一種利用魔芋復合寡糖誘導制備大豆抗毒素的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種利用魔芋復合寡糖誘導制備大豆抗毒素的方法，屬于抗毒素制備領域。
【背景技術】
[0002]寡糖，或稱低聚糖，是由2?10個相同或不同的單糖單位，通過糖苷鍵連接形成的直鏈或支鏈低度聚合糖。它的相對分子質量為200?2000 Da，可以分為功能性寡糖和普通寡糖兩大類。比如蔗糖、乳糖、麥芽糖等屬于普通寡糖，它們可被機體消化吸收;而果寡糖、木寡糖、甘露寡糖等則屬于功能性寡糖。人體胃腸道內沒有水解這些寡糖的酶系統，它們不被消化吸收而直接進入大腸內優先為雙歧桿菌所利用，是雙歧桿菌的增殖因子。因此，功能性寡糖是指具有特殊的生理學功能，特別是不被人和動物腸道吸收并能促進雙歧桿菌的增殖、有益于腸道健康的一類寡糖。
[0003]近年來，寡糖由于其功能的多樣性和獨特性，越來越引起人們重視并得到迅速發展，在食品、飼料、醫藥、農業等領域具有廣闊的應用前景。復合寡糖是指兩種或者多種不同的寡糖組合而成的寡糖。目前，常見的復合寡糖大多是由幾種寡糖復配而成，未見同時生產復合寡糖方面的公開報道。
[0004]大豆抗毒素是Keen等人在給大豆下胚軸接種大豆疫霉菌時發現并確認的具有抗菌活性的物質。大豆抗毒素是大豆中主要的植物抗毒素，當大豆在受到外源壓力刺激時會大量積累。大豆抗毒素是能夠與雌激素受體相結合的抗雌激素物質，進而抑制雌激素誘導的腫瘤進程。大豆抗毒素在治療婦女乳腺癌和子宮癌方面具有很好的療效。大豆抗毒素在調節血糖和血脂新陳代謝方面有顯著功效。
【發明內容】
[0005]本發明主要解決的技術問題:針對目前制備大豆抗毒素多是以硝酸銀作為誘導劑進行誘導制備，但其誘導過程中誘導溫度、濕度等條件比較苛刻，且大豆抗毒素的誘導產率低，誘導時間長導致大豆腐爛的問題，提供了一種利用魔芋復合寡糖作誘導劑，制備大豆抗毒素的方法，該方法以預處理后的魔芋為原材料，用復合酶進行酶解，酶解物經高速離心后收集上清液濃縮得復合寡糖，并以寡糖作誘導劑，制備得到大豆抗毒素，本發明提供的制備方法，反應條件溫和，大豆抗毒素產率高，誘導時間短，有效避免了大豆腐爛問題，降低生產成本。
[0006]為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是:
(1)取1?2kg新鮮魔芋洗凈，去皮，用刀切成1X 1 X 1cm的小塊，放入氣流粉碎機進行粉碎，按固液比為1: 1000將魔芋碎片和蒸餾水進行混合，放入高剪切混合乳化機中，以7000?8000r/min的轉速剪切乳化3?5次，每次剪切5?15min;
(2)再將剪切后的魔芋放入超高壓均質機，先在150?200MPa下均質5?lOmin，再于450?550MPa下均質處理2?3次，每次均質10?20min，用紗布過濾得到濾渣，放入恒溫干燥器中以60?80°C的溫度干燥1?2h，得魔芋粗粉；
(3)稱取50?100g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷發酵罐中，加入700?800mL蒸餾水，用質量濃度為9%的鹽酸溶液調節pH至3?4，加入5?8g復合酶，用玻璃棒攪拌均勻后，用保鮮膜密封罐口，放置在恒溫箱中，在40?50°C下酶解反應6?8h;
(4)將酶解產物移入沸水浴中，在95?100°C下滅活5?15min，再放入臥式離心機，以3000?5000r/min的轉速離心30?50min，分離得到上清液，將其放入濃縮罐，減壓至1200?1400Pa濃縮處理10?20min，得到的濃縮液即復合寡糖溶液；
(5)稱取50?60g大豆，浸入200?300mL質量濃度為80%的乙醇溶液中滅菌5?7min，將滅菌后大豆放入1L燒杯中，加入500?600mL無菌水浸泡大豆4?6h，使大豆充分溶脹，將溶脹后的大豆分成兩片子葉，向每片子葉上滴加0.5?0.6mL上述制得的復合寡糖溶液，放入十旦溫培養箱中，在25?35°C下誘導培養5?7天；
(6)將誘導培養后的大豆倒入研缽研磨后，按固液比為1:3將其和質量濃度為80%的乙醇溶液混合均勾，放置在超聲振蕩儀中，升溫至50?60°C，超聲提取1?2h后，移入高速離心機，以11000?13000r/min的轉速離心10?20min，分離得到上清液經濃縮后即為大豆抗毒素濃縮液。
