專利名稱：直接微量簡便快速的全血免疫測試方法及工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種直接微量簡便快速的全血免疫測試技術。
眾所周知，當前采用的EIA、RIA、FIA等免疫測定技術都是用血清樣本進行測試，需要抽取全血，待血清析出后，通過離心、分離，取出血清后才能進行。一般需要30～60分鐘，也有的以濾紙取全血通過浸出后，再進行測試，這同樣煩鎖，在進行流行病學調查、鑒測時需要對大量人員進行普查，采取血清進行測試，使用器械多，分離時間長，很難在現場直接進行，給調查帶來不少困難。在臨床進行測試時給病人帶來痛苦，而且需要早晨空腹抽血，等待血清析出后才能檢測，最快也要一天才有檢查報告，這樣延長整個檢測時間，另外到外地進行檢測時攜帶使用保管都很不方便。雖然當前國內外已有供測試藥盒，但未能提供直接用全血進行測試的技術和器材。
本發明的的目的是克服上述不足之處，和根據醫療技術迫切要求而發明一種直接微量、簡便快速的全血免疫測試技術。通常免疫測試技術是用血清進行檢測的免疫反應(Ag-Ab反應)或其它能在固相載體(聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯等塑料或纖維素、葡聚糖、瓊脂糖等)上進行的反應，其參入反應的有效部分是通過載體的聯接而發揮作用的，而采用全血快速直接反應時，其中紅細胞纖維蛋白等非有效部分是不參入反應，它們的存在并不阻礙抗原、抗體等其它有效部分的反應，主要是通過血液凝固而干擾后續反應的進行，只要阻止血液凝固或除去凝塊其反應就能在全血條件下照常進行本發明就是根據這一原理而設計的。
本發明的直接快速的全血免疫測試方法如下(1)將抗原、抗體及其它反應物在PH8.0，0.01MTris，HCl，3mM KCl的緩沖體系中按2-20μg/ml濃度包被于聚苯乙烯等塑料反應板，膜、管、球上，室溫反應兩小時或4℃過夜取出，用NS洗一次在低于45℃時涼干放入裝有干燥硅膠的塑料袋中，排氣、扎緊、密封、保存。(37～39℃可以保存一個月以上無影響)便于郵寄和保管。
2、用40孔、96孔、聚苯乙烯反應板和4×0.7Cm塑料管即在板的每孔和管中放入少量不影響結合反應的纖維物(如尼龍纖維或其它織物5～10mg)以便于血液的凝固和避免血塊的粘附，然后每孔加100μl NS，每管加0.5ml NS，將血紅蛋白吸管采吸的20μl全血樣本放入或取手指頭的全血一滴直接放入讓被測物在血液的凝固的同時與載體上的反應物結合0.5～2小時后甩掉纖維，用NS溶液洗三次后，即進行跡蹤的后續反應或放入盛有硅膠干燥的塑料袋中進行抽氣、扎緊密封4℃保存，便于郵寄和攜帶。在盛夏置于室溫中一個月以上不影造測試。如果被測物是血細胞或其中的組份可在孔管中不放纖維，溶液由NS改為DW(蒸餾水)即可。如果被測物是血液凝固中的物質，可在孔管中不加纖維，而加100μl或0.5ml的CID血液保存液即可。
3、被測物的跡蹤檢測將以上全血反應后經NS洗過三次的板或管，每孔放入100μl或每管放入0.2～0.5ml快速反應跡蹤試劑在室溫中反應5～15分鐘后用NS洗甩三次后，每孔加OPD或TmB底物100μl(管加0.2～0.5ml)10～15分鐘顯色觀察，在相應的492和590nM渡長下測定OD值與空白陰性、陽性對照比較進行判斷。如果加其它的跡蹤物如抗人ZgG-HRP、SPA-HRP等反應時間需延長很多。
本發明的直接微量簡便快速的全血免疫測試技術，適用于抗原抗體和其它活性物質的測試，便于到現場直接進行病疫防治和普查，應用范圍廣。并具有操作程序簡單，檢測速度快，經濟效益高、準確性好，便于異地檢查等特點，本發明的測試方法和工藝應用在血吸蟲等病的普查、診斷、防治過程中，取得了顯著的社會經濟效益，減輕了防治人員的勞動強度和減輕了廣大病人的痛苦，每天能對數百人進行檢查，深受廣大基層防治人員和人民群眾歡迎。
權利要求
1.一種直接微量簡便快速的全血免疫測試方法及工藝其特征如下A、將抗原抗體及其它反應物在PH8.0，0.01M，TriS-HCl，3mnKCl的緩沖體系中按2～20μg/ml濃度，包被于聚苯乙烯等塑料反應板、管、球上，室溫反應兩小時或4℃過夜取出，用NS洗一次在低于45℃時涼干放入裝有干燥硅膠的塑料袋中、排氣、扎緊密封保存在37～39℃可以保存一個月以上無影響。B、用40孔、96孔聚苯乙烯反應板和4×0.7cm塑料管在板的每孔和管中放入少量不影響結合反應的纖維物(5～10mg)便于血液的凝固和避免血塊的粘附，然后每孔加100μl，NS每管加0.5μlNS，將血紅蛋白吸管采吸20μl全血樣本放入或取手指頭的全血一滴直接放入。讓被測物在血液的凝固的同時與載體上的反應物結合0.5～2小時后甩掉濾嘴纖維和NS溶液，洗三次后，進行跟蹤的后續反應或放入盛有硅膠干燥的塑料袋中，進行抽氣、扎緊，密封4℃保存，(1)如被測物是血細胞或其中的組份，可在孔管中不放纖維溶液由NS(生理鹽水)改為DW蒸餾水)即可(2)如被測物是血液凝固中的物質可在孔管中不加纖維而加100ml或0.5ml的CID血液保存液即可。C、被測物的跡蹤檢測，將以上全血反應后經NS洗過三次的板或管，每孔放入100ml或每管放入0.2～0.5m快速反應跡蹤測試在室溫中反應5～15分鐘后用NS洗甩三次后，每孔加OPD或TMB底物100μl(管加0.2～0.5ml)10～15分鐘后)顯色觀察。
全文摘要
本發明屬于一種直接微量簡便快速的全血免疫測試方法及工藝，目前采用的EIA、RIA、FIA等免疫測定技術都是靠抽取全血待血清析出后通過離心、分離取出血清后才能進行，這樣使用器械多，分離時間長，難以到現場直接進行，對病疫的調查和測試帶來麻煩給病人帶來痛苦，本發明是采用一種直接微量簡便快速的全血免疫測試技術，可到普查現場直接測試，簡化操作程序，加速反應提高工作效率和經濟效益、減輕了病人的痛苦和減輕了勞動強度，具有性能穩定、操作方法簡單，檢測速度快、效果好、效益高等特點。
文檔編號G01N33/53GK1055064SQ9010542
公開日1991年10月2日 申請日期1990年3月16日 優先權日1990年3月16日
發明者姜高分, 姜光斗 申請人:姜高分, 姜光斗