專利名稱：檢測幽門螺桿菌的方法和試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種基于13C標記的尿素呼吸試驗的檢測幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)的方法，以及用于所述方法的試劑盒。該方法可用于診斷與幽門螺桿菌有關的胃及十二指腸疾病。
背景技術：
幽門螺桿菌是一種革蘭氏陰性桿菌，于1982年被首次分離得到，生物體中幽門螺桿菌的存在與胃及十二指腸疾病有關。具體來說，這種桿菌是十二指腸消化性潰瘍的主要誘因，也是慢性胃炎的主要致病因素，它存在于90-95％的患者體內，在十二指腸潰瘍、胃潰瘍、消化不良、胃非-霍奇金氏淋巴瘤、甚至胃癌患者體內也檢測到了幽門螺桿菌。
為了針對可能的胃及十二指腸疾病建立恰當有效的治療方案，需要對其進行準確可靠的診斷。一部分胃及十二指腸疾病的診斷方法是以幽門螺桿菌的檢測為基礎的，該方法可分為侵入型和非侵入型。侵入型方法需要對患者進行內窺鏡檢查，然后對內窺鏡活組織檢查所采集的胃粘膜樣本進行組織學研究、培養或快速尿素酶試驗。這些方法具有足夠的敏感性和特異性，盡管如此，這些方法成本高，需要專業人員操作，還會引起患者不適，患者偶爾會拒絕接受。非侵入型方法可能有賴于血清學方法和尿素呼吸試驗。一般來說，血清學方法的敏感性和特異性比尿素呼吸試驗低，此外，所檢測的也僅是抗幽門螺桿菌抗體而并非幽門螺桿菌的存在，這一點與13C標記的尿素呼吸試驗相同。用血清學試驗來觀測病菌的根除效果是不可靠的，因為在根除后六個月之后可以看到抗體效價顯著降低，且在根除后十八個月之前也不能肯定病菌是否被消除，與之相反，呼吸試驗有可能肯定地證實，通過治療幽門螺桿菌已被消除，從得出此結論之后第一個月開始即是如此。
在大量胃及十二指腸疾病、特別是在與幽門螺桿菌有關的疾病中觀察到尿素酶活性異常，因此若檢測到尿素酶活性為一異常值，就說明有幽門螺桿菌存在，也就說明可能有胃及十二指腸病理現象產生，尿素呼吸試驗正是基于這樣一種事實而進行的。尿素酶(尿素酰氨水解酶)是一種催化尿素(碳酰二胺)水解為碳酸銨的酶，碳酸銨又分解為二氧化碳和氨。為了進行尿素呼吸試驗，給患者服用可選用碳13(13C)、碳14(14C)、或氮15(15N)標記的尿素，然后對患者的呼吸進行分析，以檢測被標記尿素的水解產物的存在。碳13或碳14標記的尿素水解產生的所述同位素標記的二氧化碳被血液系統吸收，并被運輸至肺部，最終被呼出，使對患者呼吸的檢測成為可能。
B.J.Marshall持有的美國專利US4830010公開了一種基于尿素呼吸試驗的胃及十二指腸疾病的診斷方法，該方法存在很多缺陷，其中有-在尿素給藥前所使用的溶液沒有再現胃幽門適于幽門螺桿菌存活環境的pH條件(在2與2.3之間)，因此所得結果的準確性和可靠性是令人懷疑的，另外，這些溶液經常引起患者的胃及十二指腸功能紊亂，如腹瀉、胃部下墜感、嘔吐等；-用放射性同位素碳14標記的尿素的使用提高了診斷方法的成本，明顯限制了其應用的范圍，因為它是不能用在孕婦或兒童身上的，由于放射性的存在，也不可能在同一個患者身上重復試驗兩或三次以上；-標記的尿素的劑量是與患者體重成比例的，這就必然給測定操作帶來一定程度的復雜性，由此消退試劑的消耗也較大，不僅不符合經濟觀點，而且由于對患者的毒性和或副作用，還存在一定程度的風險；-在全部試驗過程中患者必須保持水平體位，會引起患者不適；-使用塑料接口管將患者的呼吸收集到塑料袋中，然后使用注射器從塑料袋中抽取空氣，再注入Vacutainer(裝有橡皮塞的加壓玻璃管，可在徑向影響管中收集的患者呼出的氣體)中。收集患者的呼吸需要使用大量零部件，不僅使測定操作變得復雜，而且提高了成本，因為除了零部件的成本以外，為了避免環境污染，還必須考慮廢棄物的處理成本。
