采用sle法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及動物飼料的檢測領域，特別是一種采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇 的方法。
【背景技術】
[0002] 樣品前處理是分析檢測過程的關鍵環節，是濃縮被測定的痕量組分，提高方法的 靈敏度，及除去對分析系統有干擾的物質的重要手段。萃取是從樣品集體中分離出目標化 合物的一項技術，是樣品預處理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是應用最廣泛的 樣品制備方法之一，但是，傳統的液液萃取的操作繁瑣費時、有機溶劑消耗量大，而且容易 出現乳化現象的缺陷，使得在實際應用中具有一定的局限性。
[0003] 1998年，科學家提出了在傳統的液液萃取的基礎上，利用一種具有吸附性和較大 的比表面積的惰性多空填料作為介質，建立的一種新型高效樣品的制備方法-介質液液萃 取（supported liquid extraction簡稱SLE)，SLE萃取技術就是選用一種多孔性惰性材 料-煅燒硅藻土作為介質，取代分液漏斗，增大了兩相接觸時的作用面積，實現高效、快速 的萃取過程。
[0004] 當水溶液樣品加樣到固定的聚丙烯注射管中的煅燒硅藻土上后，經過一定時間 (一般分為幾分鐘），水相溶液以一層薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，將有機溶劑 從柱管上端加入，當互不相溶的兩相在硅藻土表面接觸的同時萃取立即發生，最后萃取液 在重力作用下流出，必要情況下，可以施加較小的壓力，而水相保留在介質中。盛接的流出 液直接將溶劑吹干，復溶后，即可用于下一步分析檢測。
[0005] 農業部1025號公告-11-2008公開了豬尿中β -受體激動劑多殘留檢測，其采用 酶解后異丙醇-乙酸乙酯進行萃取，并通過內標法可以得到相關的檢測結果，但是在實際 應用中，為了使沙丁胺醇與蛋白質分離，需要采用酶解的方式，然后在采用傳統方法萃取后 通過色譜檢測，有時無法檢出殘留項。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單、檢出限低的采用SLE法分離 豬尿中的沙丁胺醇的方法。
[0007] 本發明的技術方案為：一種采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法，包括以下 步驟：
[0008] 步驟1:樣品預處理；收集豬尿，首先加入β -鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶 進行酶解，酶解結束后加入三氯乙酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4倍豬尿體積的Ph范圍為 6. 5~7. 0的磷酸緩沖液，漩渦混合器混合0. 5~1. 5分鐘后離心，將經混合處理的溶液在 離心機中以9000~11000轉/分鐘的速度離心0. 5~1. 5分鐘；取離心后的上清液；步驟 2 :將上清液加入到SLE柱后，靜置2~4分鐘；
[0009] 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有沙丁胺醇 的洗脫液；
[0010] 其中，所述的二元洗脫劑為乙酸乙酯和乙腈的混合物，其中乙酸乙酯和乙腈的重 量比為1:0. 8~1. 1。
[0011] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法中，所述的豬尿為1ml，緩沖溶 液為4ml，步驟2中所取的上清液為0. 5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時所用的洗脫劑為 0· 5ml 〇
[0012] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法中，每毫升的尿液中加入 β -鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶12 μ L。
[0013] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法中，所述的三氯乙酸和豬尿的 質量比為1:98~100
[0014] 在上述的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法中，所述的SLE柱為奧秘山東 科技有限公司生產的介質液液萃取SLE柱。
[0015] 本發明的有益效果如下：
[0016] 采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇，先進行酶解使蛋白質和沙丁胺醇分離，采用 緩沖溶液進行混合，然后通過SLE柱分離出沙丁胺醇，萃取劑為乙酸乙酯和乙腈，本發明的 分離效率好、分離時間短、檢出限低有利于后期的測量。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合【具體實施方式】，對本發明的技術方案作進一步的詳細說明，但不構成對 本發明的任何限制。
[0018] 實施例1
[0019] 步驟1 :收集豬尿1ml，首先加入12 μ Lf3 -鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進行 酶解，酶解時間為3-4小時，酶解結束后加入三氯乙酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4ml的Ph 為6. 5的磷酸緩沖液，漩渦混合器混合后離心；取離心后的上清液0. 5ml ;三氯乙酸和豬尿 的質量比為1:99。
[0020] 步驟2 :將上清液加入到SLE柱后，靜置3分鐘；SLE柱為奧秘山東科技有限公司生 產的介質液液萃取SLE柱。
[0021] 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有沙丁胺醇的洗 脫液；每次消耗的洗脫劑為〇. 5ml，所述的二元洗脫劑為乙酸乙酯和乙腈的混合物，其中乙 酸乙酯和乙腈的重量比為1:1。
