一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及其二步發酵制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及其二步發酵制備方法，該方法包括：金針菇固體發酵：以含有改善記憶的天然組分為藥性培養基質，接種金針菇液體菌種進行雙向固體發酵制備具有改善記憶功效的藥性菌質；乳酸菌液體深層發酵：以藥性菌質為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發酵培養基，接種乳酸菌進行液體深層發酵生產緩解壓力的γ-氨基丁酸，制備同時具有緩解壓力和改善記憶功效的發酵液；采用發酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及改善記憶的功能食品。本發明制備的功能食品同時具有緩解壓力及改善記憶力功能，市場前景廣闊，該制備方法穩定，適合大規模生產。
【專利說明】一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及其二步發酵制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及功能食品及其制備領域，具體涉及一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及采用金針菇、乳酸菌固液二步發酵制備該功能食品的方法。
【背景技術】
[0002]隨著現代生活節奏的不斷加快，人們在生活、學習、工作中的競爭越來越激烈，精神壓力大、記憶力減退等亞健康問題成為困擾包括學生、白領在內的腦力工作者的重大隱患，因此越來越多的人開始關注“腦健康”，緩解壓力、改善記憶的食品和保健食品越來越受青睞，目前針對腦健康的保健食品以增強免疫力、抗疲勞、改善記憶為主，且大多為單一功能的產品，并無可同時緩解壓力和改善記憶力的保健食品。
[0003]金針菇被譽為“增智菇”，研究表明金針菇多糖提取物具有改善記憶的功效。目前大多金針菇保健食品以金針菇子實體為原料制備的，如專利201310071534.9《一種具有明目益智作用的保健食品》金針菇提取物、歐洲藍莓提取物、銀杏葉提取物、大豆磷脂等配伍而成，專利201010622493.4《一種用于緩解視疲勞和輔助改善記憶的組合物》由歐洲越橘提取物、金針菇提取物、牛磺酸等配伍而成，但是使用金針菇子實體為存在原料成本高、產品質量不穩定等問題，以金針菇菌絲體為原料則可避免這些問題，如專利93110333.9《金針菇飲料及其制備方法》主要使用金針菇菌絲體配制而成。但金針菇菌絲體都是以傳統固體或液體發酵制備，并無利用金針菇和具有一定功效的藥性基質通過雙向發酵制備的報道。
[0004]莊毅等首次提出雙向發酵的概念，指出食藥用真菌與含有活性成分的中藥材進行發酵具有雙向性，能產生1+1>2的生理效果，如專利201110271923.7《一種具有降血糖功效的真菌藥性菌質及其制備方法》選用具有降血糖功效的藥性基質和真菌菌種作為雙向發酵獲得具有明顯的降低血糖又不增加胰島素濃度的作用的藥性菌質，專利200910058889.8《含有靈芝的發酵菌質混合物、制備方法及其應用》以靈芝和含有丹參的藥性基質進行雙向發酵，得到兼具丹參藥材和靈芝真菌功效的菌質發酵終產物。選用金針菇和具有改善記憶功效的藥性基質和進行固體發酵，通過藥性基質對金針菇菌絲體生長代謝過程的影響和金針菇真菌酶系對藥性基質改造在內的雙向性固體發酵后，得到兼具藥性基質和金針菇改善記憶功效的藥性菌質，可作為保健食品原料，對記憶力減退者能夠產生1+1>2的效果。
[0005]Y -氨基丁酸是一種重要的抑制性神經遞質，現代醫學研究證明Y -氨基丁酸具有鎮靜神經、緩解壓力的功效，衛生部2009年第12號公告批準乳酸菌發酵法制備的Y-氨基丁酸為新資源食品。從傳統發酵食品中篩選的乳酸菌安全性高，可用于Y-氨基丁酸的生產，如專利200780006225.6《能夠生產Y -氨基丁酸的乳酸菌》從未精制的醬油中分離到能夠生產Y-氨基丁酸(GABA)的凝乳酶乳酸桿菌，專利200910183478.1《一株高效轉化L-谷氨酸為Y-氨基丁酸乳酸菌的選育》從自制酸菜中篩選出一株能利用L-谷氨酸生產Y-氨基丁酸的植物乳桿菌。但是乳酸菌只能利用單糖、二糖等小分子碳源，不能直接利用含淀粉以及纖維質的天然基質，而真菌具有降解淀粉和纖維質的酶系，可將淀粉質、纖維質分解為可供乳酸菌利用的小分子碳源，將真菌發酵與乳酸菌發酵相耦合進行分步發酵可解決這一問題。

【發明內容】

[0006]針對目前并無緩解壓力及改善記憶力的功能食品，本發明提供了一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及利用金針菇、乳酸菌固液二步發酵制備該功能食品的方法。
[0007]—種緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，包括如下步驟:
[0008](I)金針菇固體發酵:以含有改善記憶功效的天然組分為藥性培養基質，接種金針菇液體菌種進行雙向固體發酵制備具有改善記憶功效的藥性菌質；
[0009](2)乳酸菌液體深層發酵:以步驟(I)的藥性菌質為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發酵培養基，接種乳酸菌進行液體深層發酵生產緩解壓力的Y-氨基丁酸，制備同時具有緩解壓力和改善記憶功效的發酵液；
[0010](3)采用步驟(2)的發酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及改善記憶的功能食品。
[0011]本發明第一步以含有改善記憶功效的天然組分作為藥性培養基質，接種金針菇進行雙向固體發酵，通過藥性培養基質對金針菇菌絲體生長代謝過程的影響和金針菇真菌酶系對藥性基質改造在內的雙向性固體發酵后，得到兼具藥性基質和金針菇改善記憶功效的藥性菌質；第二步以金針菇降解后含有小分子碳源等營養物質的藥性菌質為原料，添加酵母粉以及谷氨酸鈉制作發酵培養基，接種可產生Y-氨基丁酸的乳酸菌進行發酵，制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發酵液；最后，發酵液經過過濾、濃縮、制劑等工藝制備保健食品。
[0012]步驟(I)中，所述的金針菇可采用現有技術，金針菇液體菌種采用現有的常規工藝制得，如具體可選擇金針菇ACCC50424，即中國農業微生物菌種保藏管理中心(ACCC)保藏的菌種。
[0013]步驟(I)中，所述的金針菇液體菌種的接種量為2%_10%，即所述的金針菇液體菌種的加入的體積量(HiL)為藥性培養基質的質量(g)的2%-10% (mL/g),以IOOg藥性培養基質為基準，加入2-10mL的金針菇液體菌種。
[0014]步驟(I)中，所述的藥性培養基質的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥70%-80%、大豆10%-20%、核桃仁1%-3%、益智仁1%_3%、銀杏葉1%_3%、石膏粉
0.5%-1.5%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，1160C _126°C滅菌
0.5h-l.5h。優選的，所述的藥性培養基質的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥75%、大豆15%、核桃仁3%、益智仁3%、銀杏葉3%、石膏粉1%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，121°C滅菌Ih。
[0015]步驟(I)中，所述的雙向固體發酵的條件為:發酵溫度在20_25°C，發酵時間在20-30天，以該金針菇固體發酵條件為宜。
[0016]步驟(2)中，所述的乳酸菌為植物乳酸菌，優選的為從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為=CGMCC N0.5655)，即采用中國普通微生物菌種保藏管理中心CGMCC保藏的菌種，植物乳酸菌液體菌種采用MRS培養基28°C靜置培養48h獲得。
[0017]步驟(2)中，所述的發酵培養基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸鈉15-20重量份，將藥性菌質、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5-6的緩沖液，1160C _126°C滅菌20min-40min。作為優選，所述的發酵培養基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質50重量份、酵母粉7.5重量份、谷氨酸鈉20重量份，將藥性菌質、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min。
[0018]步驟(2)中，所述的乳酸菌的接種量為1%_5%，即所述的乳酸菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%_5%。
[0019]步驟(2)中，所述的液體深層發酵的條件為:發酵溫度在28_32°C，發酵時間在48-72h，以該發酵條件為宜。
[0020]步驟(2)中，所述的發酵液中Y-氨基丁酸的含量為9_12g/L。
[0021]步驟(3)中，所述的發酵液通過過濾、濃縮、制劑等工藝制備成不同劑型的功能食
品O
