本發(fa)明涉及一種基于發(fa)光細菌法的(de)大氣(qi)顆粒(li)物中(zhong)有機污染(ran)物毒性檢測方法，屬于發(fa)光細菌的(de)綜合(he)毒性檢測領(ling)域。

背景技術：

隨著經濟的(de)快速發展(zhan),城(cheng)市(shi)建設規模的(de)擴大(da)(da),大(da)(da)氣(qi)總懸浮(fu)顆(ke)粒(li)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(tsp)污(wu)染(ran)已成為(wei)我國(guo)各大(da)(da)城(cheng)市(shi)面臨的(de)重要(yao)問題。大(da)(da)部分(fen)有(you)(you)(you)機(ji)污(wu)染(ran)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)容易吸附在(zai)顆(ke)粒(li)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)上(shang)，研(yan)究表明有(you)(you)(you)機(ji)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)是(shi)(shi)大(da)(da)氣(qi)細顆(ke)粒(li)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)最重要(yao)的(de)組分(fen)占大(da)(da)氣(qi)顆(ke)粒(li)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)40%。從大(da)(da)氣(qi)顆(ke)粒(li)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)檢測出的(de)有(you)(you)(you)機(ji)污(wu)染(ran)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)種(zhong)類(lei)繁多(duo)(duo),且多(duo)(duo)數物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)質對(dui)(dui)人體(ti)有(you)(you)(you)害。如多(duo)(duo)環芳烴(jing)類(lei)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)質,苯(ben)(ben)(ben)并(bing)[a]芘、苯(ben)(ben)(ben)并(bing)[b]熒蒽(en)、苯(ben)(ben)(ben)并(bing)[k]熒蒽(en)、苯(ben)(ben)(ben)并(bing)[ghi]芘等均(jun)為(wei)致癌物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu);環境(jing)樣(yang)品已中(zhong)檢出百余種(zhong)多(duo)(duo)環芳烴(jing)類(lei)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)質。由于多(duo)(duo)環芳烴(jing)種(zhong)類(lei)多(duo)(duo),在(zai)環境(jing)中(zhong)分(fen)布廣泛,對(dui)(dui)人們的(de)康健危(wei)害性也大(da)(da)。苯(ben)(ben)(ben)酚類(lei)尤其是(shi)(shi)多(duo)(duo)氯酚、苯(ben)(ben)(ben)胺類(lei)和硝(xiao)基芳香(xiang)烴(jing)類(lei)均(jun)為(wei)有(you)(you)(you)毒物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)質;酞酸酯(zhi)類(lei)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)質已被證實是(shi)(shi)環境(jing)激(ji)素類(lei)污(wu)染(ran)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)。因此,對(dui)(dui)大(da)(da)氣(qi)顆(ke)粒(li)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)有(you)(you)(you)機(ji)污(wu)染(ran)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)毒性的(de)測定對(dui)(dui)研(yan)究大(da)(da)氣(qi)污(wu)染(ran)狀況和治理是(shi)(shi)很有(you)(you)(you)必要(yao)的(de)。