因此，美國專利US4830010所述的方法是一種一般性的方法，不太有特異性，其可靠性與重復性都是令人懷疑的，該方法應用范圍有限，復雜、昂貴、麻煩、令患者不適。
本發明提供了一種實施以碳13標記的尿素呼吸試驗的方法與試劑盒，用于檢測幽門螺桿菌，其克服了上述缺陷。本發明特別是要提供檢測幽門螺桿菌的測定方法，該方法簡單、易行、可靠、可重復、應用廣泛、不復雜、成本低、對患者安全、舒適。
附圖的簡要說明

圖1為用于本發明試劑盒的測試瓶(exetainer)類型，表示出分離狀態下測試瓶的各零部件。
圖2為圖1的測試瓶所有零部件組裝在一起時的狀態。
發明的詳細說明1．檢測幽門螺桿菌的方法本發明的第一個目的是提供了一種基于碳13標記的尿素呼吸試驗的檢測幽門螺桿菌的方法，該方法一般包括下列步驟-給患者服用適量碳13標記的尿素；-在碳13標記的尿素給藥前后測定患者呼吸樣本中的碳13含量；其特征在于-給患者服用一種檸檬酸水溶液，檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5；-在碳13標記的尿素給藥之前，測定患者呼吸樣本中的碳13含量，測定是在給患者服用所述檸檬酸水溶液之前或之后進行的；-在所述檸檬酸水溶液給藥之后或與此同時給患者服用碳13標記的尿素。
由本發明所提供的基于碳13標記的尿素呼吸試驗的檢測幽門螺桿菌的方法的第一種實施方案涉及在測定呼吸樣本中碳13的基線濃度之前給患者服用檸檬酸水溶液，檸檬酸水溶液給藥是在碳13標記的尿素給藥之前進行的，該方法由下列步驟組成a)給患者服用一種檸檬酸水溶液，檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5；
b)收集患者的呼吸樣本，目的在于測定碳13的基線含量；c)給患者服用適量碳13標記的尿素；d)收集患者的呼吸樣本，目的在于測定服用碳13標記的尿素后的碳13含量；e)分析所收集的呼吸樣本，以測定服用碳13標記的尿素前后的碳13含量。
檸檬酸水溶液由檸檬酸在水中的溶液組成，檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5。正常情況下，濃度約為0.021g/ml的檸檬酸水溶液可達到該pH。該溶液的使用達到兩個目的，一方面它能延遲胃的排空，使碳13標記的尿素在胃幽門的滯留時間較長，另一方面，通過產生一個模擬胃幽門酸堿度的pH，使幽門螺桿菌菌落有可能更有效地發揮其尿素酶的活性，將尿素水解為二氧化碳和水。為了使測定高效、敏感、可靠和可重復，該溶液的使用是必要和關鍵的，它構成了本發明的重要內容。
檸檬酸水溶液可另外含有可接受的藥物及食品添加劑，該添加劑可提高其感官特征，例如甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑。
通過將各成分溶解在適量水中，即很容易制得所述檸檬酸水溶液。在本發明方法的一個具體和優選的實施方案中，將2至5g檸檬酸溶于適量水，得到檸檬酸水溶液。
