用于心型脂肪酸結合蛋白檢測的試紙條的制作方法
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及臨床免疫檢測裝置領域，具體涉及一種用于心型脂肪酸結合蛋白檢測的試紙條。
【背景技術】
[0002]心型脂肪酸結合蛋白是一種對心肌損傷的早期診斷極其有用的生物標志物。心肌細胞損傷后I小時之內就能夠快速釋放至血液中。心型脂肪酸結合蛋白的檢測對于急性冠脈綜合癥等疾病的診斷具有重要的臨床價值。
[0003]量子點尺寸介于幾個nm至幾十nm之間。它通常是由無機核以及包覆在核表面的有機分子所構成。對于量子點來說，當其尺寸達到一定的臨界值時，材料的行為將呈現出量子特性，材料的結構和性質也將會發生從宏觀到微觀的改變。量子點的發光原理在于，當量子點的尺寸小到一定值時，由于受到量子尺寸效應的影響，原來連續的能級結構變成類似原子的不連續結構。當光照射到量子點上時，量子點吸收光子，價帶上的電子吸收能量后受到激發，躍迀至導帶，而在價帶上則會產生與被激發電子對應的空穴，躍迀到導帶上的電子可以再以輻射躍迀的方式重新回到價帶，與價帶上的空穴復合并發射出光子。
[0004]量子點檢測表現出很高的檢測靈敏度，特別是適用于低濃度水平(如pg/ml-ng/ml)待檢物含量的準確測定，但是其檢測的線性范圍不夠寬，在相同的一套檢測體系范圍內，無法實現高值樣品的準確定量。因此，單獨使用量子點時，無法兼顧到低端的檢測靈敏度以及寬線性范圍。
[0005]通過聯合應用其他與量子點具有相似的激發波長和發射波長的熒光元素或者熒光材料，將有望獲得更寬的線性范圍，并且可以實現在同一套熒光檢測系統中進行熒光信號結果的讀取，也更有利于在臨床的推廣及應用。
【實用新型內容】
[0006]摶術問題
[0007]心型脂肪酸結合蛋白的臨床檢測需要滿足高靈敏度和便捷快速的要求。因此，需要開發一種結構簡單且能夠快速精確測定心型脂肪酸結合蛋白的試紙條。
[0008]技術方案
[0009]一方面，本實用新型提供了一種用于心型脂肪酸結合蛋白檢測的試紙條，其特征在于，所述試紙條包括:
[0010]i)底板，和
[0011]ii)在所述底板上依次搭接粘貼以下組件:
[0012]i1-Ι)用于接收樣品并同時包被有由量子點和稀土熒光材料分別單獨標記的抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體的樣品結合層，其中所述量子點為微球形式且具有2nm-30nm的粒徑，
[0013]i1-2)具有相互間隔的檢測帶和質控帶的檢測層，其中所述檢測帶上固定有抗心型脂肪酸結合蛋白第二抗體，所述質控帶固定有抗鼠IgG的抗體，和
[0014]i1-3)吸水層。
[0015]在一個實施方式中，所述抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體和第二抗體識別心型脂肪酸結合蛋白的不同表位。
[0016]在一個實施方式中，所述樣品結合層上進一步包被有微球，其中所述微球負載有所述稀土熒光材料和所述第一抗體。
[0017]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為50nm_400nm。
[0018]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為100nm-300nm。
[0019]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為10nm或300nm。
[0020]在一個實施方式中，所述檢測帶和所述質控帶之間的間隔在0.3cm-0.5cm之間。
[0021]在一個實施方式中，所述試紙條的長度在8cm至1cm之間。
[0022]在一個實施方式中，所述試紙條的寬度在0.2cm至0.5cm之間。
[0023]有益效果
[0024]在本實用新型的試紙條中，樣品層和結合層合二為一的設計使得試紙條結構更加簡單。試劑條檢測更為方便和廉價，有利于臨床應用。而且，聯合使用量子點和稀土熒光材料的設計能夠同時滿足檢測中對高靈敏度和寬檢測線性范圍的要求。
【附圖說明】
[0025]圖1本實用新型的試紙條的側視示意圖。
[0026]圖2本實用新型的試紙條的俯視示意圖。
[0027]附圖標記:1_樣品結合層、2-檢測層、3-吸水層、4-底板、5-量子點標記的抗體、6-稀土熒光材料標記的抗體、7-檢測帶、和8-質控帶。
【具體實施方式】
[0028]下文中將參照附圖來更詳細地描述示例性實施方式。所述附圖用于圖示說明本實用新型，而非對其進行限制。
[0029]圖1是本實用新型的試紙條的側視示意圖。
[0030]如圖1所示，本實用新型的試紙條包括底板4和在底板4上依次搭接粘貼的樣品結合層1、檢測層2和吸水層3。
[0031]樣品結合層I可同時起到接收和結合樣品的作用。本實用新型的試紙條所適合檢測的樣品包括但不限于血清、血漿、尿液。本實用新型試紙條通過采用將樣品層和結合層一體化的設計，大大簡化了生產工藝及流程。在一個實施方式中，樣品結合層I由玻璃纖維素膜或者聚酯膜制備。