捕集大(da)(da)氣(qi)顆(ke)粒(li)物后(hou)必須進行(xing)高效提取(qu)(qu)后(hou)才能測(ce)(ce)定(ding)(ding),有人對(dui)超聲波提取(qu)(qu)條件進行(xing)了(le)詳(xiang)細研究,并于(yu)(yu)索氏抽提效果進行(xing)了(le)比較(jiao)(jiao)。前(qian)人認(ren)為以正己烷+丙酮（1:1）為提取(qu)(qu)劑,微(wei)(wei)波提取(qu)(qu)功率(lv)為40w,提取(qu)(qu)時間為20min時最(zui)為合適,,將試樣(yang)提取(qu)(qu)并凈化(hua)后(hou)用(yong)gc-ms法測(ce)(ce)定(ding)(ding)的(de)(de)(de)報(bao)(bao)道較(jiao)(jiao)多,也有用(yong)hplc一(yi)(yi)熒光(guang)檢測(ce)(ce)器或(huo)化(hua)學發光(guang)監(jian)測(ce)(ce)器測(ce)(ce)定(ding)(ding)的(de)(de)(de)報(bao)(bao)道。此外(wai)用(yong)大(da)(da)氣(qi)壓離子(zi)化(hua)lc一(yi)(yi)ms法測(ce)(ce)定(ding)(ding)苯并花,及傅里(li)葉變(bian)換熒光(guang)顯微(wei)(wei)鏡測(ce)(ce)定(ding)(ding)顆(ke)粒(li)中(zhong)的(de)(de)(de)多環芳(fang)烴也有報(bao)(bao)道。用(yong)gc一(yi)(yi)ms法同時測(ce)(ce)定(ding)(ding)多環芳(fang)烴和(he)正構(gou)烷烴及有機(ji)氯化(hua)物的(de)(de)(de)報(bao)(bao)道較(jiao)(jiao)多。但是上述檢測(ce)(ce)方(fang)(fang)法操(cao)作復雜，耗時較(jiao)(jiao)多，成本(ben)較(jiao)(jiao)高，不(bu)利于(yu)(yu)大(da)(da)氣(qi)環境的(de)(de)(de)常規(gui)檢測(ce)(ce)和(he)應急檢測(ce)(ce)。目(mu)前(qian),我國尚未建立(li)大(da)(da)氣(qi)顆(ke)粒(li)物樣(yang)品有機(ji)物毒(du)性(xing)檢測(ce)(ce)的(de)(de)(de)規(gui)范方(fang)(fang)法,因此,構(gou)建一(yi)(yi)種成本(ben)低(di)、操(cao)作簡(jian)便(bian)的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法,對(dui)大(da)(da)氣(qi)顆(ke)粒(li)物中(zhong)有機(ji)污(wu)染物毒(du)性(xing)進行(xing)及時、快速、準(zhun)確、定(ding)(ding)量的(de)(de)(de)檢測(ce)(ce)的(de)(de)(de)工作對(dui)人們的(de)(de)(de)健(jian)康(kang)和(he)生(sheng)活(huo)有重大(da)(da)意義。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種基于發光(guang)細(xi)菌法的大(da)氣(qi)顆粒物(wu)中(zhong)有(you)(you)機(ji)(ji)污染(ran)物(wu)毒性(xing)(xing)檢測(ce)(ce)方法，該檢測(ce)(ce)方法采(cai)用(yong)丙醇-正己烷混(hun)合溶(rong)液為萃(cui)取劑的加壓流體萃(cui)取方法對樣(yang)品中(zhong)的非(fei)水(shui)溶(rong)性(xing)(xing)有(you)(you)毒物(wu)質進行浸提，利用(yong)發光(guang)細(xi)菌對有(you)(you)毒有(you)(you)害物(wu)質的靈敏性(xing)(xing)和較低(di)的檢測(ce)(ce)限，建立一種簡便(bian)快速的大(da)氣(qi)顆粒物(wu)中(zhong)有(you)(you)機(ji)(ji)物(wu)綜合毒性(xing)(xing)檢測(ce)(ce)方法,降(jiang)低(di)了對采(cai)樣(yang)量的要求(qiu)。

本發明的(de)具(ju)體技(ji)術方案如下(xia)：一種(zhong)基(ji)于發光細菌法(fa)的(de)大氣顆粒物(wu)中有機污(wu)染物(wu)毒(du)性(xing)檢測方法(fa),所(suo)述方法(fa)包(bao)括(kuo)以下(xia)步驟(zou)：

（1）樣(yang)品(pin)的(de)采集與保存(cun)：利(li)用大(da)氣(qi)顆(ke)(ke)粒物采樣(yang)器采集大(da)氣(qi)顆(ke)(ke)粒物樣(yang)品(pin),采樣(yang)結束后(hou),用鋁箔紙包裹好載有大(da)氣(qi)顆(ke)(ke)粒物樣(yang)品(pin)的(de)濾膜,密(mi)閉低溫保存(cun),防(fang)止樣(yang)品(pin)中毒性物質的(de)損失；

