載體、該載體的制造方法、生物物質的免疫學測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及在表面具有聚合物的載體、該載體的制造方法以及使用免疫反應以高 靈敏度測定生物標記物等生物物質的生物物質免疫學測定方法。
【背景技術】
[0002] 以往，血清、血漿、尿等各種生物體試樣中含有的微量物質的測定一直采用放射免 疫測定法（RIA)、酶免疫測定法（EIA)等免疫測定法。這時，作為不溶性載體，有時使用結合 了抗原或抗體的磁性粒子。
[0003] 然而，在非均相的免疫測定法中，存在起因于測定試樣中含有的成分的干擾物質 所致的、不依賴于抗原和抗體的特異性反應的所謂的"非特異性吸附"導致的空白值上升的 問題。另外，在微量滴定板這樣的一個反應容器進行從抗原抗體間的反應到檢測反應的工 序的情況下，存在容器的污染引起顯著的空白值上升、測定精度降低的問題。
[0004] 以往，為了減少非特異性吸附、容器的污染，報告了向反應體系中添加白蛋白、酪 蛋白、明膠等來自生物的物質的方法；添加表面活性劑的方法（專利文獻1~3)等。然而， 使用來自生物體的封閉劑時，有BSE所代表的生物污染的問題，另一方面，使用表面活性劑 則可舉出某種程度的效果，但尚不能說是充分的。
[0005] 現有技術文獻
[0006] 專利文獻
[0007] 專利文獻1:日本特開昭58 - 187862號公報
[0008] 專利文獻2:日本特開昭60 - 53846號公報
[0009] 專利文獻3:日本特開昭61 - 260163號公報

【發明內容】

[0010] 本發明要解決的課題是提供用于以高靈敏度測定生物標記物等的生物物質量的 載體、載體的制造方法、測定方法。
[0011] 本發明人等發現通過使用以含有具有亞磺酰基的重復單元的聚合物處理過的載 體來抑制非特異性吸附，能夠以高靈敏度測定生物物質。
[0012] SP，本發明是以下的< 1 >~< 10 >。
[0013] < 1 >一種載體，其特征在于，在表面具有聚合物，該聚合物含有具有亞磺酰基的 重復單元。
[0014] < 2 >根據< 1 >中記載的載體，其中，上述聚合物是含有在側鏈具有亞磺酰基的 重復單元的聚合物。
[0015] < 3 >根據< 1 >或者< 2 >中記載的載體，其中，上述聚合物進一步含有疏水性 重復單元。
[0016] < 4 >根據< 1 >~< 3 >中任一項中記載的載體，其中，進一步擔載有配體。
[0017] < 5 >根據< 1 >~< 4 >中任一項中記載的載體，其中，具有含有磁性物質的磁 性粒子。
[0018] < 6 >-種上述載體的制造方法，其特征在于，使含有具有亞磺酰基的重復單元 的聚合物與載體接觸。
[0019] < 7 >-種生物物質的免疫學測定方法，其特征在于，包含將測定對象物質捕獲 至載體的工序，上述載體為< 4 >或< 5 >中記載的載體。
[0020] < 8 >根據< 7 >中記載的免疫學測定方法，其中，進一步包含清洗含有上述載體 的反應體系來進行B/F分離的工序。
[0021] < 9 >根據< 7 >或< 8 >中記載的免疫學測定方法，其中，進一步包含測定上述 載體所捕獲的對象物質量的工序。
[0022] < 10 >-種測定方法，其特征在于，是在同一反應容器中進行如下工序的生物物 質的免疫學測定方法：向磁性粒子捕獲測定對象物質的反應工序，清洗含有上述磁性粒子 的反應體系而進行B/F分離的清洗工序，測定磁性粒子所捕獲的對象物質的測定工序；在 反應容器內投入含有聚合物的溶液和上述磁性粒子，進行捕獲反應，該聚合物含有在側鏈 具有亞磺酰基的重復單元。
[0023] 根據本發明，在非均相的免疫測定法中能夠減少起因于干擾物質的非特異性吸 附。由此，能夠降低背景噪音。因此能夠在不對生物物質或者含有生物物質的血液獻體等 生物體試樣進行稀釋的情況下進行測定。另外，由于同時高效進行免疫反應，所以低值下的 測定精度提高，分析時間縮短。另外，如果采用在反應容器中利用聚合物處理磁性粒子等 載體的方法，則同時也能夠防止免疫反應時的反應容器的污染，因此上述效果進一步提高。 另外，本發明的方法，優選使用磁性粒子作為固相載體，這時被檢測物的濃縮、清洗容易，另 外，能夠以短時間測定大量被檢測物。
【具體實施方式】
[0024] 本發明的載體的特征在于，在表面具有聚合物，該聚合物含有具有亞磺酰基的重 復單元。
[0025][含有具有亞磺酰基的重復單元的聚合物]
[0026] 以下，將具有亞磺酰基的重復單元簡稱為"重復單元（A) "，將含有該重復單元的聚 合物簡稱為"聚合物"。
[0027] 作為重復單元（A)，只要是具有亞磺酰基的重復單元，則可以在主鏈具有亞磺酰 基，也可以在側鏈具有亞磺酰基，優選在側鏈具有亞磺酰基。
[0028] 另外，作為重復單元（A)，優選顯示親水性。這里，在本說明書中，親水性是指具有 與水的親和力強的性質。具體而言，僅由1種重復單元構成的均聚物（由實施例的測定法 得到的數均分子量為1萬~10萬左右的均聚物）在常溫（25°C )下在純水100g中溶解lg 以上的情況下，該重復單元是親水性的。
[0029] 另外，作為上述重復單元（A)，優選表示親水疏水的尺度的Hydrophile - Lipophile Balance(HLB值）為10以上。得到高的親水性的情況下，HLB值更優選為15以 上，進一步優選為20~40。
