專利名稱：單堿基延伸信號鑒別方法
技術領域：
本發明涉及一種單堿基延伸信號鑒別方法。
單堿基延伸(SBE)常用于測定核酸中特定位置的堿基成分。在進行SBE反應中，SBE引物與靶核酸樣品雜交。在聚合酶和雙脫氧核苷酸的作用下，SBE引物的3’末端以靶分子為模板延伸一個堿基。當被延伸的堿基附帶著特異的標記分子時，與被延伸堿基互補的靶分子中的堿基成分可通過該特異性的標記分子的信號而推得。當把已知的SBE引物固定于固相物體上時，通過SBE反應后所得的信號可判斷靶樣品的存在與否及被測堿基的成分。但在許多情況下，SBE引物在未與靶分子雜交時也會以自身序列為模板進行延伸，因而產生假陽性反應。如SBE假陽性反應出現于遺傳診斷中，就有發生誤診的可能性。
本發明的目的是提供一種SBE信號鑒別方法，以便降低SBE反應的假陽性結果。
一種單堿基延伸信號鑒別方法，包括把靶分子與固定于固體表面的SBE引物雜交，并進行SBE反應，然后對SBE反應后所采到的信號進行分析，其特征是所述的靶分子帶有一種可識別的標記分子，SBE反應所用的雙脫氧核糖核苷酸帶有其他的標記分子，通過計算SBE反應所得的信號與同一位置中的靶分子中標記分子信號的比例，確定反應信號的真假。
本發明的優點是排除了假陽性反應，不會發生誤診。
下面通過實施例說明本發明。
把與地中海貧血癥相關的分子探針也即SBE引物由其5’端固定于玻片上，做成診斷地中海貧血癥的基因芯片。對病人進行診斷時，對病人的核酸樣品中的相關片段用聚合酶鏈反應(PCR)進行擴增，并用一種熒光分子進行末端標記，再使標記后的靶分子與芯片上的SBE引物進行雜交，進行SBE反應，所用的四種雙脫氧核糖核苷酸(ddATP，ddCTP，ddGTP，ddTTP)分別有不同于靶分子標記的熒光標記。反應完成后用緩沖液對芯片進行清洗，然后用激光掃描儀對芯片信號進行采集，計算SBE反應所得的信號與同一位置中的靶分子中標記分子信號的比例，具有靶分子信號的位點中的SBE信號為真信號(該比例在0.5-2的范圍內)。在沒有靶分子信號的位點上所采集的SBE信號為假信號。通過如上反應和分析，可對病人的基因型進行判斷。
權利要求
1.一種單堿基延伸信號鑒別方法，包括把靶分子與固定于固體表面的SBE引物雜交，并進行SBE反應，然后對SBE反應后所采到的信號進行分析，其特征是所述的靶分子帶有一種可識別的標記分子，SBE反應所用的雙脫氧核糖核苷酸帶有其他的標記分子，通過計算SBE反應所得的信號與同一位置中的靶分子中標記分子信號的比例，確定反應信號的真假。
全文摘要
一種單堿基延伸信號鑒別方法,包括把靶分子與固定于固體表面的SBE引物雜交,并進行SBE反應,然后對SBE反應后所采到的信號進行分析,其特征是所述的靶分子帶有一種可識別的標記分子,SBE反應所用的雙脫氧核糖核苷酸帶有其他的標記分子,通過計算SBE反應所得的信號與同一位置中的靶分子中標記分子信號的比例,確定反應信號的真假。本發明的優點是排除了假陽性反應,不會發生誤診。
文檔編號C12Q1/68GK1354261SQ0012934
公開日2002年6月19日 申請日期2000年11月22日 優先權日2000年11月22日
發明者吳昌, 吳明 申請人:吳昌, 吳明