（2）樣(yang)(yang)(yang)品的萃(cui)(cui)取(qu)：將載(zai)有(you)大氣顆粒物樣(yang)(yang)(yang)品的濾(lv)膜(mo)破碎(sui)成細小碎(sui)片,選用(yong)丙醇-正己(ji)烷混(hun)合溶劑(ji)做萃(cui)(cui)取(qu)劑(ji)，對(dui)樣(yang)(yang)(yang)品中(zhong)的有(you)機(ji)污(wu)染物用(yong)加(jia)(jia)壓(ya)(ya)流體萃(cui)(cui)取(qu)法進行萃(cui)(cui)取(qu)，加(jia)(jia)壓(ya)(ya)流體萃(cui)(cui)取(qu)裝置(zhi)設置(zhi)載(zai)氣壓(ya)(ya)力0.8mpa，萃(cui)(cui)取(qu)池壓(ya)(ya)1200-2000psi，加(jia)(jia)熱溫度120-180℃，加(jia)(jia)熱5分鐘，萃(cui)(cui)取(qu)結(jie)束后加(jia)(jia)入二甲基亞砜,然后通過(guo)旋轉蒸發去除丙醇-正己(ji)烷混(hun)合溶劑(ji),獲得樣(yang)(yang)(yang)品液(ye)；同時以(yi)空白(bai)濾(lv)膜(mo)按照(zhao)(zhao)載(zai)有(you)大氣顆粒物樣(yang)(yang)(yang)品的濾(lv)膜(mo)相同的處理(li)方法得到的萃(cui)(cui)取(qu)液(ye)作為對(dui)照(zhao)(zhao)液(ye)；

（3）樣(yang)品(pin)(pin)的(de)毒(du)(du)性檢測:調節樣(yang)品(pin)(pin)液的(de)ph并(bing)將樣(yang)品(pin)(pin)液稀釋，使ph達到7,且(qie)樣(yang)品(pin)(pin)液中(zhong)二甲基亞砜含量(liang)為(wei)1%(v/v）,然后將發(fa)光(guang)(guang)細菌(jun)(jun)培養液、經(jing)稀釋的(de)樣(yang)品(pin)(pin)液、15%nacl溶液和純(chun)凈水按(an)體積比為(wei)1：2：4：13的(de)比例混勻,進行發(fa)光(guang)(guang)細菌(jun)(jun)毒(du)(du)性試驗，測定對(dui)(dui)發(fa)光(guang)(guang)細菌(jun)(jun)15min的(de)發(fa)光(guang)(guang)強度，同(tong)時將對(dui)(dui)照液按(an)照樣(yang)品(pin)(pin)液相同(tong)處理后進行發(fa)光(guang)(guang)細菌(jun)(jun)毒(du)(du)性試驗作(zuo)為(wei)空(kong)白對(dui)(dui)照，測定對(dui)(dui)發(fa)光(guang)(guang)細菌(jun)(jun)15min的(de)發(fa)光(guang)(guang)強度；

（4）樣品毒性的(de)表(biao)達(da):采用發(fa)光細(xi)菌15min的(de)發(fa)光抑制率或同氯化汞進行綜合(he)毒性的(de)當量濃(nong)度比對(dui),來表(biao)征(zheng)大(da)氣(qi)顆粒物中有機(ji)污染物的(de)綜合(he)毒性水平。

所述(shu)發光細菌為費(fei)氏弧(hu)菌或明亮發光桿菌。

所述丙醇-正己烷混合(he)溶劑(ji)為農殘級丙醇與農殘級正己烷的(de)按體(ti)積比(bi)為1:1的(de)比(bi)例混合(he)而成。

所述樣品液(ye)和對照液(ye)均設3組平行測(ce)定(ding)發(fa)(fa)光(guang)抑制率,發(fa)(fa)光(guang)抑制率相(xiang)對偏差不超(chao)過10%,結果取3組測(ce)定(ding)發(fa)(fa)光(guang)抑制率的平均值。

有益效果：

本發(fa)(fa)明(ming)的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)方法能夠適應(ying)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)量小(xiao)的(de)(de)物(wu)質(zhi)的(de)(de)綜合毒性(xing)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)，其選擇丙(bing)(bing)酮(tong)(tong)-正(zheng)己烷混合溶液(ye)(ye)作為浸(jin)提(ti)液(ye)(ye)對(dui)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)中(zhong)的(de)(de)毒性(xing)物(wu)質(zhi)進(jin)行浸(jin)提(ti)，比傳統的(de)(de)水提(ti)法具有更好的(de)(de)浸(jin)提(ti)效果(guo)。然后將(jiang)丙(bing)(bing)酮(tong)(tong)-正(zheng)己烷混合溶液(ye)(ye)中(zhong)的(de)(de)毒性(xing)物(wu)質(zhi)轉移到對(dui)發(fa)(fa)光(guang)細菌低毒的(de)(de)二甲基亞砜溶劑中(zhong)，提(ti)高(gao)(gao)了檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)結(jie)果(guo)準(zhun)確度。本方法利用發(fa)(fa)光(guang)細菌法進(jin)行檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)，樣(yang)品(pin)(pin)(pin)與(yu)發(fa)(fa)光(guang)細菌的(de)(de)反應(ying)時間(jian)僅(jin)為15分鐘，能夠迅速(su)獲(huo)得檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)結(jie)果(guo)，靈敏度高(gao)(gao)、適應(ying)性(xing)強、重復(fu)性(xing)好，適應(ying)大批量樣(yang)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)快速(su)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)，大大縮短了綜合毒性(xing)的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)時間(jian)，提(ti)高(gao)(gao)了檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)效率。

