專利名稱：一種耐高溫中性木聚糖酶基因及含有該基因的工程菌的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物工程領域，尤其涉及一種耐高溫中性木聚糖酶基因及含有該基因的工程菌。
背景技術：
木聚糖酶(1，4_β-D-xylanase ;EC3. 2. 1.8)是一種重要的工業用酶，在造紙工業、食品、能源、飼料以及環境等領域中顯示了廣闊的應用前景，特別是在紙漿生物漂白中的巨大應用潛力早已引起各界的高度關注。木聚糖酶處理各種漿料的作用是降解漿中的木聚糖，使漿中半纖維素的含量降低，并使纖維素細胞壁結構變得松弛，同時使與漿中殘余木素連接的半纖維素降解，形成脫木素或有利于脫木素的狀態。通過木聚糖酶的預處理，不僅可以提高紙漿的白度，降低打漿的能耗，改善漿料的強度性能，而且，可以減少后繼工序漂劑的用量，降低廢液的毒性，減輕環境污染。目前，以無元素氯和全無氯漂白工藝為代表的紙漿綠色清潔漂白已經成為世界各國造紙業紙漿漂白發展的必然趨勢，木聚糖酶酶法助漂新工藝已在歐洲和北美的30余家大型紙廠得到應用，成為生物技術在造紙工業應用最成功的一例。其中，加拿大已有約10 % 的硫酸鹽法紙漿廠采用了該項新工藝。丹麥諾維信公司和美國山道斯化學公司等多家酶制劑廠商，紛紛推出了專門用于紙漿處理的木聚糖酶和纖維素酶新產品，但到目前為止，工業上用于紙漿漂白的木聚糖酶大多是中性偏酸的，最適反應溫度大多在50°C左右，眾所周知， 紙漿蒸煮和漂白基本都是在高溫和強堿的條件下進行的，使得現有的低溫酸性木聚糖酶產品在此領域的應用受到了極大的限制，另外，在飼料和食品領域，木聚糖酶應用在飼料的造粒和食品的焙烤工序中，仍然要求所用的木聚糖酶在高溫條件下能夠保持較高的酶活，因此，研究開發耐高溫的木聚糖酶產品將會帶來良好的經濟效益和社會效益。國外對木聚糖酶的研究已達到了分子水平，自上世紀七十年代末開展木聚糖酶基因的研究工作以來，已有150多種來自真菌和細菌的木聚糖酶基因被克隆并在大腸桿菌中表達° 其中，Ossi Turunen 等人使用 Swiss-pdbviewer 對來源于 Trichoderma ressei 的 GHll家族木聚糖酶XYNII的結構進行分析；并用PCR的方法在XYNII中引入5個Arg點突變時，突變酶在65°C的半衰期提高4-5倍，最適pH也有所提高；Miyazaki K等人對來源于 Bacillus subtilis的木聚糖酶基因運用DNA shuffling技術進行研究，獲得了一株最適反應溫度提高了 10°C，60°C時熱穩定性提高了 M倍的突變酶；2009年，Ismail Akyol等克隆到Neocallimastix sp. GMLF2的木聚糖酶基因xyn2A，并在大腸桿菌中得到表達，其最適作用溫度和PH分別為50°C和6. 5。我國在木聚糖酶方面的研究起步較晚，但發展迅速。上世紀八十年代初期，中國科學院微生物所在張樹政院士的帶領下，開始了我國對木聚糖酶的早期研究工作，首次從海棗曲酶(Aspergillus phoe-nicis)中純化得到了四種木聚糖酶酶I、酶II、酶III和酶IV，并深入研究了活力較高的組分酶III的酶學性質。“九五”期間，山東大學微生物技術國家重點實驗室曲音波教授等開展了木聚糖酶在造紙方面的應用研究，從堿性假單胞菌sp. G6-2分離出兩種木聚糖酶XynA和XynB。目前，我國對木聚糖酶的研究大多停留在產酶菌株的篩選、酶的純化和酶學性質研究方面，部分課題已涉及木聚糖酶的分子生物學研究、 木聚糖酶基因克隆、表達和重組。Chen等用易錯PCR技術對來源于真菌Neocallimastix patriciarum的木聚糖酶進行定向進化研究，獲得了比野生型蛋白質耐堿性更強的木聚糖酶。09年Yingguo Bai等從云南溫泉中分離到產木聚糖酶的菌株thermoacidophilic Alicyclobacillus sp. A4，克隆得到木聚糖酶基因XynA4，并在大腸桿菌中表達。