在本發明方法的另一個具體實施方案中，考慮了用果汁、如柑橘屬水果(橙、檸檬、柚等)作為所述檸檬酸水溶液來源的可能性，只要所述果汁的pH為2至2.5。在果汁不具備該pH的情況下，可以加入所需量的可接受的藥物或食品酸化劑以達到所述pH。
檸檬酸水溶液在基于碳13標記的尿素呼吸試驗的檢測幽門螺桿菌的方法操作中的用途構成了本發明的另一目的，該檸檬酸水溶液中檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5，可選其中還含有其他可接受的藥物或食品添加劑。
檸檬酸水溶液給藥后，將患者的呼吸樣本收集在適當的容器中，如測試瓶，目的在于測定碳13的基線濃度。正如人們所熟知的那樣，碳13是一種同位素，正常情況下它在天然產物(如來源于蛋白質代謝產物的尿素)中的含量是非常少的。一般，天然產生的尿素樣本中含有的碳原子主要由碳12同位素組成，碳13同位素的含量非常少(大約1.1％)。正常情況下在檸檬酸水溶液給藥后10分鐘左右重復收集樣本。適當的容器優選為如圖1和圖2所示類型的測試瓶，其特征將在描述本發明所提供的試劑盒時進行詳細討論。在本發明方法的一個具體和優選的實施方案中，患者借助于預先安裝在測試瓶中的細管向測試瓶中呼氣，之后用塞子將測試瓶密封。
然后給患者服用適量的碳13標記的尿素。“適量”一詞指安全與有效量的碳13標記的尿素，該劑量足以產生可檢測濃度的碳13標記的二氧化碳，而對患者不會引起毒性或過敏反應等副作用。
正常情況下碳13標記的尿素在水中溶解后以其水溶液的方式給藥。在本發明方法的一個具體實施方案中，將50至100mg碳13標記的尿素溶于20至50ml水。在優選的實施方案中，給患者服用的碳13標記的尿素水溶液的濃度為1至4.5mg/ml。或者，碳13標記的尿素可以以片劑的方式給藥，該片劑可選是可分散的，其中含有適量的碳13標記的尿素。
劑量與體重無關，這一點簡化了操作，由于減少了藥劑的消耗，也大大節省了經濟開支，設想例如為了按照本發明方法測定一個體重70kg的成人，要用掉100mg碳13標記的尿素，而在相應于現有技術所述的其他測定方法中，劑量是體重的函數(一般為2mg/kg體重)，一個體重70kg的成人需要140mg碳13標記的尿素。碳13標記的尿素用量較小，對患者產生的毒性及副作用的風險也就較小。所有這些使本發明的測定方法比其他已知的類似測定方法更簡單、成本更低、也更安全。另一方面，使用碳13標記的尿素優點在于沒有放射性，既可以對成人、又可以對兒童給藥，甚至可以對孕婦給藥，此外，根據需要在同一個患者身上可以重復多次。而且，該方法的實施不需要任何特殊的裝置，樣本可被送至其他測定中心，在郵寄或通過其他方式時也無需特別小心。
碳13標記的尿素是一種以藥粉、片劑及其他存在形式獲得的商品，制造商例如劍橋同位素實驗室公司。
碳13標記的尿素水溶液給藥后，將患者的呼吸樣本收集在適當的容器中，例如上述的測試瓶，目的在于測定碳13標記的尿素給藥后所述同位素的含量。一般，在尿素酶活性起作用適當時間階段之后重復收集樣本，正常情況下約為30分鐘。如前文所述，患者借助于細管向測試瓶吹氣。收集有呼吸樣本的測試瓶可在室溫下貯存數月，這對患者呼吸的成分沒有不利影響。
收集在容器中的呼吸樣本被送至實驗室，借助于適當的技術進行呼吸分析，以測定碳13標記的尿素給藥前后碳13的含量。在具體的一個發明中，用氣相色譜法進行氣體的分離，用質譜法進行碳13的測定。
