白芨開放式組培育苗方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于植物組培繁殖技術，尤其是一種白芨開放式組培育苗方法。
【背景技術】
[0002]白芨是蘭科白芨屬植物白芨BletiIlastriata (Thunb)Reichb.f的塊莖，性味苦甘涼，有較好的補肺止血、消腫生肌作用，被廣泛用來治療多種疾患。野生白芨經過多年人工采挖，幾乎已絕跡，為了滿足醫藥需求，人們施行了人工種植，通常是將其塊莖切成帶芽眼的小塊后在地上栽種，費工耗時、效率低下，為了提高種苗的繁殖率，人們又嘗試以組織培養技術來培育白芨種苗，如發表在《西南農業學報》2009年22卷第3期上的“白芨組培快繁育苗技術研宄”公開的技術就是其中的一種，它比傳統的塊莖分切育苗法大大進了一步，省工、省種、育苗率高，但在農村邊遠基層的實踐中亦發現一些不足:該法育白芨其技術工藝流程較為復雜，技術要求較高，操作人員必須具備較高的專業素質，而且要求無菌操作，其設備如高壓滅火菌器，專用組培瓶等投資較大，增加了種苗生產成本。

【發明內容】

[0003]針對上面提到的現有技術中的不足，本發明的目的就在于提供一種開放式非無菌條件下白芨組培育苗的方法，以降低成本、簡便操作、提高效益。
[0004]本發明通過如下技術方案實現:
一種白芨開放式組培育苗方法，包括配制抑菌培養基、培養容器消毒、培養基分裝和分段接種培育步驟，所述的抑菌培養基為誘導培養基、增殖培養基和壯苗生根培養基；白芨種子在開放非無菌條件下組培育苗，所用抑菌培養基不經高壓滅菌，煮沸后就直接分裝到聚乙烯塑料杯，涼置后在開放非無菌條件下接種培育；
抑菌培養基的三種配方按質量比例分別是:
(1)誘導培養基:1/ 2MS+6-BA1.0mg / L +白糖25g / L+活性炭0.1g / L+瓊脂粉4g / L+ 凱松 0.8—3.5% + 尼泊金脂鈉 0.5— 1.5%。；
(2)增殖培養基:1/ 2MS+6-BA1.0mg / L+NAA0.2mg / L+ 白糖 25g / L+活性炭 0.1g /L+瓊脂粉4g / L+凱松0.8一3.5%o +尼泊金脂納0.5一 1.5%。；
(3)壯苗生根培養基:1/ 2MS+NAA0.4mg / L+香蕉泥50g / L+白糖30g / L+活性炭
0.1g / L+ 瓊脂粉 4.1g / L+ 凱松 0.8—3.5%。+ 尼泊金脂鈉 0.5 — 1.5%。；
所述的凱松與尼泊金脂鈉配制構成抑菌混合液；
所述三種抑菌培養基的配制步驟為:
以I / 2MS為基本培養基，再按配方添加配比物及抑菌混合液，調整pH值至5.6—5.8，然后持續煮沸15分鐘后分裝。
[0005]優選的是，采用84消毒液1000 mg / L對培養杯，培養室進行消毒；用70 %酒精對接種室和操作臺面噴霧降塵消毒；
優選的是，開放非無菌條件下接種培育包括在經消毒、相應潔凈的操作環境下，將不同階段的培養物轉接到分裝的匹配培養基中；培養室溫控制在25±2°C ;光照控制在800—2000LX ；
優選的是，香蕉泥須先加熱煮沸后再加入。
[0006]采用這種方法培育白芨苗，有效地克服了現有技術中的不足問題，減少了高壓滅菌、無菌室及專用培養容器等設備投資，操作較為簡便，降低了育苗成本，提高了經濟效益。
[0007]【具體實施方式】:
實施例:
以I / 2MS為基本培養基，加入6—芐基氨基嘌呤(6—BA) Img / L、白糖25g / L、活性炭0.1g / L和瓊脂粉4g / L共同配制成營養液，再加入凱松3.5%。與尼泊金脂鈉1%。配制的抑菌混合液，并調整PH值為5.6，加熱煮沸后持續15分鐘，分裝到一次性聚乙烯塑料杯，涼置至第二天作為誘導培養基接種白芨果英種子；以I / 2MS為基本培養基，加入6—BAlmg / L、萘乙酸(NAA)0.2mg / L、白糖25g / L、活性炭0.1g / L和瓊脂粉4g / L組成營養液，再加入凱松2%。與尼泊金脂鈉1.2%。配制的抑菌混合液，調整pH值為5.6，持續煮沸15分鐘，分裝到一次性聚乙烯塑料杯，涼置至第二天作為增殖培養基轉移接種2cm高的白芨小苗；以I / 2MS為基本培養基，加入NAA0.4mg / L、白糖30g / L、活性炭0.1g / L、瓊脂粉4.1g / L以及經過煮沸的香蕉泥50g / L，配成營養液，再加入凱松1.5%。與尼泊金脂鈉1.3%。配制的抑菌混合液后調整pH值達5.8，持續煮沸15分鐘，分裝到一次性聚乙烯塑料杯，涼置至第二天作為壯苗生根培養基轉移接種3cm高的白芨小苗。