測得該木聚糖酶XynA4的最適作用pH和最適作用溫度分別為7.0和55°C。Jing Wang等在造紙廠污水中分離到產堿性木聚糖酶的Baci llus pumilus BYG野生型菌株，該木聚糖酶的最適作用 PH為8. 0-9. 0，最適作用溫度50°C，并克隆到木聚糖酶基因XynBYG，該基因長度為687bp， 編碼2 個氨基酸，成功應用定點突變技術將該酶的最適作用溫度提高了 5°C。據統計， 目前國內木聚糖酶的研究中，木聚糖酶的最適作用溫度最高為85°C，而其最適作用pH為 6. 5，來自于2009年新疆大學的Wei Zhang等將嗜熱網團菌(Dictyoglomus thermophilum Rt46B. 1)的木聚糖酶基因xynB在Bacillus subtilis中表達后獲得的木聚糖酶。綜上可見，國內外各研究機構正致力于獲得不同來源的具有一定優良性質的木聚糖酶基因，并且構建合適的工程菌株，使其更適合工業應用的極端條件，開拓其更廣的應用前景。

發明內容
本發明的目的在于通過產木聚糖酶菌種的篩選，從而獲得編碼耐高溫中性木聚糖酶的基因，并且進一步構建能高效表達此耐高溫中性木聚糖酶的基因工程菌。本發明實現目的的技術方案如下一種耐高溫中性木聚糖酶基因，基因序列見序列1。而且，具體方法如下根據已報道木聚糖酶基因，分析其保守序列，設計本發明的耐高溫中性木聚糖酶基因的擴增引物如下上游引物為序列2，下游引物為序列3，擴增模板為坎皮納斯類芽孢桿菌基因組DNA，其擴增的反應條件為95°C 5min ； 94°C 45S，55°C 45S，72°C 90S, 30 個循環；72°C延長 IOmin ；擴增體系50 μ L :ddH20 35. 5 μ L, IOXbuffer 5 μ L, dNTPs 2. 5mmol/L 每個 5 μ L,上游引物ΙΟμ θΙ/L 1. 5μ L，下游引物 ΙΟμ θΙ/L 1. 5 μ L，DNA 模板 1 μ L，TaqDNA 聚合酶0.5yL;PCR擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳，得到1134bp的單一條帶，回收PCR產物，得到耐
高溫中性木聚糖酶全基因；一種序列1的耐高溫中性木聚糖酶基因的基因工程菌。而且，宿主菌為大腸桿菌E. coli BL21。而且，構建方法如下(1)重組質粒ρΕΤ-XynGl-l的構建與鑒定將XynGl-I基因的PCR純化產物與載體pET_22b (+)經Hind III和XhoI雙酶切后，分別用小量DNA回收試劑盒回收酶切產物，應用DNA連接試劑盒的Solution I在16°C 的條件下連接12h，將目的基因XynGl-I定向連接至載體pET_22b (+)，將連接產物應用化學轉化法轉化到E. coli DH5a感受態細胞中，在含有Amp的LA培養基中篩選培養，挑取陽性轉化子，培養后提質粒，用Hind III和B10I雙位點單、雙酶切鑒定，測序；(2)大腸桿菌E. coli BL21基因工程菌的構建將測序正確的重組質粒ρΕΤ-XynGl-l應用化學轉化的方法轉化到E. coli BL21感受態細胞中，挑取陽性轉化子，進行IPTG誘導表達。本發明的優點和積極效果如下本發明提供了一種來源于坎皮納斯類芽孢桿菌(TCCC11578)的耐高溫中性木聚糖酶基因以及帶有該基因序列的E. coli BL21基因工程菌，本發明提供并表達的基因區別于已報道的木聚糖酶基因序列，并在個別氨基酸組成上有差異，該重組酶的最適作用溫度和最適PH分別為60°C和7.0，在？!17.0、701保溫lh，相對酶活在65%以上，在pH9，溫度 60°C條件下lh，相對酶活在60%以上。本發明的木聚糖酶在高溫下有良好的穩定性，適合造紙、食品和飼料等多個工業領域的應用，具有廣闊的應用前景。


