一種同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥物分析領域，特別涉及一種金匱腎氣片中同時檢測馬錢苷、京尼平 甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚含量的方法。
【背景技術】
[0002] 金匱腎氣片系六味地黃系列中成藥，處方來自"醫圣"張仲景之手，記載于《金匱要 略》。金匱腎氣片用于腎虛水腫，腰膝酸軟，小便不利，畏寒肢冷。不僅有六味地黃滋陰補腎 的作用，而且能在補陰中助陽，從而達到陰陽同補的目的。
[0003] 金匱腎氣片現行標準收載于國家藥品標準WS-10439(ZD-0439)-2002-2011Z，其鑒 別標準收載了 1個顯微鑒別、3個薄層鑒別和2個含量測定，而金匱腎氣片處方中有10味藥。 通過研究發現多種藥味的薄層色譜之間均存在陰性干擾，尚無有效分離方法進行鑒別其有 效成分，導致現有的質量控制方法未能有效實現產品質量的控制。且現有的2個有效成分的 含量測定，需要分別提取供試液及采用不同的色譜系統檢測，實驗步驟繁瑣，且不能全面的 監測到產品的質量水平。

【發明內容】

[0004] 針對上述技術問題，本發明提供一種同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的 方法。本方法中所述有效成分為馬錢苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚，所述方 法為高效液相色譜法，所述色譜條件為：
[0005] 反相色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱;進樣量:10yl;
[0006] 流動相:流動相A:乙腈、流動相B:體積百分比為0.1%的磷酸水溶液，流動相A的體 積百分比與流動相B的體積百分比的和始終保持為100%，進行線性梯度洗脫，所述線性梯 度洗脫、波長與流速如下：
[0007] 梯度1 ---0~15min，流動相A與流動相B的體積百分比為（10~20 % ): (90~80 % )， 流速為l.Oml/min，檢測波長為230~245nm;
[0008] 梯度2---15~30min，流動相A與流動相B的體積百分比為〔（10~20%) - (65~ 40% )〕：〔（90~80% ) - (35~60% )〕，流速為 1 .Oml/min，檢測波長為230~245nm;
[0009] 梯度3---30~55min，流動相A與流動相B的體積百分比為（40~65%) : (60~ 35% )，流速為1 ?0~1 ? 2ml/min，檢測波長為284~294nm。
[0010] 作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 所述線性梯度洗脫、波長與流速進一步為：
[0011 ] 梯度1 -0~15min，流動相A與流動相B的體積百分比為15%:85%，流速為1.0ml / min，檢測波長為240nm;
[0012] 梯度215~30min，流動相A與流動相B的體積百分比為（15%-55%):(85% - 45% )，流速為1 .Oml/min，檢測波長為240nm;
[0013] 梯度3---30~55min，流動相A與流動相B的體積百分比為55% :45%，流速為 1 ? 2ml/min，檢測波長為 286nm。
[0014] 作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 所述線性梯度洗脫、波長與流速還可以進一步為：
[0015] 梯度10~15min，流動相A與流動相B的體積百分比為10% :90%，流速為1.0ml/ min，檢測波長為235nm;
[0016] 梯度2---15~30min，流動相A與流動相B的體積百分比為（10%-65%):(90% - 30% )，流速為1 .Oml/min，檢測波長為245nm;
[0017] 梯度3---30~55min，流動相A與流動相B的體積百分比為65% :35%，流速為 1 ? 2ml/min，檢測波長為 294nm。
[0018] 作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 所述線性梯度洗脫中梯度3后面還可以添加一個過渡梯度，所述過渡梯度的流動相比例與 所述梯度1相同，并沖洗至基線平穩。以便連續進樣。
[0019] 作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 對照品溶液的配置方法如下:精密稱取馬錢苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚 對照品，用體積百分比為80%的甲醇溶液溶解并稀釋，使每lml對照品溶液中含有0.10~ 0 ? 14mg馬錢苷、0 ? 04~0 ? 08mg京尼平甘酸、0 ? 07~0 ? 1 lmg毛蕊花糖苷、0 ? 15~0 ? 25mg桂皮醛 和0.15~0.2511^丹皮酚。
[0020] 作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 所述金匱腎氣片的前處理方法為：取金匱腎氣片供試品除去包衣，研細，所得細粉能通過 100目篩，取細粉1.8~2.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積百分比為80 %的甲 醇25ml，稱定重量，45 °C下浸泡1.5小時，超聲15min后放至室溫，再稱定重量，用體積百分比 為80 %的甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。
[0021] 本發明另提供一種同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法。本方法中所 述有效成分為馬錢苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚，所述方法為高效液相色 譜法，所述色譜條件為：
[0022]反相色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱;進樣量:10yl;
[0023]流動相:流動相A:乙腈、流動相B:體積百分比為0.1%的磷酸水溶液，流動相A的體 積百分比與流動相B的體積百分比的和始終保持為100%，進行線性梯度洗脫，所述線性梯 度洗脫、波長與流速如下：
[0024] 梯度1 ---0~35min，流動相A與流動相B的體積百分比為〔（5~15 % ) - (65~ 45%)〕：〔（95~85%) - (35~55%)〕，流速為 1.0~1.2ml/min，檢測波長為230~245nm; [0025] 梯度2-35~65min，流動相A與流動相B的體積百分比為（40~65%) : (60~ 35% )，流速為1 ?0~1 ? 2ml/min，檢測波長為284~294nm。
[0026]作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 所述線性梯度洗脫、波長與流速進一步為：
[0027] 梯度1---0~35min，流動相A與流動相B的體積百分比為（5%-55%): (95% - 45% )，流速為1 .Oml/min，檢測波長為235nm;
[0028] 梯度2--35~65min，流動相A與流動相B的體積百分比為55% :45%，流速為 1 ? 2ml/min，檢測波長為 286nm。
[0029] 作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 所述線性梯度洗脫、波長與流速還可以進一步為：
[0030] 梯度1---0~35min，流動相A與流動相B的體積百分比為（10%-60%):(90% - 40% )，流速為1 .Oml/min，檢測波長為240nm;
[0031] 梯度2--35~65min，流動相A與流動相B的體積百分比為60% :40%，流速為 1 .Oml/min，檢測波長為 290nm。
[0032] 作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 所述線性梯度洗脫中梯度2后面還可以添加一個過渡梯度，所述過渡梯度的流動相比例與 所述梯度1相同，并沖洗至基線平穩。以便連續進樣。
[0033] 作為實施方式之一，本發明同時檢測金匱腎氣片中五種有效成分含量的方法中， 對照品溶液的配置方法如下:精密稱取馬錢苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚 對照品，用體積百分比為80%的甲醇溶液溶解并稀釋，使每lml對照品溶液中含有0.10~ 0 ? 14mg馬錢苷、0 ? 04~0 ? 08mg京尼平甘酸、0 ? 07~0 ? 1 lmg毛蕊花糖苷、0 ? 15~0 ? 25mg桂皮醛 和0.15~0.2511^丹皮酚。
[0034] 作為實施方式之一，本發明