附圖說明

圖(tu)1、為不同濃度的二(er)甲基亞(ya)砜對發(fa)(fa)光細菌發(fa)(fa)光強(qiang)度的影響(xiang)關系圖(tu)。

具體實施方式

為了使(shi)本技術領域(yu)的(de)人員更好地理解本發(fa)明,并使(shi)本發(fa)明的(de)上述優(you)點能夠更加明顯易(yi)懂,下面結合附(fu)圖(tu)及具體實施例對本發(fa)明作進一步(bu)詳細(xi)的(de)說明。

實施例1

基于發光細(xi)菌法的大氣顆粒物(wu)中有機(ji)物(wu)染物(wu)毒(du)性檢測方法，其具(ju)體(ti)操作分為以下(xia)4個步驟：

（1）樣(yang)(yang)品(pin)的采(cai)集(ji)與保(bao)存(cun)：嚴格按照環(huan)境空氣(qi)質量(liang)監(jian)測(ce)規范(fan)等相關規范(fan)流程,利用(yong)大(da)(da)氣(qi)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)物(wu)(wu)采(cai)樣(yang)(yang)器采(cai)集(ji)大(da)(da)氣(qi)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)物(wu)(wu)樣(yang)(yang)品(pin),本實例(li)中利用(yong)大(da)(da)氣(qi)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)物(wu)(wu)采(cai)樣(yang)(yang)器采(cai)集(ji)大(da)(da)氣(qi)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)物(wu)(wu)pm2.512小時,采(cai)樣(yang)(yang)結束后,取下濾膜,用(yong)鋁箔紙包裹好后置于(yu)聚乙(yi)烯(xi)自封袋(dai)中,排盡空氣(qi),密閉保(bao)存(cun)于(yu)-20℃的冰箱中,以防止樣(yang)(yang)品(pin)中毒性(xing)物(wu)(wu)質的損失。

（2）樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)浸提：將載(zai)(zai)有大氣顆粒物樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)濾膜(mo)破碎成細小碎片,選擇體積比1：1的(de)農殘級丙(bing)醇和正己(ji)(ji)烷溶劑(ji)混合液(ye)(ye)對(dui)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)中(zhong)毒性物質用加(jia)(jia)壓(ya)流體萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)法進行(xing)萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)。加(jia)(jia)壓(ya)流體萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)裝置設置載(zai)(zai)氣壓(ya)力0.8mpa,萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)池壓(ya)1200-2000psi，加(jia)(jia)熱(re)溫度120-180℃；萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)池壓(ya)優選1500psi；加(jia)(jia)熱(re)溫度優選150℃，然后加(jia)(jia)熱(re)5分鐘，萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)3次(ci)。在(zai)對(dui)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)進行(xing)萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)后,再(zai)在(zai)萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)液(ye)(ye)中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)二甲(jia)基(ji)亞砜,然后通(tong)過旋(xuan)轉蒸發去(qu)除丙(bing)醇-正己(ji)(ji)烷混合溶液(ye)(ye),以獲得含(han)有有機污染樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)二甲(jia)基(ji)亞砜溶液(ye)(ye)。同時以空白濾膜(mo)按照載(zai)(zai)有大氣顆粒物樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)濾膜(mo)相(xiang)同的(de)處理(li)方法得到的(de)萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)液(ye)(ye)作為(wei)對(dui)照液(ye)(ye)。

由于大氣顆粒物中(zhong)的有機(ji)污染物多(duo)為脂溶(rong)(rong)性物質，因此本(ben)試驗利用加壓流體(ti)萃取法對毒(du)性物質進行抽提(ti)。本(ben)發明中(zhong)所有方法中(zhong)采用的提(ti)取液(ye)為丙酮/正(zheng)己烷(wan)（體(ti)積比(bi)1：1），通(tong)過兩種不同極性的溶(rong)(rong)液(ye)以不同比(bi)例配置成混(hun)合提(ti)取液(ye)，高(gao)效(xiao)率(lv)地提(ti)取全部有機(ji)物，要比(bi)單一的提(ti)取液(ye)效(xiao)果(guo)更佳。