圖1為本發明的耐高溫中性木聚糖酶基因PCR擴增產物電泳圖(其中M為 DNAMarker 從上到下分子量分別為 IOOOObp、8000bp、6000bp、5000bp、4000bp、3500bp、 3000bp、2500bp、2000bp、1500bp、1000bp、750bp、500bp、250bp，1 為以坎皮納斯類芽孢桿菌基因組為模板經PCR擴增到的木聚糖酶基因XynGl-I)；圖2為本發明的耐高溫中性木聚糖酶基因XynGl-I與原核表達載體pET_22b (+) 連接構建流程圖；圖3為本發明以pET-2^ (+)空質粒作對照分別單、雙酶切驗證ρΕΤ-XynGl-l的電泳圖(其中M為DNAMarker從上到下分子量分別為IOOOObp、8000bp、6000bp、5000bp、 4000bp、3500bp、3000bp、2500bp、2000bp、1500bp、1000bp、750bp、500bp、250bp，1 和 2 分別為pET-22b (+)空質粒經Hindi II單切、Hindi 11/Xho I雙酶切的結果；3和4分別為 ρΕΤ-XynGl-l 經 HindIII 單切、Hindlll/Xhol 雙酶切的結果)；圖4-1與圖4-2為本發明以攜帶空質粒的出發菌E. coli BL21/pET_22b (+)為對照的基因工程菌E. coli BL21/pET-XynGl-l的平板篩選圖(圖4_1為未加IPTG的篩選平板；圖4-2為加有IPTG的篩選平板)；圖5本發明重組木聚糖酶最適作用溫度的測定曲線；圖6本發明重組木聚糖酶溫度穩定性的測定曲線；圖7本發明重組木聚糖酶最適作用PH的測定曲線；圖8本發明重組木聚糖酶pH穩定性的測定曲線。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明的技術內容做進一步說明；下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發明的保護范圍。一種耐高溫中性木聚糖酶基因，序列見序列1，本耐高溫中性木聚糖酶基因全長為1134bp，命名為XynGl-I，其編碼377個氨基酸，預測其分子量為4U67Da，其中前39個氨基酸為其信號肽，第49 235個氨基酸為糖苷水解酶GHll家族的保守序列，第263 377個氨基酸為碳水化合物結合組件CBM6家族的保守序列。經NCBI序列相似性比對，發現與已報道的木聚糖酶的氨基酸序列最高相似度為97%，有14個氨基酸的差異。一、耐高溫中性木聚糖酶基因的獲得1、篩選出一種產耐高溫中性木聚糖酶的菌株，經16s rDNA鑒定為坎皮納斯類芽孢桿菌Paenibacillus campinasensis,并命名為Paenibacillus campinasensis Gl-1 (TCCC 11578)，提取其基因組DNA，大約201Λρ，坎皮納斯類芽孢桿菌基因組DNA的提取步驟如下(1)將培養至對數期的菌液(約7 12h)取ImL, 12000r/min離心Imin收集菌體。(2)將菌體懸浮于90 μ L ddH20中，加50mg/mL溶菌酶10 μ L，充分混勻后37°C水浴保溫20min。(3)加入400 μ L裂解液混勻至產生大量泡沫，補加5mol/L NaCl 200 μ L，輕輕顛倒混勻，1200r/min 離心 IOmin0(4)上清轉移至另一 Ep管中，加1/2體積苯酚和1/2體積氯仿，溫和混勻。12000r/ min 離心 3min。(5)取上清，加入1/2體積的苯酚、氯仿反復抽提，離心，吸上清。重復此步驟直到兩相界面看不到白色物質為止。(6)加入等體積的氯仿進行抽提，離心，吸上清。(7)用兩倍體積的無水乙醇-70°C沉淀DNA大約30min，12000r/min離心8min， 200 μ L70%乙醇洗滌兩次，12000r/min離心5min，室溫晾干。(8) DNA溶于溶于20 μ LddH2O中_20°C短期保存。