專利名稱：一種制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞的方法及裝置的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞的方法及裝置，屬于血液分離及其制品的制備技術領域。
背景技術：
目前，分離血漿和洗滌血細胞等過程均采用離心后虹吸或分漿夾擠壓去除上清液等方法，容易造成血細胞的污染和損失，所需設備和環境要求嚴格，不適合在醫院血庫內操作，用此方法制備的洗滌紅細胞成本高，保存期很短，制備冰凍解凍去甘油紅細胞需要反復的離心和洗滌處理過程，更容易受到污染，保存期更短，嚴重限制了洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞血液制品的臨床應用。

發明內容
本發明的目的在于提供一種制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞的方法，采用負壓抽濾方式，對血液進行抽濾分離和洗滌處理，克服了以往技術容易造成污染和紅細胞儲存期短的缺陷。
本發明的目的還在于提供一種用于制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞的裝置。
本發明的構思是這樣的。使用帶有過濾器的專用采血袋，在無菌情況下采集血液，將血漿袋和廢液袋置于負壓密封箱內，負壓密封箱與真空泵連接，使血漿袋和廢液袋內處于負壓狀態，對血液快速進行抽濾分離和洗滌，采血袋采用一次性無菌無熱源的塑料制品，密閉操作，時間短，可以減少血細胞的浪費和污染，所需設備和操作技術簡單，便于在血站和醫院血庫內進行，冰凍紅細胞在血站內直接超低溫冰凍，在醫院血庫中儲存或冰凍下運輸；冰凍紅細胞升溫速融后，洗滌、去甘油同樣在負壓下進行，洗滌后即可得到解凍去甘油紅細胞，灌注生理鹽水，即可輸血。
具體地，本發明的方法包括以下步驟(一)制備洗滌紅細胞和冰凍紅細胞(1)使用帶有過濾器的采血袋在無菌情況下采集血液；(2)將采血袋與帶有組合加液器的組合試劑袋連接，組合試劑袋位于采血袋的上方；(3)將血漿袋和廢液袋放入負壓密封箱內，關閉負壓密封箱，使血漿袋和廢液袋與采血袋的排液口相連接，負壓密封箱放在采血袋的下方，并與真空泵連接；(4)開啟真空泵，使負壓密封箱內呈負壓狀態；(5)血漿袋和廢液袋內呈負壓狀態下，向采血袋內依次加入相應試劑，對血液進行抽濾、洗滌和消毒，放出血漿和廢液，制得洗滌紅細胞；或在采血袋內加入甘油保存液，以備保存；(6)取下采血袋，將其在-80℃超低溫保存，即得冰凍紅細胞。
(二)制備解凍去甘油紅細胞(所用裝置與制備洗滌紅細胞相同)(1)取出裝有甘油保存液的采血袋，放入37℃恒溫水浴箱，使其融化；(2)連接好帶有組合加液器的組合試劑袋和負壓密封箱，組合試劑袋中分別裝有9％氯化鈉溶液、6％羥乙基淀粉溶液、0.9％氯化鈉溶液和含1％過氧化氫的無菌無熱源的生理鹽水，將廢液袋放入負壓密封箱內，關閉負壓密封箱，負壓密封箱的抽氣管與真空泵連接；(3)將組合試劑袋與裝有甘油保存液的采血袋進液口相連，使采血袋的排液口與放在負壓密封箱內的廢液袋的進液管連接；(4)開啟真空泵，使負壓密封箱內的廢液袋處于負壓狀態，先抽濾出甘油保存液，用9％氯化鈉溶液和6％羥乙基淀粉溶液洗滌第1次，再用6％羥乙基淀粉溶液和0.9％氯化鈉溶液洗滌第2次，洗滌完成后，直接灌注等量的含1％過氧化氫的無菌無熱源的生理鹽水，制得解凍去甘油紅細胞。