由本發明所提供的基于碳13標記的尿素呼吸試驗的測定幽門螺桿菌的方法的第二種實施方案涉及在檸檬酸水溶液與碳13標記的尿素給藥之前測定呼吸樣本中碳13的基線濃度，然后同時給患者服用檸檬酸水溶液和碳13標記的尿素，該方法由下列步驟組成a)收集患者的呼吸樣本，目的在于測定碳13的基線濃度；b)同時給患者服用-一種檸檬酸水溶液，檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5；-和適量碳13標記的尿素；c)收集患者的呼吸樣本，目的在于測定服用檸檬酸水溶液與碳13標記的尿素之后的碳13含量；d)分析所收集的呼吸樣本，以測定服用碳13標記的尿素前后碳13的含量。
在進行該第二種供選擇方法時，由于同時服用檸檬酸水溶液與碳13標記的尿素，測定的持續時間減少了大約10分鐘，步驟也少了一個。
在檸檬酸水溶液與碳13標記的尿素給藥之前收集患者的呼吸樣本，目的在于測定碳13的基線濃度，如前文本發明檢測幽門螺桿菌的第一種供選擇方法的實施方案所述，樣本的收集在測試瓶中進行。
然后，給患者同時服用檸檬酸水溶液和適量碳13標記的尿素。與第一種供選擇方法的情況相同，檸檬酸水溶液由檸檬酸在水中的溶液組成，檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5，該水溶液另外可含有可接受的藥物及食品添加劑，該添加劑可提高其感官性質和特征，例如甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑。碳13標記的尿素既可以在水中溶解后以其水溶液的方式給藥，也可以以片劑的方式給藥。在本發明方法的一個具體實施方案中，將50至100mg碳13標記的尿素可選擇地溶于20至50ml水后給藥。
檸檬酸與碳13標記的尿素給藥后，收集患者的呼吸樣本于測試瓶中，目的在于測定碳13標記的尿素給藥后的所述同位素含量。一般，在尿素酶活性起作用適當時間階段之后重復收集樣本，正常情況下約為30分鐘。如前文所述，患者借助于細管向測試瓶吹氣。
收集有呼吸樣本的測試瓶可在室溫下貯存數月，這對患者呼吸的成分沒有不利影響。
收集在容器中的呼吸樣本被送至實驗室，借助于適當的技術進行呼吸分析，以測定碳13標記的尿素給藥前后碳13的含量，分析方法例如氣相色譜法和質譜法。
一般來說，為了實施本發明檢測幽門螺桿菌的任一種供選擇方法的實施方案，患者宜禁食，建議患者在進行試驗前6-8小時內不吃任何食物。
比較碳13的基線含量與碳13標記的尿素給藥后的碳13含量來對尿素酶活性進行評價。尿素酶活性的高、低或沒有表現(斷開點或參考點3-5)是具有尿素酶活性的微生物存在的指征，例如幽門螺桿菌，因而能夠指示出胃及十二指腸疾病的存在。
因此，由本發明所提供的檢測幽門螺桿菌的方法的一個具體應用為幽門螺桿菌感染的診斷，幽門螺桿菌是前述胃及十二指腸疾病的直接致病因素，診斷是通過基于碳13標記的尿素呼吸試驗的非侵入型方法進行的。所以，由本發明所提供的檢測幽門螺桿菌的方法可用于胃及十二指腸疾病的診斷，如十二指腸消化性潰瘍、十二指腸潰瘍、胃潰瘍、消化不良、非-霍奇金氏胃淋巴瘤、甚至胃癌。
本發明檢測幽門螺桿菌的方法的另一個應用是檢查胃及十二指腸疾病的治療進展，特別是幽門螺桿菌的根除作用，這是因為該方法即使在治療后最多一個月內也能測定幽門螺桿菌的根除，而不會象血清學方法那樣產生假陰性結果。