[0022]所述的緩解壓力及改善記憶力的功能食品的劑型為口服劑型，優選為片劑或膠囊，發酵液經過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒、壓片后得到片劑，發酵液經過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒、裝囊后得到膠囊。具體地，首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒的重量0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒的重量0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘灌膠囊或壓成片劑，每粒膠囊/片劑0.35g。
[0023]通過上述二步發酵制備方法制備的緩解壓力及改善記憶力的功能食品，該功能食品同時具有緩解壓力和改善記憶力的功能。
[0024]金針菇與改善記憶的藥性培養基質雙向發酵可制備改善記憶效果顯著的藥性菌質，而藥性培養基質通過金針菇的降解作用，藥性菌質可為乳酸菌發酵產Y -氨基丁酸提供營養和碳源，同時通過乳酸菌的降解和轉化，藥性菌質更易吸收和利用。因此采用金針菇和乳酸菌二步發酵可制備可同時緩解壓力和改善記憶力的功能食品。
[0025]與現有技術相比，本發明具有如下有益效果:
[0026](I)本發明根據金針菇具有改善記憶功效，Y-氨基丁酸具有緩解壓力功效，二者配伍具有緩解壓力及改善記憶功效，提供了一種以功能強化的金針菇藥性菌質和Y-氨基丁酸配伍的功能食品制備方法，該方法將食用菌發酵與乳酸菌發酵有機結合，采用二步發酵法制備可同時緩解壓力和改善記憶的功能食品，其中第一步利用金針菇和具備改善記憶功效藥性基質的雙向固體發酵制備兼具金針菇和藥性基質改善記憶功效的藥性菌質，該過程不僅能產生1+1 > 2的生理功效，還可將藥性基質中的大分子碳源降解為乳酸菌易于利用的小分子碳源，為第二步乳酸菌液體深層發酵產生具備緩解壓力作用的Y-氨基丁酸提供必要的營養和碳源，同時通過乳酸菌的降解和轉化，藥性菌質更易吸收和利用。
[0027](2)本發明制備的功能食品經實驗證明具有緩解壓力和改善記憶功能。
[0028](3)本發明采用的生產方法，不僅原料成本低，整個生產過程都采用低溫發酵，條件溫和，沒有毒害物質的攝入，產品安全性、附加值高，可實現規模化生產，市場前景廣闊。
[0029](4)本發明制備的功能食品采用片劑、膠囊等劑型，方便攜帶及服用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1為本發明緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法的流程圖；[0031]圖2為試驗例2中受試者唾液皮質醇的變化率(起始點100%)。
【具體實施方式】
[0032]以下按照圖1工藝流程對本發明進行進一步描述，但本發明的保護范圍并不僅限于此。以下沒有特別說明的情況下，百分數均是指重量百分數。
[0033]實施例1
[0034]1、金針菇固體發酵:
[0035]①藥性培養基質的制作
[0036]配方:全粒大麥80%、大豆16.5%、核桃仁1%、益智仁1%、銀杏葉1%、石膏粉0.5% ；
[0037]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為65%，121°C滅菌lh，得到藥性培養基質；
[0038]②接種發酵
[0039]將金針菇ACCC50424的液體菌種(常規工藝制備)按3%體積質量比接種到①中藥性培養基質，即金針菇ACCC50424液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的3% (mL/g)，20°C培養30天制備具有改善記憶功效的藥性菌質；
[0040]2、乳酸菌液體深層發酵:
[0041]①發酵培養基制作
[0042]配方:藥性菌質40g、酵母粉5g,谷氨酸鈉15g,自來水IL (即IOOOg)；
[0043]配制方法:按配方比例將藥性菌質、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發酵培養基；
[0044]②將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養基28°C靜置培養48h)按1%比例接種到①中發酵培養基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%，28°C靜置培養72h制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發酵液；
[0045]3、第2步制備的發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘，壓成片劑，每片0.35g。
[0046]實施例2
[0047]1、金針菇固體發酵:
[0048]①藥性培養基質的制作
[0049]配方:全粒大麥80%、大豆16.5%、核桃仁1%、益智仁1%、銀杏葉1%、石膏粉0.5% ；
[0050]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為60% ;121°C滅菌lh，得到藥性培養基質；