以蒸餾(liu)水為對(dui)(dui)照，分別(bie)測定了(le)甲醇(chun)、二甲亞(ya)砜、丙酮(tong)(tong)-正己(ji)烷混合液對(dui)(dui)發光細菌的生物毒性。結果(guo)表(biao)明，丙酮(tong)(tong)-正己(ji)烷混合溶(rong)劑(ji)對(dui)(dui)發光細菌具有強毒性，而二甲亞(ya)砜的毒性較小(xiao)，不同有機溶(rong)劑(ji)對(dui)(dui)發光細菌發光強度(du)的影響見下(xia)表(biao)1。

表(biao)1不同(tong)有機溶劑對(dui)發光(guang)細菌發光(guang)強度的影(ying)響(xiang)

二(er)(er)甲(jia)基(ji)亞(ya)(ya)砜相對(dui)于其(qi)(qi)他(ta)有機溶(rong)劑對(dui)發(fa)光(guang)(guang)(guang)細菌的(de)毒性較小,故檢(jian)測(ce)大氣顆粒物(wu)中有機污(wu)染物(wu)生物(wu)毒性時(shi)常用二(er)(er)甲(jia)基(ji)亞(ya)(ya)砜交換極性的(de)萃取溶(rong)劑獲取污(wu)染物(wu)提取液。本實驗采(cai)用二(er)(er)甲(jia)基(ji)亞(ya)(ya)砜配制多環芳烴化合(he)物(wu)測(ce)試液,并為(wei)使其(qi)(qi)對(dui)發(fa)光(guang)(guang)(guang)細菌發(fa)光(guang)(guang)(guang)強(qiang)(qiang)度(du)(du)的(de)影(ying)響減(jian)至最小,在(zai)溶(rong)解(jie)和測(ce)試過(guo)程中保持樣品溶(rong)液中二(er)(er)甲(jia)基(ji)亞(ya)(ya)砜濃(nong)(nong)度(du)(du)≤0.1%(v/v)。由圖1可知(zhi)當二(er)(er)甲(jia)基(ji)亞(ya)(ya)砜濃(nong)(nong)度(du)(du)為(wei)0.1%～0.75%(v/v)時(shi)對(dui)發(fa)光(guang)(guang)(guang)細菌發(fa)光(guang)(guang)(guang)強(qiang)(qiang)度(du)(du)無甚影(ying)響,其(qi)(qi)相對(dui)發(fa)光(guang)(guang)(guang)強(qiang)(qiang)度(du)(du)保持在(zai)97%～99%間。當二(er)(er)甲(jia)亞(ya)(ya)砜濃(nong)(nong)度(du)(du)>1%(v/v)時(shi)對(dui)發(fa)光(guang)(guang)(guang)細菌發(fa)光(guang)(guang)(guang)強(qiang)(qiang)度(du)(du)的(de)影(ying)響顯(xian)著,且隨二(er)(er)甲(jia)亞(ya)(ya)砜濃(nong)(nong)度(du)(du)的(de)升高而發(fa)光(guang)(guang)(guang)細菌發(fa)光(guang)(guang)(guang)強(qiang)(qiang)度(du)(du)逐(zhu)漸減(jian)弱,二(er)(er)者間存在(zai)極顯(xian)著負相關關系(p<0.001)。

本試(shi)驗首先采用(yong)丙(bing)酮(tong)-正(zheng)己(ji)烷(wan)混合(he)溶(rong)(rong)劑(ji)對大(da)氣顆(ke)粒(li)物進行萃(cui)取，然后(hou)在丙(bing)醇-正(zheng)己(ji)烷(wan)提取物中加入對發光細(xi)菌低毒(du)的(de)二(er)甲基亞砜，最后(hou)通過旋轉(zhuan)蒸發去(qu)除丙(bing)酮(tong)-正(zheng)己(ji)烷(wan)混合(he)溶(rong)(rong)劑(ji)，以獲得(de)大(da)氣顆(ke)粒(li)物樣(yang)品提取物的(de)二(er)甲亞砜溶(rong)(rong)液作為(wei)大(da)氣顆(ke)粒(li)物生(sheng)物測(ce)定所需的(de)最終浸提液，不會影(ying)響檢測(ce)結(jie)果的(de)準確性(xing)。