[0022] 實施例2
[0023] 步驟1、收集豬尿1ml，首先加入12 μ L β -鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進行 酶解，酶解時間為3-4小時，酶解結束后加入三氯乙酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4ml的Ph 為7的磷酸緩沖液，漩渦混合器混合后離心；取離心后的上清液0. 5ml ;三氯乙酸和豬尿的 質量比為1:98。
[0024] 步驟2 :將上清液加入到SLE柱后，靜置4分鐘；SLE柱為奧秘山東科技有限公司生 產的介質液液萃取SLE柱。
[0025] 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有沙丁胺醇的洗 脫液；每次消耗的洗脫劑為〇. 5ml，所述的二元洗脫劑為乙酸乙酯和乙腈的混合物，其中乙 酸乙酯和乙腈的重量比為1:1. 1。
[0026] 標準樣的制備
[0027] 稱取沙丁胺醇標準品（純度彡99% )0.0 lOOg，置于1000 ml容量瓶中，用重量比為 1:1的乙酸乙酯和乙腈的混合物的溶劑溶解定容，其濃度為10 μ g/ml ;
[0028] 取上述濃度為10 μ g/ml的沙丁胺醇溶液于1000ml容量瓶中，配制成為2 μ g/L、 5 μ g/L、8 μ g/L、10 μ g/L、20 μ g/L 的標準樣。
[0029] 對比例I
[0030] 與實施例1大體相同，不同的地方在于，步驟3中，洗脫劑為異丙醇與乙酸乙酯的 混合物，其體積比為60:40。
[0031] 分析：
[0032] 檢測方法具體為：
[0033] 儀器：LC-2010型高效液相色譜儀（日本島津）
[0034] 色譜柱：C18 柱，150mm*3. 9mmID
[0035] 柱溫：室溫
[0036] 流動相：水：乙腈=100:12 (體積比）；
[0037] 檢測器：UV檢測器；
[0038]檢測波長：220nm ;
[0039] 進樣量：20 μ L
[0040] 以2 μ g/L、5 μ g/L、8 μ g/L、10 μ g/L、20 μ g/L的標準樣進行測試，回歸方程為Y = 17250X+1. 5, R2= 0· 9993, X為待測物濃度，Y為峰面積。
[0041] 取同一份豬尿1kg，按照實施例1的方法制備10份萃取樣品A標號為A1-A10,按 照對比例1的方法制備10份萃取樣品B標號為B1-B10。
[0042] 按照上述檢測方法進樣檢測，得到如下的檢測結果：
[0043]
【主權項】
1. 一種采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1 :樣品預處理；收集豬尿，首先加入0 _鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進 行酶解，酶解結束后加入三氯乙酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4倍豬尿體積的Ph范圍為 6. 5~7. O的磷酸緩沖液，漩渦混合器混合0. 5~1. 5分鐘后離心，將經混合處理的溶液在 離心機中以9000~11000轉/分鐘的速度離心0. 5~1. 5分鐘；取離心后的上清液； 步驟2 :將上清液加入到SLE柱后，靜置2~4分鐘； 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有沙丁胺醇的洗 脫液； 其中，所述的二元洗脫劑為乙酸乙酯和乙腈的混合物，其中乙酸乙酯和乙腈的重量比 為 1:0. 8 ~1. 1〇
2. 根據權利要求1所述的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法，其特征在于，所述 的豬尿為Iml，緩沖溶液為4ml，步驟2中所取的上清液為0. 5ml，所述的步驟3中，每次洗脫 時所用的洗脫劑為〇.5ml。
3. 根據權利要求1所述的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法，其特征在于，每毫 升的尿液中加入0 -鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶12 y L。
4. 根據權利要求1所述的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法，其特征在于，所述 的三氯乙酸和豬尿的質量比為1:98~100。
5. 根據權利要求1至4任一所述的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法，其特征 在于，所述的SLE柱為奧秘山東科技有限公司生產的介質液液萃取SLE柱。
【專利摘要】本發明公開了一種采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法，包括以下步驟：步驟1：樣品預處理；收集豬尿，首先加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進行酶解，酶解結束后加入三氯乙酸沉淀豬尿中的蛋白質，加入4倍豬尿體積的Ph范圍為6.5～7.0的磷酸緩沖液，漩渦混合器混合后離心；取離心后的上清液；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2～4分鐘；步驟3：采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有沙丁胺醇的洗脫液。本發明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單、檢出限低的采用SLE法分離豬尿中的沙丁胺醇的方法。
【IPC分類】G01N30-14
【公開號】CN104807928
【申請號】CN201510238932
【發明人】陳學松, 賴秀梅, 溫志芳, 陳啟釗, 郭振旺, 吳嵐
【申請人】廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2015年5月12日