Elisa檢測試劑盒兩種稀釋液指示劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及化ISA稀釋液指示劑的發明，屬于分析檢測技術領域。
【背景技術】
[0002] ELISA檢測技術廣泛應用于人、動、植物疫病及體內多種目標成分檢測；食品安全 監測中農藥、獸藥殘留篩查等領域。由于其操作簡單，所需設備價低量少，敏感性高、特異性 強，因此得W廣泛應用。
[0003] 在化ISA檢測技術領域，無論夾必法、間接法還是競爭法所用的稀釋液主要有2 種。國外進口試劑盒中2種不同的稀釋液中均加有不同的指示劑，W防止操作者混用。此 夕b每一反應步驟所用成分經稀釋后，加入酶標板孔槽內因有明顯顏色，操作者可有效防止 加樣失誤造成的跳孔或錯加，從而保障檢測結果的準確性和可重復性。我國各類化ISA試 劑盒在稀釋液中未添加不同的指示劑，當樣品數量多，在加樣過程中容易出現跳孔或重復 加樣問題，造成檢測結果重復性及準確性差。因此開展此項發明研究。

【發明內容】

[0004] 本發明所要解決的技術問題是所選指示劑必須顏色鮮艷、水溶性好，不易讓操作 者皮膚及所接觸的材料著色，不易粘附在酶標反應孔內壁和試驗臺面上；對原有試劑盒的 檢測結果判定沒有影響。
[0005] 為解決上述技術問題，本發明是通過W下技術方案實現：
[0006] (1)選擇不同顏色、不同特性的染料，經溶解配制成濃縮液。將亮藍及堿性藍26 兩種染料用純凈水充分溶解，均配制成0. 5mg/ml水溶液，分裝于蹤色塑料瓶內，4°C冰箱保 存。
[0007] (2)按不同濃度分別加入化ISA各反應步驟所用的稀釋液中，比較對檢測結果的 影響。將試劑盒中樣品稀釋液，按每6ml加入不同體積的堿性藍26水溶液（0. 5mg/ml)，分 別觀察指示劑顏色、對酶標板孔壁的粘附性及對結果的影響，最終確定每6ml樣品稀釋液 加120ul堿性藍26水溶液（0. 5mg/ml)。將試劑盒中抗體-酶復合物稀釋液，按每6ml加入 不同體積的亮藍水溶液（0. 5mg/ml)，分別觀察指示劑顏色深淺、對酶標板孔壁的粘附性及 對結果的影響，最終確定每6ml抗體-酶復合物稀釋液加120ul亮藍水溶液（0. 5mg/ml)。
【具體實施方式】
[0008] 通過與國內、外化ISA試劑盒系列試驗驗證，所用指示劑對檢測結果的判定無影 響。按上述試驗結果篩選的指示劑及使用濃度分別加入到已商品化的國、內外化ISA檢測 試劑盒，與原試劑盒所用稀釋液同時對相同樣品進行驗證試驗，根據0D值及最終結果判定 為評判指標。
[0009] 實例1國外牛結核病Y干擾素化ISA檢測試劑盒驗證結果
[0010] 1.實驗方法及步驟
[0011] (1)指示劑的配制：將亮藍及堿性藍26分別配制成0. 5mg/ml水溶液。
[0012] (2)稀釋液的配制：將試劑盒中血漿稀釋液，按每6ml加入120ul堿性藍26水溶液 (0. 5mg/ml);將試劑盒中抗體-酶復合物稀釋液，按每6ml加入120ul亮藍水溶液（0. 5mg/ ml);
[0013] (3)分別用新配置的2種稀釋液稀釋樣品及抗體-酶復合物，同時用試劑盒原對應 的稀釋液同時對22份樣品進行檢測，測定樣品0D值，按試劑盒標準判定結果。
[0014] 2.實驗結果
[0015] 新配置的加亮藍及堿性藍26的2種稀釋液化ISA檢測結果與原化ISA檢測結果 0D值基本無差異，所檢樣品結果判定完全一致。
[0016] 表1牛結核病Y干擾素化ISA檢測試劑盒（國外產品）驗證結果
[0017]
[001引實例2國內豬癌抗體ELISA檢測試劑盒驗證結果
[0019] 1.實驗方法及步驟
[0020] (1)指示劑的配制：將亮藍及堿性藍26分別配制成0. 5mg/ml水溶液。
[0021] (2)稀釋液的配制；將試劑盒中血清樣品稀釋液，按每6ml加入120ul堿性藍26 水溶液（0. 5mg/ml);將試劑盒中抗體-酶復合物稀釋液，按每6ml加入120ul亮藍水溶液 (0. 5mg/ml)；
[0022] (3)分別用新配置的2種稀釋液稀釋樣品及抗體-酶復合物，同時用試劑盒原對應 的稀釋液同時對32份樣品進行檢測，測定樣品0D值，按試劑盒標準判定結果。
[0023] 2.實驗結果
[0024] 新配置的加亮藍及堿性藍26的2種稀釋液化ISA檢測結果與原化ISA檢測結果 0D值基本無差異，所檢樣品結果判定完全一致。
[0025] 表2豬癌抗體ELISA檢測試劑盒（國內產品）驗證結果
[0026]
【主權項】
1. 一種染料指示劑用于ELISA檢測稀釋液，其特征在于，利用抗原抗體反應體外反應 特性，染料對生物組織的親嗜性，染料對酶標板孔壁的物理吸附特性，進行系列試驗篩選而 成。2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于，ELISA樣品稀釋液和抗體-酶復合物稀釋 液所用指示劑為堿性藍26和亮藍。3. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述染料指示劑亮藍和堿性藍26均用純 凈水充分溶解，配制成〇. 5mg/ml水溶液作為濃縮液。4. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于，每6ml樣品稀釋液加120ul堿性藍26濃 縮液。5. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于，每6ml抗體-酶復合物稀釋液加120ul亮 藍濃縮液。
【專利摘要】本發明ELISA檢測試劑盒兩種稀釋液指示劑屬于分析檢測技術領域。為酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測試劑盒在研制過程中，針對每步實驗步驟所用稀釋液，加入對試驗結果無干擾作用的染料指示劑，避免操作失誤，確保最終檢測結果可靠。其具體步驟為：(1)選擇不同顏色、不同特性的染料，經溶解配制成濃縮液；(2)經試驗優化確定指示劑在稀釋液中含量；(3)通過與國內、外ELISA檢測試劑盒的試驗驗證，證明所用指示劑對檢測結果判定無影響。本發明填補了我國ELISA檢測試劑盒所用不同稀釋液無顏色區別，解決了ELISA操作過程中存在的加樣跳孔或重復加樣問題，避免檢測過程出現差錯。
【IPC分類】G01N33/536
【公開號】CN105277686
【申請號】CN201410289476
【發明人】賴平安, 劉鑫, 何悅, 柏亞鐸, 張偉, 張朝暉, 汪琳, 高志強
【申請人】賴平安
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2014年6月26日