[0032]樣品結合層I上具有特異性結合樣品中心型脂肪酸結合蛋白的抗體，所述抗體分別被量子點和稀土熒光材料分別獨立標記(圖1示為量子點標記抗體5和稀土熒光材料標記抗體6) ο
[0033]在本實用新型中，術語“標記”包括采用化學或物理方法使抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體與量子點和稀土熒光材料直接連接。然而，標記也可以通過其它方式完成，例如稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體可通過例如同時包埋或負載在微球上的方式達到“標記”的目的。因此，在一個實施方式中，樣品結合層I上可進一步具有微球(未示出)，所述微球上同時包埋或負載有稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體。在一個實施方式中，包埋或負載在所述微球上的稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體之間可以具有化學連接，例如以稀土熒光材料標記的抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體的形式存在于所述微球上。在另一個實施方式中，包埋或負載在所述微球上的稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體之間可以不具有化學連接，即所述微球上包埋或負載有彼此間無化學連接的稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體。
[0034]在一個實施方式中，所述微球可以為聚合物微球，例如聚苯乙稀微球。在一個實施方式中，微球的粒徑大小范圍在50nm-400nm之間，優選在100nm-300nm之間，更優選為10nm 或 300nm。
[0035]制備稀土熒光微球的方法是現有技術已知的，包括但不限于:包埋法，即在聚合物微球的聚合反應過程中加入稀土材料配合物；鍵合法，即使稀土元素離子與聚合物側鏈上的官能團發生配位反應得到稀土熒光微球；以及溶脹法和包覆法。后兩種方法均是在單分散的微球(如:聚苯乙烯微球)的基礎上，將稀土材料配合物滲透或包覆在微球的內部或表面，通過控制反應條件，可實現最終制備出單分散性好、熒光強度高、熒光穩定性好的聚合物微球。
[0036]在一個實施方式中，所述量子點為I1-VI族量子點(如CdTe、CdSe等)、IV-VI族量子點(如PbSe等)、II1-V族量子點(如InP、GaN等)中的一種或者幾種。量子點有利于低值的檢測以達到靈敏度的要求。而且，量子點與傳統的熒光試劑相比具有發射波長可調、激發譜帶寬、發射譜帶窄、熒光量子產率高及光化學穩定性好等優良的光學特性。采用量子點來標記抗體可以極大的提高檢測的精確度和靈敏度。在一個實施方式中，所述量子點具有2nm-30nm的粒徑。在一個優選實施方式中，所述量子點具有2nm_20nm的粒徑。在一個優選實施方式中，所述量子點具有5nm-20nm的粒徑。
[0037]在一個實施方式中，所述稀土焚光材料為含有銪(Eu)離子、鎮(Tb)離子、釤(Sm)離子、釹(Nd)離子、鏑(Dy)離子等各種鑭系元素的熒光材料中的一種或者幾種。稀土熒光材料使得檢測的線性范圍可覆蓋高值區域。在一個實施方式中，稀土熒光材料為含有銪(Eu)離子、鋱(Tb)離子、釤(Sm)離子、釹(Nd)離子、鏑(Dy)離子等各種鑭系元素的稀土熒光材料中的一種或者幾種負載到微球上形成的稀土熒光微球。將稀土熒光材料負載到微球上可進一步提尚焚光的穩定性。
[0038]單獨量子點標記的抗體雖然靈敏度高，但其會出現線性范圍不佳，體現為高值檢測不準確。單獨稀土熒光材料標記的抗體雖然具備良好的線性范圍，但是靈敏度有待改進，體現為低值檢測不準確。在本實用新型的試紙條中，由于聯合應用量子點與稀土熒光材料，使得本實用新型的試紙條可同時實現高靈敏度和寬檢測線性范圍的要求。
[0039]檢測層2位于樣品結合層I和吸水層3之間，并與二者彼此搭接。檢測層2上具有相互間隔的檢測帶7和質控帶8。檢測帶7上固定有抗心型脂肪酸結合蛋白第二抗體。在一個實施方式中，所述抗心型脂肪酸結合蛋白的第一抗體和第二抗體識別心型脂肪酸結合蛋白的不同表位。質控帶8固定有抗鼠IgG的抗體。質控帶8用于確定反應體系是否成立，并通過計算檢測帶7與質控帶8的熒光信號值以精確進行定量。
[0040]檢測帶7和質控帶8的寬度在0.4mm至2.0mm之間，以確保所需檢測能夠完成且最大程度的節約抗體。在一個實施方式中，檢測帶7和質控帶8的寬度在0.6mm至1.8mm之間，優選0.8mm至1.4mm之間。此外，檢測帶7和質控帶8之間的間隔可以在0.05cm至0.8cm之間。在一個實施方式中，檢測帶7和質控帶8之間的間隔在0.1cm至0.6cm之間，優選在0.3cm至0.5cm之間。
[0041]試紙條的整體長度在8cm至1cm之間，整體寬度在0.2cm至0.5cm之間，優選在0.2cm至0.3cm之間，最優選為0.3cm。本實用新型的試紙條在提供靈敏度和檢測線性范圍的同時，通過降低試紙條的長度和/或寬度可降低抗體的用量