啤酒酵母菌單菌株接種于含有10wt %糖蜜，2.5wt %硫酸銨， 0.25wt%磷酸二氫鉀的初始pH5.5的培養基中進行增殖培養;將分離出的沼澤紅假單胞菌單菌株接種于含有0.5wt%葡萄糖，0.2wt%乙酸鈉，0.2wt%NH4Cl，0.15wt%酵母膏的初始 PH7的培養基中，在35°C進行耗氧黑暗培養；將分離出的干酪乳桿菌單菌株接種于含有 2 ? 5wt %豆柏，lwt %葡萄糖，lwt %酵母浸膏，0 ? 05wt %七水硫酸鎂，0 ? 02wt %磷酸二氫鉀的初始pH5.0的培養基中進行增殖培養；
[0040]接著，將以上分別增殖培養的微生物混合配制得到復合微生物菌群原液;其中，得到的所述復合微生物菌群原液包含啤酒酵母菌50wt%，干酪乳桿菌25wt%，沼澤紅假單胞菌25wt% ;
[0041](3)取所述復合微生物菌群原液接種于發酵培養基與水的混合物中，于30°C的培養溫度下在PH5.5的條件下厭氧發酵7天，制得復合菌種液；其中，所述復合微生物菌群原液:所述發酵培養基:所述水的比例為l〇wt%:70wt%: 15wt% ;[〇〇42](4)將所述復合菌種液在無菌條件下于40°C接種到發酵培養基中，進行發酵36小時;其中，發酵過程中的攪拌轉速為240r/min，通氣量為1:1;接著將發酵液在3000r/min的轉速下高速離心，得到高濃度的菌液；[〇〇43] 其中，所述發酵培養基包括:5wt %豆餅粉，1 Owt %玉米粉，2wt %玉米淀粉，lwt % 尿素，0 ? 5wt %硫酸銨，0 ? lwt %磷酸二氫鉀，0 ? lwt %磷酸氫二鈉，0 ? 3wt %硫酸鎂，75wt %米糠粉以及lwt%麥麩；
[0044](5)將所述高濃度的菌液置入30 °C的低溫干燥箱內干燥1 Oh，得到水分含量小于 12wt%的粗產品；
[0045](6)將所述粗產品放入粉碎機內進行粉碎，過篩后再次粉碎，最終制得所述微生物飼料添加劑，其所含活菌數為50億/g。
[0046]以上對本發明的具體實施例進行了詳細描述，但是，其只是作為范例，本發明并不限制于以上描述的具體實施例。對于本領域技術人員而言，任何對本發明進行的等同修改和替代也都在本發明的范疇之中。因此，在不脫離本發明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應涵蓋在本發明的范圍內。
【主權項】
1.一種微生物飼料添加劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)從啤酒酵母菌、干酪乳桿菌、沼澤紅假單胞菌菌種中分離出各自的單菌株；(2)對啤酒酵母菌單菌株、干酪乳桿菌單菌株、沼澤紅假單胞菌單菌株分別進行增殖培 養，再混合配制得到復合微生物菌群原液;其中，得到的所述復合微生物菌群原液包含啤酒 酵母菌30_50wt%，干酪乳桿菌10_30wt%，沼澤紅假單胞菌20_40wt% ;(3)取所述復合微生物菌群原液接種于發酵培養基與水的混合物中，于30°C的培養溫 度下在pH5.5的條件下厭氧發酵7天，制得復合菌種液;其中，所述復合微生物菌群原液:所 述發酵培養基:所述水的比例為10_30wt%:60-80wt%:10-15wt% ;(4)將所述復合菌種液在無菌條件下接種到發酵培養基中，進行發酵36-42小時，接著 將發酵液高速離心，得到高濃度的菌液；(5)將所述高濃度的菌液置入低溫干燥箱內進行干燥，得到水分含量小于12wt%的粗 產品；(6)將所述粗產品放入粉碎機內進行粉碎，過篩后再次粉碎，最終制得所述微生物飼料 添加劑。2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中對啤酒酵母菌單菌株進行 的增殖培養為:將分離出的啤酒酵母菌單菌株接種于含有l〇wt%糖蜜，2.5wt%硫酸銨， 0.25wt %磷酸二氫鉀的初始pH5.5的培養基中進行增殖培養。3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中對沼澤紅假單胞菌單菌株 進行的增殖培養為:將分離出的沼澤紅假單胞菌單菌株接種于含有〇.5wt %葡萄糖， 0 ? 2wt %乙酸鈉，0 ? 2wt %NH4C1，0 ? 15wt %酵母膏的初始pH7-8 ? 5的培養基中，在25-35°C進 行耗氧黑暗培養。4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中對干酪乳桿菌單菌株進行 的增殖培養為:將分離出的干酪乳桿菌單菌株接種于含有2.5wt %豆柏，lwt %葡萄糖， lwt %酵母浸膏，0.05wt %七水硫酸鎂，0.02wt %磷酸二氫鉀的初始pH5.0的培養基中進行增殖培養。5.根據權利要求2-4中任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)為:將所述復合菌 種液在無菌條件下于35-40°C接種到發酵培養基中，進行發酵36-42小時;其中，發酵過程中 的攪拌轉速為200r/min-240r/min，通氣量為1:1;接著將發酵液在3000-5000r/min的轉速 下高速離心，得到高濃度的菌液。6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述發酵培養基包括:豆餅粉、玉米 粉、玉米淀粉、尿素、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、硫酸鎂、米糠粉、麥麩中的至少五種。7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述發酵培養基包括:5-15wt%豆餅 粉，10_20wt % 玉米粉，0-10wt % 玉米淀粉，0_lwt % 尿素，0_lwt % 硫酸銨，0 ? 05-0 ? lwt % 磷 酸二氫鉀，〇 ? 1-0 ? 5wt %磷酸氫二鈉，0-0 ? 4wt %硫酸鎂，40-84 ? 85wt %米糠粉以及0-12wt % 麥麩。8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)為:將所述高濃度的菌液置入 30-45 °C的低溫干燥箱內干燥6-1 Oh，得到水分含量小于12wt %的粗產品。9.一種用于減少大菱鲆養殖過程中藥劑使用的微生物飼料添加劑，其特征在于，所述 微生物飼料添加劑根據權利要求1-8中任一項所述的制備方法制得，并且所述微生物飼料添加劑所含活菌數為50億/g。10.根據權利要求9所述的微生物飼料添加劑在養殖大菱鲆中的應用。
【文檔編號】A23K10/18GK105961924SQ201610444319
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年6月20日
【發明人】江瀚, 陸瑛
【申請人】上海亨康生物科技有限公司