2、根據已報道木聚糖酶基因，分析其保守序列，設計本發明的耐高溫中性木聚糖酶基因的擴增引物如下上游引物為CCCAAGCTTATGAAAATCTATGGGAAGAGGAGGA下劃線為 Hind III 酶切位點；下游引物為:CCGCTCGAGTCACCGGATCTCCAAATAGTCAATG下劃線為 XhoI 酶切位點；擴增模板為坎皮納斯類芽孢桿菌基因組DNA，其擴增的反應條件為95°C 5min ； 94°C 45S，55°C 45S，72°C 90S, 30 個循環；72°C延長 lOmin。擴增體系(50μ L) ddH20 35. 5 μ L，10 X buffer 5 μ L, dNTPs (2. 5mmol/L each) 5 μ L,上游引物(10ymol/L)1.5yL,下游引物(10μ mol/L) 1. 5 μ L, DNA 模板 1 μ L， TaqDNA 聚合酶 0. 5 μ L ；PCR擴增產物經0. 8%的瓊脂糖凝膠電泳，得到1134bp的單一條帶(圖1)，用小量 DNA回收試劑盒回收PCR產物，得到本發明的耐高溫中性木聚糖酶全基因。二、耐高溫中性木聚糖酶基因工程菌的構建1、重組質粒ρΕΤ-XynGl-l的構建與鑒定(圖2)將PCR純化產物與載體pET-22b(+)經Hind III和XhoI雙酶切后，分別用小量DNA回收試劑盒回收酶切產物，應用DNA連接試劑盒的Solution I在16°C的條件下連接12h，將目的基因XynGl-I定向連接至載體pET_22b (+)，將連接產物應用化學轉化法轉化到E. coli DH5 α感受態細胞中，在含有Amp的LA培養基中篩選培養，挑取陽性轉化子，培養后提質粒， 用Hind III和XhoI雙位點單、雙酶切鑒定(圖3)，測序(序列1)。得到全長為1134bp的木聚糖酶基因，命名為XynGl-Ι，其編碼377個氨基酸，預測其分子量為4U67Da，其中前39 個氨基酸為其信號肽，第49 235個氨基酸為糖苷水解酶GHll家族的保守序列，第263 377個氨基酸為碳水化合物結合組件CBM6家族的保守序列。經NCBI序列相似性比對，發現與已報道的木聚糖酶的氨基酸序列最高相似度為97%，有14個氨基酸的差異。其中大腸桿菌化轉感受態細胞的制備方法(1)從大腸桿菌平板上挑取一個單菌落，接種于aiil LB培養基試管中，37°C 180r/ min搖床培養過夜。( 取500 μ 1菌液轉接到一個含有50ml LB培養基的250ml錐型瓶中，37°C 180r/ min搖床培養2 3h，(此時OD6tltlnm彡0. 4 0. 5，細胞數務必< 108/ml，此為實驗成功關鍵)(3)將菌液轉移到50ml離心管中，冰上放置IOmin。(4)4°C、4000r/min 離心 lOmin，回收菌體細胞。(5)倒出培養液，將管倒置lmin，以便液體培養基流盡。(6)用冰冷的0. ImoVLCaCl2溶液IOml懸浮沉淀，立即放在冰上保溫30min。(7) 4°C>4000r/min 離心 lOmin，回收菌體細胞。(8)用冰冷的0. ImoVLCaCl2和15%的甘油混合液2ml重懸細胞。(9)分裝細胞，每份50 μ 1，即得到感受態細胞。其中重組質粒ρΕΤ-XynGl-l化學轉化E. coli DH5 α感受態細胞的具體步驟為(1)加入5 μ 1質粒DNA連接產物于50 μ 1感受態中，充分混勻。(2)冰上放置 30min。C3)42°C水浴 90s。(4)冰上放置1 2min。(5)將感受態細胞加入800 μ ILB培養基中，搖床37°C，180r/min復蘇培養lh。(6)復蘇培養后，取菌液8000r/min離心2min，吸掉1/3上清液后，將菌體重懸，涂布于Amp抗性平板，37°C倒置培養12 16。2、大腸桿菌E. coli BL21 (DE3)基因工程菌的構建將測序正確的重組質粒載體ρΕΤ-XynGl-l應用化學轉化的方法轉化到E. coli BL2KDE3)感受態中(轉化方法同上)，挑取陽性轉化子，進行IPTG誘導表達。其中誘導表達的具體方法為將大腸桿菌工程菌株E. coli BL21 (pET-XynGl-l)接種于2mL含Amp的LB液體培養基中，37°C水浴振蕩培養過夜，按8%的接種量轉接于裝有5mL含Amp LB培養基的試管中，37°C水浴振蕩培養2 3h(0D_ = 0. 