尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑及制備方法
【專利摘要】本發明屬于尿液檢測試劑，具體涉及一種對人體內異常代謝物—5-羥吲哚乙酸檢測試劑及制備方法。所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑，包括Hg2+、Hg22+、Cu2+、WO42-、SO42-和NO3-的水溶液。所述制備方法包括如下步驟：硫酸溶液的制備；硝酸溶液的制備；A溶液的制備；B溶液的制備；C溶液的制備；D溶液的制備；E溶液的制備和混合。本發明提供的技術方案，原材料易得，低廉，制備過程簡單，獲得的試劑性能穩定，用于癌癥檢測具有普適性強、靈敏度高和特異性好等特點，檢測過程簡單，時間短，易于判斷，特別適合于大規模的人群普查及癌癥臨床輔助診斷和療效動態檢查。
【專利說明】尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑及制備方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬于尿液檢測試劑，具體涉及一種對人體內異常代謝物一 5-羥吲哚乙酸檢 測試劑及制備方法。

【背景技術】
[0002] 癌癥死亡率在所有疾病中占據首位，是人類健康的第一殺手已成為威脅人類生命 和健康的一大病因，據統計每隔25年，癌癥患者的人數就要翻一番。不僅如此，癌癥的死亡 人數也在全球迅猛上升，2030年這個數字可能會增至1320萬。因此，癌癥的防治已成為全 球的衛生戰略重點之一，而治療癌癥的關鍵在于早期發現、早期診斷和早期治療。影像檢測 往往只能發現中晚期腫瘤類疾病，難以達到早期發現的目的，且價格昂貴，操作復雜，不適 合大規模的人群普查。
[0003] 尿液篩查試劑是通過腫瘤類疾病病人尿液中異常代謝物的檢測進行篩查，實驗數 據表明其比目前的腫瘤標志物靈敏1000倍，比CT、MRI等影像檢測靈敏10萬倍，可以用于 提前判斷惡性腫瘤發生的可能性，且避免了抽血這項容易引起感染的環節。
[0004] 但由于尿液中成分復雜，某些微量成分或者因其他病因導致的代謝異常產物同樣 會與檢測試劑中的汞離子、亞汞離子結合生成顏色沉淀，會嚴重干擾檢測結果的準確性，因 此目前的尿液代謝物檢測試劑雖然靈敏很高，但常常會出現假陽性問題，大大降低了檢測 的準確性，造成誤診，限制了其應用價值。


【發明內容】

[0005] 本發明提供了一種尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑及制備方法，用以 解決檢測準確性低的問題。
[0006] 為了解決上述技術問題，本發明的技術方案是：所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚 乙酸檢測試劑，包括Hg 2+、Hg22+、Cu2+、WO4 2' SO/-和NO3-的水溶液。
[0007] 優選地是，所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑中的濃度為Hg2+O. 17? 0· 50mol/L，Hg22+ 的濃度為 0· 25 ?0· 88mol/L，Cu2+ 的濃度為 0· 35 ?5. 41 mmol /T,, WO42 的 濃度為 〇· 37 ?5. 40mmol/L〇
[0008] 本發明還提供了尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑的制備方法，包括如 下步驟：
[0009] 1)硫酸溶液的制備：將市售濃硫酸用水稀釋至原體積的2?6倍，冷卻至室溫備 用；
[0010] 2)硝酸溶液的制備：將市售濃硝酸用水稀釋至原體積的2?6倍，冷卻至室溫備 用；
[0011] 3) A溶液的制備：稱取一定量的硝酸汞溶于步驟2)配置的所述硝酸溶液中獲得A 溶液；
[0012] 4) B溶液的制備：稱取一定量的硝酸亞汞溶于步驟2)配置的所述硝酸溶液中獲得 B溶液；
[0013] 5) C溶液的制備：稱取一定量的硫酸銅溶于步驟1)配置的所述硫酸溶液中獲得C 溶液；
[0014] 6) D溶液的制備：稱取一定量的鎢酸鈉溶于水中獲得D溶液；
[0015] 7)混合：將步驟3)、4)、5)和6)中制備的A、B、C和D溶液按I: (I. 1?1.8) : (2? 5) : (0. 3?0. 9)體積比混合，即得所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑。
[0016] 公知常識中，所述市售濃硫酸濃度約為98 %，所述市售濃硝酸濃度約為65 %。
[0017] 優選地是，步驟3)中Hg2+含量為L 5?2. 2mol/L。
[0018] 優選地是，步驟4)中Hg22+含量為L 8?2. 5mol/L。
[0019] 優選地是，步驟5)中Cu2+含量為0· 001?0· 008mol/L。
[0020] 優選地是，步驟6)中WO廣含量為0· 01?0· 03mol/L。
[0021] 癌細胞導致的代謝異常，會使尿液中5-羥吲哚乙酸含量較常人大幅上升，本發明 通過試劑中的亞汞離子與5-羥吲哚乙酸反應產生紅色、類紅色沉淀，從而據此初步判斷是 否攜帶癌細胞，該檢測方法具有高靈敏度的特點；汞離子能與尿液中其他的陰離子（如鹵 素離子、亞硝酸根離子）反應生成白色絡合物沉淀，另外，銅離子可以穩定反應后產生的紅 色沉淀，并且因為汞離子和亞汞離子易水解或隨溫度變化導致二者比例發生變化，影響試 劑中離子濃度配比，影響試劑反應靈敏度，而銅離子同樣也可以保證試劑中離子的穩定，提 供試劑的穩定性；而鎢酸根離子能與尿液中的有機化物如馬尿酸、葡萄糖醛酸等有機酸反 應生成相應的有機酸絡合物非紅色沉淀，與尿液中的磷酸鹽等電解質反應生成磷鎢雜多酸 絡合物非紅色沉淀，還能結合因其他疾病導致異常代謝的血紅蛋白結合并使之沉淀，從而 大大排除干擾，提高了檢測試劑的特異性。
[0022] 本發明提供的技術方案，原材料易得，低廉，制備過程簡單，獲得的試劑性能穩定， 用于癌癥檢測具有普適性強、靈敏度高和特異性好等特點，檢測過程簡單，時間短，易于判 斷，特別適合于大規模的人群普查及癌癥臨床輔助診斷和療效動態檢查。