[0007]所述的復合酶為β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中兩者質量比為3:2。
[0008]本發明的具體實施步驟:將大豆消毒后倒入無菌水浸泡直至大豆溶脹，將其分開成兩片子葉，之后在每片子葉上滴加適量復合寡糖，恒溫誘導后超聲振蕩醇提，濃縮制得大豆抗毒素，本發明的制備方法，誘導時間短比硝酸銀誘導時間縮短20?30%，大豆抗毒素的產率提升15?25%，有效避免了因誘導時間長引起的大豆腐爛問題。
[0009]本發明的有益效果:本發明制備大豆抗毒素的方法，誘導時間短，誘導產率高，反應條件溫和，提高了生產效率。
【具體實施方式】
[0010]取1?2kg新鮮魔芋洗凈，去皮，用刀切成1X 1 X 1cm的小塊，放入氣流粉碎機進行粉碎，按固液比為1: 1000將魔芋碎片和蒸餾水進行混合，放入高剪切混合乳化機中，以7000?8000r/min的轉速剪切乳化3?5次，每次剪切5?15min;再將剪切后的魔芋放入超高壓均質機，先在150?200MPa下均質5?lOmin，再于450?550MPa下均質處理2?3次，每次均質10?20min，用紗布過濾得到濾渣，放入恒溫干燥器中以60?80°C的溫度干燥1?2h，得魔芋粗粉;稱取50?100g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷發酵罐中，加入700?800mL蒸餾水，用質量濃度為9%的鹽酸溶液調節pH至3?4，加入5?8g復合酶，用玻璃棒攪拌均勻后，用保鮮膜密封罐口，放置在恒溫箱中，在40?50°C下酶解反應6?8h;將酶解產物移入沸水浴中，在95?100°C下滅活5?15min，再放入臥式離心機，以3000?5000r/min的轉速離心30?50min，分離得到上清液，將其放入濃縮罐，減壓至1200?1400Pa濃縮處理10?20min，得到的濃縮液即復合寡糖溶液;稱取50?60g大豆，浸入200?300mL質量濃度為80%的乙醇溶液中滅菌5?7min，將滅菌后大豆放入1L燒杯中，加入500?600mL無菌水浸泡大豆4?6h，使大豆充分溶脹，將溶脹后的大豆分成兩片子葉，向每片子葉上滴加0.5?0.6mL上述制得的復合寡糖溶液，放入恒溫培養箱中，在25?35°C下誘導培養5?7天;將誘導培養后的大豆倒入研缽研磨后，按固液比為1:3將其和質量濃度為80%的乙醇溶液混合均勻，放置在超聲振蕩儀中，升溫至50?60°C，超聲提取1?2h后，移入高速離心機，以11000?13000r/min的轉速離心10?20min，分離得到上清液經濃縮后即為大豆抗毒素濃縮液。
[0011]所述的復合酶為β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中兩者質量比為3:2。
[0012]實例1
取lkg新鮮魔芋洗凈，去皮，用刀切成1 X 1 X 1cm的小塊，放入氣流粉碎機進行粉碎，按固液比為1: 1000將魔芋碎片和蒸餾水進行混合，放入高剪切混合乳化機中，以7000r/min的轉速剪切乳化3次，每次剪切5min;再將剪切后的魔芋放入超高壓均質機，先在150MPa下均質5min，再于450MPa下均質處理2次，每次均質lOmin，用紗布過濾得到濾渣，放入恒溫干燥器中以60°C的溫度干燥lh，得魔芋粗粉;稱取50g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷發酵罐中，加入700mL蒸餾水，用質量濃度為9%的鹽酸溶液調節pH至3，加入5g復合酶，用玻璃棒攪拌均勻后，用保鮮膜密封罐口，放置在恒溫箱中，在40°C下酶解反應6h;將酶解產物移入沸水浴中，在95°C下滅活5min，再放入臥式離心機，以3000r/min的轉速離心30min，分離得到上清液，將其放入濃縮罐，減壓至1200Pa濃縮處理lOmin，得到的濃縮液即復合寡糖溶液;稱取50g大豆，浸入200mL質量濃度為80%的乙醇溶液中滅菌5min，將滅菌后大豆放入1L燒杯中，加入500mL無菌水浸泡大豆4h，使大豆充