本發明的方法使用以下裝置完成。其結構中包括帶有組合加液器的組合試劑袋、底部帶有過濾器的采血袋，組合試劑袋在采血袋的上方，采血袋的下方為負壓密封箱，內裝血漿袋和廢液袋，負壓密封箱的抽氣管與真空泵相連，組合加液器的加液管分別與組合試劑袋、采血袋的進液口相連接，采血袋的排液口與負壓密封箱內的血漿袋和廢液袋的進液管連接。
上述裝置具有柜式結構，帶有組合加液器的組合試劑袋(瓶)掛在操作柜的最上層掛鉤上，靠重力作用對采血袋進行加液，與真空泵相連的負壓密封箱放在操作柜的最下層，采血袋的下方，開啟真空泵，使處于負壓密封箱內的血漿袋和廢液袋為負壓狀態，擰開組合加液器及采血袋的相應開關，可完成對血液的抽濾、洗滌和去甘油保存液的操作。
本發明取得的技術進步在于本方法及裝置能夠迅速分離血漿和血細胞，對血細胞進行洗滌處理，制備的血細胞懸液適合臨床上大部分病人直接應用；本發明可以專門制備去白細胞的紅細胞懸液，有利于推廣普及應用洗滌紅細胞尤其是冰凍解凍去甘油紅細胞；冰凍紅細胞在冰凍狀態下保存期限延長，可達10年，遠遠長于在4℃條件下，血細胞的21天或35天保存期；可以避免血資源的浪費；在血站超低溫冰柜中可以大量儲存或在冰凍狀態下運輸，有利于實現采供血的集中化管理，可以隔幾個月、一年甚至更長時間，血站按照預定的數量向醫院血庫運送一次血液制品；所用裝置結構簡單、適用，操作方便，便于在醫院血庫推廣應用。


圖1是用于本發明方法制備洗滌紅細胞的裝置示意圖。
圖2是用于本發明的方法制備解凍去甘油紅細胞的裝置示意圖。
圖3是過濾器的濾膜示意圖。
圖4是過濾器的濾芯及支架示意圖。
圖5是過濾器的密封圈示意圖。
圖6是過濾器的外架示意圖。
需要說明的是圖1和圖2所示的裝置結構是相同的，并無本質區別。
圖中各標號代表的含義如下1、操作柜 2、組合試劑袋掛鉤 3-1、3-2、3-3、3-4、組合試劑袋 4-1、4-2、4-3、4-4、4-5組合加液器 5、帶過濾器的采血袋 6、濾膜過濾器 7-1、采血袋進液口 7-2、7-3、7-4、采血袋排液口 8、8-1、8-2、血漿袋、廢液袋進液管 9、負壓密封箱 10、負壓密封箱上蓋 11、負壓密封箱排氣管 12、抽氣管13、真空泵 14-1、14-2、14-3、14-4、血漿袋、廢液袋。
具體實施例方式
以下參照附圖及實施例說明本發明。
實施例1本實施例參照附圖進行敘述。
如圖1所示，制備洗滌紅細胞的方法所用裝置，采血袋5的底部帶有濾膜過濾器6，由帶微孔的圓形濾膜、圓形密封圈、帶篩孔的濾芯以及圓形過濾器外架構成，帶微孔的濾膜放在帶篩孔的濾芯上面，由密封圈密封，上面加蓋過濾器外架，整個過濾器通過支架固定于采血袋的底部，帶篩孔的濾芯與采血袋的排液口連通并緊固連接，帶有組合加液器4-1、4-2、4-3、4-4的組合試劑袋3-1、3-2、3-3、3-4掛在操作柜1的最上層掛鉤2上，位于采血袋5的上方，靠重力作用對采血袋5進行加液，組合加液器為五通管架，其中帶有開關的管4-1、4-2、4-3、4-4分別與組合試劑袋連接，管4-5與采血袋5的進液口7-1連接，與真空泵13相連的負壓密封箱9放在操作柜的最下層，采血袋5的下方，內裝血漿袋和廢液袋14-l、14-2、14-3、14-4。制備洗滌紅細胞的操作過程為在采血前，采血袋5內首先根據采血量加入血液保養液，根據采血量選用400ml或200ml的采血袋，無菌操作采取所需的血量，自體儲血者則可以根據情況進行消毒處理；采血結束后把采血管分段熱合密封后預留出交叉配血用的血液，剪去多余的部分，制作洗滌紅細胞時可以做交叉配血用；如果制作冰凍紅細胞，只能預先留出一段空的采血管，把制備好的冰凍解凍去甘油紅細胞灌注其中，分段熱合密封，把血漿袋的導管灌注血漿，分段熱合密封，與冰凍紅細胞一起標記冰凍保存，交叉配血用。