一種乙肝扶正膠囊的檢測方法
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及一種藥物的檢測方法，特別涉及一種乙肝扶正膠囊的檢測方法。
【背景技術】
[0002]乙肝扶正膠囊是《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第一冊收載的品種，其標準編號為WS3-B-0001-89，處方何首烏、虎杖、貫眾、肉桂、明礬、石榴皮、當歸、丹參、沙苑子、人參、麻黃，是純中藥制成的膠囊劑，具有補肝腎，益氣活血的作用。臨床上用于治療乙型肝炎，辨證屬于肝腎兩虛證候。臨床表現為:肝區隱痛不適，全身乏力，腰膝酸軟，氣短心悸，自汗，頭暈，納少，舌淡脈弱的常用藥品。該藥品標準是衛生部最早制定的藥品標準，收載于第一冊第一頁，在當時是比較好的藥品標準。原標準中僅對當歸和肉桂進行了顯微鑒別，沒有對其它幾種藥材和任何成份進行定性定量的質量控制，既沒有質量指標，也沒有這些質量指標的鑒別和檢驗方法，由此會導致不法廠商在生產藥品時可能不嚴格按照處方的劑量配料，肆意減少原料，致使藥品的療效明顯下降，影響藥品的安全有效，嚴重損害患者的利益。
[0003]處方中的虎杖，為常用中藥材；主產于江蘇、浙江及安徽等地。因其采收期葉均枯萎、脫落，僅剩殘莖，與博落回的殘莖相似，均為中空似竹，故在浙江某些地方民間均稱作“猢猻竹”或“蛤蟆竹”，藥農極易誤采誤收，導致虎杖商品中混有博落回根。而博落回為罌粟科植物，含多種生物堿，毒性較大，文獻上已屢有口服或肌注后中毒乃至死亡的報道，主要為引起急性心源性腦缺血綜合征。因此，控制乙肝扶正膠囊中博落回的混入非常必要。
[0004]處方中用到沙苑子，為豆科植物扁莖黃芪的干燥、成熟種子，具有溫補肝腎、固精、縮尿、明目等功效，是一種常用中藥材，臨床應用廣泛且療效肯定。由于市場需求量大，一些不法分子為達到其贏利的目的，常以次充好、以假亂真，造成市場上沙苑子的品種比較混亂，常有混入紫云英、豬屎豆的種子等情況發生。豬屎豆，又名太陽麻，為豆科多年生草本或直立矮小灌木，其種子和幼嫩枝葉有毒，人畜誤食種子或莖葉，嚴重者會因腹水和肝功能喪失而導致死亡。因此，控制豬屎豆，不讓其混入沙苑子中，對保證乙肝扶正膠囊的安全性十分必要。
[0005]在現有乙肝扶正膠囊的檢測方法中，均未對博落回和豬屎豆進行鑒別。根據乙肝扶正膠囊的處方特點，制定確實可行的檢測方法，尤其是對處方中虎杖和博落回、沙苑子和豬屎豆的鑒別，以保證產品的質量和臨床療效非常迫切。

【發明內容】

[0006]本發明的目的在于克服現有技術中所存在的上述不足，提供一種乙肝扶正膠囊的檢測方法。該檢測方法通過對制劑中的何首烏、虎杖和博落回、沙苑子和豬屎豆、貫眾主要藥材進行薄層色譜定性鑒別，同時對丹參特征成分丹酚酸B進行含量測定，有效地控制了乙肝扶正膠囊的成分和含量，使該藥品更加安全、有效。
[0007]為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案:
[0008]本發明所述乙肝扶正膠囊的制備方法為:分別稱取何首烏15g、虎杖25g、貫眾50g、肉桂5g、明礬10g、石榴皮6g、當歸10g、丹參15g、沙苑子10g、人參10g、麻黃6g。將當歸、肉桂、丹參、明礬粉碎為細粉；將余下七味藥材加水煎煮二次，第一次3h，第二次2h，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏狀，然后加入上述細粉，混勻，于70?80°C干燥，再粉碎成細粉，過篩，裝膠囊，即得乙肝扶正膠囊。
[0009]本發明所述乙肝扶正膠囊的檢測方法，包括薄層色譜定性鑒別、含量測定項目，所述薄層色譜定性鑒別包括對制劑中何首烏的鑒別、虎杖和博落回的鑒別、貫眾的鑒別、沙苑子和豬屎豆的鑒別；所述含量測定包括對制劑中丹參特征成分丹酚酸B的含量測定；
[0010](I)薄層色譜定性鑒別
[0011]何首烏的鑒別:以何首烏對照藥材為對照品，以體積比氯仿:甲醇:水=19?22: 8?10:1的氯仿-甲醇-水混合液為展開劑，用薄層色譜法鑒別；
[0012]虎杖和博落回的鑒別:分別以虎杖對照藥材和博落回對照藥材為對照品，以體積比氯仿:甲醇=11?15: 3的氯仿-甲醇混合液為展開劑，用薄層色譜法鑒別；
[0013]貫眾的鑒別:以貫眾對照藥材為對照品，以體積比氯仿:丙酮:冰醋酸=13?17: 2.5?3.5: 0.5的氯仿-丙酮-冰醋酸混合液為展開劑，用薄層色譜法鑒別；
[0014]沙苑子和豬屎豆的鑒別:分別以沙苑子對照藥材和豬屎豆對照藥材為對照品，以體積比甲醇:水=7?9: 3的甲醇-水混合液為展開劑，用薄層色譜法鑒別；
[0015]⑵含量測定
[0016]丹酚酸B的含量測定:照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VID測定;
