一種用精胺誘導甘蔗胚狀體的方法
【專利摘要】一種用精胺誘導甘蔗胚狀體的方法，以甘蔗幼葉切片作外植體，接種到MS精胺Spm.2.5mg·L-1、pH 5.8-6.0的固體培養基，培養20d誘導并獲得甘蔗愈傷組織團塊；在不做任何變動的情況下，再繼續培養15d和20d，陸續有形態各異的胚狀體發生；或者將上述已培養20d并誘導出愈傷組織的團塊轉移到新鮮的原培養基再培養10d和15d，即有大量胚狀體發生。本發明用于甘蔗胚狀體的誘導速度快，效率高，品質好；所得胚狀體容易繼續再分化出根、葉器官和完整再生植株，總體效果既優于用2,4-D誘導甘蔗胚狀體的傳統技術，也優于用LFS誘導甘蔗胚狀體的新技術，生產成本更低。
【專利說明】一種用精胺誘導甘蔗胚狀體的方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬植物生物技術的組織培養【技術領域】，尤其是一種用精胺誘導甘蔗胚狀體 的方法。 技術背景
[0002] "胚狀體"是由愈傷組織中的部分薄壁細胞不經過有性生殖過程，直接再分化形成 具有胚的功能的結構，也叫做"體細胞胚"或"體胚"，以區別于"合子胚"。"胚狀體"在生產 上可以直接用于制造人工種子和生產再生植株（試管苗）；在理論研究上，是探索細胞分 化、器官建成、個體發育，及其相關的解剖學和生理生化變化過程的重要材料。因此，如何 獲得胚狀體是植物學界關心的熱門【技術領域】之一。對于甘蔗胚狀體的研究已有一些報導， 但是誘導劑都是使用2, 4-D(2, 4-二氯苯氧乙酸），在獲得愈傷組織之后，再轉移到較低濃 度2, 4-D、甚至不含2, 4-D的培養基中，以減少2, 4-D對培養材料的毒害導致胚狀體誘導的 失敗。即使如此，誘導率也僅有10%左右【甘蔗體細胞培養中的胚狀體發生[J].植物生理 學報曾吉恕1979,5(4) :411-416】；【甘蔗幼葉切段培養中的體細胞胚胎發生[J]廣西植物 李春瑤等，1989, 9(3) :243-246】。還有人再復配6-BA(N6-芐基腺嘌呤）、NAA(萘乙酸）或 乳蛋白，把誘導率提高到30%-50%【激素對甘蔗心葉胚狀體發生的影響[J]吉林師范大 學學報（自然科學版）孫穎2004,8(3) :93-94】。李松和許鴻源等曾用LFS(靈發素，代號 PGR-08)把甘蔗胚狀體的誘導率提高到90%以上【一種用靈發素誘導甘蔗胚狀體的方法中 國專利ZL201010216154. 6】。遺憾的是，靈發素在國內沒有廠家生產，進口價格十分昂貴，導 致應用受到極大限制。精胺（Spermine,，Spm.)是多胺的一種，普遍存在于高等植物界，是 純天然的植物生長調節物質【多胺是植物生長發育的調節物[J]植物生理學通訊，潘瑞熾 1985(6) :63-68】，而且價格低廉，易于在科學研究和規模化生產中推廣應用。人們對其促進 植物生長、延緩衰老、增強抗逆能力，等生理活性的研究，已經有不少報導。但是，還未能檢 索到精胺用于誘導甘蔗胚狀體的研究資料。