[0051]②接種發酵
[0052]將金針菇ACCC50424的液體菌種(常規工藝制備)按3%體積質量比接種到①中藥性培養基質，即金針菇ACCC50424液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的3% (mL/g)，20°C培養30天制備具有改善記憶功效的藥性菌質；
[0053]2、乳酸菌液體深層發酵:[0054]①發酵培養基制作
[0055]配方:藥性菌質40g、酵母粉5g,谷氨酸鈉15g,自來水IL (即IOOOg)；
[0056]配制方法:按配方比例將藥性菌質、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發酵培養基；
[0057]②將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養基28°C靜置培養48h)按1%比例接種到①中發酵培養基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%，28°C靜置培養72h制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發酵液；
[0058]3、第2步制備的發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘，用膠囊填充機灌膠囊，每粒0.35g。
[0059]實施例3
[0060]1、金針菇固體發酵:
[0061]①藥性培養基質的制作
[0062]配方:全粒大麥75%、大豆15%、核桃仁3%、益智仁3%、銀杏葉3%、石膏粉1% ；
[0063]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為63% ;121°C滅菌lh，得到藥性培養基質；
[0064]②接種發酵
[0065]將金針菇ACCC50424的液體菌種(常規工藝制備)按5%體積質量比接種到①中藥性培養基質，即金針菇ACCC50424液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的5% (mL/g)，25°C培養20天制備具有改善記憶功效的藥性菌質；
[0066]2、乳酸菌液體深層發酵:
[0067]①發酵培養基制作
[0068]配方:藥性菌質50g、酵母粉7.5g,谷氨酸鈉20g,自來水IL (即IOOOg)；
[0069]配制方法:按配方比例將藥性菌質、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發酵培養基；
[0070]②將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養基28°C靜置培養48h)按1%比例接種到①中發酵培養基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%，32°C靜置培養48h制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發酵液；
[0071]3、第2步制備的發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘，壓成片劑，每片0.35g。
[0072]實施例4
[0073]1、金針菇固體發酵:
[0074]①藥性培養基質的制作
[0075]配方:全粒大麥75%、大豆15%、核桃仁3%、益智仁3%、銀杏葉3%、石膏粉1% ；[0076]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為62%，121°C滅菌lh，得到藥性培養基質；
[0077]②接種發酵
[0078]將金針菇ACCC50424的液體菌種(常規工藝制備)按5%體積質量比接種到①中藥性培養基質，即金針菇ACCC50424液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的5% (mL/g)，25°C培養20天制備具有改善記憶功效的藥性菌質；
[0079]2、乳酸菌液體深層發酵:
[0080]①發酵培養基制作
[0081]配方:藥性菌質50g、酵母粉7.5g,谷氨酸鈉20g,自來水IL (即IOOOg)；
[0082]配制方法:按配方比例將藥性菌質、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發酵培養基；
[0083]②將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養基28°C靜置培養48h)按1%比例接種到①中發酵培養基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%，32°C靜置培養48h制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發酵液；