[0017]用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比甲醇:乙腈:甲酸:水=28?32: 9?11:1: 57?61的甲醇-乙腈-甲酸-水混合液為流動相；檢測波長為286nm;理論板數按丹酚酸B峰計算應不低于2000 ;
[0018]精密稱取丹酚酸B對照品適量，加70?80v %甲醇制成對照品溶液；
[0019]取本品，取其內容物，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70?80v%甲醇，稱定重量，超聲處理，取出，放冷，再稱定重量，用70?80v%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，得供試品溶液；
[0020]分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，本品每粒含丹酚酸B不得少于0.5mgo
[0021]何首烏，又名多花寥、紫烏藤、夜交藤等。是寥科寥族何首烏屬多年生纏繞藤本植物，塊根肥厚，以其塊根入藥，可安神、養血、活絡，解毒(截瘧)、消癰；何首烏可補益精血、烏須發、強筋骨、補肝腎，是常見貴細中藥材。何首烏塊根含蒽醌類化合物，主為大黃素、大黃酚以及大黃素甲醚、大黃酸等，其溶解性不好。其生產過程中若不按照規定工藝，則可能導致有效成份提取不全或者保留不完。因此，必須對乙肝扶正膠囊中的何首烏進行檢測。
[0022]貫眾，多年生草本，為鱗毛蕨科植物粗莖鱗毛蕨的根莖及葉柄殘基，性味苦、澀、微寒、有小毒；歸肝經、胃經。其功能殺蟲、清熱、解毒、涼血止血。因為貫眾有毒，所以必須嚴格控制好其在乙肝扶正膠囊中的含量，否則會對患者帶來不良反應。現有技術中，許多廠家由于無法嚴格控制貫眾在乙肝扶正膠囊中的含量，導致許多廠家直接取消貫眾入藥，而貫眾為乙肝扶正膠囊中的主要藥方，取消貫眾入藥會顯著影響乙肝扶正膠囊的療效。因此，對乙肝扶正膠囊中的貫眾進行鑒別非常重要。
[0023]虎杖，為常用中藥材；主產于江蘇、浙江及安徽等地。因其采收期葉均枯萎、脫落，僅剩殘莖，與博落回的殘莖相似，均為中空似竹，故在浙江某些地方民間均稱作“猢猻竹”或“蛤蟆竹”，藥農極易誤采誤收，導致虎杖商品中混有博落回根。而博落回為罌粟科植物，含多種生物堿，毒性較大，文獻上已屢有口服或肌注后中毒乃至死亡的報道，主要為引起急性心源性腦缺血綜合征。因此，控制乙肝扶正膠囊中博落回的混入非常必要。
[0024]沙苑子，為豆科植物扁莖黃芪的干燥、成熟種子，具有溫補肝腎、固精、縮尿、明目等功效，是一種常用中藥材，臨床應用廣泛且療效肯定。由于市場需求量大，一些不法分子為達到其贏利的目的，常以次充好、以假亂真，造成市場上沙苑子的品種比較混亂，常有混入紫云英、豬屎豆的種子等情況發生。豬屎豆，又名太陽麻，為豆科多年生草本或直立矮小灌木，其種子和幼嫩枝葉有毒，人畜誤食種子或莖葉，嚴重者會因腹水和肝功能喪失而導致死亡。因此，控制豬屎豆，不讓其混入沙苑子中，對保證乙肝扶正膠囊的安全性十分必要。
[0025]丹參，為唇形科植物丹參的干燥根和根莖，具有活血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消癰之功效。現代研宄表明，丹參中含有丹參酮II A、丹酚酸B、原兒茶醛等多種成份，其主要有效成份的熱穩定性差，其中以丹酚酸B的熱穩定性最差，甚至在高于60°C的溫度時，低濃度下受熱20min左右即損失50%以上。因此在乙肝扶正膠囊生產過程中，如果沒有控制好工藝條件，乙肝扶正膠囊中的有效成份會發生損失，直接影響到乙肝扶正膠囊的療效。對熱穩定性最差的丹酚酸B進行含量測定，不僅可有效保證丹參中其它有效成份不受影響，也基本上保證了乙肝扶正膠囊中其它成份不受影響，從而保證了乙肝扶正膠囊的療效。
[0026]在本發明所述丹酚酸B的含量測定中，采用超聲提取，與傳統的加熱水流提取方式相比，提取效果相當，但是操作更加簡單，易掌握。采用體積比甲醇:乙腈:甲酸:水=28?32: 9?11:1: 57?61的甲醇-乙腈-甲酸-水混合液為流動相，丹酚酸B在5min內即可出峰，出峰時間短，而且分離度好，圖譜基線穩定。
[0027]本發明所述檢測方法通過對何首烏、貫眾、虎杖、博落回、沙苑子、豬屎豆進行薄層色譜鑒別，并對丹酚酸B進行含量測定，有效地控制了乙肝扶正膠囊的成分和含量，使該藥品更加安全、有效，從而保證了該膠囊制劑的臨床療效，維護了患者利益。
[0028]優選地，所述(I)項下虎杖和博落回薄層色譜定性鑒別的具體步驟為:取本品，取其內容物，置錐形瓶中，加入甲醇，振搖，超聲提取，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材，博落回對照藥材，按照供試品溶液的制備方法分別制成虎杖對照藥材溶液和博落回對照