【發明內容】

[0003] 本發明要解決的技術問題是提供一種用精胺誘導甘蔗胚狀體的方法。
[0004] 本發明以如下技術方案解決上述技術問題：
[0005] -種用精胺誘導甘蔗胚狀體的方法，包括如下步驟：
[0006] 以常規方法獲得的甘蔗幼葉切片作外植體，常規消毒后，接種到MS+精胺 (Spm.) 2. 5mg ? I71 (該濃度為優選后的適宜濃度），pH 5. 8-6. 0的固體培養基，在常規培養 條件下培養20d誘導并獲得甘蔗愈傷組織團塊。
[0007] 將上述愈傷組織團塊在不做任何變動的情況下，再繼續培養15d和20d，總計培養 時間分別達到35d和40d。陸續有形態各異的胚狀體發生。
[0008] 或者將上述已經培養20d并誘導出愈傷組織的團塊小心轉移到新鮮的原培養基， 盡量避免傷損培養物，每瓶4-5團培養物，每批試驗不少于6瓶。在常規培養條件下再培養 IOd和15d，總計培養時間分別達到30d和35d。即有大量胚狀體發生。胚狀體的發生速度 更快，總數更多。
[0009] 本發明的突出優點是：
[0010] 本發明用于甘蔗胚狀體的誘導，速度快，效率高，品質好。所得胚狀體容易繼續再 分化出根、葉器官和完整再生植株，總體效果既優于用2, 4-D誘導甘蔗胚狀體的傳統技術， 也優于用LFS誘導甘蔗胚狀體的新技術，生產成本更低。

【具體實施方式】
[0011] 以下通過實施案例對本發明的技術方案作進一步說明。
[0012] 本發明所述用精胺誘導甘蔗胚狀體的方法包括以下步驟：
[0013] 依常規方法剝取甘蔗末梢靠內部的蛋黃色幼葉，分切成大約0. 5cmX0. 5cm的切 片，接種到含有Spm. 2. 5mg噸41 (該濃度為優選后的適宜濃度）的改良型MS固體培養基中， 每批試驗不少于10瓶，每瓶4-5片。在常規培養條件下培養20d誘導并獲得甘蔗愈傷組織 團塊。在不做任何變動的情況下，繼續培養15d和20d，總計培養時間分別達到35d和40d。 陸續有形態各異的胚狀體發生。
[0014] 或者將上述已經培養20d并誘導出愈傷組織的團塊小心轉移到新鮮的原培養基， 盡量避免傷損培養物，每瓶4-5團培養物，每批試驗不少于6瓶。在常規培養條件下再培養 IOd和15d，總計培養時間分別達到30d和35d，即有大量胚狀體發生，胚狀體的發生速度更 快，效率更高，成本更低。
[0015] 在附表中，例1-4為在MS+Spm. 2. 5mg ? I71培養基上，不同培養時間和2種不同培 養程序，對誘導甘蔗胚狀體的結果。各案例所用外植體材料、培養基及培養條件皆相同。 [0016]表1.用精胺誘導甘蔗胚狀體的實施案例
[0017]

【權利要求】
1. 一種用精胺誘導甘蔗胚狀體的方法，其特征是其步驟為： ⑴以常規方法獲得的甘蔗幼葉切片作外植體，常規消毒后，接種到MS+精胺 Spm. 2. 5mg ? L'pH 5. 8-6. 0的固體培養基，在常規培養條件下培養20d誘導并獲得甘蔗愈 傷組織團塊； ⑵將上述愈傷組織團塊在不做任何變動的情況下，再繼續培養15d和20d，總計培養時 間分別達到35d和40d，陸續有形態各異的胚狀體發生； 或者將上述已經培養20d并誘導出愈傷組織的團塊小心轉移到新鮮的原培養基，盡量 避免傷損培養物，每瓶4-5團培養物，每批試驗不少于6瓶；在常規培養條件下再培養10d 和15d，總計培養時間分別達到30d和35d ;即有大量胚狀體發生；胚狀體的發生速度更快， 總數更多。
【文檔編號】A01H4/00GK104351058SQ201410679435
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月24日 優先權日:2014年11月24日
【發明者】許鴻源, 周鳳玨, 藍桃菊, 龔銀花, 梁瓊月, 許皓翔 申請人:廣西大學