8 1. 0)，一組加入IPTG (終濃度為lmmol/L)， 37°C誘導表達3h，一組作為非誘導對照進行37°C培養。3、大腸桿菌E. coli BL21(DE3)基因工程菌的篩選由于該木聚糖酶基因的信號肽可以被E. coli BL2KDE3)宿主菌識別，所以帶有該木聚糖酶基因的工程菌可在同時含有IPTG和底物木聚糖的LA平板(Amp抗性)上生長并在菌體周圍形成透明圈，并且發現在不加IPTG的情況下，工程菌也能形成透明圈(圖4)，這是由于在LA培養基成分中含有少量的乳糖，它是IPTG的類似物，也可以起到一定程度的誘導作用，因此，可以直接用含有木聚糖底物的LA平板(Amp抗性)篩選攜帶有本發明木聚糖酶基因的E. coli BL21(DE3)基因工程菌。其中含有IPTG和底物木聚糖的LA平板(Amp抗性)配制方法如下IOOml LA 培養基+Ig 稻殼木聚糖+100 μ IAmp (50mg/ml)+20 μ IIPTG (20mg/ml)121 °C高壓滅菌20min，倒平板(5 6個)。三、重組木聚糖酶XynGl-I的純化及其酶學特性分析1、應用超聲破碎儀破碎菌體細胞，破碎后4°C 12000r/min離心IOmin取上清，即得到基因工程菌產耐高溫中性木聚糖酶的粗酶液，并采用DNS法測定其酶活。其中超聲破碎方法如下(1)將誘導培養后的菌液轉移至50ml離心管中。(2) 40C 5000r/min 離心 lOmin。(3)離心后，倒出上清液，加入IOml細胞裂解液(20mM Tris-HCl ρΗ7· 5與IOOmM NaCl的混合溶液)，用移液器將沉淀的細胞打散。(4)超聲破碎電壓50%，總時間30min，開5s，關9. 9s。其中木聚糖酶酶活測定方法為(DNS法):吸取0. ImL經適當稀釋的酶液到5mL具塞刻度試管中，再加入10g/L的木聚糖底物溶液0. lmL。蓋緊試管塞，50°C水浴恒溫反應lOmin，立即向試管中加入0. 6mLDNS試劑并混勻終止反應，然后在沸水中煮沸lOmin，冷卻后加水定容至5mL，充分搖勻。根據木糖標準曲線的回歸方程計算出反應體系的含糖量。試驗中對木聚糖酶活力單位的定義為lmL酶液每分鐘產生1 μ moL的還原糖(以木糖計)為一個活力單位，用U表示，U = NXR/10minX0. ImL式中N為酶液稀釋倍數；R為回歸方程計算出的木糖含量。2、對所得粗酶液應用鎳離子親和層析進行一步純化，得到純酶。其中具體純化方法如下超聲破碎得到粗酶液，加入10%的TX-100，終濃度為1%，12000rpm，離心20min，
取上清。取1ml beadS(Ni柱)于50ml離心管中，加入20ml裂解液洗脫，除去酒精，4°C， 5000rpm，離心15min，去除上清。將離好的上清(可溶蛋白)加入到beads中，混勻，冰上孵育池(增加特異性)，孵育前加IOmM咪唑。40C，2000rpm,離心 3min，用 20mM 咪唑洗 3 次，2000rpm，離心 3min，再用含 50mM 咪唑的 washing buffer 洗一次。洗脫250mM咪唑的洗脫液1. 5ml加入beads中，混勻，冰浴IOmin后，洗脫。用PD-IODesalting column去鹽，即得重組木聚糖酶XynGl-Ι的純蛋白。3、重組木聚糖酶XynGl-I酶學特性的測定
其中溫度對酶活力的影響1)該木聚糖酶最適作用溫度的測定在不同溫度(40°C、45°C、50°C、55°C、6(rC、 65°C、70°C、80°C )，pH7. 0條件下測定重組木聚糖酶的酶活力，單位為U/ml (圖5)。2)該木聚糖酶的溫度穩定性測定將重組木聚糖酶純酶液分別置于不同溫度 (30 V、40°C、50°C、60°C、70°C、80°C )、pH為7. 0的條件下，保溫Ih后，測定各自的殘余酶活力，將其中最高酶活力定為100% (圖6)。