由本發明所提供的檢測幽門螺桿菌的方法無論哪一種供選擇的實施方案，都具有許多突出于其他類似已知方法的優點，它們有-該方法是一種非侵入型方法，因此不需要對患者進行胃鏡檢查；-該方法是安全的，它使用了適量穩定、無放射性的同位素(碳13)；-該方法是可靠和可重復的，它再現了胃幽門環境的標準條件，確保可能存在的幽門螺桿菌菌落的存活；-該方法是有效的，它反映了全部胃表面的感染情況；-該方法是快速的，它在48小時內出結果；-該方法是容易、簡單的，它不需要有資格的人員操作，實際上它可在醫生營業所或醫院中實施，也可以在患者自己的家中實施，然后將收集有不同呼吸樣本的密封容器送交分析實驗室；-該方法是令人舒適的，患者在進行測定的過程中不用被迫保持某一種體位，實際上患者在試驗中不必保持現有技術所述的其他測定方法所需的水平體位，他可以改變姿勢，或坐或站，唯一的限制是他在試驗中不可以吸煙或吃喝；-呼吸的收集非常簡單，成本低；-該方法具有廣泛應用，它能應用于孕婦、兒童、成人和老人。
2．檢測幽門螺桿菌的試劑盒本發明第二個目的是提供了一種用于檢測幽門螺桿菌的試劑盒，特別是用于實施上述基于碳13標記的尿素呼吸試驗的方法的試劑盒。試劑盒最簡單的形式包括一個盒子，該盒子含有-一個含有碳13標記的尿素的容器；-至少兩個指定用于裝患者呼吸的容器，其中之一指定裝檸檬酸給藥后但是碳13標記的尿素給藥前的患者呼吸，而另一個容器指定裝碳13標記的尿素給藥后的患者呼吸，所述容器由玻璃管構成，玻璃管具有帶螺帽的塞子，塞子裝有一個隔板；-向上述容器中呼氣的裝置。
試劑盒可以另外包括或可以不另外包括一個含有可以是固態的檸檬酸的容器，檸檬酸的量應使其在溶于適量水后產生pH2至2.5。在該特定的盒子中，含有檸檬酸的容器是一個扁囊或諸如此類。或者可選地，容器除檸檬酸以外可含有可接受的藥物及食品添加劑(甜味劑、矯味劑、防腐劑和著色劑)。因此，在本發明試劑盒的一個具體實施方案中，提供了一個扁囊，該扁囊含有2至5g檸檬酸、一般為4.2g，可選地還有其他添加劑，供其溶解在200ml水中。
含有碳13標記的尿素的容器可以是一個扁囊，該扁囊含有適量粉末形式的碳13標記的尿素，容器或可以是一個泡形容器，該泡形容器含有適當劑量的碳13標記的尿素藥片，容器還可以是一個密封瓶子，該瓶子含有適量碳13標記的尿素，其中所述瓶子具有適當體積，以獲得所需濃度的碳13標記的尿素水溶液。在一個具體實施方案中，含有碳13標記的尿素的容器是一個至少為20至50ml的瓶子，其中含有50至100mg粉末狀碳13標記的尿素。在另一個具體實施方案中，所述容器是一個含有可選擇性地為可分散的藥片的泡形容器，其含有75至100mg碳13標記的尿素。
指定裝患者呼吸的容器是測試瓶，如圖1和圖2所示，從圖中可以看到，所述測試瓶由一個管(1)和塞子(2)組成，管優選由玻璃制成，塞子刻有螺紋，中間有一個隔板(3)，隔板由適用于醫藥目的的彈性材料制成，可被針刺穿，針是用來收集測試瓶中含有的氣體，供其隨后的分析之用。隔板(3)經特殊設計，使其可以被氣體收集機的針刺穿，進行連續的空氣收集而沒有停頓。
為了評定本發明測定方法的可靠性和可重復性，在碳13標記的尿素給藥前后一式兩份收集呼吸樣本是重要的，因此，本發明試劑盒優選將含有四個測試瓶，其中兩個將被用于在檸檬酸給藥后但是碳13標記的尿素給藥前收集患者的呼吸，而其他兩個將在碳13標記的尿素給藥后收集患者的呼吸。為了使所得結果的整理分析簡單易行，測試瓶具有一個標識是重要的，該標識使區分開收集來自碳13標記的尿素給藥前的患者呼吸的測試瓶與收集來自碳13標記的尿素給藥后的患者呼吸的測試瓶成為可能。一般來說，用于向容器中呼氣的裝置是細管或類似裝置。