[0008]消毒:用70%酒精噴霧降塵對培養基分裝室消毒5分鐘后方可分裝；對接種消毒室消毒10分鐘后方可進行接種操作；用84消毒液倒入培養塑料杯適量，蓋上杯蓋搖晃3—5秒靜置5分鐘倒出消毒液后備用；培養室無需消毒，保持相對潔靜即可。
[0009]接種操作:接種室消毒處理后，用70%酒精棉球擦試接種工具，然后浸泡95%酒精中備用；白芨蒴果莢用70%酒精棉球擦試后，從中部剖開讓其中的種子插于備用的誘導培養基中；增殖和生根轉接，則用70%酒精棉球擦試母瓶后將叢生芽轉接到備用的增殖培養基或將小苗轉接到生根培養基上。
[0010]室內培養:保持培養室內相對潔凈，室溫控制在25±2°C，光照強度控制在800—2000 LX0
【主權項】
1.一種白芨開放式組培育苗方法，其特征在于包括配制抑菌培養基、培養容器消毒、培養基分裝和分段接種培育步驟，所述的抑菌培養基為誘導培養基、增殖培養基和壯苗生根培養基；白芨種子在開放非無菌條件下組培育苗，所用抑菌培養基不經高壓滅菌，煮沸后就直接分裝到聚乙烯塑料杯，涼置后在開放非無菌條件下接種培育； 抑菌培養基的三種配方按質量比例分別是: (1)誘導培養基:1/ 2MS+6-BA1.0mg / L +白糖25g / L+活性炭0.1g / L+瓊脂粉4g / L+ 凱松 0.8—3.5% + 尼泊金脂鈉 0.5— 1.5%。； (2)增殖培養基:1/ 2MS+6-BA1.0mg / L+NAA0.2mg / L+ 白糖 25g / L+活性炭 0.1g /L+瓊脂粉4g / L+凱松0.8一3.5%o +尼泊金脂納0.5一 1.5%。； (3)壯苗生根培養基:1/ 2MS+NAA0.4mg / L+香蕉泥50g / L+白糖30g / L+活性炭0.1g / L+ 瓊脂粉 4.1g / L+ 凱松 0.8—3.5%。+ 尼泊金脂鈉 0.5 — 1.5%。； 所述的凱松與尼泊金脂鈉構成抑菌混合液； 所述三種抑菌培養基的配制步驟為: 以I / 2MS為基本培養基，再按配方添加配比物及抑菌混合液，調整pH值至5.6—5.8，然后持續煮沸15分鐘后分裝。
2.如權利要求1所述的白芨開放式組培育苗法，其特征是所述的采用84消毒液1000mg / L對培養杯和培養室進行行消毒；采用70%酒精對接種室和操作臺面噴霧降塵消毒。
3.如權利要求1所述的白芨開放式組培育苗法，其特征是所述的開放非無菌條件下接種培育，是經消毒相應潔凈的操作環境下將不同階段的培養物轉接到分裝的匹配培養基中；培養室溫控制在25±2°C ;控制光照800— 2000LX。
4.如權利要求1所述的白芨開放式組培育苗法，其特征是所述的香蕉泥須先加熱煮沸后再加入。
【專利摘要】本發明公開一種白芨開放式組培育苗方法，包括配制抑菌培養基、培養容器消毒、培養基分裝和分段接種培育步驟，所述的抑菌培養基為誘導培養基、增殖培養基和壯苗生根培養基；白芨種子在開放非無菌條件下組培育苗，所用抑菌培養基不經高壓滅菌，煮沸后就直接分裝到聚乙烯塑料杯，涼置后在開放非無菌條件下接種培育；本發明設備投資少、操作簡便、成本低、效益高，是一種很經濟實用的白芨育苗技術。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104770293
【申請號】CN201510151118
【發明人】張子國, 趙菊潤, 尹卓平
【申請人】張子國
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年4月1日