其中pH對酶活力的影響1)該木聚糖酶最適作用pH的測定:在不同？!1(5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0)，溫度為60°C的條件下測定重組木聚糖酶的酶活力，單位為U/ml (圖7)。2)該木聚糖酶的pH穩定性測定將重組木聚糖酶純酶液分別調至不同pH(5.0、 6.0,7.0,8.0,9.0,10. 0)、溫度60°C條件下，保溫Ih后，測定各自的殘余酶活力，將其中最高酶活力定為100% (圖8)。本發明的重組木聚糖酶最適作用溫度為60°C，在pH7. 0、70°C保溫lh，相對酶活在 65%以上，重組木聚糖酶最適作用pH為7. 0，在pH9、溫度60°C條件下Ih，相對酶活在60% 以上，本發明的重組木聚糖酶在以上特性上與原始菌產生的木聚糖酶基本一致，酶學特性未發生改變。
權利要求
1.一種耐高溫中性木聚糖酶基因，其特征在于基因序列見序列1。
2.根據權利要求1所述的耐高溫中性木聚糖酶基因，其特征在于所述耐高溫中性木聚糖酶基因全長為1134bp，命名為XynGl-Ι，其編碼377個氨基酸，其分子量為4U67Da，其中前39個氨基酸為其信號肽，第49 235個氨基酸為糖苷水解酶GHll家族的保守序列， 第263 377個氨基酸為碳水化合物結合組件CBM6家族的保守序列。
3.根據權利要求1所述的耐高溫中性木聚糖酶基因，其特征在于所述基因來源于坎皮納斯類芽孢桿菌。
4.一種攜帶權利要求1中所述的耐高溫中性木聚糖酶基因的菌株。
5.根據權利要求4所述的攜帶耐高溫中性木聚糖酶基因的菌株，其特征在于宿主菌為大腸桿菌E. coli BL21。
6.根據權利要求4或5所述的攜帶耐高溫中性木聚糖酶基因的菌株，其特征在于構建方法如下(1)根據已報道木聚糖酶基因，分析其保守序列，設計本發明的耐高溫中性木聚糖酶基因的擴增引物如下上游引物為序列2，下游引物為序列3 ；擴增模板為坎皮納斯類芽孢桿菌基因組DNA，其擴增的反應條件為95°C 5min； 94°C 45S，55°C 45S，72°C 90S, 30 個循環；72°C延長 lOmin，PCR擴增產物經0.8%的瓊脂糖凝膠電泳，得到1134bp的單一條帶，回收PCR產物，得到耐高溫中性木聚糖酶全基因；(2)重組質粒ρΕΤ-XynGl-l的構建與鑒定將PCR純化產物與載體pET-22b(+)經Hind III和)(hoI雙酶切后，分別回收酶切產物， 應用DNA連接試劑盒的Solution I在16°C的條件下連接12h，將目的基因XynGl-I定向連接至載體pET-22b(+)，將連接產物應用化學轉化法轉化到E.coli DH5a感受態細胞中，在含有Amp的LA培養基中篩選培養，挑取陽性轉化子，培養后提質粒，用Hind III和B10I雙位點單、雙酶切鑒定，測序；(3)大腸桿菌E.coliBL21基因工程菌的構建將測序正確的重組質粒ρΕΤ-XynGl-l應用化學轉化的方法轉化到E. coli BL21感受態細胞中，挑取陽性轉化子，進行IPTG誘導表達。
全文摘要
本發明涉及一種耐高溫中性木聚糖酶基因及含有該基因的工程菌，基因序列見序列1，基因全長為1134bp，命名為XynG1-1，其編碼377個氨基酸，其分子量為41267Da，其中前39個氨基酸為其信號肽，第49～235個氨基酸為糖苷水解酶GH11家族的保守序列，第263～377個氨基酸為碳水化合物結合組件CBM6家族的保守序列。本發明提供的工程菌發酵得到的重組酶的最適作用溫度和最適作用pH分別為60℃和7.0，在pH7.0、70℃保溫1h，相對酶活在65％以上，在pH9、溫度60℃條件下保溫1h，相對酶活在60％以上。本發明的木聚糖酶在高溫下有良好的穩定性，適合造紙、食品和飼料等多個工業領域的應用，具有廣闊的應用前景。
文檔編號C12R1/07GK102191260SQ20111009690
公開日2011年9月21日 申請日期2011年4月18日 優先權日2011年4月18日
發明者劉逸寒, 王建玲, 王春霞, 路福平, 鄭宏臣 申請人:天津科技大學