首先把血漿袋和廢液袋進液管的針頭、開關、導管、分別從負壓密封箱9的箱蓋10上穿出，引出箱外，蓋好上蓋10使之密封，使采血袋5過濾器6朝下掛在操作柜的掛鉤上，并與組合加液器相連，按照無菌操作的要求用75％酒精消毒后，把組合加液器的4-5針頭從頭部刺入采血袋5的進液管7-1中，把血漿袋和廢液袋的進液管8-1、8-2的兩個針頭分別從頭部刺入采血袋的兩個排液管7-3、7-4中，負壓密封箱9的抽氣管12與真空泵13連接，打開真空泵13的電源，開始抽氣，擰開血漿袋排液口的開關，抽濾血漿，抽濾結束后關閉，這一袋血漿可用來制作冰凍血漿用，充分利用血液資源，把血漿袋的導管灌注血漿，分段熱合密封，與冰凍紅細胞一起標記冰凍保存，交叉配血用；擰開組合加液袋的生理鹽水的加液管開關，向采血袋中加入生理鹽水，加滿后關閉，將采血袋輕輕顛倒混均，擰開廢液袋的開關，抽濾完畢后擰上，可反復執行這一過程直到洗凈為止，特殊情況下需要去除白細胞時可連接白細胞過濾器，過濾去除白細胞，也可以進行輔照處理，滅活白細胞，準備光敏消毒時，加入光敏劑后擰上其開關，光照進行消毒，消毒結束后把光敏劑抽濾入廢液袋中；擰開生理鹽水袋開關重復進行洗滌過程，直到洗凈為止，制備洗滌紅細胞時可以加入100ml或200ml生理鹽水或不含抗凝劑的紅細胞保養液；準備冰凍保存時，擰開組合試劑袋中的甘油保存液袋的開關，在30分鐘內緩慢加入甘油保存液，振蕩混均，室溫平衡30分鐘后，拔下組合加液器4-5和進液管8-1、8-2的兩個針頭，消毒后蓋上帽，關閉真空泵13的電源，可以在采血袋和過濾器中部熱合密封，防止污染，把血細胞和內有血漿的熱合密封的血漿袋導管直接置-80℃冰柜超低溫冰凍保存。
如圖2所示的制備解凍去甘油紅細胞的裝置圖，它與制備洗滌紅細胞的不同之處僅在于負壓密封箱內放置的均為廢液袋，采血袋5的排液管7-2與廢液袋的進液管8連接。首先，在融化紅細胞時先把所加用試劑，真空泵和負壓密封箱檢查無誤放在相應位置，負壓密封箱9的抽氣管12與真空泵13相連接，連接好電源，把負壓密封箱9內的廢液袋的針頭、開關、導管從負壓密封箱9的上蓋10中穿過，然后蓋好上蓋10，使其密封，把所加用試劑的組合試劑袋分別掛在操作柜1的組合試劑袋掛鉤2上，把針頭、開關、部分導管從加液器底板的開口引出到加液器下面；把裝有冰凍紅細胞的采血袋放入37℃恒溫水浴箱中速融，在10分鐘內融化，迅速把采血袋5掛在操作柜的掛鉤上，組合加液器的下方，消毒后無菌操作，把與廢液袋14-1、14-2、14-3、14-4相連的廢液袋進液管8的針頭與采血袋5的排液口7-2相連，把組合加液器管4-5與采血袋進液管7-1相連，開啟真空泵，擰開廢液袋的開關，抽濾出甘油保存液，擰上開關，重復上述的洗滌步驟，用9％氯化鈉溶液和6％羥乙基淀粉溶液洗滌第1次，再用6％羥乙基淀粉溶液和0.9％氯化鈉溶液洗滌第2次，洗滌完成后，采血量為200ml的灌注100ml生理鹽水，采血量為400ml的灌注200ml生理鹽水；融化后馬上輸血的紅細胞懸液可以在洗滌后直接灌注等量的含1％過氧化氫的無菌無熱源的生理鹽水，也可以用不含有抗凝劑的其它幾種紅細胞保存液保存紅細胞，制得解凍去甘油紅細胞。
權利要求
1.一種制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞的方法，其特征在于包括如下步驟(一)制備洗滌紅細胞和冰凍紅細胞(1)使用帶有過濾器的采血袋在無菌情況下采集血液；(2)將采血袋與帶有組合加液器的組合試劑袋連接，組合試劑袋位于采血袋的上方；(3)將血漿袋和廢液袋放入負壓密封箱內，關閉負壓密封箱，使血漿袋和廢液袋與采血袋的排液管相連接，負壓密封箱放在采血袋的下方，并與真空泵連接；(4)開啟真空泵，使負壓密封箱內呈負壓狀態