（3）浸提(ti)液(ye)(ye)(ye)的(de)(de)毒(du)(du)性檢測(ce):調(diao)節樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)液(ye)(ye)(ye)的(de)(de)ph并將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)液(ye)(ye)(ye)稀釋，調(diao)節ph達(da)(da)到(dao)7，經(jing)稀釋的(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)液(ye)(ye)(ye)中二甲基(ji)亞砜(feng)含(han)量為1%(v/v）,通(tong)過計算經(jing)稀釋的(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)液(ye)(ye)(ye)的(de)(de)體積(ji),確定(ding)取體積(ji)比為1：2：4：13發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)培養(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)、經(jing)稀釋的(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)液(ye)(ye)(ye)、15%nacl和純凈水(shui),使濃(nong)度(du)(du)低于費氏弧菌(jun)(jun)的(de)(de)最適(shi)鹽度(du)(du)濃(nong)度(du)(du),可以通(tong)過調(diao)節濃(nong)度(du)(du)達(da)(da)到(dao)最適(shi)鹽度(du)(du),不會影響(xiang)檢測(ce)結果的(de)(de)準(zhun)確性。取50μl發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)培養(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)，加入(ru)100μl經(jing)稀釋的(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)液(ye)(ye)(ye)、200μl15%nacl溶(rong)液(ye)(ye)(ye)和650μl純凈水(shui)，混勻，放置15min，然后(hou)利用(yong)sdimicrotoxmodel500溫(wen)(wen)控(kong)毒(du)(du)性儀（自(zi)帶溫(wen)(wen)控(kong)和校準(zhun)裝(zhuang)置）及標(biao)配的(de)(de)費氏弧菌(jun)(jun)進行(xing)測(ce)定(ding)，該測(ce)試方法還適(shi)用(yong)于明(ming)亮(liang)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)桿菌(jun)(jun)等海洋(yang)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)。發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)可選用(yong)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)凍干(gan)粉(fen)或新(xin)鮮細(xi)(xi)菌(jun)(jun)培養(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)。但由(you)于發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)凍干(gan)粉(fen)價格昂貴,因(yin)此本試驗(yan)擬使用(yong)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)新(xin)鮮培養(yang)(yang)液(ye)(ye)(ye)。測(ce)定(ding)其對發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)一費氏弧菌(jun)(jun)15分鐘后(hou)的(de)(de)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)強度(du)(du)，同時將對照液(ye)(ye)(ye)按照樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)液(ye)(ye)(ye)相同處理后(hou)進行(xing)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)毒(du)(du)性試驗(yan)作為空白(bai)對照，測(ce)定(ding)對發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)15min的(de)(de)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)強度(du)(du)。

樣品液和對(dui)照液平(ping)行測(ce)定3次發光(guang)抑制率，發光(guang)抑制率相(xiang)對(dui)偏差不超過10%，結果分別取3次測(ce)定發光(guang)抑制率的(de)平(ping)均值。

(4)樣品毒(du)性(xing)的(de)表(biao)達:采用發光細菌15min的(de)發光抑制率,來表(biao)征大氣顆粒物(wu)中(zhong)有機污(wu)染物(wu)的(de)綜合毒(du)性(xing)水平。

發(fa)光(guang)抑制率=（對(dui)照(zhao)發(fa)光(guang)強度-樣品發(fa)光(guang)強度）/對(dui)照(zhao)發(fa)光(guang)強度×100%

發光抑制(zhi)率(lv)(lv)越(yue)(yue)大,樣(yang)品浸提液(ye)的(de)毒性越(yue)(yue)大,發光抑制(zhi)率(lv)(lv)越(yue)(yue)小,樣(yang)品浸提液(ye)的(de)毒性越(yue)(yue)小。采用國標gb/t15441-1995方法(fa)，急性毒性水(shui)平利(li)用參比氯化汞(gong)濃度（mg/l）來表(biao)征詳見表(biao)2：

表(biao)2水質(zhi)急性(xing)毒性(xing)（發光細(xi)菌(jun)法(fa)）的分級標準

本實例(li)中,sdimicrotoxmodel500溫控毒性儀三次測(ce)定的發光抑(yi)制率結(jie)果分別為85.8%、84.5%和86.6%,其最終的發光抑(yi)制率測(ce)定結(jie)果為85.6%,相對發光率為14.4%，毒性級別為高毒。