[0084]3、第2步制備的發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘，用膠囊填充機灌膠囊，每粒0.35g。
[0085]以下通過毒理及功能試驗來進一步說明本發明。由于本發明的膠囊和片劑處劑型、輔料不同外，兩者的主要原料、每日服用量、功效成分都相同，不影響產品的安全和功能。故以下針對膠囊進行毒理和功能試驗。
[0086]試驗例I
[0087]毒理試驗:
[0088]試驗目的:檢驗廣品是否具有毒性
[0089]試驗材料:實施例4制得的膠囊。
[0090]樣品:人體口服推薦攝入量為每日兩次，每次兩粒，0.35g每粒(體重按60kg計)，折合劑量0.03g/kg.bw,取膠囊內容物進行試驗。
[0091]實驗動物:清潔級ICR小鼠、SD大鼠及飼料。
[0092]飼養條件:溫度20-25°C、相對濕度40%_70%的屏障系統。
[0093]試驗方法:
[0094]小鼠急性經口毒性試驗:取實施例4制得的膠囊內容物，用無菌水配制成0.500g/mL,按最大灌胃量20mL/kg.bw —日內二次性灌胃給養,受試物給予劑量為20.0g/kg.bw。
[0095]Ames試驗:取實施例4制得的膠囊內容物，用無菌水配制成0.500g/mL,為5000ug/皿的劑量，試驗設5個劑量，1000、200、40、8ug/皿4個劑量用無菌水按一定倍比逐級稀釋配制成10、2、0.4,0.08mg/mL，加樣量均為0.1mL/皿，加入0.1mL/皿，同時設陽性、陰性及溶劑對照，計數每皿回變菌落數。
[0096]小鼠骨髓細胞微核試驗:以40mg/kg *bw劑量的環磷酰胺為陽性對照,無菌水為陰性對照，試驗組3個劑量分別為10.0g/kg.bw、5.0g/kg.bw、2.5g/kg.bw,取實施例4制得的膠囊內容物用無菌水配制成0.5,0.25,0.125g/mL,以20mL/kg *bw灌胃2次，采用30h給受試物法，兩次給樣間隔24h，第二次給樣6h后處死動物，取胸骨常規制片、鏡檢、每鼠計數1000個骨髓嗜多染紅細胞，觀察含微核的嗜多染紅細胞并觀察微核發生率。
[0097]小鼠精子畸形試驗:以40mg/kg *bw劑量的環磷酰胺為陽性對照，無菌水為陰性對照，試驗組3個劑量分別為10.0g/kg *bw、5.0g/kg *bw、2.5g/kg *bw,取實施例4制得的膠囊內容物用無菌水配制成0.5,0.25,0.125g/mL,以20mL/kg.bw灌胃，每天I次，連續5d。于首次給樣后的第35天處死動物，取兩側附睪精子濾液按常規制片、鏡檢，每鼠計數1000個完整的精子，計算精子畸形發生率。
[0098]30天喂養試驗:實施例4制得的膠囊人體推薦量1.4g/人/天，按人體推薦量的30、65、100 倍設 0.70g/kg.bw/d、l.52g/kg.bw/d、2.33g/kg.bw/d 設三個劑量組，另設一個空白對照組Og/kg.bw,受試樣品摻入基礎飼料中飼喂大鼠,連續喂養30天,每周稱I次體重和2次食物攝入量，計算每周及總的食物利用率，每天觀察有無中毒變現和死亡，試驗結束觀察血液學、血液生化、臟器系數指標，并進行病理學檢查。
[0099]試驗結果:
[0100]1、急性經口毒性試驗結果:受試樣品對雌雄性小鼠急性經口的最大耐受量(MTD)均大于20.0g/kg.bw,屬無毒級。
[0101]2、三項遺傳毒性試驗結果:Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗結果均為陰性。
[0102]3、30天喂養試驗結果:實驗期間，動物生長發育良好，各劑量組體重、食物利用率、臟器重量、臟器系數均無異常改變，血液學指標與生化各項指標均在正常范圍，各臟器病理學檢查均未見與受試品相關的病理改變、給予人體推薦量100倍的受試物未觀察到有害作用。
[0103]試驗例2
[0104]緩解壓力功能試驗:
[0105]試驗目的:檢驗產品對人體是否具有緩解壓力的功能
[0106]試驗材料:實施例4制得的膠囊。
[0107]樣品:人體口服推薦量為每日2次，每次2粒，膠囊I號、2號，二者的包裝、外觀基本相同，但其中一個為實施例4制得的膠囊，另一個為安慰劑。
[0108]受試者選擇:受試者為工作壓力大的科研人員，年齡在35-55歲，性別不限，凡符合上述條件而自愿參加并保證配合者均可納入試驗。排除以下人員:對保健食品過敏者；短期內服用與受試功能相關的物品，影響到對結果的判斷。
[0109]試驗方法:當人體處在壓力的狀態下，唾液中就會分泌皮質醇，因此可以通過以唾液皮質醇為壓力指標評價受試物緩解壓力的作用。受試者隨機分為試食組和安慰劑對照組，每天按推薦劑量服用，連續服用4周。試驗期間不改變原來的飲食習慣，正常飲食。結果如圖2所示，圖2為受試者唾液皮質醇的變化率(起始點100%)。由圖2可知，與對照組相t匕，試食組受試者唾液皮質醇增加顯著減少(P〈0.05)，說明實施例4制得的膠囊具有緩解壓力的功效。