；(5)血漿袋和廢液袋內呈負壓狀態下，向采血袋內依次加入相應試劑，對血液進行抽濾、洗滌和消毒，放出血漿和廢液，制得洗滌紅細胞；或在采血袋內加入甘油保存液，以備保存；(6)取下采血袋，將其在-80℃超低溫保存，即得冰凍紅細胞；(二)制備解凍去甘油紅細胞(1)取出裝有甘油保存液的采血袋，放入37℃恒溫水浴箱，使其融化；(2)連接好帶有組合加液器的組合試劑袋和負壓密封箱，組合試劑袋中分別裝有9％氯化鈉溶液、6％羥乙基淀粉溶液、0.9％氯化鈉溶液和含1％過氧化氫的無菌無熱源的生理鹽水，將廢液袋放入負壓密封箱內，關閉負壓密封箱，負壓密封箱的抽氣管與真空泵相連；(3)將組合試劑袋與裝有甘油保存液的采血袋進液口相連，使采血袋的排液口與放在負壓密封箱內的廢液袋連接；(4)開啟真空泵，使負壓密封箱內的廢液袋處于負壓狀態，先抽濾出甘油保護液，用9％氯化鈉溶液和6％羥乙基淀粉溶液洗滌第1次，再用6％羥乙基淀粉溶液和0.9％氯化鈉溶液洗滌第2次，洗滌完成后，直接灌注等量的含1％過氧化氫的無菌無熱源的生理鹽水，制得解凍去甘油紅細胞。
2.一種用于權利要求1所述的制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞方法的裝置，其特征在于結構中包括采血袋(5)，采血袋(5)的底部帶有過濾器(6)，在采血袋(5)的上方是組合試劑袋(3-1、3-2、3-3、3-4)，采血袋(5)的下方為負壓密封箱(9)，內裝血漿袋和廢液袋(14-1、14-2、14-3、14-4)，負壓密封箱(9)的抽氣管(12)與真空泵(13)相連，負壓密封箱(9)內的血漿袋和廢液袋(14-1、14-2、14-3、14-4)處于負壓狀態。
3.按權利要求2所述的用于制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞方法的裝置，其特征在于裝置具有柜式結構，組合試劑袋掛在操作柜(1)的最上層掛鉤(2)上，靠重力作用對采血袋(5)進行加液，負壓密封箱(9)位于操作柜的最下方。
4.按權利要求2或3所述的用于制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞方法的裝置，其特征在于所說的過濾器為濾膜過濾器，由帶有微孔的濾膜、密封圈、帶篩孔的濾芯以及過濾器外架構成，帶微孔的濾膜放在帶篩孔的濾芯上面，由密封圈密封，上面加蓋過濾器外架，通過支架固定在采血袋(5)的底部，濾芯和采血袋的排液口緊固相連。
全文摘要
本發明公開了一種制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞的方法及裝置。采用底部帶有過濾器的采血袋，將其掛在操作柜的掛鉤上，組合加液器操作時掛在操作柜的最上層掛鉤上，位于采血袋的上方，靠重力作用對采血袋進行加液，與真空泵相連的負壓密封箱放在操作柜的最下層，采血袋的下方，內裝血漿袋和廢液袋，密封箱與真空泵相連，使密封箱內為負壓狀態，開啟采血袋及組合時機袋的開關，對血液迅速進行抽濾分離血漿、血細胞、洗滌等處理，可以制備洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞。本發明解決了以往技術操作時因反復洗滌易造成污染和保存期短問題。有利于采供血的進一步集中化管理，適合在醫院血庫和血站應用。
文檔編號C12N5/08GK1590540SQ20041001230
公開日2005年3月9日 申請日期2004年5月24日 優先權日2004年5月24日
發明者喬澤江, 趙寶榮, 喬尊, 喬欣, 李智鑫, 陳紅, 胡曉靜, 張繼東 申請人:喬澤江