[0030] 另外，本說明書中，HLB值是指由化合物的有機性的值與無機性的值的比率計算的 值（小田式），可以通過"Formulation Design with Organic Conception Diagram"[1998 年，NIHON EMULSION CO.，LTD]中記載的計算方法進行計算。例如，后述的制造例1中記 載的N-1一1的共聚物中含有的親水性重復單元的HLB值為（100X3+60X1+140X1)/ (20X10+40X1 - 10X3) X 10 = 23. 8。
[0031] 另外，重復單元（A)沒有特別限定，從防止非特異性吸附的觀點出發，優選非離子 性的。
[0032] 另外，重復單元（A)，除了亞磺酰基之外，還可以具有羥基、羧基、氨基、磺基、硫醇 基、磷酸基、醛基等親水性基團。另外，該親水性基團的位置和個數是任意的，但其位置優選 為聚合物的側鏈。另一方面，作為亞磺酰基以外的親水性基團的個數，從得到適度的親水性 的觀點出發，在1個重復單元中，優選〇~12個，更優選0~10個，進一步優選0~5個， 更進一步優選〇~3個，再進一步優選1~3個，特別優選2或者3個。另外，上述親水性 基團中，從得到適度的親水性的觀點出發，優選羥基。應予說明，在不喪失本發明的效果的 范圍，聚合物中含有的多個亞磺酰基的一部分可以為硫醚基、磺酰基。
[0033] 另外，作為上述重復單元（A)的優選的具體例，可舉出側鏈中含有至少一個下述 式（1)表示的結構的重復單元。作為形成側鏈中具有式（1)表示的結構的重復單元的聚合 物種，可以使用公知的聚合物，其中優選（甲基）丙烯酸酯系的聚合物種、（甲基）丙烯酰胺 系的聚合物種、苯乙烯系的聚合物種等。更具體而言，可舉出下述式（2)表示的重復單元。
[0034]
[0035]〔式（1)中，R3表示直接鍵合或者碳原子數1~24的2價的有機基團，R 4表示碳原 子數1~10的有機基團。〕
[0036]
[0037] 〔式（2)中，R1表不氫原子或者甲基，R2表不一0 -基、* - (C = 0) - 0 -基、* - (C = 0) - NR5-基、* 一 NR 5 -（C = 0) -基（R 5表不氫原子或者碳原子數1~10的有機 基團，*表示與式（2)中的R1所鍵合的碳原子鍵合的位置）或者亞苯基，R 3和R4與上述含 義相同。〕
[0038] 這里，對式（1)和（2)中的各符號進行詳細說明。
[0039] R1表示氫原子或者甲基，優選甲基。
[0040] 另外，R2表不一0 -基、* - (C = 0) - 0 -基、* - (C = 0) - NR 5 -基、* - NR5 -（C = 0) -基或者亞苯基。作為該亞苯基，可舉出1，2-亞苯基、1，3-亞苯基、1，4 一 亞苯基。
[0041] 另外，上述R5表示的有機基團的碳原子數優選為1~10,更優選為2~8,進一步 優選為2~6。作為上述有機基團，可舉出烴基。該烴基是包含脂肪族烴基、脂環式烴基以 及芳香族烴基的概念。
[0042] 上述R5中的脂肪族烴基可以是直鏈狀也可以是支鏈狀，具體而言，可舉出甲基、乙 基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基等烷基。
[0043] 另外，上述脂環式烴基大致分為單環的脂環式烴基和橋環烴基。作為上述單環的 脂環式烴基，可舉出環丙基、環己基等環烷基。另外，作為橋環烴基，可舉出異冰片基等。
[0044] 另外，作為上述芳香族烴基，可舉出苯基等芳基。
[0045] 像上述那樣的R2中，從非特異性吸附抑制效果的觀點出發，優選* 一（C= 0) - 0 一基、亞苯基，特別優選* 一(C= 0) 一 0 一基。
[0046] R3表示直接鍵合或者碳原子數1~24的2價的有機基團。作為該直接鍵合，可舉 出單鍵。
[0047] 這樣的R3中，優選碳原子數1~24的2價有機基團。該2價有機基團的碳原子 數優選為2~18,更優選為2~10,進一步優選為2~9,特別優選為3~6。
[0048] 作為上述2價有機基團，可舉出2價烴基。2價烴基優選為2價脂肪族烴基，可以 是直鏈狀，也可以是支鏈狀。具體而言，可舉出甲燒一 1，1 一二基、乙燒一 1，1 一二基、乙 燒一 1, 2 一二基、丙烷一 1, 1 一二基、丙烷一 1, 2 一二基、丙烷一 1, 3 一二基、丙烷一 2, 2 一 二基、丁燒一 1, 2 一二基、丁燒一 1, 3 一二基、丁燒一 1, 4 一二基、戊燒一 1, 4 一二基、戊燒一 1, 5 -二基、己燒一1, 5 -二基、己燒一1, 6 -二基、庚燒一1, 7 -二基、辛燒一1, 8 -二基 等鏈烷二基。
[0049] 另外，上述2價烴基可以具有取代基，也可以在碳一碳鍵間含有醚鍵。
[0050] 作為上述2價的烴基可以具有的取代基，可舉出上述親水性基團。該取代基的個 數優選為1~5,更優選為1~3,進一步優選為1或者2。
[0051] 另外，作為上述2價的烴基可以含有的醚鍵的個數，優選0~5,更優選0~3。
[0052] 另外，作為2價的有機基團的優選的具體例，可舉出下述式（3)表示的連接基團、 碳原子數1~24的鏈烷二基，更優選為式（3)表示的連接基團。
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