[0110]試驗例3
[0111]改善記憶功能試驗:[0112]試驗目的:檢驗產品對人體是否具有改善記憶的功能
[0113]試驗材料:實施例4制得的膠囊。
[0114]樣品:人體口服推薦量為每日2次，每次2粒，膠囊I號、2號，二者的包裝、外觀基本相同，但其中一個為實施例4制得的膠囊，另一個為安慰劑。
[0115]受試者選擇:記憶力減退者，年齡25-50歲，選擇符合試驗條件的志愿者服用受試物45天，受試者106名，隨機分為試食組、對照組各53名，試食結束時試食組I人和對照組2人未參加檢查。試食前后，受試者精神飲食、大小便狀況未見異常。
[0116]試驗方法:根據《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003版)評價標準，選擇記憶商為指標評價受試物的改善記憶的功效。采用自身對照法及組間對照法，試驗期間不改變原來的飲食習慣，正常飲食。結果如表1所示。
[0117]表1產品對記憶商的影響(^±?5 )
[0118]
【權利要求】
1.一種緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)金針菇固體發酵:以含有改善記憶功效的天然組分為藥性培養基質，接種金針菇液體菌種進行雙向固體發酵制備具有改善記憶功效的藥性菌質； (2)乳酸菌液體深層發酵:以步驟(I)的藥性菌質為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發酵培養基，接種乳酸菌進行液體深層發酵生產緩解壓力的Y-氨基丁酸，制備同時具有緩解壓力和改善記憶功效的發酵液； (3)采用步驟(2)的發酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及改善記憶的功能食品。
2.根據權利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的金針菇液體菌種的接種量為2%-10%。
3.根據權利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的藥性培養基質的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥70%-80%、大豆10%-20%、核桃仁1%-3%、益智仁1%_3%、銀杏葉1%_3%、石膏粉0.5%-1.5%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，1160C _126°C滅菌0.5h_l.5h0
4.根據權利要求3所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的藥性培養基質的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥75%、大豆15%、核桃仁3%、益智仁3%、銀杏葉3%、石膏粉1%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，121°C滅菌Ih。
5.根據權利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的雙向固體發酵的條件為:發酵溫度在20-25°C，發酵時間在20-30 天。
6.根據權利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的發酵培養基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸鈉15-20重量份，將藥性菌質、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5-6的緩沖液，1160C _126°C滅菌20min-40min。
7.根據權利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的乳酸菌的接種量為1%_5%。
8.根據權利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的液體深層發酵的條件為:發酵溫度在28-32°C，發酵時間在48-72h。
9.根據權利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的緩解壓力及改善記憶力的功能食品的劑型為片劑或膠囊。
10.根據權利要求1?9任一項所述的制備方法制備的緩解壓力及改善記憶的功能食品ο
【文檔編號】A23L1/28GK103932181SQ201410136197
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月4日 優先權日:2014年4月4日
【發明者】吳學謙, 徐娟, 熊科輝, 黨亞麗, 俞盈, 許海順, 李青青 申請人:浙江省醫學科學院