因此，在本發明的一個具體和優選的實施方案中，提供了一種用于檢測幽門螺桿菌的試劑盒，特別是用于進行前述碳13標記的尿素呼吸試驗的試劑盒，該試劑盒包括一個盒子，該盒子含有-一個含有固態檸檬酸的扁囊，檸檬酸的量足以使其在溶于適量水后產生pH2至2.5，可選還含有幾種添加劑，如甜味劑、矯味劑、防腐劑和著色劑；-一個含有適量粉末形式的碳13標記的尿素的瓶子，所述瓶子具有溶解尿素并達到所需濃度所需的體積，或者是一個含有適量碳13標記的尿素藥片的泡形容器；-四個指定裝患者呼吸的測試瓶，其中兩個將被用于在檸檬酸給藥后但是碳13標記的尿素給藥前收集患者的呼吸，而其他兩個將在碳13標記的尿素給藥后收集患者的呼吸；-幾支用于向測試瓶呼氣的細管。
給測試瓶作標記會是有利的，這樣一來可以將指定用于收集碳13標記的尿素給藥前的患者呼吸的測試瓶與用于收集碳13標記的尿素給藥后的患者呼吸的測試瓶容易區分開來。
下列實施例解釋說明本發明。
實施例1檸檬酸水溶液的制備將下列成分的混合物溶于200ml水，制得pH2至2.5檸檬酸水溶液克 百分比檸檬酸 4.2 96.1碳酸鈉 0.1 2.24檸檬香料(粉) 0.040.9天冬苯丙二肽酯 0.030.67日落黃(Sunset-Yellow) 0.002 0.04總計 4.472 99.95例2幽門螺桿菌的檢測對懷疑患有與幽門螺桿菌有關的胃及十二指腸疾病的患者進行下述測定。測定是對一個已禁食8小時的成人患者進行的。
給患者服用按照實施例1制得的200ml檸檬酸水溶液。10分鐘后，將患者的呼吸樣本一式兩份收集在標識為“基線”的測試瓶中，用于測定基線碳13含量。為了收集呼吸樣本，患者利用預先裝在測試瓶中的細管輕輕地吐出呼氣，直到由于呼氣使得在測試瓶內壁上出現冷凝為止，之后在移去細管的同時保持呼氣，最后用相應的塞子密封測試瓶。
然后，給患者服用50ml濃度為1.5mg/ml的碳13標記的尿素水溶液(劍橋同位素實驗室公司)。30分鐘后，如上所述將患者的呼吸樣本一式兩份收集在標識為“給藥后”的測試瓶中，用于測定碳13標記的尿素給藥后所述同位素的含量。
將測試瓶送交分析實驗室，對所收集的呼吸樣本進行分析，以測定碳13標記的尿素給藥前后碳13的含量。為此將樣本送入自動呼吸碳分析儀(ABCA)(Europa Cientifica,S.L)，隨后不打開瓶子借助于刺穿塞子隔板的針抽取測試瓶中含有的氣體。呼吸樣本中含有的氣體經氣相色譜法分離，按照制造商的說明用質譜法測定碳13含量。
醫生通過比較碳13基線濃度[基線]與碳13標記的尿素給藥后的碳13濃度[給藥后]，可對尿素酶活性作出判斷，從而對可能患有的與幽門螺桿菌的存在有關的胃及十二指腸疾病作出診斷。
權利要求
1．一種基于碳13標記的尿素呼吸試驗的檢測幽門螺桿菌的方法，該方法由下列步驟組成a)給患者服用一種檸檬酸水溶液，檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5；b)收集患者的呼吸樣本，目的在于測定碳13的基線含量；c)給患者服用適量碳13標記的尿素；d)收集患者的呼吸樣本，目的在于測定碳13標記的尿素給藥后的碳13含量；e)分析所收集的呼吸樣本，以測定碳13標記的尿素給藥前后的碳13含量。
2．根據權利要求1的方法，其中所述的檸檬酸水溶液另外還含有可接受的藥物或食品添加劑，選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑。
3．根據權利要求1的方法，其中所述的檸檬酸水溶液來源于果汁，可選用可接受的藥物或食品酸化劑進行酸化。