【具體實施方式】
[0023] 所有原材料均為分析純級別的普通化學制劑，制備過程也都在常溫、常壓下進行。
[0024] 實施例1
[0025] 所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑，包括Hg2+、Hg2 2+、Cu2+、WO42' SO42-和NO3-的水溶液，其中Hg2+的濃度為0· 30mol/L，Hg22+的濃度為0· 40mol/L，Cu2+的濃 度為 3. 03mmol/L，WO42 的濃度為 0. 91mmol/L。
[0026] 制備過程如下：
[0027] 1)市售濃硫酸1份用水稀釋成3份，冷卻至室溫備用；
[0028] 2)市售濃硝酸1份用水稀釋成3份，冷卻至室溫備用；
[0029] 3)A溶液的制備：稱取一定量的硫酸汞溶于步驟2)的硝酸溶液中，其中汞離子含 量為 2mol/L ;
[0030] 4)B溶液的制備：稱取一定量的硝酸亞汞溶于步驟2)的硝酸溶液中，其中亞汞離 子含量為2. 2mol/L ;
[0031] 5) C溶液的制備：稱取一定量硫酸銅溶于步驟1)的硫酸溶液中，，其中銅離子含量 為 0· 005mol/L ;
[0032] 6)D溶液的制備：稱取一定量的鶴酸納溶于蒸饋水中，其中鶴酸根尚子含量為 0.015mol/L ；
[0033] 7)混合：將制備的A、B、C和D溶液按1:1. 2:4:0. 4體積比均勻混合，即得尿液中 腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑。
[0034] 實施例2
[0035] 所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑，包括Hg2+、Hg2 2+、Cu2+、WO42' SO42-和NO3-的水溶液，其中Hg2+的濃度為0· 30mol/L，Hg22+的濃度為0· 40mol/L，Cu2+的濃 度為 3. 03mmol/L，WO42 的濃度為 0. 91mmol/L。
[0036] 制備過程如下：
[0037] 1)市售濃硫酸1份用水稀釋成4份，冷卻至室溫備用；
[0038] 2)市售濃硝酸1份用水稀釋成4份，冷卻至室溫備用；
[0039] 3)A溶液的制備：稱取一定量的硫酸汞溶于步驟2)的硝酸溶液中，其中汞離子含 量為 I. 6mol/L ;
[0040] 4)B溶液的制備：稱取一定量的硝酸亞汞溶于步驟2)的硝酸溶液中，其中亞汞離 子含量為2mol/L ;
[0041] 5) C溶液的制備：稱取一定量硫酸銅溶于步驟1)的硫酸溶液中，，其中銅離子含量 為 0· 003mol/L ;
[0042] 6)D溶液的制備：稱取一定量的鎢酸鈉溶于蒸餾水中，其中鎢酸根離子含量為 0.02mol/L ；
[0043] 7)混合：將制備的A、B、C和D溶液按1:1. 5:3:0. 7體積比均勻混合，即得尿液中 腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑。
[0044] 實施例3
[0045] 所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑，包括Hg2+、Hg2 2+、Cu2+、WO42' SO42-和NO3-的水溶液，其中Hg2+的濃度為0· 39mol/L，Hg22+的濃度為0· 79mol/L，Cu2+的濃 度為 0. 70mmol/L，WO42 的濃度為 4. 74mmol/L。
[0046] 制備過程如下：
[0047] 1)市售濃硫酸1份用水稀釋成6份，冷卻至室溫備用；
[0048] 2)市售濃硝酸1份用水稀釋成6份，冷卻至室溫備用；
[0049] 3)A溶液的制備：稱取一定量的硫酸汞溶于步驟2)的硝酸溶液中，其中汞離子含 量為 2. 2mol/L ;
[0050] 4)B溶液的制備：稱取一定量的硝酸亞汞溶于步驟2)的硝酸溶液中，其中亞汞離 子含量為2. 5mol/L ;
[0051] 5) C溶液的制備：稱取一定量硫酸銅溶于步驟1)的硫酸溶液中，，其中銅離子含量 為 0· 002mol/L ;
[0052] 6)D溶液的制備：稱取一定量的鎢酸鈉溶于蒸餾水中，其中鎢酸根離子含量為 0.03mol/L ；
[0053] 7)混合：將制備的A、B、C和D溶液按1:1. 8:2:0. 9體積比均勻混合，即得尿液中 腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑。
[0054] 實施例4對比例
[0055] 所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑，包括Hg2+、Hg2 2+、S0,和NCV的水 溶液。
[0056] 制備過程如下：市售濃硫酸1份用水稀釋成3份，冷卻至室溫，稱取一定量的硫酸 汞溶解其中，其中汞離子含量為2mol/L ;市售濃硝酸1份用水稀釋成3份，冷卻至室溫，稱 取一定量的硝酸亞汞溶解其中，其中亞汞離子含量為2. 2mol/L ;將上述兩種溶液按1:1. 2 體積比均勻混合，即得對比例檢測試劑。
[0057] 實施例5效果驗證試驗
[0058] 1.試驗對象
[0059] 1)經臨床診斷確診為惡性腫瘤（已經臨床檢測手段確診）的患者共957名，年齡 20-80,男女各占一半，其中確診的癌癥有甲狀腺癌、肝癌、胃癌、食道癌、乳腺癌、宮頸癌、鼻 咽癌等；
[0060] 2)非腫瘤良性疾病組654名，年齡20-80歲，男女各半；
[0061] 3)正常健康人組1854名，年齡20-80歲，男女各半為經檢查健康合格者。
[0062] 2.試驗方法
[0063] 所有試驗對象均取新鮮潔凈尿液4mL加入裝有0. 5ml試劑（實施例1制備的檢測 試劑）的安瓿中，稍加振蕩靜置約5min，將沉淀顏色與標準比色板對照判定結果，結果及顏 色如下表1所示：
[0064] 表1尿液中檢測5-羥吲哚乙酸乙酸判定標準