4．根據權利要求1的方法，其中用于測定基線碳13濃度的患者呼吸樣本的收集是在檸檬酸水溶液給藥后大約10分鐘進行的。
5．根據權利要求1的方法，其中碳13標記的尿素是以水溶液的形式給藥的。
6．根據權利要求5的方法，其中所述的碳13標記的尿素水溶液的濃度為1至4.5mg/ml。
7．根據權利要求1的方法，其中碳13標記的尿素是以藥片的形式給藥的。
8．根據權利要求7的方法，其中所述的藥片含有50至100mg碳13標記的尿素。
9．根據權利要求1的方法，其中用于測定碳13標記的尿素給藥后的碳13含量的患者呼吸樣本的收集是在碳13標記的尿素給藥后大約30分鐘進行的。
10．根據權利要求1的方法，其中患者的呼吸是收集在測試瓶中的。
11．根據權利要求1的方法，其中對呼吸的分析和對碳13含量的測定是用氣相色譜法和質譜法進行的。
12．根據權利要求1的方法，其中基線碳13含量與碳13標記的尿素給藥后的碳13含量的比較是患者體內存在尿素酶活性的指征。
13．一種基于碳13標記的尿素呼吸試驗的檢測幽門螺桿菌的方法，該方法由下列步驟組成a)收集患者的呼吸樣本，目的在于測定碳13的基線濃度；b)同時給患者服用-一種檸檬酸水溶液，檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5；-和適量碳13標記的尿素；c)收集患者的呼吸樣本，目的在于測定檸檬酸水溶液與碳13標記的尿素給藥之后的碳13含量；d)分析所收集的呼吸樣本，以測定碳13標記的尿素給藥前后碳13的含量。
14．根據權利要求13的方法，其中所述的檸檬酸水溶液另外還含有可接受的藥物或食品添加劑，選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑。
15．根據權利要求13的方法，其中所述的檸檬酸水溶液來源于果汁，可選用可接受的藥物或食品酸化劑進行酸化。
16．根據權利要求13的方法，其中碳13標記的尿素是溶解在水溶液中給藥的。
17．根據權利要求16的方法，其中所述的碳13標記的尿素水溶液的濃度為1至4.5mg/ml。
18．根據權利要求13的方法，其中碳13標記的尿素是以藥片的形式給藥的。
19．根據權利要求18的方法，其中所述的藥片含有50至100mg碳13標記的尿素。
20．根據權利要求13的方法，其中用于測定碳13標記的尿素給藥后的碳13含量的患者呼吸樣本的收集是在碳13標記的尿素給藥后大約30分鐘進行的。
21．根據權利要求13的方法，其中患者的呼吸是收集在測試瓶中的。
22．根據權利要求13的方法，其中對呼吸的分析和對碳13含量的測定是用氣相色譜法和質譜法進行的。
23．根據權利要求13的方法，其中基線碳13含量與碳13標記的尿素給藥后的碳13含量的比較是患者體內存在尿素酶活性的指征。
24．一種用于檢測幽門螺桿菌的試劑盒，所述檢測是通過實施根據權利要求1或13的基于碳13標記的尿素呼吸試驗的方法進行的，該試劑盒包括一個盒子，該盒子含有-一個含有碳13標記的尿素的容器；-至少兩個指定裝患者呼吸的容器，其中之一指定裝檸檬酸給藥后但是碳13標記的尿素給藥前的患者呼吸，而另一個容器指定裝碳13標記的尿素給藥后的患者呼吸，所述容器由玻璃管構成，玻璃管具有帶螺帽的塞子，塞子裝有一個隔板；-向上述容器中呼氣的裝置。
25．根據權利要求24的試劑盒，該試劑盒另外包括一個含有檸檬酸的容器。