【權利要求】
1. 一種尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑，其特征在于，包括Hg2+、Hg 22+、Cu2+、 to42-、so42-和no3_的水溶液。
2. 根據權利要求1所述一種尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑，其特征在于， 所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑中的濃度為Hg2+0. 17?0. 50mol/L，Hg22+的 濃度為 〇? 25-0. 88mol/L，Cu2+ 的濃度為 0? 35-5. 41mmol/L，WO廣的濃度為 0? 37-5. 40mmol/ L〇
3. 權利要求1或2所述一種尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑的制備方法，其 特征在于，包括如下步驟： 1) 硫酸溶液的制備：將市售濃硫酸用水稀釋至原體積的2?6倍，冷卻至室溫備用； 2) 硝酸溶液的制備：將市售濃硝酸用水稀釋至原體積的2?6倍，冷卻至室溫備用； 3. A溶液的制備：稱取一定量的硝酸汞溶于步驟2)配置的所述硝酸溶液中獲得A溶 液； 4. B溶液的制備：稱取一定量的硝酸亞汞溶于步驟2)配置的所述硝酸溶液中獲得B溶 液； 5. C溶液的制備：稱取一定量的硫酸銅溶于步驟1)配置的所述硫酸溶液中獲得C溶 液； 6. D溶液的制備：稱取一定量的鎢酸鈉溶于水中獲得D溶液； 7) 混合：將步驟3)、4)、5)和6)中制備的六、8、（：和0溶液按1:(1.1?1.8):(2? 5) : (0. 3?0. 9)體積比混合，即得所述尿液中腫瘤標志物5-羥吲哚乙酸檢測試劑。
4. 根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，步驟3)中Hg2+含量為1. 5?2. 2mol/ L〇
5. 根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，步驟4)中Hg22+含量為1. 8?2. 5mol/ L〇
6. 根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，步驟5)中Cu2+含量為0. 001? 0.008mol/L〇
7. 根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，步驟6)中W042_含量為0.01?0.03mol/ L〇
【文檔編號】G01N21/82GK104390975SQ201410605167
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月31日 優先權日:2014年10月31日
【發明者】劉 東, 黎磊, 鄭明彬 申請人:江蘇東博生物醫藥有限公司