26．根據權利要求25的試劑盒，其中檸檬酸是固態的，其含量使其在溶于適量水后產生pH2至2.5。
27．根據權利要求26的試劑盒，其中含有檸檬酸的容器是一個扁囊。
28．根據權利要求25的試劑盒，其中檸檬酸容器除檸檬酸以外還含有其他可接受的藥物或食品添加劑，選自甜味劑、矯味劑、防腐劑和著色劑。
29．根據權利要求24的試劑盒，其中含有碳13標記的尿素的容器是一個瓶子，該瓶子含有適量碳13標記的尿素，該瓶子具有適當的體積適合于獲得所需濃度的碳13標記的尿素水溶液。
30．根據權利要求24的試劑盒，其中含有碳13標記的尿素的容器是一個泡形容器，該泡形容器含有一個可選擇地為可分散的藥片，該藥片含有適量碳13標記的尿素。
31．根據權利要求24的試劑盒，其中指定裝患者呼吸的容器是測試瓶，該測試瓶由一個玻璃制成的管(1)和塞子(2)組成，塞子刻有螺紋，并且中間有一個隔板(3)，隔板由適用于藥用目的的彈性材料制成，其可被針刺穿，針收集測試瓶中含有的體氣，供其隨后的分析之用。
32．根據權利要求24的試劑盒，其中所述的向容器中呼氣的裝置是細管。
33．一種用于檢測幽門螺桿菌的試劑盒，其適用于實施根據權利要求1或13的基于碳13標記的尿素呼吸試驗的方法，該試劑盒包括一個盒子，該盒子含有-一個含有固態檸檬酸的扁囊，檸檬酸的量足以使其在溶于適量水后產生pH2至2.5，可選擇地還含有幾種添加劑，如甜味劑、矯味劑、防腐劑和著色劑；-一個含有碳13標記的尿素的瓶子，選自ⅰ)一個含有適量碳13標記的尿素的瓶子，所述瓶子具有溶解尿素并達到預定濃度所需的體積，或者另一種選擇是ⅱ)一個含有適量碳13標記的尿素藥片的泡形容器，藥片可選擇地為可分散的；-四個指定裝患者呼吸的測試瓶，其中兩個將被用于在檸檬酸給藥后但是碳13標記的尿素給藥前收集患者的呼吸，而其他兩個將在碳13標記的尿素給藥后收集患者的呼吸；-幾支用于向測試瓶呼氣的細管。
34．根據權利要求33的試劑盒，其中所述的扁囊含有2至5g檸檬酸，以及可選擇的其他添加劑，供在適量水中溶解之用。
35．根據權利要求33的試劑盒，其中含有碳13標記的尿素的瓶子是一個至少20至50ml的瓶子，其中含有50至100mg碳13標記的尿素。
36．根據權利要求33的試劑盒，其中所述的藥片含有50至100mg碳13標記的尿素。
37．根據權利要求33的試劑盒，其中對所述的測試瓶進行了標識，使容易區分開用于收集來自碳13標記的尿素給藥前的患者呼吸的測試瓶與用于收集來自碳13標記的尿素給藥后的患者呼吸的測試瓶成為可能。
38．一種檸檬酸水溶液的用途，該檸檬酸水溶液中檸檬酸的含量足以產生pH2至2.5，可選擇地還含有其他藥學上可接受的添加劑，該檸檬酸水溶液用于實施基于碳13標記的尿素呼吸試驗的檢測幽門螺桿菌的方法中。
全文摘要
本方法是基于碳13標記的尿素呼吸試驗,包括a)給患者服用一種pH2至2.5的檸檬酸水溶液;b)收集患者的呼吸樣本,目的在于測定碳13的基線含量;c)給患者服用適量碳13標記的尿素;d)收集患者的呼吸樣本,目的在于測定碳13標記的尿素給藥后的碳13含量;e)分析所收集的呼吸樣本,以測定碳13標記的尿素給藥前后的碳13含量。本發明試劑盒具有一個檸檬酸容器、還有一個碳13標記的尿素容器、指定裝患者呼吸的測試瓶、和向測試瓶中呼氣的裝置。
文檔編號G01N33/00GK1219238SQ9719276
公開日1999年6月9日 申請日期1997年7月21日 優先權日1996年11月12日
發明者A·比塞羅·德·本格亞·瓦萊奧 申請人:伊索梅德公司